Vidutolimod

摘要：病毒样颗粒（VLPs）已成为生物学、医学甚至工程学中的关键工具。在最初用于解析病毒原子级结构之后，VLPs迅速被用于开发抗病毒疫苗，随后作为展示平台用于生成各种疫苗。最近，VLPs被用作纳米机器，将药物活性产品输送到体内的特定部位和特定细胞。在这里，我们专注于使用VLPs开发疫苗，其应用范围广泛，从针对病毒的经典疫苗到针对慢性炎症、疼痛、过敏和癌症的治疗性疫苗。在这篇综述中，我们穿越时间，从最新的实验性基于VLP的疫苗开发开始，以每年赚取数十亿美元的上市疫苗结束，为已经出现在地平线上的下一波预防性和治疗性疫苗铺平了道路。 1.病毒样颗粒（VLPs）的概念 病毒样颗粒（VLPs）是指由于表达编码病毒的衣壳、核心或包膜蛋白而自行组装成的颗粒，甚至是源自多层病毒的单层颗粒的制剂。由非病毒或人工蛋白形成的对称颗粒也可以被视为VLPs；在这种情况下，对称性指的是衣壳单元在几何上的组织方式。然而，这类VLPs不在本综述中讨论。此外，VLPs自行组装成模仿原始病毒的结构、大小和对称性的颗粒，但VLPs不能复制，因为它们缺乏基因组和复制酶。关于VLP结构、免疫原性和表达的详细描述，以及它们与疫苗接种的相关性，已在其他地方进行了综述。 乙型肝炎病毒的结构蛋白，主要是核心蛋白（HBc）和表面抗原（HBsAg），是最早在异源表达系统中表达的VLPs之一。这些努力促成了1986年首个针对HBV的重组人用疫苗的使用，该疫苗利用了表面抗原。接下来，引入了一种针对人乳头瘤病毒（HPV）的疫苗，该病毒会导致宫颈癌，使用的是L1结构蛋白。HPV疫苗在2006年和2007年上市。在此成功之后，2011年中国批准了一种针对戊型肝炎病毒（HEV）的疫苗。总的来说，使用VLPs作为传统疫苗平台具有几个优点，如表1所列。 当前的综述旨在通过首先描述一些基于VLP的疫苗在临床前开发和临床试验中的实例，最后描述目前市场上的基于VLP的疫苗，来讨论一些VLP疫苗开发的最新进展。 2.临床前开发 VLPs已广泛用作预防性或治疗性疫苗平台，用于多种疾病的预防。在本节中，我们旨在讨论一些VLP作为疫苗平台在以下疾病中成功诱导抗体和/或T细胞反应的临床前应用实例：传染病（讨论的实例：中东呼吸综合症、2019冠状病毒病（COVID-19）、流感、疟疾和获得性免疫缺陷综合症（AIDS）、炎症、过敏、疼痛、神经退行性疾病（阿尔茨海默病和帕金森病）和癌症）。 表1. 使用传统病毒样颗粒作为疫苗平台的优势 2.1.用于在预防性或治疗性方案中诱导抗体的基于VLP的疫苗 具有重复表面的颗粒可以最佳地刺激B细胞。20世纪70年代的研究发现，至少有12-16个表位间隔5-10纳米可以诱导最佳B细胞反应（例如，半抗原和人工聚合物），称为免疫子。随后人们意识到，典型的RNA病毒表现出多个免疫子的特征，因为它们通常直径为30纳米，有180个衣壳蛋白副本间隔约5纳米，如图1所示。使用这种颗粒的优势包括有效地交联B细胞受体，以及成功地被天然IgM抗体识别，导致经典补体途径的激活，引起抗原在滤泡树突状细胞（FDCs）上的沉积，增强生发中心（GC）的形成，并诱导持久和长寿命的浆细胞。因此，用全长抗原装饰并装载RNA的VLP被认为是激活B细胞和诱导长寿命B细胞反应的重要工具。此外，对于某些VLPs，特别是RNA病毒衍生的VLPs，可以装载RNA或CpGs（富含非甲基化CG基序的DNA寡核苷酸），分别在B细胞中激活TLR7/8或TLR9。这增强了IgG2a和IgA抗体反应，并增强了浆细胞形成和亲和力成熟。装载在VLPs中的RNA类型也很重要，细菌RNA是最有效的B细胞增强剂。下面，我们讨论了一些预防性和治疗性基于VLP的疫苗的例子，这些疫苗能有效地激发抗体反应，从而介导对疾病的保护。在目标抗原不能很好地诱导TH细胞反应的情况下（例如，自身分子或碳水化合物），针对VLPs的TH是必不可少的，因为它将介导分子间的相互作用，推动针对目标抗原的抗体反应。 图 1 当抗原以颗粒形式存在，并且表面表位每5-10纳米重复出现时，抗原处理得到促进。这种重复结构被免疫系统识别为病原体相关的结构模式（PASPs），这有助于B细胞的交联、天然IgM的结合、补体激活、高亲和力长寿命抗体的诱导以及生发中心的形成。使用 BioRender.com 创建。 2.1.1.传染病 冠状病毒病：冠状病毒是一类最近引起广泛关注的病毒，主要由于SARS-CoV-2引起的持续大流行。冠状病毒是一类具有单链正义RNA分子的RNA病毒，大约30 kB，编码包括四种结构蛋白在内的多种蛋白，如图2A所示：刺突（S）、膜（M）、核衣壳（N）和包膜（E）。人们已经做出了巨大努力，使用传统的VLP平台来开发针对这类病毒的疫苗。然而，除了一些针对SARS-CoV-2的候选疫苗目前正在I、II和III期临床试验中外，这些努力的大部分仍处于临床前阶段，如表2所总结。 图 2 A 一种典型的冠状病毒基于四种结构蛋白：刺突蛋白（S）、包膜蛋白（E）、膜蛋白（M）和核衣壳蛋白（N）。B 通过基因融合将MERS-CoV的RBD（受体结合域）融合到优化的CuMVTT-VLPs中，开发马赛克VLP基础疫苗的策略，这些VLPs包含一个通用的TT表位和TLR7/8配体。使用 BioRender.com 创建。 表 2. 临床试验中的基于病毒样颗粒（VLP）的疫苗列表。 中东呼吸综合症（MERS）：中东呼吸综合症冠状病毒（MERS-CoV）在人类中引起严重的呼吸道疾病，并在十年前沙特阿拉伯首次注册大流行后，继续在全世界超过27个国家构成威胁。MERS的死亡率非常高，大约在40%的范围。MERS-CoV包含几种免疫原性蛋白，包括刺突（S）蛋白，该蛋白通过其受体二肽基肽酶4（Dpp4）介导病毒进入宿主细胞。因此，受体被用作疫苗开发中针对病毒的主要靶向剂。已经进行了临床前研究，使用不同的平台，包括VLPs，来开发针对MERS-CoV的疫苗。 我们最近优化了一种称为黄瓜花叶病毒样颗粒（CuMVTT）的植物源性VLP，通过遗传融合将破伤风毒素（TT）表位整合到其中，作为改进的疫苗平台。TT表位的整合被认为可以增强B细胞和TH细胞之间的相互作用，特别是在老年人中，这是由于存在预先存在的TT特异性记忆TH细胞。此外，CuMVTT-VLPs在表达过程中结合了来自大肠杆菌的RNA，作为TLR7/8激动剂。该平台在小鼠、猫、狗、兔子和马中被证明具有高度免疫原性。 使用这个新平台（CuMVTT），我们开发了一种基于MERS-CoV刺突蛋白的受体结合基序（RBM）与CuMVTT-VLPs遗传融合的可扩展疫苗（图2B）。所得的马赛克VLP基疫苗（mCuMVTT-MERS）在大肠杆菌中表达，允许自发包装TLR7/8配体。mCuMVTT-MERS诱导了高水平的特异性抗体，能够中和MERS-CoV/EMC/2012分离株，显示出转化为单峰驼和人类的有希望的潜力。Wang等人使用杆状病毒表达系统构建了MERS-CoV-VLP疫苗，并在恒河猴中进行了测试。开发的疫苗可以诱导特定的抗RBD滴度（ELISA）1:1280以及T细胞介导的免疫。研究表明MERS-CoV-VLPs具有出色的免疫原性，是很有前途的疫苗候选物。同一组还开发了一种表达MERS-CoV RBD的嵌合VLP基疫苗，利用犬细小病毒（CPV）的VP2结构蛋白。用嵌合疫苗免疫也在小鼠模型中诱导了RBD特异性的体液和细胞免疫。不幸的是，到目前为止，还没有基于VLP的疫苗进入临床试验。 严重急性呼吸综合症（COVID-19）：持续的COVID-19大流行已经压倒了全球的卫生系统。大约有三十种不同的疫苗已经获得不同国家的批准用于人类，大约有八十个候选疫苗正在进行临床开发，其中19个处于III期临床试验。然而，随着新的关注变体（VOCs）的不断出现，仍然需要开发有效、可扩展、负担得起和稳定的传统疫苗。 作为一个例子，我们通过将SARS-CoV-2的受体结合域（RBD）化学偶联到我们免疫学优化的CuMVTT VLPs上，开发了COVID-19疫苗。我们利用了VLP表面最流行的修饰目标，其中包含可接近的赖氨酸残基（图3A）。展示的RBD识别病毒受体血管紧张素转换酶2（ACE2），确认了正确的构象结构，并产生了高度特异性的抗体反应，体外中和了SARS-CoV-2[29]和VOCs。类似的平台，CuMVTT-RBD，在小鼠模型中进行了鼻内给药测试。疫苗候选物引发了强烈的特异性系统性和粘膜IgG和IgA反应，有效中和了不同的VOCs。 图 3 以下技术的示意图。A 化学技术将表位结合到病毒样颗粒（VLPs）上主要基于修改VLP表面的化学基团。VLP表面的赖氨酸（Lys）残基（以红点显示）是最常用的修饰目标。表位应该被修改以包含一个自由的半胱氨酸（Cys），以适应所选择的化学结合方法。B 一种遗传融合技术，允许VLP衣壳蛋白和目标表位的共表达。遗传融合技术可能被认为是GMP翻译目的和扩大规模的更好选择[37]。使用 BioRender.com 创建。 为了转化目的，我们接下来设计了一种新的疫苗候选物，通过将SARS-CoV-2的RBM遗传嫁接到CuMVTT VLPs中，称为马赛克CuMVTT-RBM（图3B）。开发的疫苗可以大规模生产（1000升发酵罐运行>250万剂），在4°C下具有高稳定性，持续14个月，并且可以用于多次增强剂量。CuMVTT-RBM还在小鼠和兔子模型中诱导了高特异性抗RBD和抗刺突抗体滴度，对突变RBD和VOCs具有交叉反应性。由于高生产率和在4°C下易于储存，我们预计生产和运输成本将比当前基于RNA的疫苗低几个数量级。使用VLP AP205融合RBM也获得了类似的结果。此外，我们还产生了一个双马赛克颗粒，它诱导了针对S1中的RBM以及S2中的切割位点的中和抗体，这是第二个“次要”中和表位。 使用不同的技术，其他组也成功地使用VLPs开发了针对COVID-19的疫苗。例如，Tan等人设计并在小鼠模型中测试了RBD-SpyAP205疫苗，采用主要/增强方案。他们使用SpyTag/SpyCatcher技术在AP205-VLP平台上展示RBD。他们的结果显示，疫苗候选物可以引发中和抗体反应。 如上所述，SARS-CoV-2包含四种基本结构蛋白，可以在没有病毒基因组的哺乳动物细胞中组装成VLPs。Yilmaz等人描述了一种基于VLP的疫苗，表达六脯氨酸预融合稳定化的刺突（S-6p）以及SARS-CoV-2的N、M和E结构蛋白。该疫苗被吸收到明胶上，并与K型CpG ODN配方。使用HEK293细胞表达疫苗候选物，并产生了表达四种结构蛋白的囊泡VLPs。结果表明，在接种动物中有效产生了抗S、抗RBD和抗N IgG，并防止了肺病理。这种疫苗候选物目前正在进行II期临床试验；请参阅表2。 总的来说，基于重组蛋白的疫苗可以使用不同的宿主表达系统生产，如昆虫细胞、酵母、哺乳动物细胞和植物。最近，随着COVID-19大流行的发展，基于植物的疫苗开发在该领域变得更加被接受。最近发表的一项研究描述了基于植物的SARS-CoV-2疫苗的成功构建。作者将SARS-CoV-2的M、N和E基因克隆到双生病毒载体中，并在N. benthamiana植物中进行了瞬时表达。该过程产生了与原生SARS-CoV-2病毒粒子形状和大小相似的植物源性VLPs，但没有刺突蛋白。图4展示了使用烟草植物中的农杆菌渗透法的植物表达系统过程。作者指出，这样的VLPs将来可以作为携带S抗原的平台。 图 4 利用两个载体在烟草植物中进行共表达的农杆菌渗透法。使用 BioRender.com 创建。 Medicago公司也利用植物衍生的VLP生产方法开发了他们的SARS-CoV-2疫苗（CoVLPs疫苗；Covifenz）。CoVLPs是通过表达修改后的全长S蛋白产生的，该蛋白在植物细胞中表达后三聚体化，并移动到质膜中的脂质筏上，自发组装成从植物细胞表面“出芽”的VLPs。在猕猴中，这些VLPs在AS03佐剂存在的情况下诱导了强烈而持久的IgG反应，并增强了T细胞反应，从而保护灵长类动物免受病毒感染。CoVLPs目前正在进行晚期临床试验，并已在加拿大获得批准用于人类（表2）。 流感：流感病毒是一类属于Orthomyxoviridae科的包膜RNA病毒。病毒表面的糖蛋白血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）是疫苗开发的主要靶点。HA由一个球形头部和一个茎组成。目前市场上的季节性流感疫苗针对HA的球形头部进行中和；然而，球形头部的快速抗原变异使得诱导的抗体的亲和力降低，这就需要每年或每两年开发新的疫苗。相反，HA的茎部更加保守；然而，由于球形头部的免疫优势和茎部的空间障碍，可能具有挑战性但并非不可能对茎部产生有效的免疫反应。针对NA，流感病毒的第二大蛋白，可以防止病毒进入宿主细胞，降低疾病严重程度，并抑制病毒复制。与HA和NA类似，M2蛋白是流感病毒的一个完整表面蛋白，M2的细胞外结构域在流感A中高度保守。基质蛋白（M）和核蛋白（NP）是病毒的主要内部蛋白。图5展示了流感病毒的结构和主要抗原。 图 5 一幅卡通插图，展示了流感病毒的主要抗原，包括：血凝素（HA）的球形头部和茎部，M1基质蛋白，M2离子通道，NA神经氨酸酶和核衣壳蛋白（NP）。使用 BioRender.Com 创建。 VLPs构成了一个有吸引力的、替代传统流感疫苗配方的疫苗平台，因为它们模仿了原生病毒但缺乏任何遗传物质。Buffin等人表明，使用哺乳动物细胞进行疫苗生产有许多优势，包括维持糖基化模式。他们开发了一种包含HA、基质（M1）和NA蛋白的VLP疫苗。表达的VLPs模仿了真正病毒的外表面，并显示出高度的免疫原性。 使用噬菌体Qβ，我们设计了一种针对HA球形结构域不同形式的VLP疫苗。球形结构域被化学偶联到VLP的表面。几乎所有疫苗候选物都在小鼠中诱导了保护性抗体，这些抗体也与变异株发生了交叉反应。有趣的是，HA球形结构域是在细菌中产生的，表明糖基化对诱导保护性抗体并非必需，因为小鼠中血凝抑制抗体的水平与经典疫苗获得的水平相似。接下来，这种疫苗在I期临床试验中进行了测试，结果显示这种完全由细菌生产的疫苗至少与经典病毒基础疫苗在人体中对抗体和T细胞的免疫原性一样。 另一种有趣的方法是在铁蛋白纳米颗粒上展示HA，这可以诱导针对H1N1流感病毒株的高水平广泛中和抗体。 由于HA蛋白非常多变且保守性差，基于保守结构的疫苗，如M2的细胞外结构域（eM2）或HA茎部，可能是HA和NA疫苗的一个有趣的替代品。事实上，早期通过遗传融合在HBcAg上展示eM2或通过化学偶联在Qβ上展示的实验，都能诱导能够保护免受多种流感A病毒株侵害的抗体。基于Qβ的M2e疫苗还测试了通过鼻内给药诱导保护性抗体的能力。使用这种途径的疫苗接种在小鼠的血清和肺部诱导了高水平的保护性IgG和IgA抗体。 与Qβ类似，源自噬菌体AP205的AP205-VLPs也通过遗传融合在N-末端展示M2蛋白，显示出高诱导特异性抗体的能力。在针对流感病毒的eM2基疫苗的背景下，有趣的是我们已经提供了证据，在小鼠流感模型中，携带原核RNA的VLPs，一种TLR7/8配体，并展示eM2比携带真核RNA的VLPs诱导了更好的保护性IgG亚类，突出了包装RNA的类型的重要性，并确认了抗-M2 IgG抗体的亚类对保护至关重要。 HA的茎部区域，比HA的球形结构域更保守，可能是另一个有吸引力的靶点。事实上，可以将茎部区域表达为适合化学偶联到VLPs的三聚体，并且当在HBcAg上展示时，它可以在小鼠中诱导强烈的IgG反应。此外，铁蛋白纳米颗粒上展示的HA茎部在小鼠中诱导了广泛的中和和保护性抗体。因此，针对流感病毒保守结构的基于VLP的疫苗候选物，HA或M2蛋白，可能是目前用于对抗季节性和未来流感大流行的流感疫苗的合适替代品。 作为诱导对流感亚型更广泛免疫覆盖的替代方法，已经开发了一种包含来自H5N1、H7N2和H9N2的3或4个全长HA蛋白的马赛克、多亚型VLP疫苗。多亚型VLP疫苗在雪貂中进行了鼻内测试，并显示出有效性和免疫原性。也有几种针对H9N2的基于VLP的疫苗被描述。 疟疾：WHO估计2020年大约有85个疟疾流行国家的241百万疟疾病例，与2019年的227百万病例相比。2016年至2020年间，苏丹的死亡病例增加了49%，报告的80%病例是由于恶性疟原虫（P. falciparum）。针对疟疾的疫苗可以分为三种方法：红细胞前期疫苗、血液期疫苗和阻断传播疫苗（TBV）。最先进的红细胞前期疫苗是RTS,S（MosquirixTM），一种基于VLP的疫苗，WHO在2021年10月推荐在高风险地区使用。RTS,S在下面的“市场上的基于VLP的疫苗”部分讨论。 Chan等人设计并开发了一种通过利用鸭HBV VLPs结合大Pfs230和Pfs25蛋白的阻断传播疫苗。该疫苗在与cGMP兼容的Hansenulla细胞系中表达。诱导的抗体能够识别配子体表面的原生蛋白，并在标准膜喂养测定中降低传播活性。同一组最近使用鸭HBV的小表面抗原（dS）在支架表面上更大一部分展示环孢子蛋白（CSP）。为了克服RTS,S的缺点，CSP只出现在疫苗表面的一小部分。Barillas Mury小组还专注于通过使用Spycatcher-SpyTag技术将Pfs47（一种在配子体表面表达的蛋白）结合到Acinetobacter噬菌体（AP205-VLPs）上，开发一种TBV。候选疫苗诱导了高抗体滴度，对Pfs47具有高亲和力，证实了其潜力。 炎症。病毒样颗粒（VLPs）已被广泛用于开发针对不同慢性炎症性疾病的治疗性疫苗。在这方面，已经在不同动物种类中为不同的临床前疫苗生成了概念验证。在昆虫叮咬过敏（IBH）中，马因蠓（Culicoides）叮咬引起的Ⅰ型/Ⅳ型过敏反应而遭受慢性过敏性皮肤炎，由嗜酸性粒细胞介导。白细胞介素-5（IL-5）被认为是嗜酸性粒细胞的关键刺激因子（图6）。 针对IL-5的单克隆抗体（mAbs）已成功用于治疗具有嗜酸性粒细胞成分的人类疾病，特别是嗜酸性粒细胞性哮喘。因此，可以预期通过疫苗降低IL-5水平会减少一般的嗜酸性粒细胞疾病，包括IBH中马皮肤的嗜酸性粒细胞浸润，扩展了早期在小鼠中的观察。为此，我们将马IL-5共价连接到我们的CuMVTT平台上，并在34匹冰岛马的安慰剂对照研究中测试了疫苗。疫苗未添加佐剂，未显示任何安全问题，但在89%的接种马中诱导了抗IL-5自身抗体，这转化为了临床改善。通过每年加强注射，有效性可以提高到100%，并在几个季节中保持，几乎完全消除了症状。这种方法可能被视为针对马的慢性炎症性疾病的突破性治疗，并有潜力在未来转化为人类。除了IL-5，IL-31在IBH以及人类、狗、猴子和小鼠的过敏性瘙痒中也起着重要作用（图6）。 图 6 IL-31 和 IL-5 是过敏性瘙痒的中心介质。通常，过敏原穿透皮肤，触发肥大细胞和辅助性 T 细胞 2 型（TH2）。IL-31 的分泌刺激周围感觉神经元，导致瘙痒。IL-5 是生成和激活嗜酸性粒细胞所需的主要细胞因子。使用 BioRender.com 创建。 与IL-5不同，IL-31主要促进瘙痒；然而，这种瘙痒导致慢性抓挠引起局部炎症，通常因感染而加剧。基于CuMVTT平台，生成并测试了一种IL-31马用疫苗。结果证明了疫苗的安全性，并揭示了方法的有效性，与安慰剂组相比，治疗组的临床评分显著降低。特应性皮炎是狗最常见的过敏性疾病，导致广泛抓挠和毛发脱落以及继发感染。在对屋尘螨敏感的狗中测试了展示在CuMVTT上的犬IL-31，这些狗在局部挑战过敏原后发展出典型的特应性皮炎症状。免疫的狗在免疫后显示出显著减少的瘙痒，这与诱导的特定抗体滴度相关。然而，在抗体滴度下降时注意到反应较弱，表明维持IgG滴度是未来改进的领域。进行的研究为狗特应性皮炎的有效治疗奠定了基础。还需要进行进一步的研究来增加和延长有效性，并且使用单克隆抗IL-31抗体的结果将指导针对人类IL-31的疫苗开发。除了IL-5，展示IL-13的VLPs也可能是广泛用于治疗特应性皮炎的另一种有趣的方式，并且应该与针对IL-4的VLPs一起更详细地探索。已经证明，针对促炎细胞因子IL-17A的mAbs对银屑病非常有效，银屑病影响全球1%至4%的人口。IL-17生物制剂的高成本限制了患者的获取。使用基于IL-17展示在Qβ或CMVTT上的疫苗针对小鼠的IL-17A，在心肌炎、类风湿性关节炎和多发性硬化症以及银屑病的临床前模型中证明是有效的。针对TNF-α的mAbs在一系列炎症性疾病中显示出疗效，如银屑病、克罗恩病、类风湿性关节炎和溃疡性结肠炎。不幸的是，接受抗TNF-α治疗的患者可能在长期内产生抗药性，除了与治疗相关的高成本外。因此，开发针对TNF的疫苗可能是有吸引力的。已经描述了两种基于VLP的疫苗：一种疫苗基于HPV，使用生物素/链霉亲和素展示了TNF衍生肽，另一种基于全长TNF或在Qβ上使用SMPH化学和在TNF或肽中引入的自由Cys展示的TNF衍生肽。两种策略都诱导了能够中和TNF并消除胶原蛋白诱导的关节炎中的疾病的治疗性抗体。有趣的是，基于整个TNF连接到Qβ-VLPs的疫苗诱导的抗体能够中和跨膜和可溶性TNF。相比之下，基于TNF N-末端20个氨基酸（a.a.）的疫苗候选物（Qβ-C-TNF(4-23)）中和了可溶性TNF，但不是膜形式。尽管如此，两种疫苗都产生了能够保护小鼠免受类风湿性关节炎的特定抗体。相比之下，只有接种全长TNF（Qβ-C-TNF(1-156)）的小鼠显示出对单核细胞李斯特菌感染的增加敏感性以及潜伏的结核分枝杆菌的增强复活，而接受基于肽的疫苗的小鼠没有免疫受损。因此，仅针对可溶性TNF-α可能是一个有效的临床转化策略，可能克服机会性感染的风险。基于HPV和TNF衍生肽的疫苗与单独的融合肽相比，将抗TNF抗体水平提高了1000倍。如上所述，这种疫苗候选物还抑制了小鼠模型中胶原蛋白诱导的关节炎的发展。考虑到这些发现，进行了一项基于（Qβ-C-TNF(3-24)）的临床研究。研究显示了令人失望的结果；然而，基于小鼠TNF衍生肽的疫苗未能在人类中诱导TNF中和抗体（未发表）。 过敏。目前，特异性脱敏是治疗过敏的唯一可用方法。这种策略需要长期应用过敏原，并可能导致危及生命的过敏性休克。因此，能够通过几次注射缓解过敏症状的治疗性非反应原疫苗被认为是一种有吸引力的策略。对于治疗猫过敏，我们之前描述了一种治疗性疫苗，由主要猫过敏原（Fel d 1）与Qβ-VLPs偶联而成。单次注射能够诱导对1型过敏反应的保护。此外，过敏原诱导的系统性嗜碱细胞脱颗粒被特异性IgG抗体抑制，这一特性被FcγRIIb增强。将过敏原偶联到VLPs不仅可以增加过敏原特异性IgG反应，而且显著降低了过敏原引起过敏反应的能力，这是这种新的特异性免疫治疗方法的重要安全特性。在HBcAg上展示的过敏原也发现了类似的结果。为了快速转化，我们开发了一种替代策略，通过给猫接种疫苗来治疗人类的Fel d1过敏。使用基于CuMVTT的偶联疫苗，我们的结果表明在猫中具有耐受性，没有明显的毒性，疫苗还产生了强烈且持久的特异性IgG反应，具有高亲和力和中和能力。人类和猫预计将从这种治疗中受益，这将降低人类患哮喘的风险，并促进宠物主人与他们的猫的互动。Hirschberg等人研究了用屋尘螨（Dermatophagoides pteronyssinus，Der p1）致敏后以及用来自携带免疫优势表位Der p1的酵母逆转录转座子的p1蛋白的杂交Ty-VLPs疫苗接种后诱导的免疫反应。他们的结果表明，杂交疫苗取消了过敏原特异性IL-5的产生，并且这种效应是通过CD4+ T细胞介导的。在一项较早的研究中，当Der p 1衍生的肽与Qβ-VLPs化学偶联时，在人类中诱导了强烈的IgG反应。最近的证据表明，基于VLP的过敏原疫苗接种也可能对预防性干预具有吸引力。花生过敏是一种日益频繁的疾病，在美国尤其如此，目前尚无治疗方法。CuMVTT-VLPs被用来展示烤花生（Ara R）提取物或纯化的单一过敏原Ara h1或Ara h2，并通过化学偶联在花生过敏的小鼠模型中进行了测试。所有生成的疫苗的一剂或两剂可以保护对花生敏感的小鼠在用整个花生提取物挑战后的过敏反应。令人惊讶的是，所有三种疫苗候选物，即使是基于单一过敏原的，也能够提供对整个花生提取物的系统性和局部挑战的保护，并且所有疫苗都保护了在用复杂提取物口服挑战后胃肠道的嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润。这些结果表明，针对单一过敏原的疫苗接种可以提供对复杂过敏原混合物挑战的保护。抗体被确定为作用方式，因为纯化的IgG或甚至是单一的单克隆抗Ara h 2抗体的被动转移都能保护小鼠免受过敏反应。也研究了肥大细胞和嗜碱细胞上的FcγRIIb受体的作用，所获得的结果证明了这种抑制性受体在阻止对复杂提取物的过敏反应中的关键作用（图7）。简要地说，对单一过敏原的高水平特异性IgG抗体的诱导将导致免疫复合物的形成，这些复合物将结合FcγRIIb，从而抑制IgE介导的信号，这些信号也由其他过敏原触发。基于Ara h 2的疫苗的GMP材料已经生产出来，并且在美国已经获得了IND（表2）。疼痛。神经生长因子（NGF）对神经系统的早期发育至关重要，但在后期，它成为疼痛的重要介质。mAb tanezumab在几项人类研究中显示出有效性，目前正在注册中，还有许多其他mAbs正在开发中。因此，开发针对NGF的治疗性疫苗可能具有重大兴趣。事实上，我们已经展示了一种基于VLP的疫苗对NGF的强效效力，以控制类风湿性关节炎和骨关节炎中的疼痛。开发的疫苗是基于在CuMVTT VLPs上呈现小鼠NGF蛋白。然而，进一步的研究对于建立针对NGF的疫苗的安全性至关重要。 图7 一个卡通图示，展示了在花生过敏模型中抑制肥大细胞上FcγRIIb的机制。A 花生过敏原与结合在高亲和力Fcε RI上的IgE结合，导致肥大细胞脱颗粒和过敏反应。B 使用基于VLP的疫苗（CuMVTT-Arah2）进行免疫，诱导针对单一过敏原Ara h2的特异性IgG抗体，形成免疫复合物，该复合物结合到FcγRIIb上，抑制IgE介导的信号。通过BioRender.com创建。 2.1.2.神经退行性疾病 阿尔茨海默病：阿尔茨海默病（AD）是导致痴呆的主要因素之一，这是一种随着年龄增长迅速增加的疾病。根据阿尔茨海默协会的数据，在美国，AD影响大约620万65岁以上的人，预计到2060年这个数字将增加到1380万。此外，目前的治疗费用，特别是护理援助，在2020年达到了美国的> 2500亿美元。针对淀粉样斑块的主动免疫是一种有前景的治疗策略。然而，目前还没有针对AD的批准的预防性或治疗性疫苗。在最初的突破性研究将针对AD的潜在疫苗置于聚光灯下之后，开发了一种基于Qβ和Aβ的N末端（CAD106）的VLP疫苗候选物。只选择了前6个氨基酸，因为在用原始疫苗候选物Aβ1-42配制的佐剂进行的临床研究中，诱导了自身特异性T细胞，这些细胞在高达10%的患者中诱发了脑膜炎性脑炎。临床前评估表明，在不使用佐剂的情况下用CAD106免疫可以在淀粉前体蛋白（APP）转基因小鼠中有效清除斑块，重现了使用佐剂配制的Aβ1-42获得的原始发现。此外，没有观察到Aβ特异性T细胞的迹象。随后在AD患者中的临床研究表明，清除斑块没有脑膜炎性脑炎或微出血的迹象。然而，目前没有明确的证据表明CAD106免疫的AD患者的性能有所改善。使用我们的免疫学优化的VLPs（CuMVTT-VLPs）以及Aβ1-6肽，我们建立了一种针对AD的疫苗。如前所述，CuMVTT包含一个TT表位，据提出由于对破伤风的预先存在的存储记忆TH细胞，可以增强老年人的反应。开发的疫苗可以用于预防性和治疗性环境。CuMVTT-Aβ1-6在年轻和老年小鼠中显示出高度的免疫原性，并且对破伤风的预免疫增强了对Aβ1-42的反应。实际上，在CuMVTT表面上展示Aβ1-6诱导的抗体表现出正确的特异性，因为免疫小鼠的血清可以像针对Aβ肽1-17的单克隆抗体一样有效地识别AD斑块在死后大脑切片上。最近的努力利用HBc为特定患者生产个性化的AD疫苗。研究人员通过将SpyCatcher插入截断的HBc的主要免疫优势区域（MIR）构建了一个平台，该平台可以组装成能够轻松结合不同SpyTag表位的均匀VLPs，例如Aβ（1-6），Aβ（1-15），cAβ（1-7）cEP1和cEP2来自β-淀粉样单体或寡聚体，以及来自tau蛋白的T294，pTau396-404和pTau422。一项研究的结果表明，HBc-S-pTau422在转基因小鼠中减轻了认知缺陷以及神经病变进展。对于替代的Qß-，HPV-和逆转录病毒颗粒-基础疫苗候选物也观察到了强大的免疫原性和良好的安全性。Aβ可能不是治疗AD的唯一靶标。事实上，Maphis等人报告了针对tauopathies的治疗性疫苗的开发，包括AD。在苏氨酸181处磷酸化的Tau肽被化学连接到Qβ-VLPs（pT181-Qβ）。该疫苗诱导了一种强大而持久的特定抗体反应，能够识别死后的人脑切片，并能够减少转基因小鼠的皮层和海马中的可溶性和不溶性pTau。因此，针对Aβ或Tau或两者的组合的疫苗可能是AD治疗或甚至预防发展的有希望的途径。 帕金森病：帕金森病被认为是第二常见的神经退行性疾病，与运动障碍、认知障碍和进行性残疾有关。该病影响60岁以上的1%的人。中和有毒的α-突触核蛋白（a-syn）寡聚体被提出在阻止寡聚体和聚集体在大脑中的传播以及细胞毒性方面发挥作用。Doucet等人提出了一种基于将针对α-syn C末端区域的短肽偶联到Qβ平台的主动疫苗策略。所获得的结果证明了疫苗在野生型小鼠和α-syn转基因小鼠中诱导高抗体滴度的能力，并识别了Lewy体。尽管诱导的抗体能够特异性地识别溶液中的寡聚α-syn，但疫苗未能在转基因小鼠模型中产生显著变化，与对照条件相比，对行为表型没有影响。缺乏临床前疗效是否是由于使用的特定小鼠模型尚不清楚，这些结果表明需要优化的临床前模型，这可能是一个具有挑战性的任务。癌症。已经在几种肿瘤中研究和使用了抗体，并已被证明是抗肿瘤免疫的重要参与者。抗肿瘤抗体的效应功能包括诱导凋亡、干扰肿瘤信号通路、抗体依赖性细胞毒性（ADCC）或激活补体。尽管大多数抗肿瘤抗体以mAb的形式被动给药，但疫苗可能是主动诱导抗肿瘤抗体的有希望的替代方案。然而，大多数针对癌症的疫苗旨在诱导T细胞而不是抗体，下面描述的疫苗可能更准确地被描述为“利基候选物”。诱导抗体的癌症疫苗的突出例子是基于AP205的，它已经在临床前用作治疗性疫苗的平台，用于诱导癌症治疗的抗体。作者使用SpyTag/SpyCatcher技术，用人类表皮生长因子受体-2（HER-2）装饰VLPs，这是一个经典的mAb治疗靶标。使用这种策略，他们能够克服B细胞耐受性，并诱导强烈的抗HER2 IgG抗体，阻碍了表达HER-2的小鼠乳腺癌肿瘤的进展。此外，三阴性乳腺癌肿瘤中xCT蛋白的过度表达已被用作靶表位，并插入到MS2-VLPs中。该疫苗引发了强烈的特定抗IgG2a反应，阻碍了肿瘤生长并防止了在已建立的4T1小鼠模型中的转移。与人类乳头瘤病毒相关的癌症占所有恶性肿瘤类型的约4.5%，并且已被证明每年影响超过50万人。与HPV相关的癌症包括宫颈癌（99.7%）和阴道、肛门、阴茎、外阴和口咽的鳞状细胞癌。HPV的衣壳L1蛋白是一个高度免疫原性表位，针对已获得许可的预防性HPV疫苗（稍后在4中讨论）。结构L1蛋白可以自组装成VLPs，形态上类似于亲本原生病毒（图8）。小衣壳蛋白L2是HPV类型中高度保守的蛋白质，因此可以被认为是开发下一代泛HPV疫苗的合适靶标。然而，基于L2的疫苗已被证明比基于L1的疫苗诱导的中和抗体水平低。Schellenbacher等人构建了一种表达L1和L2蛋白的嵌合HPV疫苗（HPV16 L1-HPV16 L2（嵌合体17-36）），并且佐剂化的VLPs诱导了针对与HPV16不同的HPV类型的广泛谱系中和抗体。这些发现表明，这种嵌合疫苗可能对由高风险、低风险和beta HPV相关疾病引起的粘膜感染提供保护。关于RG1-VLP作为另一种使用L2作为疫苗候选物的尝试的临床研究即将开始。RG1-VLPs包含HPV16L2的保守氨基酸17-36，这些氨基酸紧密融合在HPV16L1-VLP的免疫优势表面环中。小动物模型的免疫实验已确认对医学上相关的高风险和低风险HPV类型具有交叉保护。AAVLP-HPV是另一种嵌合疫苗，旨在展示L2表位，来自HPV16和31，显示在腺相关病毒衍生的VLPs上。用这些VLPs在Montanide佐剂中配制的小鼠和兔子的免疫诱导了特定的抗体滴度，能够在伪病毒感染测定中中和几种HPV类型的感染。这种嵌合疫苗已成功完成I期临床试验（表2）。 图8 人乳头瘤病毒（HPV）的L1和L2衣壳蛋白 A. HPV的L1衣壳蛋白是一种高度免疫原性表位，能够组装成VLPs，例如（已获得许可的预防性基于HPV的疫苗：Cervarix®、Gardasil®和Gardasil9®）。B. 一种表达L1和L2两种衣壳蛋白的嵌合HPV疫苗。通过BioRender.Com创建 2.2.病毒样颗粒（VLPs）治疗性疫苗用于诱导治疗性方案中的保护性T细胞 带有T细胞表位的VLPs是有效的工具，可以诱导TH1以及细胞毒性T细胞淋巴细胞（CTLs），尽管VLPs不包含遗传物质。外源性抗原优先进入主要组织相容性类II（MHC-II）途径以启动CD4+ T细胞。然而，以前的研究表明，颗粒状的VLPs可以被APCs成功摄取并通过交叉呈现进入MHC-I途径。通过与抗原处理相关的转运蛋白（TAP）独立的内体途径或TAP依赖的内体至细胞质途径可以实现MHC-I的装载。将VLPs与APCs的刺激因子结合使用可以产生CTL和TH1反应。在小鼠中测试的所有TLR配体中，刺激TLR3、TLR7/8尤其是TLR9最为有效，而其他TLRs，如TLR2和TLR4，对刺激CTL反应的能力较弱。此外，装载有TLR配体的Qβ-VLPs，如RNA或CpGs，能够有效地诱导CTL和TH1反应，但如果装载了多聚谷氨酸或为空载则无法做到这一点。出乎意料的是，我们已经证明VLPs和TLR配体可以分开传递，无需物理连接，只要TLR配体以颗粒形式配制，就可以在体内产生CTL反应。形成沉积物的佐剂可能提供进一步增强诱导的T细胞反应的机会。 2.2.1.癌症 由人乳头瘤病毒（HPV）引起的癌症：预防性HPV疫苗旨在针对晚期蛋白L1和L2产生体液反应。因此，这样的疫苗在治疗环境中不会显示出疗效，因为在病毒感染的增殖细胞中没有检测到病毒衣壳蛋白。HPV治疗性疫苗的主要目标是消除癌前病变和持续的HPV感染。早期E蛋白（E6和E7）是转录因子，负责推动感染细胞的增殖。因此，这两种蛋白在肿瘤细胞中高度表达，使它们成为治疗性疫苗的理想靶标。在宫颈上皮内瘤变（CIN）自发消退中检测到基质中CD4+：CD8+比率的增加，CD4+ T细胞对E2蛋白的反应以及E6和E7特异性CD8+ T细胞的浸润。已经采取了几种不同的临床前方法来开发HPV治疗性疫苗，包括使用VLPs。一些研究设计了一种针对肿瘤蛋白E6和E7的基于T细胞的疫苗，其他研究开发了一种包含衣壳和肿瘤蛋白的嵌合疫苗。例如，Greenstone等人展示了HPV-VLPs通过生成包含主要衣壳蛋白L1加上整个非结构性E7或E2融合到小衣壳蛋白L2中的嵌合VLPs来诱导细胞介导的免疫的能力。HPV16 L1/L2-HPV16 E7嵌合VLPs保护了野生型和MHC-II缺陷小鼠（缺乏Th细胞）免受TC-1肿瘤挑战。另一项研究使用修饰后的兔出血病病毒VLP（RHDV-VLP）作为疫苗平台，装饰有E748-57肽。使用表达E6和E7抗原的TC-1细胞系在小鼠模型中测试了开发的疫苗。作者将疫苗与抗CTLA-4检查点抑制剂或用于Treg耗竭的抗CD25结合使用。结果表明肿瘤负担减少了50%，生存率显著提高。我们已经证明，展示或与E7蛋白混合的Qβ-VLPs可以诱导对肿瘤生长的保护并增强超过80%的接种小鼠的生存。另一项研究生成了一个将长E7蛋白片段结合到禽传染性肿瘤病病毒VLPs中的VLP-E7疫苗。在表达人类HLA-A2的人源化转基因小鼠中，在治疗环境中接种了TC1/A2癌细胞系，测试了VLP-E7疫苗。结果表明完全根除了已建立的肿瘤以及持久的免疫反应。 黑色素瘤：一些临床前实验已经探索了使用VLPs作为针对黑色素瘤的治疗性疫苗的疗效。装载A型CpGs的Qβ-VLPs（Qβ(G10)，也称为CMP-001）不包含任何肿瘤抗原，并且在肿瘤内注射后已测试了抗黑色素瘤反应。Sabree等人证明CMP-001诱导形成抗Qβ抗体，这些抗体使Qβ VLPs包被，随后被浆细胞样树突状细胞（pDCs）摄取，导致细胞因子分泌和抗肿瘤T细胞反应。CMP-001已在临床试验中使用，如表2所示。在最近发表的一篇论文中，Melhim等人表明，CMP-001单独或与pembrolizumab（PD-1抑制剂）联合用于晚期黑色素瘤患者是可耐受的，并且能够逆转抗PD1抗性治疗，具有持久且强烈的临床反应。使用化学偶联方法开发了Qβ(G10)MelanA疫苗，并在II-IV期黑色素瘤患者的I/II期研究中证明了潜在的疗效。超过60%的接受治疗的患者产生了特定的效应和记忆T细胞反应以及高水平的IFN-γ、TNF-α和IL-2细胞因子产生。最近，我们已经将我们的努力转向开发针对患者肿瘤特异性表位的个性化VLPs疫苗，以实现有效的T细胞反应。鉴于针对单一抗原允许肿瘤细胞通过下调这单一抗原来复发，我们设计了一种在具有挑战性的移植小鼠黑色素瘤模型中的多靶标疫苗。我们的结果表明，针对生殖系和突变表位可以增强诱导的抗肿瘤反应。我们还测试了微晶（MCT）佐剂与CuMVTT-p33疫苗结合的沉积效应。结果表明MCT将反应极化为TH1并增强诱导的抗肿瘤反应。 乳腺癌：由于我们已经在黑色素瘤中展示了使用多靶标疫苗策略的增强疗效，我们已经将这些发现扩展到一个侵袭性转移性乳腺癌小鼠模型。为了进一步提高主动免疫疗法，我们设计了一种个性化的多靶标疫苗，使用Qβ-VLPs包装TLR9配体，通过整合基于质谱的免疫肽组学和全外显子测序，展示延长的新生抗原。与短新生抗原的疫苗接种相比，长新生抗原的疫苗接种更有效，并且抗肿瘤效应可以显著重新极化肿瘤微环境，减少肺转移并增强生存。 获得性免疫缺陷综合症（AIDS）。自从20世纪80年代作为获得性免疫缺陷综合症（AIDS）的病原体被发现以来，HIV已成为全球主要的公共卫生问题。尽管抗病毒药物能够控制病毒，但迫切需要一种针对HIV的治疗性疫苗，以消除接受抗逆转录病毒治疗的患者中的长期持久性HIV。对HIV-1发病机制的了解表明，T细胞免疫在控制HIV感染的急性期中起着至关重要的作用，长期研究表明CD8+ CTL反应与HIV复制的控制和感染清除有关。1996年，Wolf等人构建并表达了一种嵌合HIV-1 VLP疫苗。将gp120的第3个可变区域（V3）或CD4结合域插入Pr55gag-VLPs中；这种插入没有干扰VLPs的组装能力。使用不同的途径和不同的嵌合Pr55gag/V3 VLPs对小鼠进行免疫，没有使用任何佐剂。结果表明对V3区域内已知表位有强烈的MHC-I (Dd) CTL反应。此外，已经证明Gag-VLP疫苗能够在处理的单核细胞来源的树突状细胞（DCs）中诱导干扰素α（IFN-α），APOBEC3G和APOBEC3F蛋白mRNA表达增加，这些蛋白已知是HIV-1的抑制剂。此外，包含HIV V3环的酵母衍生VLP已被证明可以被小鼠树突状细胞处理，与MHC类I相关呈递。 3.临床开发 目前有几种预防性和治疗性的基于VLP的疫苗处于临床开发阶段。我们在表2中列出了与上述讨论的疾病相关的临床试验。 4.市场上的VLP疫苗 4.1.人乳头瘤病毒疫苗 Gardasil®是首个获批作为针对人乳头瘤病毒（HPV）的预防性疫苗。Gardasil9®覆盖9种而非4种血清型，已经在美国取代了Gardasil®。Gardasil®、Gardasil9®和Cervarix®疫苗是L1-HPV表位的重组制造VLPs（表3）。然而，Gardasil9®包含比Gardasil®更大的总抗原负荷，以补偿不同共同配方VLPs的数量增加。Gardasil可预防4种HPV（6、11、16和18型），而Gardasil9®可预防另外5种（31、33、45、52和58型）。这些疫苗的设计目的是激发病毒中和抗体，以预防最初的HPV感染。这些上市疫苗已被证明能提供100%的预防宫颈癌前病变和生殖器疣的发展的保护效果，预计保护效果至少持续4.5年。HPV疫苗是安全的，局部不良反应如肿胀、疼痛和发红大多是轻度和短期可逆的。全身反应很少见，可能涉及恶心、发烧、头痛和疲劳。目前酵母或昆虫表达系统中的许可HPV疫苗的成本可能被认为是全球广泛实施的一个障碍。最近在大肠杆菌中表达低成本HPV疫苗的努力已成功。Cecolin®是一种针对HPV16和HPV18的双价L1-HPV疫苗，已成功在大肠杆菌中表达，并在小鼠、山羊和兔子中显示出高度免疫原性。2019年12月30日，Cecolin®正式获得国家药品监督管理局的批准，于2020年5月在中国上市。2021年10月，WHO为Cecolin®授予了预认证，使其成为首个获得WHO预认证的中国制造的HPV疫苗。 表3. 市场上目前批准的基于VLPs的HPV预防性疫苗列表 4.2.乙型肝炎病毒（HBV）疫苗 有几种针对可能危及生命的疾病乙型肝炎的HBV疫苗可供商业使用。HBV感染可能导致慢性感染，并使患有肝硬化和肝癌的人处于危险之中。现有的疫苗对HBV显示出98-100%的保护。 第一代HBV疫苗于1981年获得批准，基于Bulmberg的工作，他因发现澳大利亚抗原（现称为乙型肝炎表面抗原（HBsAg））而获得诺贝尔奖，该抗原在感染者的血清中。独特的疫苗是基于直接从人类携带者中获得HBsAg。然而，由于生物安全问题，这种血液来源的疫苗在1986年被改进的重组HBsAg版本所取代，使用重组DNA方法和在酵母细胞以及目前也在哺乳动物细胞中生产。第二代HBV重组疫苗最初是使用酵母系统生产的。现有的酵母衍生的HBV疫苗基于HBsAg单体自组装成VLPs。几项研究表明，纯化的酵母衍生的HBsAg呈现为∼22 nm VLPs 。形成的HBsAg VLPs中60-70%由HBsAg单体蛋白组成，其余由脂质组成。总的来说，形成的VLPs具有高度免疫原性，能够激发强大的中和抗体，并且是一种安全的疫苗，不含任何病毒基因组。使用单一抗原（HBsAg的小S抗原）进行疫苗接种有一些限制，包括实现血清保护所需的时间延长。30-40%的成年人在接种2剂疫苗后达到血清保护，但即使在接种第3剂后，也可能有10%的人无法达到这一点。最近FDA批准的第三代HBV疫苗PreHevBrio表达三种HBV表面抗原，S、pre-S1和pre-S2，并在哺乳动物细胞中生产。III期临床试验证实了疫苗在老年人和慢性病患者中的高免疫原性。研究得出结论，在第3剂后4周，疫苗在血清保护率上与单一抗原疫苗相比没有劣势。接种2或3剂后的血清保护率高于接种经典HBV疫苗（对照组）。超过90%的参与者在接种2剂后报告了快速诱导的保护性抗体轮廓；此外，观察到良好的安全性。表4总结了不同HBV疫苗的可用性，表5概述了第二代和第三代HBV疫苗之间的主要差异。 表4. 市场上一些基于VLPs的FDA批准的HBV疫苗 表5. 第二代与第三代乙型肝炎病毒（HBV）疫苗的比较 4.3.乙型肝炎病毒（HEV）疫苗 乙型肝炎病毒是印度、中国、肯尼亚、苏丹、尼泊尔和孟加拉国等国家超过50%的急性病毒性肝炎的罪魁祸首。据估计，全球每年约有3500万例病例发生，平均死亡率为0.2-4%，在孕妇中高达25%。HEV是一种无包膜病毒，大小为27-35纳米，分为四种不同的基因型，I、II、III和IV。I型和II型仅限于人类，而III型和IV型感染其他哺乳动物，然后可以将病毒传播给人类。尽管存在这种遗传多样性，但所有HEV都属于同一血清型。病毒的正义链RNA基因组包含三个开放阅读框，其中一个编码病毒衣壳蛋白，是中和抗体的主要靶标。HEV239（Hecolin®）于2012年在中国获得批准作为针对HEV的疫苗。该疫苗是由厦门万泰沧海生物技术有限公司（中国）开发的基于重组VLP的疫苗，编码基因来自ORF2 HEV基因型I菌株。在大肠杆菌表达系统中产生的重组蛋白由368-606个氨基酸组成（p239）4-5，经过复性并自组装成20-30纳米大小的VLPs。形成的VLPs在小鼠和恒河猴中具有高度免疫原性。Hecolin®在人类中显示出良好的安全性和100%的疗效。目前正在进行研究，以评估疫苗在高风险群体中的安全性和有效性，以评估潜在的全球使用，正如WHO推荐的那样。 4.4.疟疾疫苗 RTS,S/AS01（Mosquirix™）被认为是迄今为止针对疟疾红细胞前阶段的最先进疫苗。单价重组疫苗针对环孢子蛋白（CSP）蛋白的片段，这是P. falciparum包膜蛋白的主要成分。CSP蛋白片段被融合到HBsAg作为载体。在RTS,S中，R：代表19个中心串联重复，T：代表C末端的T表位，第一个S代表修饰的表面抗原，第二个S指的是未修饰的表面抗原，允许CSP在粒子表面的马赛克HBsAg颗粒上呈现。该结构组装成VLPs，并与AS01配制而成，AS01是一种有效的佐剂。RTS,S/AS01已在III期临床研究中进行了评估；然而，结果仅显示部分保护，并存在一些令人担忧的安全问题，特别是年轻女性可能增加的死亡率。RTS,S马赛克颗粒包含与CSP-HBsAg融合蛋白相比，有4倍摩尔过量的未修饰HBsAg亚单位。相比之下，下一代RTS,S/AS01疫苗（R21）仅包含CSP-HBsAg融合蛋白，R21因此在表面显示更多的CSP表位，并能在小鼠中诱导无菌保护。正在进行几项晚期临床试验，以测试下一代R21的安全性和有效性，并提高第一代RTS,S的疗效（表2）。2021年10月6日，WHO建议在撒哈拉以南非洲地区以及P. falciparum传播中等至高的地区广泛使用RTS,S/AS01疫苗。 5.结论 VLPs表现出高度免疫原性与卓越的安全性的独特组合，使它们成为疫苗设计的理想平台。自从首次描述基于VLP的HBV疫苗以来，该领域已取得显著进展，VLPs现在是许多上市疫苗的基础，如针对HPV和HEV的疫苗。关于使用VLPs作为展示平台的非常激动人心的新颖发展已经实现，不仅用于病原体衍生的抗原，如针对疟疾免疫的HBsAg上展示的CSP，还用于自身分子，如用于针对阿尔茨海默病的疫苗的Aβ或用于治疗伴侣动物和人类的慢性疾病的细胞因子。因此，我们预计未来几年将有几种新产品，包括针对人类和动物的产品，将进入市场。 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

从罕见病过渡到常见病，联合疗法是小核酸疗法开发的重要方向。作为第一款在常见慢性病上市的小核酸，Inclisiran（英克司兰）联合他汀治疗高脂血症已拥有完整证据链，且证据版图仍不断扩张。近期一项发表于JACC的荟萃分析，调取了迄今为止的最大规模研究数据，再次充分论证了英克司兰联合他汀或其他口服LLTs治疗具备良好的耐受性。在我国，去年发表的《小干扰RNA 降脂药物药学专家共识》也建议：对于经他汀类药物治疗血脂不达标或由于药物不良反应他汀类药物使用受限的患者，可选择 siRNA 英克司兰作为联合治疗方案。随着人口老龄化的加剧，慢病管理及用药需求有望持续扩容和爆发。全球慢性病管理市场。仅在 2019 年，这个市场就价值 3260 亿美元。以 7.2% 的复合年增长率计算，到 2023 年它可能达到 4900 亿美元。米内网数据显示，我国慢病用药市场也在2021年超过了4000亿元人民币。目前普遍认为，通过结合通过不同作用机制发挥作用的治疗药物，在慢病管理领域可能实现更多临床获益，包括提高疗效、克服耐药性和改善不良反应，最终实现提高实现疾病完全缓解和治愈的可能性。RNAi治疗药物的独特作用机制使其成为组合治疗的理想候选者。除了已上市的Inclisiran，小核酸在癌症、乙肝、高血压等治疗领域也在积极拓展联合治疗方式。学界和工业界正在临床前模型和临床试验中探索小核酸与各种其他类型药物的组合，例如，siRNA可以与抗体或其他小分子药物联合使用，以增强治疗效果或减少药物抵抗。此外，RNAi治疗还可以与其他治疗方法如基因治疗和基因编辑相结合，为患者提供更全面的治疗方案。01癌症：小核酸联用有望攻克耐药性问题癌症本质上具有高度异质性，并且在治疗时常常会产生药物耐药的情况，包括化疗、放射治疗和光动力治疗 (PDT)等等不同的治疗方式均可能会产生耐药性。近年来，癌症各类疗法与基于RNA疗法的联合使用为癌症靶向治疗打开了新的窗口，并引起了全世界研究人员的兴趣。基于siRNA 、适体、反义寡核苷酸等已被证明与药物相结合可有效克服癌症中的多重耐药性（MDR），有效减少对健康细胞的不必要损伤；一些还能表现出协同/组合抗癌作用，调控与肿瘤细胞生长、发育、转移扩散和耐药性相关的多种机制和调节蛋白，以达到更好的治疗效果。1、与化疗药物联合寡核苷酸与化疗药物联合的限制是可能会与血浆蛋白竞争性结合，这将导致与单独化疗药物相比，联合治疗的体内疗效降低。使用水溶性聚合物偶联物、纳米粒子、树枝状聚合物和脂质体的基于载体的联合药物递送系统被开发并得到应用，使用聚合物纳米粒子联合递送化疗药物和sirna已经显示出一些成功。Prexigebersen+decitabine+venetoclaxPrexigebersen（BP1001）是一种由中性脂质体包覆、具抗核酸酶特性、靶向Grb2 mRNA分子的反义寡脱氧核苷酸疗法。Grb2是一种衔接蛋白，可将致癌酪氨酸激酶与下游激酶（如ERK和AKT）联系起来，ERK和AKT对细胞增殖和存活至关重要。2023年8月，Bio-Path公司公布其在研反义寡脱氧核苷酸疗法prexigebersen联合地西他滨（decitabine）和venetoclax治疗急性髓系白血病（AML）2期试验第二阶段的中期数据。分析显示，该疗法的耐受性良好，在两个队列中显示显著优于目前一线疗法的疗效。在新确诊的AML队列中，该组合疗法达成86%的完全缓解（CR）。siG12D LODER+多种化疗药物siG12D-LODER是一种由可生物降解的聚合物基质包裹的针对KRASG12D的siRNA，临床研究表明，EUS引导下肿瘤内植入siG12D-Loder联合化疗，12例局部晚期胰腺癌患者接受治疗后，10例病情稳定，2例部分缓解，中位总生存时间为15.1个月，4例患者出现严重不良反应，说明该聚合物能够靶向肿瘤并抑制肿瘤进展。目前，诺华正在针对siG12D-LODER进行下一步的研究，以测试siG12D-LODER与化疗药物（如吉西他滨和紫杉醇）联合治疗局部晚期胰腺癌患者的疗效。Oblimersen sodium (Genasense, G3139)+多种化疗药物Oblimersen钠(Genasense™，G3139)是一种反义寡核苷酸，与Bcl-2 mRNA开放阅读框的前六个密码子杂交，导致Bcl-2 mRNA降解并诱导细胞凋亡。oblimersen联合化疗药物如卡铂、紫杉醇、多西他赛、伊立替康等治疗实体肿瘤已开展了较多临床试验。在I/II期试验中，转移性结直肠癌患者对oblimersen和前药伊立替康的联合耐受性良好；其中，1例患者出现部分缓解，另外10例患者病情稳定，持续2.5-10个月(NCT00004870)。此外，临床试验的安全性数据进一步支持oblimersen联合细胞毒性药物临床开发的可行性。OGX-011 (custirsen)+多西他赛/强的松OGX-011 (custirsen)是第二代反义聚集蛋白抑制剂。为了确定OGX-011的临床活性，一项随机II期研究多西他赛/强的松联合用药用于治疗转移性去势抵抗性前列腺癌患者。研究结果表明OGX-011和多西他赛治疗耐受性良好，且与生存率提高有关，因为OGX011可以通过增加肿瘤细胞对多西他赛的敏感性来增强肿瘤杀伤能力。因此，OGX-011也可能是去势抵抗性前列腺癌(CRPC)患者的一种新的治疗策略。Atu027+吉西他滨Atu027是一种被包裹在脂质纳米颗粒(LNP)中的siRNA药物， 可以特异性靶向致癌靶点PKN3。临床试验结果表明，Atu027在晚期或转移性胰腺腺癌患者联合标准化疗药物吉西他滨(NCT00938574)时具有良好的安全性和活性。2、与免疫检查点抑制剂联合AZD9150 (Danvatirsen, ISIS 481464)+度伐利尤单抗AZD9150 (danvatersen, ISIS 481464)， 2.5代ASO，是STAT3的特异性抑制剂。与2.0代和以前的ASOs相比，2.5代ASOs具有更高的亲和性和更强的内在效力。AZD9150可以特异性抑制STAT3并诱导多种白血病细胞系凋亡。此外，AZD9150还通过抑制内源性STAT3和STAT3靶基因，降低成神经细胞瘤细胞的致瘤性，增加细胞的化学敏感性。在两项I期临床研究(NCT01563302和NCT01839604)中，AZD9150单药治疗诱导了免疫介导的抗肿瘤反应，表明AZD9150联合免疫检查点抑制剂治疗有望增强抗肿瘤免疫效能。Danvatirsen联合Durvalumab（抗PDL1单抗）在晚期实体瘤患者中显示出临床益处（NCT02983578），在CT26小鼠结肠直肠癌模型上进行的临床前研究显示，在治疗的肿瘤中，M-MDSC和G-MDSC的比例降低，NK细胞和T细胞的数量增加，联合用药组NK细胞的颗粒酶表达增加，导致NK细胞毒性增强。在另一项临床试验中（NCT02499328），与Duravulumab单药治疗或Duravulumab和AZD5069 （CXCR2抑制剂）治疗组相比，接受Durvalumab和Danvarrsen联合治疗的患者显示出更高的疗效。BO-112+帕博利珠单抗BO-112是一种由聚乙烯亚胺配制的双链合成RNA，模拟病毒感染。直接肿瘤注射时可以通过树突状细胞的激活、CD8 T细胞浸润的增加和干扰素的诱导，产生一种免疫原性细胞死亡。在2022美国癌症研究协会（AACR）年会上的一项2期临床试验数据显示：对于接受抗PD-1治疗后出现耐药的黑色素瘤患者，将BO-112与帕博利珠单抗（K药）联用显示出良好的有效性和安全性。Vidutolimod（CMP-001）+帕博利珠单抗Vidutolimod（CMP-001）是一种CpG-a寡核苷酸，包装在由噬菌体外壳蛋白Qβ形成的病毒样颗粒内。在临床前研究中，瘤内注射Vidutolimod已证明可诱导局部肿瘤消退，并限制了非靶向毒性。在最近公布的一项1b期临床研究（NCT02680184）中，评估了肿瘤内注射Vidutolimod联合pembrolizumab的疗效和安全性，显示出克服晚期黑色素瘤患者的PD-1抑制剂耐药性的潜力。2、与光动力疗法（PDT）联合光动力疗法（PDT）是一种无创且有效的局部癌症治疗方法，可对靶组织和细胞产生选择性损伤。然而，单独的PDT不太可能完全抑制肿瘤转移和/或局部肿瘤复发。PDT联合RNAi疗法抑制相关靶点一直是研究热点，其临床效果优于单一疗法。2021年9月，北京理工大学黄渊余课题组发表在在顶级期刊《ACS Applied Materials & Interfaces》上的“ROS-Activatable siRNA-Engineered Polyplex for NIR-Triggered Synergistic Cancer Treatment”，设计了一种聚乙二醇（PEG）修饰、ROS响应的阳离子聚合物PPTC，该阳离子聚合物可高效负载抗RRM2基因的siRNA药物，形成稳定、均一的PPTC/siRRM2纳米药物体系。RRM2是一种脱氧核糖核酸酶还原亚基，与多种癌症的发生发展密切相关，沉默RRM2可促进肿瘤细胞发生凋亡。该复合物进入到细胞后，在近红外光的照射下能有效降解聚合物、产生ROS，ROS可破坏内涵体膜、促进内涵体逃逸，同时破坏细胞膜使肿瘤细胞发生凋亡。而进入胞质的siRNA抑制RRM2的表达，可有效阻止癌细胞增殖，从而从“促凋亡、抑增殖”双角度实现协同抗肿瘤治疗。研究人员首先在肝癌细胞上转染该小核酸药物体系，激光共聚焦显微镜（Confocal）结果显示，该体系可高效进入到细胞中；且相比于未光照组，经光照处理后，siRNA的内涵体逃逸效率得到有效提高。生物电镜（BioTEM）的研究证明，该体系经光照后产生的ROS，可有效提高细胞膜通透性，并对肿瘤细胞进行杀伤。PPTC/siRNA在CDX和PDX肿瘤模型中的药效研究进一步，研究人员在小鼠上分别建立了肝癌细胞系异种移植的CDX模型和肝癌患者癌组织异种移植的PDX肿瘤模型。研究表明，在这两种肿瘤模型中，PPTC/siRNA药物体系均可有效抑制肿瘤生长，促进癌细胞凋亡。值得注意的是，数据证明该药物体系表现出良好的光动力与siRNA治疗协同效应，相比于单独使用siRNA或单独进行光照处理，二者联合可显著提高RRM2的基因沉默效率，提升小鼠肿瘤生长的抑制效果。同时，该复合物在细胞和动物体内都展现出了良好的安全性。02乙肝：小核酸联用有望达到功能性治愈慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染影响全球约2.9亿人，每年造成约90万人死亡。目前的治疗标准以长效干扰素为主（机理为免疫调节），但是只有约2-5%的病人可以诱导永久性的表面抗原消失，达到功能性治愈。如果联合、续贯核苷类小分子药物（机理为抑制病毒复制），可能将这一比例提高到10%。总体而言，现有的药物很难达到功能性治愈（定义为治疗结束6个月后，血液中的HBsAg低于0.05IU/ml）。其关键就在于慢性HBV感染的肝细胞中始终存在活性的cccDNA，导致持续的病毒抗原暴露抑制特异性免疫，造成宿主免疫衰竭。所以理论上，若能迅速将乙肝表面抗原HBsAg降低，则有利于激发先天性/适应性免疫。RNA疗法是近年来科学家们积极探索的方向，因为其作用机理可以降低HBsAg。目前进展积极的主要以siRNA为主，有罗氏的RG-6346（从Dicerna引进），Arbutus的AB-729，Vir的Vir-2218（被腾盛博药引进）；ASO药物主要包括GSK-836（从Ionis引进）。总体上，乙肝的联用治疗策略包括“抑制复制±降低抗原±刺激免疫”的不同组合方式，以实现乙肝治疗“1＋1＋1＞3”的效果。1、与抗体联合在RNAi疗法干扰肝细胞内病毒复制从而降低HBsAg水平达到平台期之后，与中和抗体的联用可以中和外周游离的病毒以及S抗原，继而被抗原呈递细胞吞噬，从而进一步降低HBsAg水平，为机体的免疫应答打开“窗口”，提高功能性治愈的人群比例。VIR-2218 +VIR-3434VIR-2218（又称 BRII-835）是一种正在研究中的 N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）共轭 RNA 干扰（RNAi）疗法，其靶点是乙型肝炎病毒（HBV）基因组中所有 HBV 病毒RNA 转录本共有的一个区域。VIR-3434是一款正在进行研究的用于慢乙肝治疗的HBV中和性单克隆抗体，旨在阻断HBV的所有10个基因型进入肝细胞，并降低血液中病毒体和亚病毒颗粒的水平。正在进行的 Phase 2 期开放标签 MARCH 研究的 B 部分正在评估24 周和 48 周 VIR-2218 和 VIR-3434 加用或不加用 PEG-IFNα 用于治疗慢性乙型肝炎方案的安全性、耐受性和抗病毒活性。在2023年美国肝病学会年会（AASLD 2023）公布的大会摘要中，研究者报道了MARCH研究B部分24周队列EOT时的数据：当给药20~24周时，VIR-2218+VIR-3434与VIR-2218+VIR-3434+PEG-IFNα在EOT时达到了相似的HBsAg转阴率（分别为15%和14.3%），大约是既往观察到的VIR-2218+PEG-IFNα治疗24周HBsAg转阴率的3倍。这一数据支持VIR-3434具有叠加效应。HT-102+HT-101HT-101作为一款GalNAc偶联的siRNA创新药物，通过干扰乙肝病毒的mRNA，破坏其作为转录后的翻译模板功能，阻止相关病毒蛋白合成，从而抑制乙肝病毒颗粒形成。目前已在国内完成了针对健康志愿者的全部研究以及针对慢性乙肝患者的Ib期临床所有给药。初步研究数据表明HT-101在健康人群和慢性乙肝患者中具有良好的安全性及耐受性，并且可显著降低慢性乙肝患者乙肝表面抗原（HBsAg）,中高剂量组HBsAg降幅达21g以上且无明显反弹。HT-102中和抗体是由星曜坤泽与苏州博奥明赛生物制药有限公司联合开发、一款具有多种机制、针对HBV的全人源单克隆抗体，通过特异性结合并靶向小(S)包膜蛋白。据星曜坤泽称，临床前研究表明HT-102与HT-101注射液联用，显示更强更持久的抗病毒活性。2、与干扰素/免疫调节剂联合BRII-835 (VIR-2218)+ PEG-IFNα聚乙二醇干扰素α-2α（PEG-IFNα）已获批用于治疗HBV感染，但PEG-IFNα治疗48周后仅不到10%的患者可实现HBsAg清除。在2022年美国肝病研究学会年会（AASLD 2022）上，研究人员报告了VIR-2218单药或联合PEG-IFNα治疗慢性HBV感染者的安全性和疗效初步研究结果。数据表明，VIR-2218单独或与PEG-IFNα联合使用通常耐受性良好。大多数AE与已知的PEG-IFNα相关影响一致。PEG-IFNα可增强VIR-2218的抗病毒活性，从而实现HBsAg清除。同时启动VIR-2218 + PEG IFNα治疗的受试者在48周内HBsAg降幅更大，且联合治疗时间越长，HBsAg水平越低。联合治疗队列5在48周内HBsAg清除率可达30%，同时出现anti-HBs。bepirovirsen（GSK-3228836）+PEG-IFNBepirovirsen (BPV; GSK3228836)是一款靶向 HBV 前基因组 RNA 和mRNAs 中的20个保守核苷酸序列的反义寡核苷酸。B-Together研究是一项旨在评估 bepirovirsen 和长效干扰素(PegIFN)的序贯用药能否改善在 B-Clear临床研究中观察到的 bepirovirsen 效果的多中心、随机、开放标签 Phase 2b期临床研究。在2023年美国肝病学会年会（AASLD2023）上，研究人员公布了该项 B-Together 研究关于患者病毒基因型和乙肝表面抗原（HBsAg）应答情况的临床数据。结果显示，与单独BPV治疗（B-Clear）相比，BPV和PeglFN顺序治疗，可以减少BPV应答者的复发，从而提高停药后的应答率，没有发现新的令人担忧的安全性问题。Xalnesiran（RG6346，RO7445482）+Peg-IFN-αXalnesiran（RG6346，RO7445482）是Roche和Dicerna共同开发的一种靶向HBV基因组HBsAg编码区的siRNA药物，ruzotolimod（RG7854，RO7020531)是Roche开发的一种TLR-7激动剂，目前这两种药物均处于临床II期阶段。在AASLD2023大会LATE BREAKING摘要中，公布了xalnesiran联合ruzotolimod或聚乙二醇干扰素α（Peg-IFN-α）治疗的中期结果，显示xalnesiran单药、xalnesiran + ruzotolimod、xalnesiran+ Peg-IFN-α治疗48周的HBsAg清除率分别为6.7%、17.6%和30.0%，停药随访24周的HBsAg清除率分别为6.7%、11.8%和23.3%。AB-729+核苷(酸)类似物(NA)+聚乙二醇干扰素α-2a(peg-ifnα-2a)AB-729是一种RNA干扰(RNAi)疗法，专门用于降低所有HBV病毒蛋白和抗原，包括乙型肝炎表面抗原（HBsAg）。AB-729使用Arbutus Biopharma 的新型共价偶联N -乙酰半乳糖胺(GalNAc)递送技术靶向肝细胞，实现皮下递送。迄今为止产生的临床数据显示，单剂量和多剂量AB-729总体上是安全的，耐受性良好，同时还能显著降低 HBsAg 和HBV DNA。2022年12月,  Arbutus Biopharma 公布了用于慢性乙型肝炎治疗的 AB-729 的 Phase 2a 期临床试验初步数据。临床试验受试者的登记已经完成，43名患者接受了至少一剂 AB-729。前15名患者达到治疗第16周，接受两剂量 AB-729 + NA治疗，平均(SE) HBsAg下降为1.51 log(0.12)，与完成的1b期临床试验AB-729-001在同一时间点观察到的下降(1.56 log(0.1))相当。随着试验的进行，患者将被随机分为不同的治疗组，包括AB-729联合治疗、NA治疗和短期干扰素治疗，疗程为12周或24周。  GSK-5637608（JNJ-3989）+ NA ± JNJ-6379序贯联合聚乙二醇干扰素α（PegIFNα） GSK-5637608（JNJ-3989）属于RNA 干扰疗法，包含特异性N-半乳糖胺缀合的siRNA 触发器和两个siRNA 分子，能够降解来自游离cccDNA和整合入宿主基因组的乙肝病毒（HBV）DNA产生的多种HBV RNA，抑制所有HBV蛋白的产生。GSK于去年年底从强生接手获得该药的全球权益，并计划从2024年开始，将JNJ-3989与bepirovirsen一起进行II 期序贯治疗试验，进一步加强GSK的后期专业药物管道。近日，公司在AASLD 2023大会分享的摘要中，公布了JNJ-3989 + NA ± JNJ-6379序贯联合聚乙二醇干扰素α（PegIFNα）治疗初治HBeAg阳性（大部分免疫耐受期）患者的最新数据，该2期REEF-IT研究纳入初治、HBeAg阳性、ALT < 2 × ULN的慢性乙肝患者，所有患者接受JNJ-3989 200 mg Q4W + NA ± JNJ-6379 250 mg QD治疗36 - 52周（诱导期），随后加用PegIFNα 180 mcg QW治疗12周（巩固期）。结果显示，治疗结束时，平均HBsAg相比基线的变化为-3.61（0.18）log10 IU/mL，平均HBV DNA相比基线的变化为-6.24（0.20）log10 IU/mL，7/48（15%）患者实现HBeAg清除；停药随访24周时，平均HBsAg相比基线的变化为-2.92（0.37）log10IU/mL，21/28（75%）的NA维持治疗患者实现HBV DNA阴转。REP2139/REP2165 + PEG IFNα HBsAg抑制剂REP2139/REP2165的REP 401 II期研究中，REP2139/REP2165 + PEG IFNα + TDF三联疗法在治疗结束时有55%-65%的患者获得 HBsAg清除，随访5.3年能较好的维持HBsAg清除。REP 301和REP301-LTF研究中REP2139-Ca + PEG IFNα治疗HBV/HDV合并感染者，随访3.5年时乙肝功能性治愈率达40%，平均随访7.4年持久率为100%。3、与疫苗联合BRII-835 + BRII-179（即VIR-2218 + VBI-2601） 腾盛博药探究了BRII-835（即VIR-2218）联合治疗性疫苗BRII-179的效果。随机、开放标签的II期研究中，NA经治获病毒学抑制的患者在接受BRII-835联合BRII-179治疗的基础上加用IFNα佐剂，可以更好的诱导T细胞和B细胞，从而产生anti-HBs，以解决停药后HBsAg反弹的问题。在治疗第40周两个联合治疗组均有超过40%的受试者anti-HBs > 100 IU/L，而且治疗后 70%的受试者产生HBV特异性T细胞应答。03高血压：小核酸联用有望解决标准药物控制不佳问题尽管高血压治疗已经较为普及，但仍有大量患者血压控制不达标导致心血管事件风险升高，其中重要原因是患者对复杂的治疗方案依从性差。此外，尽管治疗达到规范化，血压的节律异常也可能会带来风险。Zilebesiran是一种皮下给药、靶向血管紧张素原（AGT）的在研RNAi治疗药物。AGT是肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）中最上游的靶点，该级联反应已被证实在血压调节中发挥作用，其抑制具有明确的抗高血压作用。Zilebesiran抑制肝脏中AGT的合成，可能导致AGT蛋白持久减少，并最终导致血管紧张素减少。KARDIA-2研究（NCT05103332）将在奥美沙坦、氨氯地平或吲达帕胺为基础治疗控制不佳的高血压患者中，联合zilebesiran来进一步评估其降压疗效和长期安全性。日前，Alnylam Pharmaceuticals公司公布了zilebesiran在治疗高血压患者的2期临床试验KARDIA-2中获得的积极结果。数据分析显示，zilebesiran添加到标准治疗方案中，在接受治疗第3个月时，与安慰剂组相比，通过动态血压监测（ABPM）测量的24小时SBP显示出具有显著临床意义的降低。Zilebesiran与抗高血压药物联用，最高可将SBP额外降低12.1 mmHg。04眼部疾病：与VEGFR抑制剂联用提高药效PF-04523655 (PF-655)是一类合成的化学修饰后的siRNA，能够抑制Quark公司独有的靶点基因RTP801，后者为应激诱导的结构蛋白，可以抑制mTOR信号通路中TSC1/TSC2复合体上游的各项功能。PF-655的作用机制被认为与各类型的VEGF抑制剂类药物不同。在缺血、缺氧或氧化应激压力下，RTP801的表达量会迅速上调。在激光诱导的脉络膜新生血管(CNV)的临床前动物模型玻璃体腔中注射PF-655会导致RTP801表达量因RNAi过程而发生的下调，并且没有TLR信号的激活、抗血管生成和神经营养因子的诱导表达，以及随后的脉络膜新生血管体积减少、血管渗漏和炎性细胞浸润为脉络现象的缓解。对于动物模型中的脉络膜新生血管，当PF-655与VEGFR抑制剂联用时，能够提高效果并降低糖尿病小鼠视网膜中的血管渗漏。PF-655已进行了多项临床研究，包括针对糖尿病黄斑水肿(DME)的两项二期临床研究，以及用于治疗年龄相关性黄斑变性(AMD)的临床一期/二期研究。在代号为MONET用于治疗湿性年龄相关性黄斑变性的二期临床研究中，相比于前三个月，PF-655可显著改善平均视力水平；而该药物同Ranibizumab的联用效果比单独用药更佳。在代号为DEGAS用于治疗糖尿病黄斑水肿的二期临床研究中，相比于激光光凝治疗的对照组，PF-655对于患者视力的改善具有药物剂量依赖性。基于此项研究的结果，特别是视力改善与药物剂量间的相关性，一项Ⅱb期研究正在开展用以评估PF-655单独用药及与Ranibizumab联合用药对DME患者的治疗效果。资料来源：[1] https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.1016/j.molmed.2023.10.005[2] Babu A, Munshi A, Ramesh R. Combinatorial therapeutic approaches with RNAi and anticancer drugs using nanodrug delivery systems. Drug Dev Ind Pharm. 2017 Sep;43(9):1391-1401. doi: 10.1080/03639045.2017.1313861. Epub 2017 May 19. PMID: 28523942; PMCID: PMC6101010.[3] https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.3389/fbioe.2021.628137[4] 同写意Biotech，胰腺癌新的治疗方法：siRNA或适配体[5] https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.1212/WNL.92.15_supplement.S58.005[6] Friedrich, M., Aigner, A. Therapeutic siRNA: State-of-the-Art and Future Perspectives. BioDrugs 36, 549–571 (2022). https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.1007/s40259-022-00549-3[7] RNAi Therapeutics and Novel RNA Bioengineering Technologies. Gavin M. Traber and Ai-Ming Yu. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics January 1, 2023, 384 (1) 133-154; DOI: https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.1124/jpet.122.001234[8] 药渡，RNA疗法一路“狂飙”，下一个重磅炸弹的掘金之地？[9] 北理工在光动力协同小核酸药物抗肿瘤方面取得进展[10] 雨露肝霖|肝霖君：谢青教授：慢乙肝在研新药——进展与挑战[11]https://mp.weixin.qq.com/s/44NfDXOv85r-a2Xkfe_-Xg [12] 肝脏时间|略晓薛：全球首个研究证实基因编辑技术联合RNAi 技术清除cccDNA和HDV RNA可行！  BiG 十周年预告  本次BiG十周年庆典，将首次分为国内和国际篇章，以原创科学和临床需求为出发点，讨论创新技术平台和创新疗法（PROTACT/分子胶、双抗/ADC、siRNA/ASO、CGT、AI制药）的重大进展和发展前景，十年一药曙光现，大浪淘沙始见金！▼报名参会 会议门票：审核制(免费)；含主论坛+分论坛，不含餐；优先biotech/Pharma、临床、院校科学家共建Biomedical创新生态圈！如何加入BiG会员？