Guangzhou LintonPharm Co Ltd

（点击图片 查看详情） 摘要：近年来，国内外双特异性抗体发展迅速，截至2023年12月，全球已有近200个双特异抗体正在进行临床研究，10余个双特异性抗体药物获批上市。本文分析了国内外双特异性抗体注册申报现状，并结合药学审评经验及相关文献，对此类产品药学开发中的常见技术问题进行探讨，以期为双特异性抗体药物的药学开发及评价提供参考。 NISONOFF等[1]在20世纪60年代首次提出将不同特异性的单价抗体片段的混合物重组，自此双特异性抗体（简称双抗）的发展拓展了癌症免疫治疗领域。但由于免疫原性和链错配问题的存在，双抗的发展受到了很大限制，近年来，随着科学技术的快速发展以及对双抗认知的提高，这些问题已逐渐被克服。双抗由于能同时结合2个不同的靶点或同一个靶点的2个不同表位而具有更强的抗原结合能力，在复杂疾病的治疗中十分关键[2]。LAN等[3]报道，靶向人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2）的双抗已显示出将免疫细胞定向至HER2阳性乳腺癌细胞的能力，从而有效杀伤肿瘤细胞。已完成的临床研究显示，Roche的法瑞西单抗（Vabysmo）靶向血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2）和血管内皮生长因子-A(vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A），用于治疗新生血管性或湿性年龄相关性黄斑变性和糖尿病黄斑水肿，相比1～2个月眼部给药1次的阿柏西普，Vabysmo在达到同样治疗效果下可将给药时间延长至3～4个月，有效降低了治疗负担[4]。 自2009年首个双抗卡妥索单抗（Catumaxomab）批准上市以来，多个双抗药物进入研发的不同阶段。截至2023年12月，全球已有近200个双抗正在进行临床研究，10余个双抗药物获批上市。本文分析了国内外双抗注册申报现状，并结合药学审评经验及相关文献，对此类产品药学开发中的常见技术问题进行探讨，以期为双抗药物的药学开发及评价提供参考。1 国内外双抗药物受理情况分析1.1 国外已上市双抗情况分析 根据已经公开的信息，截至2023年底，全球已获批14款双抗药物（包括已退市的），其中10款为2022年后上市。获批的双抗药物涉及的靶点多样，包括分化簇3(cluster of differentiation 3,CD3）、分化簇19(CD19）、表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）、细胞间质上皮转换因子（cellular-mesenchymal epithelial transition factor,c MET）、程序性细胞死亡蛋白-1(programmed cell death protein-1,PD-1）、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4(cytotoxic T lymphocyte associated protein-4,CTLA-4）、B细胞成熟抗原（B cell maturation antigen,BCMA）、凝血因子Ⅸ（coagulation factorⅨ，FⅨ）、凝血因子Ⅹ（FⅩ）、VEGF-A和Ang2等。适应症多为血液瘤、多发性骨髓瘤、消化道肿瘤、非小细胞肺癌、黑色素瘤等恶性肿瘤，也进行了血友病、眼科及关节炎等适应症的扩展探索。见表1。 全球已上市双抗药物中，有4家已在国内获批上市，包括Amgen的贝林妥欧单抗、Roche的艾美赛珠单抗、法瑞西单抗、格罗菲妥单抗，其中贝林妥欧单抗在国外获批5～6年后在国内上市，Roche的3种双抗国内外获批时间从1年逐渐缩短至1月，可见双抗在国内的上市时间与欧美的差距逐渐缩短，这得益于国内近年来加快审评、审批的各项举措及国际多中心临床的开展，明显提高了国内用药的可及性。在国内进行新药上市申请且处于审评中的包括Janssen的特立妥单抗、Roche的莫妥珠单抗、Johnson&Johnson的埃万妥单抗。 表1 国外已上市双抗药物汇总 Tab.1Summary of foreign marketed bispecific antibody drugs 注：FDA(Food and Drug Administration）为美国食品药品监督管理局；EMA(European Medicines Agency）为欧洲药品管理局；NMPA(National Medical Products Administration）为国家药品监督管理局；Ep CAM(epithelial cell adhesion molecule）为上皮细胞黏附分子；Gp100(glycoprotein 100）为糖化蛋白100;TNF-α(tumor necrosis factor-α）为肿瘤坏死因子-α;CD20(cluster of differentiation 20）为分化簇20;GPRC5D(G protein-coupled receptor,class C,group 5,member D）为G蛋白偶联受体C5D。 国外已上市双抗药物在我国正开展临床试验的包括Pfizer的Elranatamab、Johnson&Johnson的Talquetamab、Abbvie/Genmab的Epcoritamab-bysp，目前在国内均已进入关键的临床试验阶段。除此之外，全球尚未上市，国内外同步开展临床试验，且已进入关键临床试验的包括卡妥索单抗（Catumaxomab）、Amgen的Tarlatamab（靶点CD3E x DLL3）、Medimmune Llc研发的Volrustomig(PD-1 x CTLA4）、诺和诺德制药的Mim8（靶点F9 x F10）、阿斯利康的Gefurulimab(C5抑制剂）、默克雪兰诺的Bintrafuspalfa（靶点PD-L1 x TGF-β）、Zymeworks Inc的Zanidatamab（靶点HER2）、Abl Bio Inc的TR-009（靶点DLL4 x VEGFA）。值得注意的是，首个双抗药物卡妥索单抗（Catumaxomab）于2009年被欧盟批准上市，用于恶性腹水治疗，于2017年因商业原因退出市场。广州凌腾生物医药有限公司重启了卡妥索单抗在国内的开发，目前最高研发阶段为临床Ⅲ期，用于治疗胃癌[5]。1.2 国内双抗注册受理情况分析 中山康方生物医药有限公司的卡度尼利单抗注射液（代号：AK104，商品名：开坦尼）已于2022年6月由NMPA获批上市，靶向人PD-1和CTLA-4，用于治疗既往接受含铂化疗治疗失败的复发或转移性宫颈癌患者，是全球首个获批上市的肿瘤双免疫检查点抑制剂双抗，也是国内首个获批上市的双抗[6]。新药上市申请方面，中山康方生物医药有限公司研发的依沃西单抗（AK112）是一种特异结合人VEGF和PD-1的人源化双抗，用于治疗联合培美曲塞与卡铂用于经EGFR酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptortyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI）治疗后进展的EGFR突变的局部晚期或转移性非鳞非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC），目前已申请上市，处于审评中。 除已上市及正申请上市的品种外，国内双抗药物的临床研究也取得了阶段性进展，截至2023年底，中国大陆已有152个双抗获得临床试验申请（Investigational New Drug,IND）的批准，用于基于免疫肿瘤学的癌症及自身免疫性疾病治疗，且已成为双抗临床开发的重点。根据靶点组合和适应症的区别，主流的双抗类型可分为3类：含PD-1/PD-L1轴类、CD3招募类及其他类。目前国内处于临床Ⅲ期的双抗见表2。2 双抗药学审评中常见问题及思考 双抗具有与单抗相似的理化性质，单抗典型质量研究方法大部分也适用于双抗，但双抗由于分子固有特性、特异性纯化工艺、产品相关杂质与单抗存在一定差异，质控研究又有自身特点。本文结合审评经验，列举了双抗药物审评中常见药学问题，着重强调了质量研究中可能遇到的问题，以期为双抗药物的药学开发及评价提供参考。 表2 国内处于临床Ⅲ期的双抗药物 Tab.2Domestic bispecific antibody drugs in clinical phaseⅢ 注：PD-L1(programmed cell death 1 ligand 1）为细胞程序性死亡-配体1;HER3(human epidermal growth factor receptor 3）为人表皮生长因子受体3。2.1 双抗特异性 FDA于2021年5月发布的《Bispecific Antibody Development Programs Guidance for Industry》[7]在双抗药学研究和控制（Chemical Manufacturing and Control,CMC）方面提出，应研究可能影响药理学的质量属性，包括抗原特异性、与抗原表位结合的亲和力、与抗体结合的亲和力（针对同一细胞上的2个分子的双抗）、效价、产品相关杂质（如聚集体、片段、同源二聚体及其他错配形式）、稳定性及半衰期等，并指出“某些情况下，FDA可能会要求将双抗与针对相同抗原靶点的已批准单特异性产品进行比较（与类似单特异性产品相比安全性和/或有效性应有所提高），以便为双抗的获益风险评估提供信息”，此处强调了双抗特异性的重要性，与仅具有组合效应的双抗相比，更倾向于特异性双抗。 双抗药物开发时比传统的单抗药物面临更多的挑战，如某些双抗形式可能显示出不如其母体单抗的药代动力学特性[8]。该研究评估了两种Ig G融合双抗形式（Ig G-ECD和Ig G-sc Fv）在食蟹猴体内的代谢，结果显示，两种Ig G融合双抗形式清除较快、较其单抗分子半衰期短，因此选择合适的双抗形式是开发的关键部分[9]，通常需要大量的筛选研究工作，重点是提高稳定性，降低多反应性和自缔合潜力，去除免疫及消除化学和蛋白水解切割位点。早期的体外研究可能会对选择具有最佳亲和力和稳定性的工程细胞株具有指导意义。如文献报道，艾美赛珠开发时曾从40 000个双抗中筛选，针对靶向FIX x FX活性、药代动力学改善、溶解度改善、脱酰胺和去免疫等进行了优化，最终筛选出emicizumab。部分抗体通过添加透明质酸酶等辅料制备皮下注射剂型，以高浓度形式给药，延长半衰期，方便患者给药[10]。目前国内外制药企业构建了高通量双抗制备和筛选平台，如苏州康宁杰瑞生物科技有限公司的电荷排斥诱导双特异性（Charge Repulsion Improved Bispecific,CRIB）平台、武汉友芝友生物制药股份有限公司的Ybody、Roche双抗筛选平台、Merck的SPLIT INTEINS平台、赛诺菲的CODV-Ig等，为快速、高效获得高质量、疗效好的双抗提供了平台支持。2.2 结构研究 部分双抗与Ig G单抗结构类似，分子较大，研发时采用传统的生物物理学工具，如圆二色谱（circular dichroism,CD）、傅里叶变换红外光谱（Fourier transform infrared spectrometer,FTIR）和差示扫描量热法（differential scanning calorimetry,DSC）等，对大的、多结构域蛋白或小部分变体微小结构变化的检测灵敏度下降，导致采用这些生物物理学技术对双抗提供的额外表征有限。但仍应尽可能采用多种正交方法对双抗的高级结构进行表征，以便从多角度了解蛋白质高级结构，这对发生可能影响产品安全、有效性的药学变更时，如何证明产品变更前后的可比性也具有益处。此外，双抗分子结构较为复杂，氨基酸序列测定时，部分双抗的氨基酸覆盖率可能达不到100%，建议尽可能采用多种酶切形式结合肽图提高序列覆盖率。2.3 产品相关杂质/有关物质 双抗产品相关杂质/有关物质可能包括分子大小变异体、电荷异构体、序列变异体、错配抗体、半抗体、糖化变体、氧化变体、天冬氨酸异构化等。对于分子大小变异体、电荷异构体等含量较多产品相关杂质/有关物质可采用色谱法富集，对于序列变体等痕量变异体可通过强降解方法制备，开展进一步的质量研究，分析对活性的影响。 部分双抗开发研究时出现序列变异体，已知治疗性抗体恒定区的异型变异体可在异型错配患者中引发免疫原性反应，但与临床影响无关[11]。开发者应从DNA水平、蛋白水平研究序列变体的来源、不同代次细胞中的含量，并对序列变体进行鉴别，结合已有的非临床、临床研究鉴定该变异体对安全性、有效性、免疫原性不会产生影响。若与基因突变有关，应严格控制细胞限传代次，必要时在质量标准中拟定合理的限度。 双抗因二硫键偏多，可能会出现二硫键错配结构，另外如果抗体轻链和重链可变区中存在游离巯基，可能会影响其生物活性，导致生物学活性降低[12]，应在研究时采用合适的方法（如非还原变性-酶切肽图结合纯度方法）表征二硫键配对方式、游离巯基含量等，鉴定二硫键已正确配对。 考虑到抗CD3或抗Fc受体的同源二聚体可能会导致细胞因子的释放，而后者又是双抗类产品常见的安全性风险，应对同源二聚体进行定量分析，这对于与效应细胞结合的双抗十分重要。此外，新的结构可能会导致增加免疫原性[7]。 部分双抗互补性决定区（complementarity determining region,CDR）存在一定的氧化、脱酰胺、异构化、糖基化等，考虑到CDR区影响样品的有效性，增加免疫原性风险，CHUNG等[13]报道，聚糖结构α1-3连接半乳糖和N-羟乙酰神经氨酸（N-glycolylneuraminic acid,NGNA）可能参与不良免疫反应，应明确具体位点、含量，分析对活性、药代、安全性及免疫原性等的影响，制定合理的控制措施。2.4 生物学活性 由于双抗的作用机理多样，如细胞连接、受体桥接失活、受体桥接激活、双靶点同时作用、双靶点顺序作用等，因此双抗分子开发时，除抗原结合试验、细胞表面配体结合试验、效应器功能测定外，还应尽可能开发反映双抗2个靶标结合/协同效应的生物学活性测定方法（mechanisms of action,MOA）。完善的生物测定法对于生物制品的表征和控制以及临床研究结果的解释至关重要，要求具有较好的准确性和重现性，充分体现分子作用机制，最好使用单一检测形式满足检测所需性能（即捕获分子的双重活性和潜在的协同效应），以及检测多方面的结构变化[14]。 根据分子的作用机制，除应测定主要生物学活性外，还需考虑开发多种免疫学方法，如细胞杀伤、细胞因子分泌、抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC）、抗体依赖性细胞介导的吞噬作用（antibody dependent cellular phagocytosis,ADCP）等，对产品进行表征。REGISTER等[15]汇总了目前双抗生物学检测常用方法，通过案例分析结合检测、MOA、功能检测（其他支持MOA表征方法）、效应器功能检测、杂质生物测定等表征方法，为不同类型双特异性分子的生物测定开发提供策略。 目前部分企业仅开发分子水平的生物学活性检测方法，未开发细胞水平的活性研究方法。一方面与方法开发难度有关，据文献报道[16]，开发稳健且适合质量控制（Quality Control,QC）的基于细胞的生物检测方法比开发非基于细胞的结合检测方法更具挑战性，细胞水平检测方法方法变异度大；另一方面，生物测定的开发、执行、转移和维护成本很高。FDA曾在2023年8月发表了针对三阴性乳腺癌双抗的研究，比较了2种不同形式双抗的生物学活性。一种具有2个针对每种抗原的结合位点的双可变结构域免疫球蛋白（dual variable domain-Ig,DVD-Ig），另一种针对每种抗原具有1个结合位点的杆臼结构（knobin-hole,KIH）。研究发现，用于分析的细胞类型（MDA-MB-231和BT-20细胞）以及抗肿瘤活性的测定会影响检测能力，如一种分析法（细胞活力）可检测2种细胞系的抗肿瘤作用，但另一种分析法（台盼蓝细胞增殖）不够灵敏，无法检测BT-20细胞的抗肿瘤作用[17]。因此进行双抗的生物学活性研究时，开发合适的细胞系以及灵敏的检测方法非常重要。2.5 不溶性微粒（sub-visible particle,Sv P）问题 目前开发的双抗产品浓度均较高，可能会引发Sv P升高。Sv P形成原因很多，包括分子的固有特性、处方、制剂工艺及贮存/稳定性等均可影响Sv P，分析方法也会影响Sv P检测结果的可靠性。 已知可逆的蛋白质-蛋白质（自缔合）相互作用会导致光散射增加，可能会影响聚集和乳光度[18]，观察到澄清度/乳光度升高。蛋白质聚集，尤其是在高浓度时，可能会导致制剂中的Sv P计数升高。SIMLER等[19]报告了蛋白质聚集与Sv P形成之间的机制途径。抗体处方中常添加聚山梨酯80或聚山梨酯20保护蛋白质免受搅拌强制降解，已知聚山梨酯20降解可能因形成不溶性游离脂肪酸（free fatty acid,FFA）微粒导致Sv P[20]。抗体制剂工艺多存在搅拌、冻融环节，可能会影响Sv P形成。有研究报道，抗体冻融时蛋白质的疏水基团和亲水基团会发生一定程度上的反转，液体中的气泡在冻融过程中可能会溶解和逸出，导致蛋白质结构的变化，易于聚集形成Sv P[21,22]，此时需结合冻融研究、运输稳定性研究证实。根据《美国药典》<787>、《欧洲药典》2.9.19和《中国药典》三部（2020版）通则0903要求，推荐采用光阻法、显微计数法检查Sv P，如果光阻法测定结果不符合规定或供试品不适于用光阻法测定时，应采用显微计数法进行测定，并以显微计数法测定结果作为判定依据。对于滴眼液，应按照《美国药典》<789>规定，限度更严。两种分析方法的变异性可能会影响观察到的Sv P水平。 针对抗体药物储存时出现Sv P，应采用多种分析方法，如显微镜、FTIR光谱、拉曼光谱、Energy Dispersive X-Ray Spectroscopy(EDX光谱）、流动成像等，尽可能对Sv P进行鉴别，分析Sv P的组成，形成原因，是否随储存时间而增加等，进行必要的安全性评估，并采用合理的控制策略进行控制（如使用前过滤、替换为纯度更高的辅料等），原则上应符合现行药典及同类品种的要求。3 结语 随着双抗平台技术的发展，双抗药物免疫原性和链错配问题等逐渐被克服，贝林妥欧单抗、艾美赛珠单抗等10余个双抗药物已在全球获批上市，用于治疗癌症、血液系统、眼科、免疫系统疾病等。双抗药物的开发仍在快速发展中，是当下制药行业最热门的新药研发方向之一，国内外药企研发速度正在逐渐缩短差距。本文基于对多个双抗品种的审评经验，结合文献调研等对双抗药物的国内外注册申报现状进行了分析，并汇总探讨了双抗审评中常见的技术问题，以期通过研发生产方与监管方共同努力，强化技术和共性问题交流，为患者提供安全有效、质量可控的新型双抗药物。 参考文献 ［1］ NISONOFF A，WISSLER F C，LIPMAN L N. Properties of the major component of a peptic digest of rabbit antibody［J］. Science，1960，132（3441）：1770-1771. ［2］ LABRIJN A F，JANMAAT M L，REICHERT J M，et al. Bispecific antibodies：a mechanistic review of the pipeline［J］. Nat Rev Drug Discov，2019，18（8）：585-608. ［3］ LAN H R，CHEN M，YAO S Y，et al. Bispecific antibodies revolutionizing breast cancer treatment：a comprehensive overview ［J］. Front Immunol，2023，14：1266450. DOI：10.3389／fimu.2023.1266450. ［4］ HEIER J S，KHANANI A M，QUEZADA RUIZ C，et al. Efficacy，durability，and safety of intravitreal faricimab up to every 16 weeks for neovascular age-related macular degeneration（TENAYA and LUCERNE）：two randomised，double-masked，phase 3，noninferiority trials［J］. Lancet，2022，399（10326）：729-740. ［5］ Clinical Trials. Comparing the efficacy and safety of intra-peritoneal infusion of catumaxomab and treatment of investigator choice in patients with advanced gastric carcinoma with peritoneal metastasis（uncompleted）［EB／OL］.（2020-01-09）［2024-01-20］. https：／／classic.clinicaltrials. gov／ct2／show／NCT0422-2114?term=04222114&draw=2&rank=1. ［6］ 国家药品监督管理局. 国家药监局附条件批准卡度尼利单抗注射液上市［EB／OL］.（2022-06-29）［2024-01-20］. https：／／www.nmpa.gov.cn／directory／web／nmpa／／／／／／／／zhuanti／zt2023／ypgzhlfzh／shypqxgg／ggjzcx／0220629135936153.html. ［7］ U. S. Food and Drug Administration. Bispecific antibody development programs guidance for industry［EB／OL］.（2021-05）［2024-01-20］. https：／／www.fda.gov／regulatory-information／searchfda-guidance-documents／bispecific-antibody-development-programs-guidance-industry. ［8］ DATTA-MANNAN A，CROY J E，SCHIRTZINGER L，et al.Aberrant bispecific antibody pharmacokinetics linked to liver sinusoidal endothelium clearance mechanism in cynomolgus mon -keys［J］. MAbs Internet，2016，8（5）：969-982. ［9］ GERA N. The evolution of bispecific antibodies［J］. Expert Opin Biol Ther，2022，22（8）：945-949. ［10］ SAMPEI Z，IGAWAT，SOEDA T，et al. Identification and multidimensional optimization of an asymmetric bispecific igg antibody mimicking the function of factor viii cofactor activity［J］.PLoS One，2013，8（2）：e57479. DOI：10.1371／journal.pone.0057479. ［11］ WEBSTER C，BRYSON C，CLOAKE E，et al. A comparison of the ability of the human IgG1 allotypes G1m3 and G1m1，17 to stimulate T cell responses from allotype matched and mismatched donors［J］. MAbs，2016，8（2）：253-263. ［12］ HARRIS R J. Heterogeneity of recombinant antibodies：linking structure to function［J］. Dev Biol（Basel），2005，122：117-127. ［13］ CHUNG C H，MIRAKHUR B，CHAN E，et al. Cetuximab-induced anaphylaxis and IgE specific for galactose-alpha-1，3-galactose ［J］. N Engl J Med，2008，358：1109-1117. ［14］ LEE H Y，SCHAEFER G，LESACA I，et al. "Two-in-One" approach for bioassay selection for dual specificity antibodies［J］. JImmunol Methods，2017，448：74-79. ［15］ REGISTER A C，TARIGHAT S S，LEE H Y. Bioassay development for bispecific antibodies-challenges and opportunities［J］.Int J Mol Sci，2021，22（10）：5350. ［16］ KARLSSON R，FRIDH V，FROSTELL Å. Surrogate potency assays：Comparison of binding profiles complements dose respo-nse curves for unambiguous ssessment of relative potencies［J］. JPharm Anal，2018，8（2）：138-146. ［17］ U. S. Food and Drug Administration. Bispecific antibodies：an area of research and clinical applications［EB／OL］.（2023-08-02）［2024-01-20］. https：／／www.fda.gov／drugs／news-eventshuman-drugs／bispecific-antibodies-area-research-and-clinicalapplications. ［18］ KOEPF E，SCHROEDER R，BREZESINSKI G，et al. The missing piece in the puzzle：Prediction of aggregation via the proteinprotein interaction parameter A（∗）（2）［J］. Eur J Pharm Biopharm，2018，128：200-209. ［19］ SIMLER B R，HUI G，DAHL J E，et al. Mechanistic complexity of subvisible particle formation：links to protein aggregation are highly specific［J］. J Pharm Sci，2012，101（11）：4140-4154. ［20］ JIAO N，BARNETT G V，CHRISTIAN T R，et al. Characterization of subvisible particles in biotherapeutic prefilled syringes：the role of polysorbate and protein on the formation of silicone oil and protein subvisible particles after drop shock［J］. J Pharm Sci，2020，109（1）：640-645. ［21］ CHANG B S，KENDRICK B S，CARPENTER J F. Surface-induced denaturation of proteins during freezing and its inhibition by surfactants［J］. J Pharm Sci，1996，85（12）：1325-1330. ［22］ LIU L，QI W，SCHWARTZ D K，et al. The effects of excipients on protein aggregation during agitation：an interfacial shear rheology study［J］. J Pharm Sci，2013，102（8）：2460-2470. 收稿日期：2024-01-22 编辑：王佳凤 转自：中国生物制品学杂志2024年5月第37卷

点击上方的 行舟Drug ▲ 添加关注 我国双特异性抗体药物注册申报现状及药学审评思考 来源 《中国生物制品学杂志》 2024年5月 第37卷第5期 作者 阚红金，韦薇，程速远 国家药品监督管理局药品审评中心 摘要 近年来，国内外双特异性抗体发展迅速，截至2023年12月，全球已有近200个双特异抗体正在进行临床研究，10余个双特异性抗体药物获批上市。本文分析了国内外双特异性抗体注册申报现状，并结合药学审评经验及相关文献，对此类产品药学开发中的常见技术问题进行探讨，以期为双特异性抗体药物的药学开发及评价提供参考。 关键词 双特异性抗体；临床试验申请；新药上市申请；药学审评 _ 正文 _ NISONOFF等[1]在20世纪60年代首次提出将不同特异性的单价抗体片段的混合物重组，自此双特异性抗体（简称双抗）的发展拓展了癌症免疫治疗领域。但由于免疫原性和链错配问题的存在，双抗的发展受到了很大限制，近年来，随着科学技术的快速发展以及对双抗认知的提高，这些问题已逐渐被克服。双抗由于能同时结合2个不同的靶点或同一个靶点的2个不同表位而具有更强的抗原结合能力，在复杂疾病的治疗中十分关键[2]。LAN等[3]报道，靶向人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）的双抗已显示出将免疫细胞定向至HER2阳性乳腺癌细胞的能力，从而有效杀伤肿瘤细胞。已完成的临床研究显示，Roche的法瑞西单抗（Vabysmo）靶向血管生成素-2（angiopoietin-2，Ang-2）和血管内皮生长因子-A（vascular endothelial growth factor-A，VEGF-A），用于治疗新生血管性或湿性年龄相关性黄斑变性和糖尿病黄斑水肿，相比1~2个月眼部给药1次的阿柏西普，Vabysmo在达到同样治疗效果下可将给药时间延长至3~4个月，有效降低了治疗负担[4]。 自2009年首个双抗卡妥索单抗（Catumaxomab）批准上市以来，多个双抗药物进入研发的不同阶段。截至2023年12月，全球已有近200个双抗正在进行临床研究，10余个双抗药物获批上市。本文分析了国内外双抗注册申报现状，并结合药学审评经验及相关文献，对此类产品药学开发中的常见技术问题进行探讨，以期为双抗药物的药学开发及评价提供参考。 1 国内外双抗药物受理情况分析 1.1 国外已上市双抗情况分析 根据已经公开的信息，截至2023年底，全球已获批14款双抗药物（包括已退市的），其中10款为2022年后上市。获批的双抗药物涉及的靶点多样，包括分化簇3（cluster of differentiation 3，CD3）、分化簇19（CD19）、表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）、细胞间质上皮转换因子（cellular-mesenchymal epithelial transition factor，cMET）、程序性细胞死亡蛋白-1（progra-mmed cell death protein-1，PD-1）、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4（cytotoxic T lymphocyte associated protein-4，CTLA-4）、B细胞成熟抗原（B cell maturation anti-gen，BCMA）、凝血因子Ⅸ（coagulation factorⅨ，FⅨ）、凝血因子Ⅹ（FⅩ）、VEGF-A和Ang2等。适应症多为血液瘤、多发性骨髓瘤、消化道肿瘤、非小细胞肺癌、黑色素瘤等恶性肿瘤，也进行了血友病、眼科及关节炎等适应症的扩展探索。见表1。 全球已上市双抗药物中，有4家已在国内获批上市，包括Amgen的贝林妥欧单抗、Roche的艾美赛珠单抗、法瑞西单抗、格罗菲妥单抗，其中贝林妥欧单抗在国外获批5~6年后在国内上市，Roche的3种双抗国内外获批时间从1年逐渐缩短至1月，可见双抗在国内的上市时间与欧美的差距逐渐缩短，这得益于国内近年来加快审评、审批的各项举措及国际多中心临床的开展，明显提高了国内用药的可及性。在国内进行新药上市申请且处于审评中的包括Janssen的特立妥单抗、Roche的莫妥珠单抗、Johnson&Johnson的埃万妥单抗。 国外已上市双抗药物在我国正开展临床试验的包括Pfizer的Elranatamab、Johnson&Johnson的Tal-quetamab、Abbvie/Genmab的Epcoritamab-bysp，目前在国内均已进入关键的临床试验阶段。除此之外，全球尚未上市，国内外同步开展临床试验，且已进入关键临床试验的包括卡妥索单抗（Catumaxo-mab）、Amgen的Tarlatamab（靶点CD3ExDLL3）、Me-dimmune Llc研发的Volrustomig（PD-1x CTLA4）、诺和诺德制药的Mim8（靶点F9x F10）、阿斯利康的Ge-furulimab（C5抑制剂）、默克雪兰诺的Bintrafuspalfa（靶点PD-L1x TGF-β）、ZymeworksInc的Zanidatamab（靶点HER2）、Abl Bio Inc的TR-009（靶点DLL4x VEGFA）。值得注意的是，首个双抗药物卡妥索单抗（Catumaxomab）于2009年被欧盟批准上市，用于恶性腹水治疗，于2017年因商业原因退出市场。广州凌腾生物医药有限公司重启了卡妥索单抗在国内的开发，目前最高研发阶段为临床Ⅲ期，用于治疗胃癌[5]。 1.2 国内双抗注册受理情况分析 中山康方生物医药有限公司的卡度尼利单抗注射液（代号：AK104，商品名：开坦尼）已于2022年6月由NMPA获批上市，靶向人PD-1和CTLA-4，用于治疗既往接受含铂化疗治疗失败的复发或转移性宫颈癌患者，是全球首个获批上市的肿瘤双免疫检查点抑制剂双抗，也是国内首个获批上市的双抗[6]。新药上市申请方面，中山康方生物医药有限公司研发的依沃西单抗（AK112）是一种特异结合人VEGF和PD-1的人源化双抗，用于治疗联合培美曲塞与卡铂用于经EGFR酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor，EGFR-TKI）治疗后进展的EGFR突变的局部晚期或转移性非鳞非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC），目前已申请上市，处于审评中。 除已上市及正申请上市的品种外，国内双抗药物的临床研究也取得了阶段性进展，截至2023年底，中国大陆已有152个双抗获得临床试验申请（Investigational New Drug，IND）的批准，用于基于免疫肿瘤学的癌症及自身免疫性疾病治疗，且已成为双抗临床开发的重点。根据靶点组合和适应症的区别，主流的双抗类型可分为3类：含PD-1/PD-L1轴类、CD3招募类及其他类。目前国内处于临床Ⅲ期的双抗见表2。 文章内容由凡默谷小编查阅文献选取，排版与编辑为原创。如转载，请尊重劳动成果，注明【来源：凡默谷公众号】。 2 双抗药学审评中常见问题及思考 双抗具有与单抗相似的理化性质，单抗典型质量研究方法大部分也适用于双抗，但双抗由于分子固有特性、特异性纯化工艺、产品相关杂质与单抗存在一定差异，质控研究又有自身特点。本文结合审评经验，列举了双抗药物审评中常见药学问题，着重强调了质量研究中可能遇到的问题，以期为双抗药物的药学开发及评价提供参考。 2.1 双抗特异性 FDA于2021年5月发布的《Bispe-cific Antibody Development Programs Guidance for Industry》在双抗药学研究和控制（Chemical Manufacturing and Control，CMC）方面提出，应研究可能影响药理学的质量属性，包括抗原特异性、与抗原表位结合的亲和力、与抗体结合的亲和力（针对同一细胞上的2个分子的双抗）、效价、产品相关杂质（如聚集体、片段、同源二聚体及其他错配形式）、稳定性及半衰期等，并指出“某些情况下，FDA可能会要求将双抗与针对相同抗原靶点的已批准单特异性产品进行比较（与类似单特异性产品相比安全性和/或有效性应有所提高），以便为双抗的获益风险评估提供信息”，此处强调了双抗特异性的重要性，与仅具有组合效应的双抗相比，更倾向于特异性双抗。 双抗药物开发时比传统的单抗药物面临更多的挑战，如某些双抗形式可能显示出不如其母体单抗的药代动力学特性[8]。该研究评估了两种IgG融合双抗形式（IgG-ECD和IgG-scFv）在食蟹猴体内的代谢，结果显示，两种IgG融合双抗形式清除较快、较其单抗分子半衰期短，因此选择合适的双抗形式是开发的关键部分[9]，通常需要大量的筛选研究工作，重点是提高稳定性，降低多反应性和自缔合潜力，去除免疫及消除化学和蛋白水解切割位点。早期的体外研究可能会对选择具有最佳亲和力和稳定性的工程细胞株具有指导意义。如文献报道，艾美赛珠开发时曾从40000个双抗中筛选，针对靶向FIX x FX活性、药代动力学改善、溶解度改善、脱酰胺和去免疫等进行了优化，最终筛选出emicizumab。部分抗体通过添加透明质酸酶等辅料制备皮下注射剂型，以高浓度形式给药，延长半衰期，方便患者给药[10]。目前国内外制药企业构建了高通量双抗制备和筛选平台，如苏州康宁杰瑞生物科技有限公司的电荷排斥诱导双特异性（Charge Repulsion Improved Bispecific，CRIB）平台、武汉友芝友生物制药股份有限公司的Ybody、Roche双抗筛选平台、Merck的SPLIT INTEINS平台、赛诺菲的CODV-Ig等，为快速、高效获得高质量、疗效好的双抗提供了平台支持。 2.2 结构研究 部分双抗与IgG单抗结构类似，分子较大，研发时采用传统的生物物理学工具，如圆二色谱（circular dichroism，CD）、傅里叶变换红外光谱（Fourier transform infrared spectrometer，FTIR）和差示扫描量热法（differential scanning calorimetry，DSC）等，对大的、多结构域蛋白或小部分变体微小结构变化的检测灵敏度下降，导致采用这些生物物理学技术对双抗提供的额外表征有限。但仍应尽可能采用多种正交方法对双抗的高级结构进行表征，以便从多角度了解蛋白质高级结构，这对发生可能影响产品安全、有效性的药学变更时，如何证明产品变更前后的可比性也具有益处。此外，双抗分子结构较为复杂，氨基酸序列测定时，部分双抗的氨基酸覆盖率可能达不到100%，建议尽可能采用多种酶切形式结合肽图提高序列覆盖率。 2.3 产品相关杂质/有关物质 双抗产品相关杂质/有关物质可能包括分子大小变异体、电荷异构体、序列变异体、错配抗体、半抗体、糖化变体、氧化变体、天冬氨酸异构化等。对于分子大小变异体、电荷异构体等含量较多产品相关杂质/有关物质可采用色谱法富集，对于序列变体等痕量变异体可通过强降解方法制备，开展进一步的质量研究，分析对活性的影响。 部分双抗开发研究时出现序列变异体，已知治疗性抗体恒定区的异型变异体可在异型错配患者中引发免疫原性反应，但与临床影响无关[11]。开发者应从DNA水平、蛋白水平研究序列变体的来源、不同代次细胞中的含量，并对序列变体进行鉴别，结合已有的非临床、临床研究鉴定该变异体对安全性、有效性、免疫原性不会产生影响。若与基因突变有关，应严格控制细胞限传代次，必要时在质量标准中拟定合理的限度。 双抗因二硫键偏多，可能会出现二硫键错配结构，另外如果抗体轻链和重链可变区中存在游离巯基，可能会影响其生物活性，导致生物学活性降低[12]，应在研究时采用合适的方法（如非还原变性-酶切肽图结合纯度方法）表征二硫键配对方式、游离巯基含量等，鉴定二硫键已正确配对。 考虑到抗CD3或抗Fc受体的同源二聚体可能会导致细胞因子的释放，而后者又是双抗类产品常见的安全性风险，应对同源二聚体进行定量分析，这对于与效应细胞结合的双抗十分重要。此外，新的结构可能会导致增加免疫原性[7]。 部分双抗互补性决定区（complementarity deter-mining region，CDR）存在一定的氧化、脱酰胺、异构化、糖基化等，考虑到CDR区影响样品的有效性，增加免疫原性风险，CHUNG等[13]报道，聚糖结构α1-3连接半乳糖和N-羟乙酰神经氨酸（N-glycolylneuraminic acid，NGNA）可能参与不良免疫反应，应明确具体位点、含量，分析对活性、药代、安全性及免疫原性等的影响，制定合理的控制措施。 2.4 生物学活性 由于双抗的作用机理多样，如细胞连接、受体桥接失活、受体桥接激活、双靶点同时作用、双靶点顺序作用等，因此双抗分子开发时，除抗原结合试验、细胞表面配体结合试验、效应器功能测定外，还应尽可能开发反映双抗2个靶标结合/协同效应的生物学活性测定方法（mechanisms of action，MOA）。完善的生物测定法对于生物制品的表征和控制以及临床研究结果的解释至关重要，要求具有较好的准确性和重现性，充分体现分子作用机制，最好使用单一检测形式满足检测所需性能（即捕获分子的双重活性和潜在的协同效应），以及检测多方面的结构变化[14]。 根据分子的作用机制，除应测定主要生物学活性外，还需考虑开发多种免疫学方法，如细胞杀伤、细胞因子分泌、抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC）、抗体依赖性细胞介导的吞噬作用（antibody dependent cellular phagocytosis，ADCP）等，对产品进行表征。REGISTER等[15]汇总了目前双抗生物学检测常用方法，通过案例分析结合检测、MOA、功能检测（其他支持MOA表征方法）、效应器功能检测、杂质生物测定等表征方法，为不同类型双特异性分子的生物测定开发提供策略。 目前部分企业仅开发分子水平的生物学活性检测方法，未开发细胞水平的活性研究方法。一方面与方法开发难度有关，据文献报道[16]，开发稳健且适合质量控制（Quality Control，QC）的基于细胞的生物检测方法比开发非基于细胞的结合检测方法更具挑战性，细胞水平检测方法方法变异度大；另一方面，生物测定的开发、执行、转移和维护成本很高。FDA曾在2023年8月发表了针对三阴性乳腺癌双抗的研究，比较了2种不同形式双抗的生物学活性。一种具有2个针对每种抗原的结合位点的双可变结构域免疫球蛋白（dual variable domain-Ig，DVD-Ig），另一种针对每种抗原具有1个结合位点的杆臼结构（knob-in-hole，KIH）。研究发现，用于分析的细胞类型（MDAMB-231和BT-20细胞）以及抗肿瘤活性的测定会影响检测能力，如一种分析法（细胞活力）可检测2种细胞系的抗肿瘤作用，但另一种分析法（台盼蓝细胞增殖）不够灵敏，无法检测BT-20细胞的抗肿瘤作用[17]。因此进行双抗的生物学活性研究时，开发合适的细胞系以及灵敏的检测方法非常重要。 2.5 不溶性微粒（sub⁃visible particle，SvP）问题 目前开发的双抗产品浓度均较高，可能会引发SvP升高。SvP形成原因很多，包括分子的固有特性、处方、制剂工艺及贮存/稳定性等均可影响SvP，分析方法也会影响SvP检测结果的可靠性。 已知可逆的蛋白质-蛋白质（自缔合）相互作用会导致光散射增加，可能会影响聚集和乳光度[18]，观察到澄清度/乳光度升高。蛋白质聚集，尤其是在高浓度时，可能会导致制剂中的SvP计数升高。SIMLER等[19]报告了蛋白质聚集与SvP形成之间的机制途径。抗体处方中常添加聚山梨酯80或聚山梨酯20保护蛋白质免受搅拌强制降解，已知聚山梨酯20降解可能因形成不溶性游离脂肪酸（free fatty acid，FFA）微粒导致SvP[20]。抗体制剂工艺多存在搅拌、冻融环节，可能会影响SvP形成。有研究报道，抗体冻融时蛋白质的疏水基团和亲水基团会发生一定程度上的反转，液体中的气泡在冻融过程中可能会溶解和逸出，导致蛋白质结构的变化，易于聚集形成SvP[21-22]，此时需结合冻融研究、运输稳定性研究证实。根据《美国药典》<787>、《欧洲药典》2.9.19和《中国药典》三部（2020版）通则0903要求，推荐采用光阻法、显微计数法检查SvP，如果光阻法测定结果不符合规定或供试品不适于用光阻法测定时，应采用显微计数法进行测定，并以显微计数法测定结果作为判定依据。对于滴眼液，应按照《美国药典》<789>规定，限度更严。两种分析方法的变异性可能会影响观察到的SvP水平。 针对抗体药物储存时出现SvP，应采用多种分析方法，如显微镜、FTIR光谱、拉曼光谱、Energy Dispersive X-Ray Spectroscopy（EDX光谱）、流动成像等，尽可能对SvP进行鉴别，分析SvP的组成，形成原因，是否随储存时间而增加等，进行必要的安全性评估，并采用合理的控制策略进行控制（如使用前过滤、替换为纯度更高的辅料等），原则上应符合现行药典及同类品种的要求。 3 结语 随着双抗平台技术的发展，双抗药物免疫原性和链错配问题等逐渐被克服，贝林妥欧单抗、艾美赛珠单抗等10余个双抗药物已在全球获批上市，用于治疗癌症、血液系统、眼科、免疫系统疾病等。双抗药物的开发仍在快速发展中，是当下制药行业最热门的新药研发方向之一，国内外药企研发速度正在逐渐缩短差距。本文基于对多个双抗品种的审评经验，结合文献调研等对双抗药物的国内外注册申报现状进行了分析，并汇总探讨了双抗审评中常见的技术问题，以期通过研发生产方与监管方共同努力，强化技术和共性问题交流，为患者提供安全有效、质量可控的新型双抗药物。 参考文献 详见《中国生物制品学杂志》 2024年5月 第37卷第5期 文章信息源于公众号凡默谷，登载该文章目的为更广泛的传递行业信息，不代表赞同其观点或对其真实性负责。文章版权归原作者及原出处所有，文章内容仅供参考。本网拥有对此声明的最终解释权，若无意侵犯版权，请联系小编删除。 学如逆水行舟，不进则退； 心似平原走马，易放难收。 行舟Drug 每日更新 欢迎订阅+ 医药大数据|行业动态|政策解读

9月25日，经历过简单的波折后，湖北武汉的创新药企业友芝友生物，登陆了港交所。这是今年以内登陆港交所的第6家内地未盈利生物科技公司。友芝友生物开盘市值32亿港元，截至目前，这是港股之上，今年以来诞生的最小一支带B上市的生物科技股。发稿前，友芝友生物股价16.36港元，市值31.57亿港元。友芝友生物实时行情  数据来源：雪球成立于2010年的友芝友生物，位于武汉市东湖高新区，基于双特异性抗体平台，开发用来对抗重大疾病的生物创新药。与大多数同行选择围绕特定肿瘤开发的创新药不同，友芝友生物主要针对癌症的严重并发症，即恶性腹水、恶性胸水，这是临床实践中的重大空白领域。友芝友生物的核心产品M701，是一款重组双抗药物，靶向EpCAM表达癌细胞及T细胞表面抗原CD3，主要用于恶性腹水和恶性胸水的缓解治疗。2022年1月，M701完成了治疗恶性腹水的I期临床试验，正在进行II期临床试验，计划在2025年第4季度上市。在同类创新药中，M701进展十分靠前。此外，友芝友生物还布局了6款在研产品，都已经进入临床阶段，覆盖癌症相关并发症、癌症及老年性眼科疾病。商业化层面，友芝友生物值得期待的点还是比较可观的。上市前，友芝友生物完成了多轮融资，累计募集资金数亿元，吸引了武汉高科、湖北科技投资集团、光谷金控、华大共赢、磐霖资本等国资、产业、专业创投背景的投资机构入局。根据上市前的股权结构，石药集团旗下的恩必普药业，是友芝友生物最大的股东。那么，此番逆势登陆港股，等待友芝友生物的会是什么？带B登陆港股，今年已经不破发了！时至今日，当人们谈及Biotech企业带B登陆港股，兴奋中会多几分审慎。2021年下半年以来的破发潮，让港交所的Biotech新股表现不确定性陡增。不过，进入2023年以来，未盈利的Biotech企业在港股市场上的发行颓势，已经有所改善。五一小长假后的第一个交易日，绿竹生物登陆港交所，是2023年在港股上市的第一家未盈利Biotech企业。IPO当天，绿竹生物的股价收盘于下跌超过30%的水平。此后的6月、7月和9月，科笛、来凯医药、科伦博泰生物、宜明昂科纷纷带B上市，股价都在上市当天稳中收涨。其中，来凯医药IPO首日的股价涨幅超过20%。至此，今年已经上市港股的未盈利Biotech企业中，IPO当天股价表现4涨1跌，整体上扭转了这类企业上市即破发的局面。现阶段，对于登陆港交所的未盈利Biotech企业而言，真正的压力，在于流动性。如果用换手率来做简单评估，在2022年，登陆港股的未盈利Biotech企业股票流动性急转直下，跌落到历史最低点。进入2023年以来，前述股票的流动性略有提升，但整体仍处于历史低位。港股未盈利Biotech股票的平均换手率  数据来源：动脉网根据Choice行情数据测算对于Biotech企业而言上，上市的目的，本质都是为了拓展融资渠道。在投资者看来，，如果一家企业的股票流动性很低，则意味着变现难度比较大。金融上，变现难度越大，作为风险补偿，投资者需要的投资溢价越高。在市场整体相对低迷期间，投资者持有低流动性资产的意愿很低。换言之，如果股票流动性很低，Biotech企业很难通过将股权转让给不特定的公众而完成募资。这样的上市，对于Biotech企业的经营，几乎没有实质性的帮助。进一步分析未盈利Bioech企业的流动性表现，可以看出，即便是在2022年至2023年期间，也出现过高流动性的带B新股。比如，2023年7月登陆港股的科伦博泰生物，在上市2日、5日和10日的换手率，分别为5.3%、6.8%和10.6%，接近2021年带B Biotech新股的中位水平。因此，至少在流动性的层面，未盈利Biotech企业在港股的表现，分化十分明显。自2018年市场对未盈利的Biotech企业开闸以来，港股之上的投资者，已经慢慢适应了这些无法用传统指标衡量的新标的。随着新的交易体系被建立起来，很难再用一类企业的共性，来研判特定企业的市场表现。对于友芝友生物而言，港股之旅到底能不能如愿，还得从在研产品本手入手分析。硬核Biotech也缺钱作为一家以开发创新药为主业的公司，友芝友生物的技术平台和管线布局，可谓相当硬核。友芝友生物是国内双抗药物自主研发的先行者。早在2012年，友芝友生物就启动了早期管线M802的研发，这是国内首个获得IND批准的自主研发双抗药物。而眼下作为核心产品推进的M701，在2013年启动研发，是国内第二个获得IND批准的原创双抗新药。此后，友芝友生物大力推进M701的研发。在全球恶性腹水、恶性胸水特效药的研发中，M701的进展始终处于前列。在M701、M802之外，友芝友生物还陆续布局了Y101D、Y332、Y400等新药管线。其中，Y400已经授权给康哲维盛。友芝友生物的研发管线  图片来源：招股书友芝友生物的在研管线，全部基于内部的技术平台开发。成立至今，友芝友生物开发了4个技术平台，包括自研的YBODY®平台、Check-BODY平台及Nano-YBODYTM平台，及与武汉病毒研究所合作开发的UVAX®平台。其中，YBODY®平台专注于单链可变片段－抗原结合片段－可结晶片段结构（scFv-Fab-Fc结构）的非对称人免疫球蛋白G (IgG)类双抗药物的开发。友芝友生物旗下的3歌T细胞结合双抗药物管线M701、M802和Y150，均由YBODY®平台开发。Check-BODY平台专门用作开发对称性四价双抗药物，产出Y101D。Nano-YBODYTM平台专门用作开发基于单域抗体的对称型四价双抗药物，实现更高的结合亲和力、更稳定、更低的免疫原性及更高的产品收得率。在Nano-YBODYTM平台技术之上，友芝友生物发现和开发了Y400和Y332。此外，与武汉病毒所合作的UVAX®平台，在新冠疫情期间，开发了Y2019，用来对抗新冠病毒。当然，硬核实力背后，是长期的资金和人员投入。成立13年以来，友芝友生物是没有主营业务收入的，除了几次对外融资，主要的资金来源是政府补助，销售蛋白抗原也带来了少量收入，但并不稳定。形成对比的是，核心管线进入开发中后期，研发费用支出逐年走高。友芝友生物的收支结构  图片来源：招股书根据招股说明书，在2021年、2022年及截至2023年5月31日的5个月间，友芝友生物投入在双抗新药管线中的研发费用，5820万元、7850万元和4940万元，本就不富裕的现金流，日渐吃紧。2022年10月，友芝友生物完成C轮融资，录得现金1.535亿元，资金压力稍有缓解。不过，短短半年后，整个公司的现金存量即腰斩。除了日常的经营相关支出外，在研管线的持续研发，对现金流提出了很高的要求。友芝友生物的资产负债表  图片来源：招股书过去10年间，友芝友生物将最多的研发资金投入到M701。数据显示，2013年至2020年间，M701产生的研发开支总额一直高于当时正在开发的任何其他候选药物产生的研发支出。然而，M701真正成为吞金兽，是在2021年以后。根据招股说明书，由于在2021年12月启动治疗恶性腹水的II期临床试验，加上拓展其他适应症，2021年至2022年间，M701的研发支出由990万元，增加至2350万元。到2023年，M701吞金的速度更快，仅前5个月，就用掉2550万元，占同期研发支出总额约40.1%。至于M701是否值得这样重的投入，后文将具体分析。实际上，M701并非特例，任何创新药管线的推进，都伴随着大量的资金投入。比如，2021年2月，友芝友生物启动Y101D的研发。后者是一款靶向PD-L1和TGF-β的双抗注射液，用于胰腺癌、胆管癌、小细胞肺癌等治疗难度极大的实体瘤。2021年，友芝友生物投入2710万元，完成了Y101D的临床前开发，准备申请IND。到2022年，友芝友生物又花费1360万元，推进Y101D的临床研究。在2023年前5个月，友芝友生物在Y101D之上投入1870万元，用于Y101D联合疗法临床试验的两项Ib/II期临床试验。无重金，不新药。对于友芝友生物而言，有硬核的技术实力支撑，即便没有营收，也有信心走下去。但钱的问题，无疑是眼下颇为棘手的问题，这或许也是友芝友生物一直没有放弃争取港股上市的一个重要原因。临床急需的重磅药品再来看友芝友生物为之押重注的药物是否值得。M701针对恶性腹水、恶性胸水。这是肿瘤患者最常见、医生最棘手的并发症之一。临床上，腹膜原发性或转移性恶性肿瘤生长，都可能引起恶性腹水。其中，卵巢癌、乳腺癌、胃癌、肺癌和胰腺癌等多种肿瘤患者往往出现这种并发症。恶性胸水波及的范围更广，数据显示，约45%的肺癌患者、2%~11%的乳腺癌患者、41.6%的淋巴母细胞淋巴瘤患者、33%的卵巢癌患者会出现恶性胸水。通常，由于恶性腹水、恶性胸水与预后不良的多个器官的恶性肿瘤有关，治疗难度极大。现阶段，一旦患者出现恶性腹水、恶性胸水，能用的治疗方案十分有限，尤其是对于晚期肿瘤患者，除了缓解症状，几乎别无他法。实践中，常规的穿刺术、利尿剂，或者腹膜、胸膜内输注化疗药物、抗血管生成药物，或者配合穿刺术的免疫抑制剂，被用来治疗恶性腹水、恶性胸水。但这些措施治标不治本，还可能诱发新的问题，耽误进一步救治。比如，腹膜内、胸膜内输注抗血管生成药物，可以下调肿瘤细胞表面与血管生成及血管通透性，改变相关的信号通路（如VEGF），从而抑制肿瘤生长分化，抵抗肿瘤，并减少积液。但这种方式疗效有限，复发率高，并没有得到临床指南推荐。如果仅从患病人数看，恶性腹水、恶性胸水并不能算很大的适应症，但这类疾病治疗昂贵。仍以腹膜内、胸膜内输注抗血管生成药物为例，患者每年的治疗费用高达数万元。因此，即便治疗手段匮乏，恶性腹水、恶性胸水疗法的市场规模仍达到数百亿元。根据友芝友生物招股说明书，2018年至2022年间，国内恶性腹水治疗市场规模从99亿元增长至108亿元，恶性胸水疗法的市场规模，则总109亿元增长至117亿元。伴随更有效的创新疗法出现，恶性腹水、恶性胸水疗法的市场规模还将持续扩大。实际上，在全球范围内，开发治疗恶性腹水、恶性胸水的特效药，去填补这个巨大的临床空白，一直是新药研发重要的方向。2009年，卡妥索单抗率先获批上市，成为全球首个用于治疗恶性腹水的双抗药物。不过，由于商业化表现不理想，卡妥索单抗无奈退市。2022年8月，卡妥索单抗的开发商又向EMA申请续期上市许可，目前正在审查中。全球在研的恶性腹水、恶性胸水创新药  图片来源：招股书现阶段，除了卡妥索单抗外，全球还有6条专门为治疗恶性腹水或恶性胸水而开发的创新药物管线进入临床研究。除了友芝友生物采用的双抗药物外，这些在研管线中，有细胞疗法、多肽药物等创新的药物形态。不过，相比已经有过药物上市的双抗药物，多肽药物还处于临床开发早期，细胞疗法虽然表现出了显著疗效，但费用昂贵，也有待进一步优化。在全部相关在研产品中，友芝友生物的M701开发进展相对靠前，除了同样开发卡妥索单抗的凌腾生物，和靶向Endostatin的先声药业外，友芝友生物将M701的恶性腹水适应症研发推进到II临床，处于创新药开发的第一梯队，是有望成就治疗恶性腹水、恶性胸水的重磅药物的。从这个意义上讲，友芝友生物在M701之上的高额前期投入，是值得的。当然，M701不是友芝友生物的全部。对于友芝友生物而言，中短期看M701，长期看储备管线，无论是快速跟进的Y101D，还是持续加码的Y150，都颇值得期待。从针对肿瘤并发症的M701，到针对胰腺癌、胆管癌的Y101D，友芝友生物一直在尝试啃下肿瘤临床治疗中的硬骨头。我们也希望看到这样硬核的Biotech企业，不断战胜自己，一点一点走向成功。*封面图片来源：123rf近期推荐声明：动脉网所刊载内容之知识产权为动脉网及相关权利人专属所有或持有。未经许可，禁止进行转载、摘编、复制及建立镜像等任何使用。动脉网，未来医疗服务平台