WHO对抗体检测用二级标准品制备的要求和建议

2024-04-26

疫苗诊断试剂

中文摘要2023年11月13—16日，WHO在印度尼西亚登巴萨举办了“WHO抗体检测二级标准品制备手册培训”，培训中WHO专家对抗体检测用二级标准品的制备提出了要求和建议。该培训使各国参会代表充分了解了抗体检测用二级标准品研究、使用过程中应注意的问题，加强了各国与WHO的交流，对于我国正在开展的相关工作和加强国际交流具有重大意义。我国应根据WHO对抗体检测用二级标准品制备的要求及建议，进一步做好我国抗体检测用二级标准品的制备工作。正文WHO的职能包括制定、建立和推广有关食品、生物制品、药品及相关产品的国际标准，对标准物质确定国际认可的单位，以便在全球范围内进行生物测量的比较等，WHO在建立国际生物标准物质，促进生物制品标准化，以及制定生物制品生产、检定和技术许可的指导方针与建议方面发挥了关键作用。WHO生物制品标准化委员会（Expert Committee on Biological Standardization，ECBS）负责制定包括血液制品和相关体外诊断试验、生物技术产品和疫苗在内的生物制品的建议与指导原则，现已建立了一系列的标准物质，并在全球被广泛使用，为生物制品的规范化发展作出了重要贡献。2022年WHO ECBS颁布了《WHO抗体检测用二级标准品制备手册》（《制备手册》），对WHO抗体类二级标准物质的制备、标定、储存和分发提出了具体要求。本文结合生物制品标准品的发展历史与2023年11月13—16日在印度尼西亚登巴萨举办的“WHO抗体检测二级标准品制备手册培训”内容，对WHO关于抗体检测用二级标准品制备的要求和建议进行评述。1生物制品标准品简介生物制品标准品分为一级、二级和三级。WHO国际标准品（international standard，IS）为最高级别的一级标准品，由ECBS和指定的国际机构制定。制定、建立和推广IS是WHO的核心职能，在确保全球使用的生物医药产品的质量和剂量一致性方面发挥着重要作用。二级标准品是区域或国家标准品，使用IS进行标定，通常由国家控制实验室或制造商建立，用于测定生物制品的效价、活性或含量。三级标准品为企业内控品，如工作试剂或标准品、内控参考品，用二级标准品进行标定。2生物制品标准品发展历史简述2.1生物制品IS发展历史简述生物制品标准物质分为IS和国际参考品（international reference reagent，IRR），包括生物治疗、诊断试剂和疫苗3类。目前有超过330个IS、IRR和不同IS/IRR的集合可供使用。1978年WHO颁布了《生物制品标准物质制备及建立指南》，对国际生物制品标准物质的制备、表征和建立提出了建议，并多次对其进行修订，现行版为2006年发布的《国际和其他生物制品标准物质制备、表征及建立指南（2004年修订）》。近年来，随着大量疫苗，如HPV疫苗、呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus， RSV）疫苗、新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）疫苗等，以及治疗性抗体的研发及评价体系迅速发展，相关行业对传染性疾病抗体类标准品的需求日益增加。为规范抗体检测方法和统一量值，确保其检测结果的可比性，WHO制定了一系列抗体IS以及相应的技术指导原则或手册。2009和2012年，WHO分别针对HPV 16、18血清型建立了抗体标准品，又于2023年针对6、11、31、33、45、52和58血清型建立了抗体标准品。2017年WHO制定了第1个RSV抗血清IS，最初建议用于评估人血清中抗RSV A亚型中和滴度，2019年扩展到包括B亚型。2020年，WHO制定了首个抗SARS-CoV-2免疫球蛋白IS，以促进血清学检测方法的开发和统一，形成通用单位。2022年，针对SARS-CoV-2变异株又建立了抗SARS-CoV-2免疫球蛋白IS（变异株）。2.2生物制品二级标准品发展历史简述为适应生物制品行业的快速发展，WHO分别于2011年和2017年颁布了《WHO疫苗用国家及其他二级标准物质建立手册》《WHO传染病类核酸或抗原体外诊断试剂检测用二级参考品制备手册》，以解决疫苗类、传染病类核酸或抗原体外诊断试剂检测用国家二级标准品制备中可能遇到的实际问题。各国对抗体IS的需求量在快速增加，而WHO研制的IS数量有限，无法满足各国监管实验室和企业的日常使用。WHO鼓励各监管机构实验室以及其他实验室在IS的基础上制备二级标准品，以满足各国的需要。为指导该工作规范地开展，2022年WHO对《WHO疫苗用国家及其他二级标准物质建立手册》进行修订，发布了《制备手册》，同年发布了《SARS-CoV-2中和抗体国家或其他二级标准品建立手册》，对WHO抗体类二级标准物质的制备、标定、储存和分发提出了更具体的要求。3各国二级标准品建立情况WHO一直致力于推进各国建立生物制品二级标准品，然而不同国家由于生物制品产业成熟度各不相同，因此在该方面仍存在一定差异。生物制品产业较为成熟的国家，如中国、印度和印度尼西亚，都已遵循WHO要求完善二级标准品建立流程，并建立了多种二级标准品。中国食品药品检定研究院自1952年开始进行国家标准品的建立，已有生物治疗类74个，疫苗类114个，诊断试剂类227个。中国在2020年建立了首个SARS-CoV-2国家标准品，在2021年建立的第2个SARS-CoV-2国家标准品不但与首个SARS-CoV-2国家标准品桥接，也用首个SARS-CoV-2 IS进行标定。印度也已建立了多种二级标准品，包括用于麻疹-腮腺炎-风疹疫苗、百日咳-白喉-破伤风疫苗、卡介苗和蛇毒的标准品。印度尼西亚也制备了用于二价口服脊髓灰质炎、麻疹、白喉、破伤风、百日咳、乙型肝炎疫苗和卡介苗效力试验的二级标准品。此外，这些国家还积极参与WHO及英国国家生物检定所（National Institute for Biological Standards and Control，NIBSC）关于 IS 制备的联合研究工作，进一步推动其二级标准品的建立。总的来说，不同国家在二级标准品制备方面的现状有所不同，但WHO的技术指导与支持对于各国推进二级标准品的制备工作起到了重要作用。4《制备手册》的意义及内容简介4.1《制备手册》的意义《制备手册》的批准，标志着WHO提供了从疫苗、传染病诊断试剂到抗体类生物制品等全范围的二级标准品研制指南。《制备手册》作为WHO最新颁布标准，在规范检测用抗体类标准物质研制的基础上，进一步强调了对标准物质研制设计、原材料选择、制备中质量控制和协作标定的统计学要求等，对国家和企业标准品具有指导意义。4.2《制备手册》的内容简介《制备手册》从抗体检测用二级标准品制备使用的生物学标准、制备原则、制备计划、对候选材料的要求、最终容器的处理（包括确保二级标准品质量、二级标准品的性质、容器规格、微生物负载、灌装精度、冷冻干燥循环）、表征、根据国际标准校准（包括校准原则、合作研究、单个实验室协作标定）、统计学分析（包括统计模型、使用多种检测方法的协作标定、单个实验室标定的统计学要求、测量不确定度的计算）、稳定性、监控储存稳定性、托管实验室的职责、使用说明和标签、标准品的分发、二级标准品的替换等方面进行了要求和规范。张辉等对《制备手册》的要点进行了逐一解读，为我国抗体检测用二级标准品的制备提供了进一步指导和参考。5WHO对抗体检测用二级标准品制备的要求和建议为了让各国相关实验室更好地理解和执行《制备手册》，WHO举办了此次“WHO抗体检测二级标准品制备手册培训”。来自越南、韩国、中国、马来西亚、印度、泰国、印度尼西亚、孟加拉、沙特阿拉伯、突尼斯、埃及、巴基斯坦、伊朗等国的国家监管实验室，以及英国葛兰素史克公司、印度血清研究所和Bharat生物技术公司、巴西Bio-Manguinhos及印度尼西亚BioFarma等公司的代表参加了培训。WHO专家对二级标准品的特点进行了介绍，并重点对二级标准品制备和抗体检测用二级标准品的研发与标化提出建议。5.1二级标准品的特点及WHO的建议英国咨询专家Ian Feavers博士参与了《制备手册》的编写。他在登巴萨培训会上作出报告，强调二级标准品的特点：二级标准品是单批次均一样本，其免疫学特征与被检测样本一致，要有确定的单位和量值，以及其量值必须稳定。同时，Feavers博士指出，二级标准品在标化过程中要考虑诸多因素，包括量值要与IS溯源；要对不确定度进行分析；参与标定的不同方法的不确定度可能不同，可制定不同方法的不确定度；在量值赋值的方法学方面，若IS的量值是针对某一特定方法确定的量值，其二级标准品也应采用类似的方法进行标定和赋值；稳定性要根据IS进行实时监测评价；在可转换性方面，应该保证二级标准品适用于所检测的样本等。此外，在制备二级标准品前要充分了解用户的需求，根据用户的需求确定具体的研究方案，如：标准品将用于哪些试剂，是检测中和抗体的试剂还是结合抗体的试剂；用何容器进行分装和分装多少量更合适；每一次实验需要多少支；理想的效期是多少；是否具有传染性以及如何防护；二级标准品的原料来源应保证与被检测物性质一致等。Feavers博士还指出，虽然二级标准品没有完全要求在GMP条件下分装，但应按照质量管理的要求，对相关人员进行培训，做好分装记录以及其他质量控制措施。分装完成后要进行系统的质量控制指标的检测，包括外观、水分、效价以及安全性等。对分装后的标准品组织多家实验室进行协作标定是很重要的环节。在协作标定之前应该制定具体方案，并将具体方案发送给各参与单位，而且参与单位要提供所用试剂的准确性、线性、定量范围等相关信息。对检测结果要采用合理的统计方法进行统计分析。此外，对标准品的稳定性研究、储藏稳定的监测、存储单位的职责、使用说明以及标签、分发和换批等相关内容应按照《制备手册》的要求进行。5.2WHO对抗体检测用二级标准品的研发与标化建议英国NIBSC的Giada Mattiuzzo博士也参与了《制备手册》的编写。Mattiuzzo博士指出，二级标准品应该是单一的、同质的批次，具有确定的单位，适合预定的用途，具有较好的稳定性（多数为冻干），与被检测的样品具有可转换性等特点。选择原料时应确保样本量充足、有知情同意、排除病原体感染，可以用感染后的血浆、也可以考虑用疫苗免疫后的血浆等。候选样品确定以后要进行标化。标化的目的是将量值单位从IS转移到二级标准品中，2个标准品的数量值可能不同，但均可以溯源到IS。标化的具体设计取决于二级标准品的预期状态和用途，但适用一般原则，即候选标准品与IS一起在相同条件下进行多次检测，计算所有检测的相对效力，并根据相对效力对候选品进行赋值。二级标准品的可转换性应基于被测物的范围选择代表性样本进行评估，尽管有时很难获得足够数量的患者样本，但至少应该包括高、中、低浓度的样品，如果有更多的样品可用，则可对转换性进行更稳健的评估。6总结与展望中国是生物制品的生产大国，特别是近年来中国生物技术领域发展迅猛，SARS-CoV-2疫苗的研发和应用居世界前列，建立我国的国家二级标准品，对满足我国生物制品活性单位的量值传递、保证我国生物制品质量控制和评价与国际接轨具有重要意义。WHO在印度尼西亚登巴萨举办的“WHO抗体检测二级标准品制备手册培训”进一步解读了《制备手册》，充分了解了各国二级标准品的研究、使用以及存在的问题，同时也加强了各国人员与WHO有关专家的交流，对我国正在开展的相应工作和国际交流也具有巨大的帮助。我国在开展抗体检测二级标准品制备和标定的过程中，应认真学习和借鉴该手册中明确的技术要求，加强国内外合作，进一步提升二级标准品制备的能力和水平。相信未来WHO还会根据各国提出的问题和不断发展的生物技术，编制和提供更多的标准和技术指导原则，为规范产品的检测方法和统一量值提供更多指导。作者周振歆1 赵冰心2 王佑春3 1中国医学科学院医学生物学研究所北京协和医学院质量管理处，昆明 650118；2中国医学科学院医学生物学研究所北京协和医学院质量保证部，昆明 650118；3中国医学科学院医学生物学研究所北京协和医学院，昆明 650118周振歆和赵冰心对本文有同等贡献通信作者：王佑春，Email：wangyc@nifdc.org.cn引用本文：周振歆, 赵冰心, 王佑春. WHO对抗体检测用二级标准品制备的要求和建议 [J]. 国际生物制品学杂志, 2024, 47(1): 44-48. DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20231214-00024识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。