AACR2023：TILs技术各显神通

2023-05-05

AACR会议免疫疗法细胞疗法临床申请

▲ 2023CGCT第三届中国基因与细胞治疗青藜风云论坛，详情点击上方图片获取↑↑↑TILs的概念是好的，但是实际技术上的推进相比CAR-T等要困难许多，各家TILs也在努力打造自己的技术壁垒，尝试差异化突出。此次AACR上也有三款TILs做了海报摘要展示。1.沙砾生物摘要4062：The discovery and development of a CRISPR/Cas9-engineered tumor-infiltrating lymphocytes product (GT316) as a next-generation TIL therapy(CRISPR/Cas9工程肿瘤浸润淋巴细胞产物(GT316)作为下一代TIL疗法的发现与开发)技术平台：全基因组CRISPR/Cas9筛选平台ImmuT Finder®和制造工艺平台KOReTIL®目标难点：TIL产品在制造过程中快速扩增后会产生“易耗尽”表型，和肿瘤微环境中各种免疫抑制机制一起损害了TIL输注后的持久性和抗肿瘤功效。方法和表现：ImmuT Finder平台旨在发现可以最大化TIL功能的潜在免疫调控靶点。该平台采用了带有肿瘤抗原特异性TCR-T的T细胞，这些T细胞被带有同源肿瘤抗原的肿瘤细胞反复刺激，并表现出与TIL类似的衰竭情况。研究人员通过几轮筛选，验证了30个筛选的目标TCR靶点，进一步保留对 TCR-T的增殖和功能有明显增强作用的，并在体外和体内测试了它们对TIL的组合效应。最后，GT304和GT312(GT316)的双重KO组合被证明是最有效的，显著改善了TIL的增殖和细胞因子的释放，在CDX和PDX小鼠模型中根除(eradicate)了肿瘤的生长，并促进了IL-2的低依赖性的长期体内存活。针对这两个靶点特异性强的sgRNAs，研究人员开发了GT316 TIL产品的制造工艺（KOReTIL®）。目前，一项由研究者发起的GT316的试验正在中国进行。其他：近日，沙砾生物的第二款产品GT201刚获得NMPA的IND批准。其进展最快的是GT101，2022年5月完成的首例患者入组。去年，沙砾生物也在AACR展示了自己的TIL平台，不过是另一款产品GT202，重点在于展示其病毒工艺平台StaViral®开发的载体设计。2.研究所TGen(The Translational Genomics Research Institute)摘要4060：Selective Neoantigens Peptide TILs(snapTILs): A next generation tumor infiltrating lymphocytes(TIL)therapy platform(选择性新抗原肽TIL(snapTIL)：下一代肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)治疗平台)技术平台：富集个性化snapTIL目标难点：体外扩增的TILs中只有一小部分能识别个人突变型的肿瘤特异性抗原。方法和表现：TGen开发了一种技术来富集具有预期(predefined)新抗原特异性的TILs，称之为选择性新抗原肽TILs(Selective Neoantigens Peptide TILs,snapTILs)。其通过对肿瘤与正常DNA的全外显子组测序来调用患者肿瘤抗原突变，生成一个肽库。接着研究人员使用一个在线预测算法和其专有的肽-MHC结合来测定筛选。然后将选定的肽与从患者肿瘤活检中分离出来的TILs孵化，产生富含识别新肽的TILs群体，即snapTILs。快速扩增后，研究人员通过检查snapTILs在患者衍生的肿瘤器官中的浸润性、IFN-γ激活程度、细胞毒性和T细胞衰竭标志物，以检测snapTILs的功效。还使用人类黑色素瘤和胰腺癌异种移植hIL-2转基因小鼠测试了snapTILs的体内疗效。结果显示：▷ 在两种癌症小鼠模型中，snapTILs对肿瘤器官的浸润水平明显高于IL2刺激的TILs。在高免疫原性的黑色素瘤中，70%的肿瘤生长受到抑制，在免疫原性差的胰腺肿瘤模型中，50%的肿瘤生长受到限制。▷ 同时，snapTILs对肿瘤的识别具有很强的特异性，因为它们在同一患者的未受影响的组织中的浸润明显较少。此外，在与自体肿瘤细胞共培养后，snapTILs被发现比IL2刺激的TILs在IFN-γ和Granzyme B的分泌方面更具有细胞毒性。3.Turnstone Biologics：TIDAL-01该公司此次展示了两个poster：（1）摘要4049：TIDAL-01: A selected TIL process that enriches for neoantigen reactive TIL in solid tumors(TIDAL-01：一种富集实体瘤新抗原反应性TIL的选定TIL过程)技术平台：Turnstone的精选TIL(Selected TILs)。其精选TIL方法采用以下基本原则：①患者特异性肿瘤抗原的无偏(Unbiased)鉴定；②从患者提取的TIL中选择最大宽度的肿瘤反应性T细胞；③选择性扩增：扩增所有肿瘤反应性T细胞并去除所有非肿瘤反应性旁观者细胞。目标难点：许多TIL疗法在实体瘤治疗中的成功是有限的。通过选择性扩增新抗原反应亚群来增强肿瘤反应性，在黑色素瘤以外的癌症中已显示出成功，强调了新抗原选择TIL方法在肿瘤突变负荷较低的适应症中的潜力。方法和表现：研究人员对肿瘤组织和自体PBMCs进行全外显子组和RNA测序，并用于预测和确定新抗原突变的优先次序。随后将合成编码突变的抗原肽加载到APCs上并与自体TIL共同培养。基于激活标记物CD134和CD137的上调，通过FACS筛选新抗原反应的TIL并扩增。大量非精选的TIL同时扩增作为对照组。最后通过细胞因子分泌、脱颗粒、CD134/CD137的上调、对自体肿瘤细胞系或器官进行杀伤的效果，来对对精选TILs进行量化和分化。结果显示：在31/34(91%)肿瘤(14/17转移性CRC、10/10NSCLC、3/3卵巢癌和3/3黑色素瘤)中，使用肿瘤碎片和分离的肿瘤成功实现了TIL扩展。CRC肿瘤占一半(17/34)。这些样本中的肿瘤突变负担差异很大，包含229到5436个突变。在所有样本中，当与装载抗原的APCs共同培养时，观察到CD134和CD137的上调以及IFN-γ的增加。TIDAL-01过程能够富集CD4和CD8的反应性。精选TILs产生的IFN-γ、TNF-α和Granzyme B比对照组TIL多50倍，脱颗粒水平至少高2倍，表明杀伤力更大。（2）摘要 4052：Direct selection of PD1+ CD39+ tumor infiltrating lymphocytes(TIL)from tumor dissociates enrich for functional tumor-reactive cells(从肿瘤解离物中直接选择PD1+ CD39+ TIL富集功能性肿瘤反应细胞)方法和表现：研究人员先将来自不同适应症的患者肿瘤材料处理成单细胞悬浮液，最大限度地提高TIL的回收率和活力。根据PD-1和CD39的共同表达，通过FACS筛选有抗原的TIL。分选的细胞或未选择的对应细胞在REP中扩增，然后分析其表型和功能特征以及对自体肿瘤细胞的反应性。结果显示：▷ PD-1+ CD39+的选择策略在多种肿瘤中始终能够分拣出一个可行的TIL群体，也能够顺利扩增。▷ TCR测序分析显示，与未选择的亚群相比，扩增后的PD-1+ CD39+TILs在多克隆试验中重新刺激后显示出产生关键效应细胞因子的能力。▷ 重要的是，PD-1+ CD39+扩增的TIL富含肿瘤反应性T细胞，对自体肿瘤显示出更好的细胞毒性活性。其他：2022年10月31日，FDA批准了Turnstone Biologics的TIDAL-01用于治疗晚期实体瘤的IND申请(NCT05628883)。该管线还有和帕博丽珠单抗联用、和OV联用的方案。TBio-4101（一种自体选择和扩展的肿瘤浸润淋巴细胞 [TIL] 疗法）的概念验证研究，在淋巴细胞耗竭化疗方案后使用短期培养、选定的自体 TIL，然后对复发或难治性黑色素瘤患者进行 IL-2 治疗。小结这四个poster各有千秋。Turnstone直接同时押注个性化TAA和PD-1+CD39+TSA，双管齐下。TGen是试图达成更精准的TAA筛选。沙砾生物的重点则是在于对TIL细胞本身增殖能力和细胞毒性的强化，从而降低TIL疗法对IL-2的依赖性。这也反映出目前TIL疗法的IL-2毒性、靶向性、有效性等问题还是行业的关注焦点，因此企业和研究机构需要进行“对症下药”的技术开发。TIL的复杂性使其临床表现有时与临床前实验结果不相匹配，也只能等待更响亮的数据说话。参考资料：1.Proceedings of the American Association for Cancer Research Annual Meeting 2023; Part 1 (Regular and Invited Abstracts); 2023 Apr 14-19; Orlando, FL. Philadelphia (PA): AACR; Cancer Res 2023;83(7_Suppl)2.各公司官网第三届中国基因与细胞治疗青藜风云论坛斗转星移，CGCT已经来到了第三个年头，在过往的两届论坛，我们共话前沿技术，我们并肩携手共建产业链、T细胞治疗的生产工艺与临床应用、新兴细胞疗法的前沿研究、基因编辑与疗法、mRNA药物开发与生产、溶瘤病毒。青藜论坛始终为细胞基因行业的青藜之士保驾护航。2023年第三届中国基因与细胞治疗青藜风云论坛（CGCT 2023），由中国研究型医院学会医工转化与健康产业融合专业委员会、博腾生物、佰傲谷BioValley 、BioBAY 联合主办，将于2023年6月9-10日在苏州召开。本次青藜论坛将特别增加免疫联合疗法的探讨专场、GCT的商业化应用与罕见病公益专场，我们将持续聚焦中国细胞基因免疫治疗学术的最前沿，站在更高的高度、更深的广度，同与会各方一齐深度探讨与分享CGT的新成果，共论CGT领域的新时代。点击”阅读原文“，进入大会官网了解更多~