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双抗正值风口，三抗已初露苗头。 2025年1月13日，先声药业旗下抗肿瘤创新药公司先声再明宣布，已与全球制药公司艾伯维（AbbVie）就其处于中国和美国进行临床1期研究阶段的，GPRC5DxBCMAxCD3的TCE三抗管线SIM0500达成许可选择协议，艾伯维将支付给先声再明一定的预付款以及最高10.55亿美元的选择性权益付款和里程碑付款，以及大中华区以外地区的销售分成。 尽管单克隆抗体和双特异性抗体在临床治疗上都发挥了至关重要的作用，但对于恶性肿瘤的治疗疗效仍然有限。随着抗体药物的发展，同时靶向三个特异性抗原结合位点的三特异性抗体，在肿瘤治疗领域展现了非凡的应用前景。 与双特异性抗体相比，三特异性抗体还能够与肿瘤细胞或免疫细胞表面的另一个靶点相结合，或桥接免疫细胞并阻断双信号通路等作用，更有利于将药物或免疫细胞重定向至肿瘤部位，增强结合特异性，提高靶向性，降低脱靶毒性，从而提升抗肿瘤能力。 因此，虽然当下全球暂时没有三抗药物获批，可是已经有不少中国Biotech布局其中。同时，MNC也从2024年开始布局，或许我们将在2025年的BD交易中看到越来越多的三抗管线。 01 MNC悄然入局 2024年三抗的交易数量超过了过去3年的总和且总额近80亿美元。 与双抗的双靶点相比，三抗的抗体组合更加丰富多样，也为抗体药物的研发提供了更多的空间。因此，MNC开始通过并购、许可交易以及股权投资等方式入局三抗/多抗赛道。 近几年三抗交易情况，据公开信息收集整理 可以看到，包括辉瑞、艾伯维、GSK、吉利德以及默沙东这些MNC在2024年都已出手，特别是默沙东一年内就花了近40亿美元并购两家专注于三抗药物开发的公司，可见其对三抗的态度。 其中，以30亿美元卖给默沙东的EyeBio值得一说。EyeBio成立于2021年，迄今为止融资1.3亿美元，而默沙东早在A轮就参与其中。2024年2月，EyeBio公布了其核心管线EYE103的1b/2a期临床积极数据，随后在5月，默沙东便出手并购，到了8月，Clinicaltrials网站便出现了EYE103临床2/3期试验的信息，可谓是惟快不破。 默沙东在2024年1月并购Harpoon的交易则更凸显默沙东对三抗的看好。此次交易除了收获临床中颇具前景的DLL3/CD3抗体管线外（MK6070），还得到了Harpoon多个三特异抗体平台，其中包括在肿瘤微环境中特异性激活的ProTriTAC和TriTAC-XR三特异抗体平台这一前瞻性技术平台。 值得注意的是，据Insight数据库信息，MK6070和罗氏的RO7616789以及泽璟生物的ZG006是全球范围内仅有的三款进入临床阶段的靶向DLL3的三抗管线。到了8月份，第一三共与默沙东签订MK6070的全球共同开发和商业化协议（默沙东保留该药在日本的独家权力），第一三共将付出1.7亿美元的首付款。 有意思的是Harpoon也曾出现在艾伯维的故事里，早在2019年，艾伯维以3000万美元+5000万美元的里程碑付款获得了Harpoon旗下一条三抗管线的全球独家授权。只是后来艾伯维对其重视不够，将权益退回。 此次艾伯维花大价钱收购先声再明的三抗管线，很有可能是受到竞争对手的影响。例如强生旗下就拥有CD38单抗、BCMA-CAR-T、BCMAxCD3双抗、甚至GPRC5DxCD3双抗等多个多发性骨髓瘤（MM）领域产品，而艾伯维自身仅有一款BCMAxCD3双抗似乎显得势单力薄。 先声再明的GPRC5D/BCMA/CD3三抗在前期研究中表现出了针对MM细胞的强大T细胞毒性效应，肿瘤杀伤效果显著，耐受性好，起效剂量低，停药后肿瘤不复发等多重优势。对艾伯维而言，既然错过了GPRC5D/CD3双抗，直接入局BCMA/GPRC5D/CD3三抗也不失为一种选择。 从这些并购事件不难看出，进入临床阶段的三抗管线拥有较高的交易价值。此外，涉及热门靶点的三抗管线，也极具BD潜力。目前，全球的三抗管线已经开始向肿瘤和自免这两大市场推进。 02 超100条管线在研，默沙东靠并购领先 三抗的多样性带来的更多可能性，让药企趋之若鹜。 尽管目前尚未有三抗药物获批，但已有多家生物医药企业布局三特异性抗体，并研发设计出具有迭代优势的靶点组合药物。据不完全统计，目前全球三抗药物管线已超百条，其中约有一半已进入临床阶段，只是大多数尚处于临床早期阶段。 部分在研三抗管线，据公开信息整理 MNC中，赛诺菲布局较多，如靶向Anti-CD3/CD38/CD28的SAR442257，其介导了强烈的肿瘤细胞杀伤作用，与抗CD38单抗相比，SAR442257在体外对CD38高表达和CD38低表达的MM细胞均表现出高3~4个数量级的杀伤效力。SAR443579（NKp46/CD16/CD123）则有可能成为血液瘤患者的新选择。辉瑞开发的Anti-IL-13/IL-4/TSLP(PF-07275315)，属于三功能融合蛋白，针对特应性皮炎已进入临床2期。 从时间上来看，全球的三抗/多抗管线从2021年开始大幅增长，国内同样也是从这一年开始出现增长。到了2024年，已经有多家中国Biotech布局三抗赛道，仅这一年，国内就有超过10条三抗1类新药管线首次在国内获批IND，进展较快的包括天广实、百利天恒、神州细胞、信达生物、嘉和生物、泽璟生物、恩沐生物、博锐生物以及普米斯等。 从适应症分布来看，三抗延续了单抗和双抗类药物类似的思路，最热门的领域依然是肿瘤，整体管线占比超过50%，毕竟抗肿瘤药物市场需求大、医保覆盖范围广，企业有推动创新的动力。 03 国产三抗百花齐放 国内药企正悄然加速三抗赛道的研发。 如基石药业在2024年底宣布旗下用于治疗多种实体瘤的管线CS2009（PD-1/VEGF/CTLA-4三特异性抗体）已在澳大利亚递交临床试验申请。受此消息影响，公司股价一度上涨7%。 市场之所以如此热情，既有康方双抗在2024年的铺垫，也有市场对于后续三抗爆发的期待。 从作用机制来看，PD-1/VEGF/CTLA-4三特异性抗体相对于康方PD-1/VEGF双抗，anti-CTLA-4能促进更多初始T细胞激活、迁移浸润至肿瘤组织。在第39届癌症免疫治疗学会年会上基石药业公布的临床前数据显示，CS2009展示出优于潜在竞品(包括PD-1/CTLA-4双抗、PD-1/VEGFA双抗以及抗PD-1/抗CTLA-4联合疗法)的抗肿瘤活性。 此外，阿斯利康的PD-1/CTLA-4双抗目前也有4项适应症（非小细胞肺癌、胸膜间皮瘤、宫颈癌和头颈鳞癌）处于临床3期阶段，且从前期数据来推断成功概率较高。并且这些靶点都是成熟靶点，组合之下能覆盖包括非小细胞肺癌、卵巢癌、肾细胞癌、宫颈癌、肝细胞癌、胃癌等多个肿瘤适应症。同时对于PD-(L)1疗法响应不佳的PD-L1低表达或PD-L1阴性的群体也能进一步获益。 如果说康方的PD-1/VEGF双抗有希望向K药发起冲击，那么基石药业和宏成药业都有布局的PD-1/CTLA-4/VEGF三抗是否也有进一步的空间呢？ 三特异性抗体按照作用机制的不同主要分为：T细胞接合器、免疫检查点抑制剂、NK 细胞接合器、靶向三个肿瘤相关抗原、延长半衰期的TCE以及三功能融合蛋白等。目前的国产三抗管线类型相对全面。 恩沐生物的CMG1A46药物为靶向CD3/CD19/CD20的三特异性抗体，其适应症为急性淋巴细胞白血病、血液肿瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤。CMG1A46同时靶向 T细胞表面的CD3以及B细胞上的两个抗原表位CD20和CD19，通过募集CD3+T细胞增强T细胞功能，介导B细胞耗竭并杀死表达CD19/CD20的B细胞。 基石药业的CS2006是靶向4-1BB/PD-L1/HSA的三特异性抗体，它是一款免疫检查点抑制剂，同时靶向肿瘤免疫抑制性PD-1/PD-L1通路和肿瘤免疫刺激性4-1BB通路，发挥PD-L1阻断作用以及4-1BB激活的协同效应，仅局部激活肿瘤定向的特异性免疫应答。 嘉和生物的GB263(Anti-EGFR/cMET/cMET)则走了靶向三个TAA的路径。通过靶向EGFR和两种不同的cMET表位，阻断cMET及EGFR的信号通路，下调cMET和EGFR的蛋白水平。拓创生物的TAVO-412也选择了类似思路。 普米斯生物的PM-8003是靶向PD-L1/TGF-β/VEGF的三功能融合蛋白，通过阻断TGF-β通路可以减少Treg细胞的数量，增加效应T细胞的活性，从而恢复对抗PD-L1治疗的敏感性。 有意思的是，国产三抗才刚加速，四抗就已经起步。 2024年12月20日，百利药业GNC-038四特异性抗体注射液的临床试验申请获得NMPA默示许可。9月20日，百利药业GNC-077多特异性抗体注射液临床试验也获得国家药品监督管理局药品审评中心（CDE）批准。 基于GNC平台，百利天恒开发了多款候选药物。其中，除未披露的GNC-077外，还有3款四特异性抗体已处于临床开发阶段，包括GNC-038（CD3 × 4-1BB × PD-L1 × CD19）、GNC-035（CD3 × 4-1BB × PD-L1 × ROR1）和GNC-039（CD3× 4-1BB × PD-L1 × EGFRvIII）。 可以看到国产多抗在肿瘤领域布局较为全面，考虑到近来MNC频繁收购双抗资产，并着手将肿瘤双抗管线拿去做自免临床，未来三抗在自免市场同样极具想象空间。 04 自免开始卷三抗 TCE的热浪终究开始扑向了自免。 2024年TCE双抗出尽了风头，如CD19/CD3，CD20/CD3等。2024年的交易显示未来三抗TCE将是一个重要的发展方向。2024年10月，GSK宣布以8.5亿美金收购中国恩沐生物的三特异抗体CMG1A46，根据协议，GSK将向恩沐生物支付3亿美金的首付款。 值得注意的是，新闻显示GSK计划开发和商业化CMG1A46，并将重点放在B细胞驱动的自身免疫疾病上，如系统性红斑狼疮（SLE）和狼疮性肾炎（LN），并有可能扩展到相关的自身免疫疾病。 据之前披露的信息，CMG1A46不仅可以杀伤CD19、CD20双阳性的B细胞，还可以清除CD19或者CD20单阳性的细胞，同时在体外的半数效应浓度仅为0.3pM，与传统的1+1型CD20 TCE相比，具有更好的安全性和更强的活性。在体内，CMG1A46可以在24小时内快速的清除B细胞，与传统CD20 TCE双抗相比可以给到更高的剂量，在1mpk的剂量下对B细胞的清除持续了28天。 艾伯维此次收购先声药业的SIM0500三抗，在血液瘤之外，BCMA和GPRC5D靶点在某些自免疾病的B细胞上也有表达，现有靶向BCMA的药物已经在干燥综合症、NMOSD、系统性硬化症、类风湿关节炎等自免疾病中展现出疗效。未来SIM0500在自免领域同样具有开发潜力。 有意思的是，NewCo的风也开始吹到国产多抗上。 2025年1月，药明生物与Candid Therapeutics达成研究服务合作协议，Candid将拥有一款基于药明生物通用型多特异性抗体专利技术平台WuXiBody发现的，处于临床前开发阶段的三特异性抗体的全球权益。就在20多天前，Candid还一口气宣布了三笔关于TCE与中国Biotech的研发合作交易。 2024年11月，维立志博与风险投资公司Aditum Bio就一款三抗药物达成了一项产品的独家选择权及许可协议，双方将基于维立志博CD19/BCMA/CD3三特异性T细胞衔接器（TCE）LBL-051，成立新药研发公司Oblenio。 三特异性抗体管线有望成为2025年靓丽的风口。 *封面图片来源：123rf 如果您认同文章中的观点、信息，或想进一步讨论，请与我们联系；也可加入动脉网行业社群，结交更多志同道合的好友。 近 期 推 荐 声明：动脉网所刊载内容之知识产权为动脉网及相关权利人专属所有或持有。未经许可，禁止进行转载、摘编、复制及建立镜像等任何使用。 动脉网，未来医疗服务平台

治疗性抗体已经在多个领域获得成功，如自身免疫疾病，肿瘤治疗，抗病毒等。传统的抗体为Y型结构，包含两个用于结合抗原的Fab和一个发挥效应的Fc，其中Fab的主要功能是特异性结合抗原，而Fc主要是和相关受体结合执行相应的效应功能。本文章我们将全面了解一下目前为止的Fc工程化改造，这些改造使得抗体满足相关机制要求，以更好的发挥治疗效果。 01   Fc与FcγR结合以发挥相应的细胞效应功能 人类含有6种不同的FcγR: hFcγRI，hFcγRIIA，hFcγRIIB， hFcγRIIC，hFcγRIIIA 和 hFcγRIIIB，这些受体与Fc有不同的亲和力。其中hFcγRI细胞外结构域含有三个免疫球蛋白结构域并且其与Fc的结合力最强，而其它受体细胞外区域仅含有两个免疫球蛋白结构域，它们与Fc的亲和力从较低到中等。 从功能上来看FcγR可以分为两大类，具有激活效应的受体和具有抑制效应的受体。其中hFcγRI，hFcγRIIA， hFcγRIIC，hFcγRIIIA。含有或与免疫酪氨酸激活图案（ITAM）相关。 含有ITAM（免疫酪氨酸激活基序）或与ITAM有关。其中人类激活受体中的两个hFcRγIIA和hFcRIIC)ITAM包含在FcγR本身的胞质内结构域中，而在其余的激活性受体中，它包含在相关的FcγR 链中。在小鼠中，含有4个FcγR,所有3个活化型的FcγR都需要FcγR 链来表达和传递信号。相比之下，FcγRIIB包含一个ITIM（免疫酪氨酸抑制性基序），是人类和小鼠中唯一的抑制性Fcγ R。除了这些激活性和抑制性FcγR之外，还有一个与GPI相连的hFcγR,它缺乏ITAM和ITIM基序，即hFcγRIIIB。它的功能不太清楚，有不同的研究显示其具有中性或诱饵受体的作用，调节FcγRIIA介导的中性粒细胞脱颗粒现象和ROS的产生。FcγRI是IgG的高亲和力受体，因此在很大程度上被循环中的IgG全部结合。尽管有证据表明它能够在某些B16小鼠模型中介导抗肿瘤免疫治疗，但它仍然被认为在免疫治疗中的具有较小的作用。因此，改变FcRI亲和力的相关研究相对较少。一般认为，当激活性和抑制性FcγR存在于一个特定的细胞类型上（在骨髓细胞上很常见），那么IgG与每个表达的FcγR的相对结合来调节细胞的反应。在实践中，激活性(A)与抑制性(I)或A:I 与FcγR的结合比率和/或FcγR的细胞表达谱是后续细胞活性预判的一个较好的指标，高的A:I比值提供了强有力的反应。其中另外一个关键的决定因素是抗体的亚型，例如hIgG1与大多数FcγR的结合，而hIgG4则要少得多。 hFcγR的遗传变异也可以影响表达和功能，特别是，某些单核苷酸多态性（SNPs）影响与IgG的结合。值得注意的是，158位的缬氨酸（V）到苯丙氨酸（F）突变影响FcγRIIIA与IgG1、IgG2的结合，以及在较小程度上与IgG3的结合，V158与F158相比，对hIgG1的结合力增加，从而导致激活效应的增加。同样地。Fc RIIA中第131位的组氨酸（H）到精氨酸（R）的突变会影响到与hIgG2的结合（在较小程度上影响到hIgG1），与R131相比，H131的结合增加。FcγRs可以影响抗肿瘤抗体的有效性，特别是通过激活Fc效应功能（如抗体依赖性细胞毒性（ADCC）和抗体依赖性细胞吞噬（ADCP））的抗体。ADCC被认为主要是由NK细胞发挥的效应功能。IgG与FcγRIIIA可以激活NK细胞并刺激释放含有穿孔蛋白和颗粒酶等分子的裂解颗粒，最终导致目标靶标细胞的裂解。许多临床上相关的抗癌抗体，如利妥昔单抗、赫赛汀和西妥昔单抗已被证明可以在体外激起NK细胞介导的ADCC。 ADCP是由吞噬细胞，如巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞介导的，该效应是由抗体与相应的激活性FcγRs相互作用诱发的。SGN-30是一种抗CD30抗体，用于治疗一些血液病，如霍奇金病，其可以在体外刺激ADCP。Rituximab和其他抗CD20抗体也被认为在体外和体内的各种动物模型中都能引起有效的ADCP效应。在这些模型中，去除巨噬细胞可以消除这些抗体的所有清除肿瘤细胞的能力，这突出了Fc介导的相关效应的重要性。   02   C1q参与并诱导补体介导的效应 由Fc介导的另一个重要的相互作用是它与补体的第一个成分C1q的结合。一旦有足够的Fc分子与C1q的6个球状头结合，它就会启动血清中补体蛋白的蛋白分解级联，导致过敏毒素的释放，如C3a和C5a，并在目标细胞表面形成膜攻击复合物，产生补体依赖性细胞毒性（CDC）。最初，有证据表明CDC在抗癌单抗 效应功能的发挥方面具有重要作用，通过体外研究证明的发现，肿瘤细胞过度表达补体防御分子，如CD55和CD59；而阻断这些分子可以增强利妥昔单抗的肿瘤杀伤力。CDC在抗癌抗体疗效中起作用的进一步证据包括：当慢性淋巴细胞白血病（CLL）细胞被利妥昔单抗处理时，补体成分的消耗增加；以及补体耗尽的CLL患者的血清对肿瘤肿瘤细胞裂解能力的降低。利妥昔单抗也被证明在C1q缺失的情况下是无效的。在人类淋巴瘤细胞的异种移植实验中，利妥昔单抗对C1q缺陷的小鼠也无作用，这表明补体激活是体内删除肿瘤活性的必要条件。然而，异种移植模型可能无法预测患者的补体活性，因为靶细胞可能对异种补体过于敏感。而用转基因小鼠模型（如hCD20转基因小鼠）的实验表明，没有补体激活功能的抗CD20抗体具有与野生型（WT）抗CD20抗体相当的B细胞清除能力。这表明，至少在小鼠中，补体活性是不必须的。同样的，C1q或C3的遗传性缺失并不明显影响用各种抗CD20 mAb对hCD20转基因小鼠B细胞的清除。临床数据表明，肿瘤细胞补体防御分子的表达无法预测滤泡性淋巴瘤（FL）患者接受利妥昔单抗治疗后的临床结果，进一步表明CDC不是决定利妥昔单抗成功清除肿瘤的关键因素。 03   Fc与FcRn相互作用延长抗体半衰期 由Fc介导的第三种主要的相互作用是与FcRn的作用。这种受体与FcγR家族在结构和功能方面都有很大不同。在结构上，该受体更接近于主要组织相容性复合体（MHC），但是它不包含信号转导的结构域。最初FcRn被认为在IgG从母体到胎盘的运输中起非常重要，但随后研究表明它在维持IgG平衡方面具有更广泛的作用。与上面概述的直接效应功能不同，这种相互作用使得抗体具有较长的半衰期，人类IgG抗体的半衰期超过20天，小鼠的半衰期为9天。血清蛋白，包括IgG不断地被单核细胞和内皮细胞内吞，FcRn能够使得被内化的IgG返回循环细胞表面并重新进入血液循环。这个过程中，FcRn以一种依赖于pH值的方式结合Fc的CH2-CH3界面。IgG的CH2-CH3结构域中保守的组氨酸残基（H310和H435）在酸性pH值（