低剂量盐酸二甲双胍片餐后生物等效性试验

2023-06-04

临床1期临床结果

点击上方的行舟Drug ▲ 添加关注低剂量盐酸二甲双胍片餐后生物等效性试验来源《中国新药杂志》2023年第32卷第4期作者孙明利，许馨文，魏雅丽，白海红，刘龙，佟媛旭，王瑜，刘晨，张薇，刘慧娟，李璞，李银娟，刘菊，雷春璞，王兴河首都医科大学附属北京世纪坛医院药物Ⅰ期临床试验研究室北京国仁堂医药科技发展有限公司摘要目的：研究餐后状态下单次口服受试制剂盐酸二甲双胍片与参比制剂盐酸二甲双胍片在健康受试者体内的药动学及其生物等效性。观察2种制剂在健康受试者中的安全性。方法：入选36例健康受试者，随机分成2组，每组各18例，进食高脂餐后单次口服受试制剂或参比制剂，于给药0h（进餐结束后、给药前）和给药后1，2，2.5，3，3.5，4，4.5，5，5.5，6，7，8，10，12和24h采集血样，检测血浆二甲双胍浓度。本项试验为两周期、交叉给药，清洗期为7d。采用PhoenixTM WinNonlin®8.1软件进行非房室模型药动学参数估算，采用SAS 9.4软件进行统计描述与生物等效性评价分析。如果受试制剂与参比制剂的主要药动学参数（Cmax，AUC0~t，AUC0~∞）几何均值比的90%置信区间均在80.00%~125.00%等效区间内，则证明两制剂生物等效。结果：36例受试者中有1例因不良事件脱落。受试制剂与参比制剂的主要药动学参数：Cmax分别为（418.42±94.72）和（399.52±79.49）ng·mL-1，AUC0~t分别为（3402.04±803.32）和（3219.06±704.13）ng·h·mL-1；AUC0~∞分别为（3458.50±815.42）和（3276.11±715.12）ng·h·mL-1；二者Cmax和AUC0~t，AUC0~∝几何均值比及其90%置信区间分别为103.11%（98.69%~107.72%），104.73%（100.11%~109.57%）和104.63%（100.03%~109.44%），均在80.00%~125.00%的生物等效区间内。试验过程中未发生严重不良事件和非预期不良事件。结论：受试制剂与参比制剂在中国健康受试者餐后单次口服给药条件下具有生物等效性，2种制剂安全性和耐受性好。关键词低剂量；盐酸二甲双胍片；餐后；生物等效_正文_糖尿病是困扰全球的慢性疾病，中国为糖尿病大国[1-2]，二甲双胍为2型糖尿病一线治疗药物[3-4]。原研药盐酸二甲双胍片不能满足中国医药市场，仿制药一致性评价在中国尤为重要。首都医科大学附属北京世纪坛医院药物Ⅰ期临床试验研究室于2019年3月6日至2019年4月12日研究在餐后状态下单次口服受试制剂（北京中新药业股份有限公司生产，盐酸二甲双胍片，规格为0.25g）和参比制剂（日本新药株式会社生产，商品名：Glyc⁃oran®，规格为0.25g）的生物等效性，报道如下。材料与方法1 材料1.1 药品受试制剂（test preparation，T）：北京中新药业股份有限公司生产的仿制盐酸二甲双胍片，批号：171201，规格：每片0.25g，纯度：99.993%，有效期至2020年11月，室温密闭保存。参比制剂（reference preparation，R）：日本新药株式会社（Nippon Shinyaku Co. ，Ltd. ）生产的盐酸二甲双胍片，批号：356501，规格：每片0.25g，纯度：99.987%，有效期至2019年8月，气密容器、室温保存。以上2种制剂均由北京国仁堂医药科技发展有限公司提供。1.2 仪器液相色谱泵Shimadzu LC30AD，自动进样器Shimadzu SIL30AC MP，质谱仪Sciex API5500，分析天平Mettler Toledo XPE204/Mettler Tole⁃do XPR6UD5，离心机Thermo Pico17/Thermo Sorvall ST40R，液体处理机Tomtec Quadra4LTD System，振荡器/多管涡旋混合仪LP Vortex Mixer/DMT⁃2500。数据采集和积分软件Analyst（版本1.6.3），计算软件Watson LIMS（版本7.5），其他数据处理软件Mi⁃crosoft Excel（版本2013）。2 受试者选择2.1 入选标准①健康志愿者，年龄≥18周岁。②体重指数为19.0~28.0kg·m-2，男性体重≥50.0kg，女性体重≥45.0kg。③具有与医护人员正常交流能力，依从性好。2.2 排除标准①入选前3个月内参加过任何药物试验或使用过本试验药物者。②试验前筛选过程中发现任何有临床意义的异常者。③既往有消化系统疾病或者有消化系统手术史（阑尾炎除外）影响药物吸收者。④吸烟、饮酒或药物滥用者。⑤有传染性疾病者。⑥试验开始前2周内使用过任何其他药物者。⑦有显著变态反应史者，特别是对二甲双胍及辅料过敏者。⑧入选前3个月内失血或献血≥400mL者。⑨妊娠试验阳性者；拒绝有效避孕至试验结束后6个月者。⑩不能耐受静脉穿刺采血者。本项试验共筛选132例受试者，纳入36例，汉族33例（91.67%，33/36），哈萨克族1例（2.78%，1/36），蒙古族2例（5.56%，2/36）；年龄（34.78±9.44）岁，男性27例（75.0%，27/36），体重（66.81±9.43）kg，身高（166.55±7.95）cm，体重指数（24.06±2.61）kg·m-2；本项研究获得首都医科大学附属北京世纪坛医院伦理委员会批准（批件号：2018Y136）；所有受试者均充分知情并签署知情同意书。3 试验方法采用SAS9.4选择1∶1区组随机方法产生给药随机表，入选的36例健康受试者随机分成2组。服药前禁食10h，服药前30min进食高脂餐，20min完成，根据随机表分别在不同周期餐后单次口服T/R0.25g。2周期间的清洗期为7d。受试者于每周期给药0h（进餐结束后、给药前）和给药后1，2，2.5，3，3.5，4，4.5，5，5.5，6，7，8，10，12和24h采集血样，每次取全血约4mL至K2⁃EDTA抗凝真空采血管中。1h内离心[（2500±20）g，2℃~8℃，10min]，将血浆分置于2支冻存管中，作为待测样本和备份样本，1h内放置于-20℃（-10℃~-30℃）冰箱中，24h内转移至-70℃（-60℃~-90℃）冰箱中保存。4 测定方法与样品处理4.1 色谱条件色谱柱型号：SeQuant ZIC⁃HILIC（50mm×2.1mm，5μm）。流动相A：10mmol·L-1乙酰铵溶液，流动相B：乙腈。梯度洗脱：30%A、70%B，流速0.8mL·min-1，时间0.01~0.4min；0.4min开始洗脱液进质谱，1.2min洗脱液开始进废液，2.0min停止。柱温：40℃；进样量：5.00μL。4.2 质谱条件离子源：气帘气为30psi，离子源气体为1：55psi和2：55psi，离子源温度为550℃，加热板块置于ON，离子源电压为3000V。碰撞诱导解离（collision⁃activated dissociation，CAD）：5units；电离模式：电喷雾离子化（electroSpray ionization，ESI）、正离子模式、多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）。离子对：待测物和内标分别为二甲双胍和二甲双胍⁃d6，离子对质荷比分别为130.2/68.0和136.0/68.0，滞留时间均为100ms，碰撞能量（collision energy，CE）、碰撞室入口电压（entrance potential，EP）、碰撞室出口电压（collision cell exit potential，CXP）和去簇电压（declustering potential，DP）相同，分别为39，8，10和65V。4.3 血浆样品处理移取样品50.0μL至96孔板中，移取空白基质50.0μL作为空白样品、质控0样品（Quality Control0，QC0）。向标准曲线样品、质控样品、试验样品、QC0内加入50.0μL内标工作溶液（500ng·mL-1），向空白样品内加入50.0μL水∶乙腈（50∶50），涡旋混匀。加入300μL乙腈，封板后涡旋混合约2min（约1000g），再离心（4000g，10min）。另取一96孔板，每孔加150μL水∶乙腈（50∶50），加入150μL上层有机相并混匀，封板后离心（3000g，1min）。将样品转移至仪器进行上机检测或存放在室温条件下等待进样。5 方法学考察与评价5.1 选择性通过分析不同批次或个人空白血浆样品以评估方法的选择性，6个不同批次或个人的血浆至少处理一个样品进行检测分析。在空白血浆中化合物保留时间检测的峰面积不能大于该批次制备的化合物定量下限平均峰面积的20%，在空白血浆中内标保留时间检测到的峰面积都应小于该批次所有非空白样品中内标峰面积平均值的5.0%，6个空白样品必须全部通过接受标准。代表色谱图见图1。5.2 标准曲线及定量下限定量下限（lower limit of quantitation，LLOQ）是可以精确地和准确地检测到二甲双胍的最低浓度水平，偏差必须在±20%之内，精密度（CV）必须≤20%。此方法验证二甲双胍的LLOQ浓度为2.00ng·mL-1，线性范围为2.00~1000ng·mL-1。采用2.00，4.00，20.0，100，300，600，900和1000ng·mL-1的标准品进行验证，测得二甲双胍的线性回归方程为y=0.001772x+0.000027，r2=0.9979。5.3 精密度、准确度和提取回收率通过重复检测（n=6）质控样品评估分析物的批内精密度和准确度，通过至少2d、至少3个分析批评估分析物二甲双胍的批间精密度和准确度。计算公式分别为：通过比较萃取后质控样品中分析物或内标的平均峰面积和加入化合物和内标的纯溶液中分析物的平均峰面积评估分析物或内标的绝对提取回收率。每个浓度测试6个平行样品，测试结果的相对标准差（relative standard deviation，RSD）应≤20%。采用质控样品进行批内和批间精密度和准确度、回收率检测结果均符合生物样品接受标准（表1）。5.4 基质效应精确量取20.0μL120ng·mL-1的工作液和400μL500ng·mL-1内标储备液，混匀，加2780μL稀释溶液（50∶50Water∶MeCN）得到低浓度稀释溶液；精确量取20.0μL的16000ng·mL-1工作液和400μL的500ng·mL-1内标储备液，混匀后加入2780μL稀释溶液（50∶50Water∶MeCN）得到高浓度稀释溶液。取6个单个人空白血浆各50.0μL，按照样品处理过程处理后，加入150μL样品低、高稀释溶液，通过分别比较基质样品和纯溶液样品中化合物和内标峰面积计算基质效应因子。使用生物基质相分析物与内标面积比和溶剂相分析物与内标面积比相比较得到归一化基质效应因子。5.5 稳定性在（37±2）℃条件下，将分析物加入新鲜全血中，配制得到全血质控样品，最终浓度与低浓度质控和高浓度质控浓度相同的2种质控样品。等量分装，分别在常温和4℃条件下保存0h（对照组），1h，2h，取出离心（4000g，5min），收集血浆样品，按照质控样品的处理方法对其进行处理和进样检测，验证全血中待测物稳定性。使用空白混合人血浆稀释高浓度质控、低浓度质控工作液20倍得到基质稳定性样品，分别在室温6h和-80℃22d以后按照样品处理过程处理后进样，考察基质的短期和长期稳定性。经过上述方法学考察与评价，表明血浆二甲双胍浓度测定标准曲线（范围：2.00~1000ng·mL-1）的试验方法，准确度、精密度、选择性、基质效应、回收率、稀释因子、稳定性等均符合国家标准，可以用于人血浆（含抗凝剂K2⁃EDTA）中二甲双胍浓度检测。6 统计学处理血药浓度数据采用Phoenix WinNolin 8.1软件（Pharsight Corporation，USA）进行非房室模型药动学参数估算并进行生物等效性评价；同时采用SAS9.4软件进行统计描述与分析。生物等效性评价：将Cmax，AUC0~t和AUC0~∞经对数转换后进行方差分析（ANOVA），以给药顺序、制剂、周期作为固定效应，受试者（顺序）作为随机效应；并对受试制剂与参比制剂的几何均值比的90%置信区间进行双侧t检验，若90%置信区间落在80.00%~125.00%范围内，则判断为生物等效。非正态分布的计量资料用中位数及范围表示，两组间差异采用Wilcoxon秩和检验；正态分布的计量资料用xᢲ±s表示，两组间差异采用t检验。计数资料：以例数和百分数（n，%）表示，两组间差异采用卡方检验，如果期望值<5，则采用Fisher精确检验。所有的统计检验均采用双侧检验，P<0.05被认为所检验的差别有统计学意义。结果1 血药浓度⁃时间曲线健康受试者餐后口服仿制盐酸二甲双胍片（0.25g，T）和原研Glycoran（0.25g，R）后的平均血药浓度⁃时间曲线见图2。2 药动学参数健康受试者餐后口服仿制盐酸二甲双胍片（0.25g，T）和原研Glycoran（0.25g，R）后的主要药动学参数见表2。3 生物等效性评价健康受试者餐后口服盐酸二甲双胍片受试制剂和参比制剂，受试者的Cmax，AUC0-t和AUC0-∝几何均值之比（T/R）分别为103.11%，104.73%和104.63%，其90%置信区间分别为98.69%~107.72%，100.11%~109.57%和100.03%~109.44%均落在80.00%~125.00%内，表明餐后口服二甲双胍受试制剂与参比制剂具有生物等效性，见表3。4 安全性评价本项试验36例受试者中有1例于第二周期给药（R）后由于发生不良事件“上呼吸道感染”脱落，其余35例受试者按照试验方案完成试验。服用受试制剂周期中，有6例受试者（16.67%，6/36）发生10例次药物相关的不良事件（Ⅰ级9例次，Ⅱ级1例次），在服用参比制剂周期中有4例受试者（11.11%，4/36）发生5例次药物相关的不良事件（Ⅰ级4例次，Ⅱ级1例次），随访所有不良反应均恢复正常，两组之间无显著性差异（P>0.05）。2种制剂均未发生严重不良事件和非预期不良事件。讨论本项试验为北京中新药业股份有限公司生产的仿制盐酸二甲双胍片（0.25g）上市前研究，严格按照国家药品监督管理局发布的《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》标准完成[5]。根据国家药品监督管理局公布的《仿制药参比制剂目录（第五批）》[6]，选择日本新药株式会社生产的Glycoran作为参比制剂。原研制剂的药动学研究报道其Tmax为（2.36±0.96）h，进食会延迟Tmax[7]，据此设定16个时间点，每次采集静脉血4mL。检测方法采用液相色谱⁃串联质谱分析法，是目前药物一致性评价广泛采用的检测方法[8-9]。本临床试验中2种制剂在中国健康受试者中无严重不良事件和非预期不良事件发生，安全性和耐受性好。盐酸二甲双胍片在临床有60余年的用药史，有充分数据证实药物安全性好[10]；低剂量盐酸二甲双胍片（0.25g）较普通剂量药物（0.85g）的不良反应发生率更低[8]。参考文献详见《中国新药杂志》2023年第32卷第4期文章信息源于公众号凡默谷，登载该文章目的为更广泛的传递行业信息，不代表赞同其观点或对其真实性负责。文章版权归原作者及原出处所有，文章内容仅供参考。本网拥有对此声明的最终解释权，若无意侵犯版权，请联系小编删除。学如逆水行舟，不进则退；心似平原走马，易放难收。行舟Drug每日更新欢迎订阅+医药大数据|行业动态|政策解读