Merck KGaA

BOSTON, MA, USA I June 12, 2025 I EMD Serono, the Healthcare business of Merck KGaA, Darmstadt, Germany, in the U.S. and Canada, a leading science and technology company, today announced the presentation of detailed results from Cohort B of the global Phase 2 WILLOW study ( NCT05162586 ) evaluating enpatoran, an investigational, oral, novel TLR7/8 inhibitor in systemic lupus erythematosus (SLE). Although it did not meet the primary endpoint of dose-response relationship, when compared to placebo, enpatoran demonstrated improvements in measures of both systemic and cutaneous disease activity in prespecified SLE subpopulations despite standard of care (SoC), including those with active cutaneous manifestations at baseline [(CLASI-A) ≥8], and was overall well tolerated. These findings will be presented in a late-breaking oral presentation at the 2025 European Congress of Rheumatology (EULAR) in Barcelona (Abstract # LB0004). “Analyses of Cohort B contribute to our understanding of enpatoran’s potential to address the critical unmet needs for patients living with lupus, including those experiencing significant skin manifestations. These manifestations are often part of the systemic activity or flare, which can be painful and have a considerable impact on quality of life,” said principal investigator Prof. Eric Morand, from Monash University and Monash Health. “The improvements observed in key disease measures represent a meaningful advancement in our ongoing investigation of the TLR7/8 inhibition approach for patients insufficiently managed by current therapies.” WILLOW is a global, multicenter, randomized, placebo-controlled Phase 2 study evaluating three doses of oral enpatoran taken twice daily (25 mg, 50 mg and 100 mg) versus placebo plus SoC over 24 weeks. The study features a unique design across two lupus cohorts, including both patients with active SLE and cutaneous lupus erythematosus (CLE). Cohort B of the study was designed to evaluate the dose-response relationship of enpatoran in reducing disease activity, based on the British Isles Lupus Assessment Group (BILAG)-based Composite Lupus Assessment (BICLA) response rate at Week 24 and enrolled SLE patients who had moderate or severe active disease despite SoC. Cohort B showed positive results in secondary and exploratory endpoints and within prespecified patient subpopulations. In patients with active skin disease (CLASI-A ≥8), BICLA response rates were up to 58.6% while placebo response rates were 31.7%, and up to 60.5% of patients receiving enpatoran showed a CLASI-70 response, compared with 26.8% for placebo, at Week 24. In addition, the subgroups of patients with high corticosteroid (prednisone-equivalent ≥10 mg/day) use and those with high interferon gene signature (IFN-GS) at baseline also showed higher and relevant BICLA response rates for enpatoran compared to placebo. As presented earlier this year at LUPUS 2025 , Cohort A analyses from the WILLOW study showed clinically meaningful improvement in disease activity in patients with CLE and mild SLE with active lupus rash at Weeks 16 and 24. Overall, for skin-related signs and symptoms, comparable improvements were observed in Cohort B relative to Cohort A, reinforcing the potential efficacy of enpatoran in patients with cutaneous manifestations of lupus erythematosus with or without systemic disease. “The efficacy and tolerability results from Cohort B, particularly among those with active skin involvement—a manifestation that affects most lupus patients—are consistent with our observations from Cohort A. The lupus rash is not only a visible symptom but is also closely linked to the underlying systemic activity of lupus,” said Jan Klatt, Head of Development Unit Neurology & Immunology for the Healthcare business of Merck KGaA, Darmstadt, Germany. “We are set to initiate regulatory discussions with key health authorities to determine the most effective pathway for bringing enpatoran to patients.” Enpatoran was well-tolerated and exhibited a manageable safety profile consistent with previous studies, with no new safety signals identified. Rates of treatment-emergent adverse events (TEAEs) were comparable between all enpatoran arms and placebo, ranging from 60.6% to 64.2%, and the most frequently reported TEAEs were infections and infestations. These results further support the anticipated favorable safety profile of enpatoran. About Enpatoran Enpatoran is a selective Toll-like receptor (TLR)7/8 inhibitor under investigation for the treatment of systemic lupus erythematosus (SLE) and cutaneous lupus erythematosus (CLE). By inhibiting TLR7/8 activation, enpatoran may help reduce pro-inflammatory cytokines and autoantibody production, potentially addressing underlying mechanisms of chronic inflammation and disease progression in lupus. With its novel proposed mechanism of action and oral administration, enpatoran has the potential to be a first-in-class treatment for patients across lupus conditions. Enpatoran is currently under clinical investigation and is not approved for any use anywhere in the world. About the Phase 2 WILLOW Clinical Study WILLOW ( NCT05162586 ) is a randomized, double-blind, placebo-controlled Phase 2 proof of concept and dose-finding study designed to evaluate the efficacy and safety of enpatoran in patients with systemic lupus erythematosus (SLE) and cutaneous lupus erythematosus (CLE). The study incorporates a basket design, including two cohorts – Cohort A including patients with CLE or SLE with active lupus rash and Cohort B including patients with active SLE. The WILLOW study aims to advance the understanding of enpatoran’s therapeutic potential and to help address significant unmet needs in lupus treatment. About Lupus Erythematosus Lupus erythematosus is a chronic autoimmune disease that can affect various parts of the body, including the skin, joints, kidneys and other organs. It occurs when the immune system mistakenly attacks healthy tissues, leading to inflammation, pain and potential organ damage. There are multiple types of lupus, with systemic lupus erythematosus (SLE) and cutaneous lupus erythematosus (CLE) being two primary forms. Symptoms can range from mild to life-threatening, often including fatigue, joint pain, rashes and organ involvement. Lupus disproportionately impacts women and people of color, and despite available treatments, many patients experience unmet needs due to limited efficacy or side effects. EMD Serono in Neurology and Immunology EMD Serono has a long-standing legacy in neurology and immunology, with significant R&D and commercial experience in multiple sclerosis (MS). The company’s current MS portfolio includes two products for the treatment of relapsing MS – Rebif ® (interferon beta-1a) and MAVENCLAD ® (cladribine) tablets. EMD Serono aims to improve the lives of patients by addressing areas of unmet medical needs. In addition to EMD Serono’s commitment to MS, the company also has a pipeline focusing on discovering new therapies that have potential in other neuroinflammatory and immune-mediated diseases, including systemic lupus erythematosus (SLE), cutaneous lupus erythematosus (CLE) and generalized myasthenia gravis (gMG). About EMD Serono, Inc. EMD Serono – the healthcare business of Merck KGaA, Darmstadt, Germany in the U.S. and Canada – aspires to create, improve and prolong life for people living with difficult-to-treat conditions like infertility, multiple sclerosis and cancer. The business is imagining the future of healthcare by working to translate the discovery of molecules into potentially meaningful outcomes for people with serious unmet medical needs. EMD Serono’s global roots go back more than 350 years with Merck KGaA, Darmstadt, Germany. Today, the business has approximately 1,050 employees around the country with commercial, clinical and research operations in Massachusetts. www.emdserono.com . About Merck KGaA, Darmstadt, Germany Merck KGaA, Darmstadt, Germany, a leading science and technology company, operates across life science, healthcare and electronics. More than 62,000 employees work to make a positive difference to millions of people’s lives every day by creating more joyful and sustainable ways to live. From providing products and services that accelerate drug development and manufacturing as well as discovering unique ways to treat the most challenging diseases to enabling the intelligence of devices – the company is everywhere. In 2024, Merck KGaA, Darmstadt, Germany, generated sales of € 21.2 billion in 65 countries. The company holds the global rights to the name and trademark “Merck” internationally. The only exceptions are the United States and Canada, where the business sectors of Merck KGaA, Darmstadt, Germany, operate as MilliporeSigma in life science, EMD Serono in healthcare and EMD Electronics in electronics. Since its founding in 1668, scientific exploration and responsible entrepreneurship have been key to the company’s technological and scientific advances. To this day, the founding family remains the majority owner of the publicly listed company. 1 Cojocaru M, Cojocaru IM, Silosi I, Vrabie CD. Manifestations of systemic lupus erythematosus. Maedica (Bucur). 2011 Oct;6(4):330-6. PMID: 22879850; PMCID: PMC3391953. SOURCE: EMD Serono

TONACEA01再创先例视频：首张处方“艾米迈托赛注射液”（商品名：睿铂生）一路走来取得了无数首位称号。继“首个”获批受理并纳入优先审评、取得“首张”干细胞药物生产许可证、成为“首款”上市干细胞药物后，于2025年6月5日，由北京大学人民医院黄晓军院士团队开出首张处方笺，6月6日，患者完成首支注射，标志着我国干细胞药物正式开启商业化临床应用！图：定价及相关信息这款干细胞药物此次定价为19800元/次，一疗程注射8次，共158400元。而美国类似产品的定价高达194000美元/次，整个治疗周期所需费用约为160万美元。两相对比，艾米迈托赛注射液售价仅为美国类似产品的1/70。相信这一“惠民价”也将成为行业定价策略的风向标。图：患者招募公告艾米迈托赛注射液已获批适应症为急性移植物抗宿主病（aGVHD），为其后续开展更多临床研究、拓展更多适应症打下了坚实基础。目前，中国人民解放军总医院（301医院）正针对艾米迈托赛注射液治疗更多适应症招募临床受试患者，包括急性肾损伤、糖尿病肾病、血管衰老。可以得见，这款干细胞药物应用于更多疾病治疗已是指日可待。TONACEA02进阶之路图：大规模三维细胞生产线简介如何实现高质量、标准化、规模化的细胞体外扩增培养是产业发展中的核心技术难点，更是实现“做老百姓用得上、用得起的干细胞药品”的必经之路。早在临床试验期间，华龛生物就依托全球领先的三维细胞培养技术与完善成熟的产品管线，助力这款干细胞新药，打赢了从二维到三维细胞生产制备工艺变更的技术攻坚战，顺利完成全部临床研究，在III期临床试验期间展现出良好的安全性和有效性。华龛生物细胞智造一站式解决方案点击可了解详情艾米迈托赛注射液能够一路领航且价格惠民，细胞生产制备技术的选择至关重要——应用华龛生物基于3D可降解微载体悬浮培养的自动化、连续性、密闭式的干细胞制备工艺，实现了单批次百亿/千亿量级干细胞生产。华龛生物原研可降解3D微载体点击了解详情华龛生物百亿/千亿量级干细胞生产制备工艺，能够避免开放式操作所带来的污染风险，在满足干细胞质量及安全性符合临床应用标准的基础上，更能满足临床应用和商业化生产中对于细胞产量的需求。极大提升研发及生产效率，显著降低细胞生产制备过程中的耗材、人力和时间成本，加速产品上市、应用进程。这一次，中国技术真的“把价格打下来”了！— 未来展望 —  据统计，自2015年以来，全球每年有超过100项临床试验，探索MSCs在心血管疾病、骨关节炎、糖尿病足溃疡等众多疾病中的应用。目前，华龛生物也已助力多家客户完成干细胞新药临床研究审批申报并获批。未来，华龛生物也将持续拓展自动化、全封闭、大规模三维智造工艺技术的应用范围，助力更多临床研究转化落地，为全球干细胞疗法的研发与商业化应用开辟新的道路，赋能CGT产业发展，惠及更多患者。关于同写意同写意论坛是中国新药研发行业权威的多元化交流平台，二十一年来共举办会议论坛百余期。“同写意新药英才俱乐部”基于同写意论坛而成立，早已成为众多新药英才的精神家园和中国新药思想的重要发源地之一。同写意在北京、苏州、深圳、成都设立多个管理中心负责同写意活动的运营。尊享多重企业/机构会员特权● 分享庞大新药生态圈资源库；● 同写意活动优享折扣；● 会员专属坐席及专家交流机会；● 同写意活动优先赞助权；● 机构品牌活动策划与全方位推广；● 秘书处一对一贴心服务。入会请联系同写意秘书处 同写意创新链盟机构 （上下滑动查看更多）深势科技 | 新天地药业 | 快舒尔医疗 | 华赛伯曼 | 艾里奥斯 | 药明合联 | 皓元医药 | 希格生科 | 纽瑞特医疗 | 夸克医药 | 石药集团 | 源生生物 | 君赛生物 | 达尔文生物 | 浩博工程 | 怀雅特 | 赛立维 | 科伦博泰 | 赛隽生物 | 安升达/金唯智 | 卡替医疗 | 达科为生物 | 沙利文 | 天广实 | 拜耳 | 楚天科技 | 三生制药 | 三启生物 | 国通新药 | 通瑞生物 | 科济药业丨立迪生物 | 森西赛智 | 汇芯生物 | 申科生物 | 方拓生物 | 东抗生物 | 科盛达 | 依利特 | 翊曼生物丨锐拓生物丨复百澳生物丨圆因生物丨普洛斯丨华润三九丨皓阳生物丨人福医药丨广生堂药业丨澳宗生物丨妙顺生物 | 荣捷生物丨行诚生物 | 宜联生物 | 生命资本 | 恒诺康丨斯丹姆 | 益诺思 | 深圳细胞谷丨佰诺达生物 | 沃臻生物 | 金仪盛世 | 朗信生物 | 亦笙科技 | 中健云康 | 九州通 | 劲帆医药 | 沙砾生物 | 裕策生物 | 同立海源 | 药明生基 | 奥浦迈 | 原启生物 | 百力司康 | 宁丹新药 | 上海细胞治疗集团 | 滨会生物 | FTA | 派真生物 | 希济生物 | 优睿赛思 | 血霁生物 | 优睿生物 | 邦耀生物 | 华大基因 | 银诺生物 | 百林科医药 | 纳微科技 | 可瑞生物 | 夏尔巴生物 | 金斯瑞蓬勃生物 | 健元医药 | 星眸生物 | 格兰科医药 | 莱羡科学仪器 | 明度智云 | 玮驰仪器 | 康源久远 | 易慕峰 | 茂行生物 | 济民可信 | 欣协生物 | 泰楚生物 | 泰澧生物 | 谱新生物 | 思鹏生物 | 领诺医药 | 宜明生物 | 爱科瑞思 | 阿思科力 | 博格隆生物 | 百吉生物  | 迈邦生物 | 多宁生物 | 万邦医药 | ASCT | 为度生物 | 比邻星创投 | 赛桥生物 | 吉美瑞生 | 荣泽生物 | 科金生物 | 汉超医药 | 康日百奥 | 汉腾生物 | 力品药业 | 安必生 | 博瑞策生物 | 中盛溯源 | 深研生物 | 东方略 | 赛赋医药 | 克睿基因 | 安润医药 | 镁伽科技 | 科锐迈德 | 和元生物 | 申基生物 |楷拓生物|森松生命科技 | 凯理斯 | 尚德药缘 |  晟国医药 | 健新原力 | 纽福斯 | 华东医药 | 士泽生物 | 影研医疗科技 | 新格元生物 | 依生生物 | 腾迈医药 | 汉欣医药 | 恒驭生物 | 盛诺基 | 序祯达生物 | 乐纯生物 | 速石科技 | 耀海生物 | 新合生物 | 华龛生物 | 恺佧生物 | 成都凡微析 | 正帆科技 | 大橡科技 | 博雅辑因 | 因美纳 | 博雅控股集团 | 近岸蛋白 | 依科赛生物 | 利穗科技 | 东南科仪 | 倍谙基 | 辉诺医药 | 圣诺制药 | 埃格林医药 | 科镁信 | 爱思益普 | 复星医药 | 齐鲁制药 | 捷思英达丨荣昌生物丨泽璟制药丨奕安济世丨礼新医药丨维立志博丨派格生物丨赛生药业丨呈源生物丨启德医药丨双运生物丨宝船生物丨曙方医药丨澳斯康生物丨普莱医药丨维健医药丨海昶生物丨征祥医药丨智核生物丨望石智慧丨博生吉医药丨南京诺丹丨四星玻璃丨艾米能斯丨霁因生物丨普瑞康生物丨映恩生物丨康哲生物丨霍德生物丨海慈药业丨沃生生物丨睿健医药丨矩阵元丨斯微生物丨则正医药丨预立创投丨东立创新丨博安生物丨伟德杰生物丨星奕昂生物丨耀乘健康科技丨琅钰集团丨康德弘翼 | 原力生命科学丨上海科洲丨特瑞思丨药源丨健艾仕生物丨冠科美博丨微境生物丨天境生物丨合源生物丨泛生子丨创胜集团丨加科思药业丨丹诺医药丨凌科药业丨偶领生物丨凯斯艾生物丨成都圣诺丨松禾资本丨清普生物丨和其瑞丨开拓药业丨科兴制药丨玉森新药丨水木未来丨分享投资丨植德律所丨奥来恩丨乐明药业丨东曜药业丨君圣泰丨海创药业丨天汇资本丨再鼎医药丨济煜医药丨百英生物丨基石药业丨君实生物丨Sirnaomics,Inc.丨亦诺微丨博腾股份丨思路迪诊断丨艾博生物丨普瑞金生物丨未知君生物丨尚健生物丨阿诺医药丨有临医药丨赛业生物丨睿智医药丨博济医药丨晶泰科技丨药明康德丨创志科技丨奥星集团丨苏雅医药丨科贝源丨合全药业丨以岭药业丨科睿唯安丨DRG丨博瑞医药丨丽珠医药丨信立泰药业丨步长制药丨华素制药丨众生药业丨上海医药丨高博医疗集团丨药渡丨君联资本丨集萃药康丨诺思格丨精鼎医药丨百利药业丨Pfizer CentreOne丨默克中国创新中心丨奥来恩丨瑞博生物丨新通药物丨广东中润丨医普科诺丨诺唯赞丨康利华丨国信医药丨昆翎丨博纳西亚丨缔脉丨一品红丨和泽医药丨博志研新丨凯莱英医药丨汉佛莱丨英派药业丨京卫制药丨海思科药业丨宏韧医药丨开心生活科技丨哈三联丨Premier Research丨宣泰医药丨先声药业丨海金格丨普瑞盛医药丨Informa丨科特勒丨谋思医药丨HLT丨莱佛士丨辉瑞丨科林利康丨冠科生物丨科文斯丨卫信康丨龙沙（Lonza）丨美迪西丨阳光诺和丨润东医药丨勃林格殷格翰（中国）丨艾苏莱生物丨领晟医疗丨驯鹿医疗丨燃石医学丨中肽生化丨鸿运华宁丨泰格医药丨易迪希丨希麦迪丨百奥赛图丨迪纳利丨青云瑞晶丨鼎丰生科资本丨中源协和丨维亚生物丨青松医药丨中科谱研丨长风药业丨艾欣达伟丨鼎康生物丨中晟全肽丨海步医药丨勤浩医药丨奥萨医药丨太美医疗科技丨生特瑞丨东富龙丨Cytiva丨优辰实验室丨苏桥生物丨君达合创丨澎立生物丨南京澳健丨南京科默丨东阳光丨亚盛医药丨杰克森实验室丨上海科州丨三优生物丨三迭纪丨泰诺麦博丨Cell Signaling Technology丨PPC佳生丨澳斯康丨先为达丨智享生物丨锐得麦丨宜明昂科丨明济生物丨英百瑞丨六合宁远丨天津天诚丨百拓生物丨星药科技丨亓上生物丨真实生物丨引光医药丨方达医药丨高博医疗集团丨赞荣医药丨国投创新丨药明生物丨康哲药业丨高特佳投资丨普瑞基准丨臻格生物丨微谱医药丨和玉资本 | 倚锋资本

同写意年度巨献！！7月25-26日，邀您相聚金鸡湖畔，与5000人一起为中国医药创新“同写意”！1、双特异性或双靶点药物的崛起应和了如今药物研发的最大困境：小分子药和蛋白药的药物靶点不够用了。2006年时统计的已获批药物共针对324个药靶。2017年，已获批药物的药靶数量扩展到893个，其中667个是人蛋白。假设传统药物（不包括核酸药和细胞治疗）可开发的药靶共有1000个，所有生物技术和制药公司的共同竞争空间则受到极大的禁锢。但如果考虑双靶点药物的话，药靶空间（双药靶的随机组合数）增长了500倍。图片来源：参考资料132、双特异性抗体（这里简称双抗或bsAb）是最重要的一类双靶点药物，也是近些年来最热门的药物研发领域之一。它的研发历史已有几十年: 图中黄色的立柱代表和双抗有关的论文每年发表篇数（左轴），紫色的立柱代表每年进入临床试验的双抗数。到目前为止，已有三个双抗药获批，其中两个还在市场上（Amgen的Blincyto / Blinatumomab和Chugai的Hemlibra / Emicizumab），但有上百个双抗药分子正在临床试验中被评估。未来几年将是双抗药全面爆发的时代。3、双特异性抗体不等同于两种单克隆抗体的联合用药。和联合用药相比，双抗的优势包括单一的药代动力学特性（PK profile）和相对简单的申报流程：如果两种单抗在体内有不同的半衰期，在联合用药中需要平衡两者的给药时间表；联合用药在申报时需要准备两套CMC、毒理数据等。但双抗药最重要的优势是obligate effects，或全新功能。图片来源：参考资料144、如果一个双抗药的效果仅仅等同于（additive effects）或超过（synergistic effects）两种母单抗的联合用药产生的效果，它还不是最理想的双抗药。一个理想的双抗药可以产生全新的功能、全新的效果。如果这种新功能是两种母抗体不管如何联用也无法获得的，它就是obligate effects 。图片来源：参考资料185、双抗产生新功能主要有两个机理。第一个机理是通过空间重排产生新的药效（spatial obligate mechanisms）。在这种情况下，双抗同时结合两个药靶，把它们拉近，进而启动下一步行为。最常见的双抗——细胞桥接双抗——就是利用这个机理(a)。比如，T细胞导向双抗同时结合T细胞上的CD3和肿瘤细胞表面上的某种抗原（tumor associated antigen, TAA），桥接两种细胞，并激活T细胞，以杀死肿瘤细胞。还有的双抗，如b和c所示，同时结合同一细胞表面上的两种受体，或者导致细胞凋亡，或者促进细胞生长。这种效果只有在两种受体被交联时才会发生。Hemlibra则是d图描绘的双抗类型的一个例子：Hemlibra模仿FVIIIa因子，把FIXa和FX拉到一起，激活FX，引起血凝反应。图片来源：参考资料186、双抗产生新功能的第二个主要机理是在时间维度上完成的（temporal obligate mechanisms）。双抗分子先通过一个结合臂结合一个靶点，再因此被置换到新的空间（比如通过血脑屏障（图e），或被内吞入细胞（图f）），最后通过另一个结合臂结合第二个靶点，触发下游反应。如果第一个结合事件不发生，该双抗接触不到第二个靶点。从这个角度看，该双抗的第一个结合臂是第二个的递送装置。图片来源：参考资料147、图1中的499,500种双靶点组合只是可能的成药空间（双抗的成药空间比这要小的多）。理性设计只能找到寥寥不多的几种双抗。要从中找到更多的能产生新功能的组合需要一个高通量的筛选手段。对于双抗药来说，第一个难题是如何构建足够大的双抗分子库以供筛选。假设针对每个靶点有10种结合片段（binders）可供选择（覆盖不同的表位和亲和力），那么针对两个靶点就至少需要10 x 10 = 100种双抗分子。即使对大公司来说，制备、提纯100种蛋白分子也不是一件容易的事。这还只是在双靶点的成药空间中筛选。如果要从多靶点空间中寻找合适的双抗，制备的蛋白数量急剧增加。可以说，构建大规模的双抗分子库是双抗药研发的一个主要门槛。这里，我们以UCB的技术平台为代表来探讨一下制药公司是如何攻克这一难关的。在筛选阶段，UCB的所有结合片段都是以单臂Fab形式存在，这些Fab又分两种格式：Fab-Y和Fab-X。Fab-Y的C端带着一段多肽Y，而Fab-X的C端则带有可结合Y的scFv，两者混合后会形成一个临时的、可供筛选的Fab-KD-Fab双抗。Fab-KD-Fab技术的最大优势是节省了蛋白制备、纯化的成本。针对两种抗原A和B，UCB团队只需制备10种针对A的Fab-Y和10种针对B的Fab-X，一共20个蛋白，而不是100个蛋白。所有100种双抗都可以通过Fab-Y和Fab-X混合而生成。图片来源：参考资料148、UCB有一个项目是筛选抑制纤维化的双抗药物。人的肺（或肾）成纤维细胞与气管（或近端肾小管）上皮细胞混合培养，在培养液中加入不同的双抗分子，最后用免疫荧光方法比较各类蛋白纤维和细胞外基质的沉积程度。抑制纤维化可能的靶点有22个，双靶点的组合数就达到228种（理论上应该是231种可能：22 x 21 / 2）, 再考虑针对同一靶点有多种Fab，一共有2000个双抗需要被制备、筛选。而UCB采用Fab-KD-Fab技术，只需制备130种Fab分子作为起始原料就可以覆盖所有可能的双抗。图片来源：参考资料149、 结果显示，一种双抗组合可以成功抑制细胞外基质的沉积或纤维化，而这种效果是两种单抗或其联合用药无法达到的。至此，UCB通过高通量筛选成功地找到一个抑制纤维化的候选双抗药物。其它公司也有自己的独特技术来构建大规模的双抗分子库，比如Genmab的DuoBody技术平台。10、一旦双靶点和双binder组合选定，下一步就要决定该双抗采取何种格式。双抗主要有三种格式：片段格式（左图），非对称的IgG类抗体格式（中图），和对称的IgG类抗体格式（右图）。每种格式里还有多种不同版本，图中给出的只是有代表性的例子。图片来源：Harpoontx.com/science/11、和IgG类双抗药相比，片段双抗主要有两个优势：由于其分子量小，它们可以更容易地渗透到肿瘤或靶向组织内，还可以结合到全长抗体不易接触的表位。但片段双抗的主要缺点是由于缺乏Fc，它们不能结合FcRn受体，因此体内半衰期短。比如Blincyto采取的是BiTE格式（左图），在体内的半衰期只有4个小时，其每个治疗周期需要连续28天静脉输液，给患者带来极大的不便，也增加了治疗费用。片段双抗可以通过改造而克服这一缺点。比如，Harpoon Therapeutics的TriTAC技术在片段双抗之间再加上能结合白蛋白（HSA）的抗体片段（右图）。片段双抗也可以和Fc融合而延长半衰期。图片来源：参考资料1812.  截至2019年6月份的数据表明，已进入或即将进入临床阶段的双抗药物中，非对称的IgG类双抗药占大部分——约60%。非对称IgG类双抗药的最大局限性是其生产过程中的效率问题。13、一个单克隆抗体是由两个相同的重链和两个相同的轻链构成。轻链与重链之间、重链与重链之间通过二硫键联结。在生产单抗蛋白时，先需要将两种质粒转染进同一个细胞（CHO或HEK293）里。一个质粒携带重链基因，另一个携带轻链基因。细胞同时表达重链蛋白和轻链蛋白，两种蛋白再自动组装成一个抗体分子，被细胞分泌到培养液里，不会有相似的副产物。但用细胞表达双抗分子时，事情就变得复杂一些。一个非对称IgG类双抗分子包含4个不同的蛋白链。宿主细胞需要被转染4种质粒，分泌出的抗体蛋白并不是100%想要的双抗。14、在细胞内，轻链与重链之间，重链与重链之间会随机配对。最后组装出的抗体分子会出现16种可能，10种蛋白分子。假设每种配对的概率都相同（实际上概率有些差异），我们所需要的双抗蛋白分子（红圈标出的）只占所有产物的1/8或12.5%。这不但导致了低效率的生产流程，而且还使提纯过程变得异常复杂：双抗很难从其它相似的抗体产物中分离出来。15、为了解决错配问题，工业界已经开发出很多创新技术。解决重链错配的常见技术有Genentech发明的Knobs-into-holes（KiH），Novimmune发明的Common Heavy Chain策略，和Regeneron发明的Fc双突变技术。KiH技术是在两种重链上引入不同的突变，使得同种重链无法配对，而异种重链则榫卯相扣。Common Heavy Chain策略则是使用同一个重链，对不同抗原的特异性主要由不同的轻链决定。Fc双突变技术与前两个技术不同。它不会导致单一配对，但便于选择性地提纯。一个重链还是野生型，另一个重链则引入两个突变（H435R和Y436F）。杂合重链双聚体与蛋白A的结合力比纯和突变重链双聚体高，但比纯和野生重链双聚体低。这样在蛋白提纯的过程中可以选择性地把含有杂合重链双聚体的双抗分子纯化出来。图片来源：参考资料1716、解决重轻链错配的常见技术有Common Light Chain策略，罗氏开发的CrossMab技术，Merck KGaA开发的CH1: CL界面改造技术，和药明生物、Invenra等公司开发的CH1: CL置换技术。Common Light Chain策略是使用同一个轻链，对不同抗原的特异性主要由不同的重链可变区决定。CrossMab技术（之一）是将一侧的轻重链的CH1和CL互相调换，这样野生的重链只能和野生的轻链配对，而含CL域的重链只能和含CH1的轻链配对。在CH1: CL界面改造技术中，一侧的CH1和CL各引入一系列突变，使得改造后的重、轻链依然能结合，但和野生型的轻、重链相排斥。药明生物的WuXiBody技术是通过将其中一对轻、重链的CH1/CL结构域置换为TCR Cα / Cβ而实现；与此相似，Invenra的B-body技术是将其中一对轻、重链的CH1/CL结构域置换为一对儿其它抗体结构域（未披露具体信息）。图片来源：参考资料13和1817、现在处于临床阶段的双抗候选药的85%是用来治疗肿瘤的，而抗肿瘤双抗药的大部分是T细胞导向双抗（T-cell redirecting bispecific antibodies, 简称TRBA），即有CD3结合臂的双抗。在剩下的篇幅中，让我们来重点讨论一下TRBA。图片来源：参考资料1118、T细胞表面的CD3和TCR组成CD3-TCR复合体，用来结合抗原呈递细胞（APC）表面的MHC-抗原片段。TRBA则绕开了MHC的限制，激活T细胞，把T细胞的火力引向了肿瘤细胞。TRBA的一个结合臂靶向肿瘤细胞表面的抗原（TAA），另一个结合臂结合T细胞表面的CD3ε，起到CD3ε激动剂的作用。TAA-TRBA-CD3-TCR形成了类似于MHC-peptide-TCR-CD3的免疫突触（IS），T细胞被激活，释放颗粒酶、穿孔素等蛋白，从而引起肿瘤细胞的裂解。图片来源：参考资料2419、正如前文所言，处于临床阶段的TRBA候选药物有很多种。Genentech的Mosunetuzumab就是其中之一。Mosunetuzumab是一个靶向B细胞表面的CD20的非对称全长双抗。它的Fc部分引进了一个突变（N297G）, 去除了ADCC作用，以避免误伤T细胞。图片来源：www.biooncology.com/pipeline-molecules/cd20-tcb.html; 参考资料920、罗氏正在开发的Glofitamab（CD20-TCB或RG6026）是另一个TRBA例子。Glofitamab的独特之处在于它与CD20的结合是二价的，与CD3是单价的。这种格式增强了它杀死肿瘤细胞的能力。另外，它的Fc部分只保留了FcRn结合位点，但不会引起免疫效应，从而既保留了长的生物半衰期又不会误伤T细胞。从Glofitamab的结构示意图（右上角）可以看出，为了避免错配，这个分子的设计至少采用了三个技术：KiH，CrossMab和CH1:CL电荷界面。图片来源：参考资料2421、 T细胞导向双抗经常被拿来和另一种合成免疫（synthetic immunity）治疗手段——CAR-T作比较。作为第二代TRBA的代表，Mosunetuzumab、CD20TCB和Regeneron的REGN1979在一期临床试验中显示了对B淋巴瘤的良好疗效，不亚于已上市的CAR-T疗法。有两点需要说明的是，Kymriah（Tisagenlecleucel）和Yescarta （Axicabtagene Ciloleucel）的靶向抗原是CD19，而这三个TRBA靶向CD20。另外，TRBA和CAR-T之间还从没做有过头对头的临床试验比较。根据表中的数据作横向比较还需谨慎。ORR为客观应答率，CR为完全缓解率。图片来源：参考资料2422、CAR-T最常见的副作用是细胞因子风暴（CRS）和神经毒性。和已上市的CAR-T疗法相比，三个TRBA的这两项副作用的发生频率和严重程度都有降低。图片来源：参考资料1223、尽管如此，TRBA在药效和安全性上还有很大的提高空间。提高药效大致可以从7个方面下手：（A）T细胞结合臂靶向的受体不仅仅局限于CD3（由黄色的椭圆代表），还可以从CD28，CD2和αβTCR中选择；（B）T细胞结合臂可以靶向CD3的不同表位；（C）TRBA可以采取多种格式，包括片段双抗和类IgG双抗；（D）癌细胞表面上的TAA密度也影响TRBA的效果；（E）形成的TAA-TRBA-CD3-TCR的空间尺度对癌细胞的杀伤力也有影响，而这是由TRBA的格式、TAA的大小、TAA上的结合表位与癌细胞膜之间的距离等因素决定的；（F）增加TRBA与TAA的亲和力会增加对癌细胞的杀伤力；（G）调整TRBA与CD3的亲和力可改变TRBA的药效和毒性。（G）比较复杂。一般来说，TRBA与CD3的亲和力（affinity）或总亲和力（avidity）不能太高，否则将导致TRBA和循环中的T细胞率先结合，不能有效渗入肿瘤，也产生很多副作用。图片来源：参考资料624、让我们先看一个通过（A）来提高对肿瘤细胞杀伤力的例子。激活T细胞并使之持续增殖、保持对肿瘤细胞的杀伤力需要两个信号：第一个信号是由CD3-TCR复合体介导的，引起细胞因子的分泌；第二个信号是由CD28介导的，抑制T细胞凋亡。设计TRBA时一般只考虑了第一个信号，因此TRBA经常引起T细胞无能化（anergy）而限制了T细胞的持久杀伤作用。但双信号这个概念已经被应用在第二代、第三代CAR-T的设计中：CAR的膜内部分既包括CD3ζ（信号1），又包括CD28的膜内激活域（信号2）。图片来源：参考资料2025、Sanofi设计的三特异性抗体就同时靶向这两个信号通路。这个三抗的一个结合臂靶向骨髓瘤细胞表面上的CD38，另一个结合臂同时靶向CD3和CD28。为了降低引起CRS的风险，这个分子被设计成与CD3ε的亲和力相对不高（KD ~ 20 nM，而anti-CD28和anti-CD38与各自靶点的KD分别为2 nM和4 nM）。在细胞和动物实验中，CD38 / CD3 x CD28三抗显示了对肿瘤细胞的持久杀伤力。图片来源：参考资料2426、TRBA的主要副作用是CRS。有没有可能只保留TRBA对肿瘤细胞的裂解能力，但又剔除其引起CRS的风险？研究表明，细胞杀伤力和CRS都依赖于TCR刺激，但是它们需要不同强度的CD3结合水平。细胞毒性T细胞（CTL）有两种不同的激活阈值，引起细胞因子释放的CD3结合率阈值要比细胞裂解阈值高得多，至少相差百倍。因此，可以通过减弱其对T细胞的亲和力或增加其TAA / CD3结合价比例来设计更安全的TRBA。IGM Biosceinces设计的IGM2323就是这样一个例子。它由靶向CD20的IgM五聚体和一个靶向CD3的scFv构成。也就是说，IGM-2323对CD20和CD3的结合价之比为10：1。图片来源：参考资料2327、在细胞实验中，IgM版本的双抗比IgG版本显示了对肿瘤细胞的更强的杀伤力。图片来源：参考资料2328.  而同时在细胞和动物（包括猴子）实验中，和IgG版本双抗相比，IGM-2323几乎不引起细胞因子的释放。IGM-2323正在一期临床试验中被评估。图片来源：参考资料1729、增加TRBA安全性的另一个办法是，让它只在肿瘤微环境（TME）中才被激活，才能招募T细胞。Maverick Therapeutics的COBRA技术平台就是建立在这一机理上。MVC-101是通过COBRA推出的一个三抗候选药。它可以结合EGFR和HSA（延长生物半衰期），但只能有条件地结合CD3。在其它组织中，它结合CD3的VH和VL分别被VLi和VHi所屏蔽，不能结合CD3。肿瘤及其周边中富含MMP2和MMP9等基质金属蛋白酶。在MMP的作用下，分子内的衔接链被剪断，含VLi、VHi和anti-HSA的一半蛋白分子被释放。剩下的半个分子两两配对，形成了可四价结合EGFR、两价结合CD3的双聚体双抗。在取得了良好的细胞和动物数据后，MVC-101即将进入临床试验。图片来源：www.affimed.com/rock-platform/innate-cell-engagers/; 参考资料2630、招募T细胞不是桥接双抗的唯一策略。Affimed公司通过ROCK技术推出了一系列招募NK细胞的候选双抗药。ROCK双抗既可以结合肿瘤细胞表面的TAA，又可结合NK细胞表面的CD16A（即FcγRIIIa），通过激活先天免疫系统和ADCC来裂解肿瘤细胞。这种双抗既保留了杀伤肿瘤的药效，又降低了TRBA的CRS风险。Affimed的管线领头项目AFM13靶向CD30和T细胞淋巴瘤，目前正在二期临床试验中被评估。31、未来10年将是多特异性抗体药的爆发期。双抗药发展到今天，是几十年来学术界和工业界在概念上、技术上不断产生突破日积月累的结果。几十家生物技术和制药公司都做出了重要贡献。我在这里仅列出文中涉及的公司。在不久的未来，双抗药将被广泛用来治愈顽疾，拯救生命。到那时，我们不应忘记，它们的背后是一系列的创新和众多的开拓者。参考资料：（上下滑动查看更多）1.  Overington, J. 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