A Phase II Randomized Controlled Trial for the Addition of Chloroquine, an Autophagy Inhibitor, to Concurrent Chemoradiation for Newly Diagnosed Glioblastoma

Glioblastomas (GBM) are the most common type of primary brain tumors with an annual incidence of approximately 500 patients in the Netherlands. Despite extensive treatment including a resection, radiation therapy and chemotherapy, the median overall survival is only 14.6 months.
Epidermal growth factor receptor (EGFR) amplification or mutation is regularly observed in GBM and is thought to be a major contributor to resistance to radiotherapy and chemotherapy. The most common EGFR mutation in GBM (EGFRvIII) is present in 30-50% of GBM.
Previously MAASTRO lab has shown that expression of EGFRvIII provides GBM cells with a survival advantage when exposed to stress factors such as hypoxia and nutrient deprivation. These metabolic stress factors activate a lysosomal degradation pathway, known as autophagy. Inhibition of autophagy sensitizes cells to hypoxia, reduces the viable hypoxic fraction in tumors with > 40% and subsequently sensitizes these tumors to irradiation.
Chloroquine (CQ) is a potent autophagy blocker and is the most widely investigated substance in this context. Previously, the effect of CQ has been demonstrated in a small randomized controlled trial in GBM treated with radiotherapy and carmustine. Although not statistically significantly different, the rate of death over time was approximately half as large in patients receiving CQ as in patients receiving placebo. The intracellular effects of CQ are dose-dependent. Therefore, the authors suggest an increase in daily dose of CQ may be necessary. Furthermore, the combination of CQ with TMZ may induce more damage to the neoplastic cells.
In the phase I part of this trial the recommended dose of CQ in combination with radiotherapy and temozolomide will be tested. In the phase II part of the trial patients with a histologically confirmed GBM will be randomized between standard treatment consisting of concurrent radiotherapy with temozolomide and adjuvant temozolomide (arm A) and standard treatment plus CQ (arm B).

开始日期2023-11-10

申办/合作机构

Maastro

NCT06044805 / Completed临床4期IIT

Monitoring Therapeutic Efficacy of Chloroquine Plus Primaquine in the Treatment of Uncomplicated Plasmodium Vivax Based on Clinical, Parasitologic and Hematologic Parameters in Shecha Health Center: Open Label Clinical Trial

The goal of this open label clinical trial will be to assess the therapeutic efficacy of chloroquine plus primaquine in the treatment of uncomplicated plasmodium vivax in Shecha Health Center, South Ethiopia.
The main question it aims to answer:- the current therapeutic efficacy of chloroquine plus primaquine in the treatment of uncomplicated plasmodium vivax in Shecha Health Center, South Ethiopia based on clinical, parasitological and hematological parameter.
Participants will be patients aged >6 months with diagnosis of plasmodium vivax mono-infection and who fulfills the inclusion criteria.
This is a single arm open label invivo therapeutic efficacy study of chloroquine plus primaquine in the treatment of uncomplicated plasmodium vivax. The final result will be compared with World Health Organization recommendation on antimalarial drug therapeutic efficacy.

开始日期2022-12-19

申办/合作机构

Wollega University

TCTR20211222005 / Not yet recruitingN/AIIT

Detection of Chloroquine or Hydroxychloroquine Retinopathy by Visual Field 10-2 VS Visual Field 24-2 Combined with Retinal Imaging in Chiang Mai University Hospital

开始日期2022-01-04

申办/合作机构

Chiang Mai University

100 项与盐酸氯喹相关的临床结果

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100 项与盐酸氯喹相关的转化医学

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100 项与盐酸氯喹相关的专利（医药）

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17,943

项与盐酸氯喹相关的文献（医药）

2024-05-01·Journal of Traditional and Complementary Medicine

Qufeng tongluo decoction decreased proteinuria in diabetic mice by protecting podocytes via promoting autophagy

Article

作者: Ni, Boran ; Liu, Yifan ; Xiao, Yao ; Liu, Weijing ; Wei, Ruojun ; Li, Jiamu ; Huang, Weijun ; Zhao, Jinxi ; Zhu, Liwei ; Ruan, Zhichao ; Wang, Shidong

Background:

Diabetic kidney disease (DKD) is one of diabetic complications, which has become the leading cause of end-stage kidney disease. In addition to angiotensin-converting enzyme inhibitor/angiotensin II receptor blocker(ACEI/ARB) and sodium-glucose cotransporter-2 inhibitor (SGLT2i), traditional Chinese medicine (TCM) is an effective alternative treatment for DKD. In this study, the effect of Qufeng Tongluo (QFTL) decoction in decreasing proteinuria has been observed and its mechanism has been explored based on autophagy regulation in podocyte.

Methods:

In vivo study, db/db mice were used as diabetes model and db/m mice as blank control. Db/db mice were treated with QFTL decoction, rapamycin, QFTL + 3-Methyladenine (3-MA), trehalose, chloroquine (CQ) and QFTL + CQ. Mice urinary albumin/creatinine (UACR), nephrin and autophagy related proteins (LC3 and p62) in kidney tissue were detected after intervention of 9 weeks. Transcriptomics was operated with the kidney tissue from model group and QFTL group. In vitro study, mouse podocyte clone-5 (MPC-5) cells were stimulated with hyperglycemic media (30 mmol/L glucose) or cultured with normal media. High-glucose-stimulated MPC-5 cells were treated with QFTL freeze-drying powder, rapamycin, CQ, trehalose, QFTL+3-MA and QFTL + CQ. Cytoskeletal actin, nephrin, ATG-5, ATG-7, Beclin-1, cathepsin L and cathepsin B were assessed. mRFP-GFP-LC3 was established by stubRFP-sensGFP-LC3 lentivirus transfection.

Results:

QFTL decoction decreased the UACR and increased the nephrin level in kidney tissue and high-glucose-stimulated podocytes. Autophagy inhibitors, including 3-MA and chloroquine blocked the effects of QFTL decoction. Further study showed that QFTL decoction increased the LC3 expression and relieved p62 accumulation in podocytes of db/db mice. In high-glucose-stimulated MPC-5 cells, QFTL decoction rescued the inhibited LC3 and promoted the expression of ATG-5, ATG-7, and Beclin-1, while had no effect on the activity of cathepsin L and cathepsin B. Results of transcriptomics also showed that 51 autophagy related genes were regulated by QFTL decoction, including the genes of ATG10, SCOC, ATG4C, AMPK catalytic subunit, PI3K catalytic subunit, ATG3 and DRAM2.

Conclusion:

QFTL decoction decreased proteinuria and protected podocytes in db/db mice by regulating autophagy.

2024-04-01·Journal of ethnopharmacology

Fangji Huangqi decoction ameliorates membranous nephropathy through the upregulation of BNIP3-mediated mitophagy

Article

作者: Ma, Yuhua ; Liu, Jian ; Wang, Yuxin ; Chen, Xue ; Wang, Chaojun ; Jiang, Xiaocheng ; Zheng, Hong ; Xiao, Yang ; Shi, Manman ; Ke, Yanrong

ETHNOPHARMACOLOGICAL RELEVANCE:

Fangji Huangqi Decoction (FJHQ), a traditional Chinese medicinal formula outlined in Zhang Zhongjing's "Jin Gui Yao Lue" during the Han Dynasty, is often used to treat conditions characterized by symptoms like edema and dysuria, including membranous nephropathy (MN). Despite its proven clinical effectiveness, the exact mechanisms through which FJHQ acts on MN remain elusive.

AIM OF THE STUDY:

This study aimed to investigate whether FJHQ enhances BNIP3-mediated mitophagy in podocytes by promoting BNIP3 expression and whether this improvement leads to the amelioration of MN.

MATERIALS AND METHODS:

In this study, by establishing passive Heymann nephritis (PHN) rats, an experimental rat model of MN induced by sheep anti-rat Fx1A serum, we evaluated the effects of FJHQ in vivo. In vitro experiments were carried out by treating primary podocytes with experimental rat serum. Furthermore, the potential mechanism by which FJHQ acts through BNIP3 was further examined by transfecting primary podocytes with the siRNA of BNIP3 or the corresponding control vector.

RESULTS:

After 4 weeks, significant kidney damage was observed in the rats in the model group, comparatively, FJHQ markedly decreased urine volume, 24-h urinary protein, blood urea nitrogen (BUN), creatinine (Scr), and increased serum total albumin (ALB). Histology showed that FJHQ caused significant improvements in glomerular hyperplasia, and IgG immune complex deposition in MN rats. JC-1 fluorescence labelling and flow cytometry analysis showed that FJHQ could significantly increase mitochondrial membrane potential in vivo. In the mitochondria of MN model rats, FJHQ was able to down-regulate the expression of P62 and up-regulate the expression of BNIP3, LC3B, and LC3 II/LC3 I, according to Western blot and immunofluorescence studies. Furthermore, FJHQ has been shown to significantly up-regulate mitochondrial membrane potential, down-regulate P62 expression in mitochondria, and up-regulate the expression of BNIP3, LC3B, and LC3 II/LC3 I in mitochondria at the cellular level. After the administration of the autophagy inhibitor chloroquine, the serum of rats treated with FJHQ further increased the expression of LC3 II/LC3 I in primary podocytes, showing higher autophagy flow. After the interference of BNIP3 in podocytes, the effect of FJHQ on mitochondrial membrane potential and autophagy-related proteins almost disappeared.

CONCLUSION:

FJHQ enhanced mitophagy in podocytes by promoting the expression of BNIP3, thereby contributing to the amelioration of MN. This work reveals the possible underlying mechanism by which FJHQ improves MN and provides a new avenue for MN treatment.

2024-04-01·Journal of ethnopharmacology

Tangshen formula protects against podocyte apoptosis via enhancing the TFEB-mediated autophagy-lysosome pathway in diabetic nephropathy

Article

作者: Zhao, Tingting ; Ma, Fang ; Peng, Liang ; Lu, Xiaoguang ; Wang, Yuyang ; Zhao, Hailing ; Liu, Tongtong ; Zhang, Haojun ; Zhan, Yongli ; Mao, Huimin ; Yang, Liping ; Li, Ping

ETHNOPHARMACOLOGICAL RELEVANCE:

Diabetic nephropathy (DN) is the leading cause of end-stage kidney disease and currently there are no specific and effective drugs for its treatment. Podocyte injury is a detrimental feature and the major cause of albuminuria in DN. We previously reported Tangshen Formula (TSF), a Chinese herbal medicine, has shown therapeutic effects on DN. However, the underlying mechanisms remain obscure.

AIM OF THE STUDY:

This study aimed to explore the protective effect of TSF on podocyte apoptosis in DN and elucidate the potential mechanism.

MATERIALS AND METHODS:

The effects of TSF were assessed in a murine model using male KKAy diabetic mice, as well as in advanced glycation end products-stimulated primary mice podocytes. Transcription factor EB (TFEB) knockdown primary podocytes were employed for mechanistic studies. In vivo and in vitro studies were performed and results assessed using transmission electron microscopy, immunofluorescence staining, and western blotting.

RESULTS:

TSF treatment alleviated podocyte apoptosis and structural impairment, decreased albuminuria, and mitigated renal dysfunction in KKAy mice. Notably, TSF extracted twice showed a more significant reduction in proteinuria than TSF extracted three times. Accumulation of autophagic biomarkers p62 and LC3, and aberrant autophagic flux in podocytes of DN mice were significantly altered by TSF therapy. Consistent with the in vivo results, TSF prevented the apoptosis of primary podocytes exposed to AGEs and activated autophagy. However, the anti-apoptosis capacity of TSF was countered by the autophagy-lysosome inhibitor chloroquine. We found that TSF increased the nuclear translocation of TFEB in diabetic podocytes, and thus upregulated transcription of its several autophagic target genes. Pharmacological activation of TFEB by TSF accelerated the conversion of autophagosome to autolysosome and lysosomal biogenesis, further augmented autophagic flux. Conversely, TFEB knockdown negated the favorable effects of TSF on autophagy in AGEs-stimulated primary podocytes.

CONCLUSIONS:

These findings indicate TSF appears to attenuate podocyte apoptosis and promote autophagy in DN via the TFEB-mediated autophagy-lysosome system. Thus, TSF may be a therapeutic candidate for DN.

项与盐酸氯喹相关的新闻（医药）

2024-06-16

·AIDD Pro

【第一百三十一期】AI+药物研发领域一周资讯

前言 AIDD Pro 根据国内外各大网站以及人工智能药物设计主流新闻网站及公众号，从 AIDD会议、AIDD招聘，重大科研进展、行业动态、最新报告发布等角度，分析挖掘了每周人工智能辅助药物设计领域所发生的、对领域技术发展产生重大推动作用的事件，旨在帮助 AIDD领域研究人员和业内人士及时追踪最新科研动态、洞察前沿热点。如果您觉得符合以上要求的内容我们有遗漏或者更好建议，欢迎后台留言。科研进展2024年6月14日【图注意网络】J. Chem. Theory Comput. | 推进力场参数化：一种有向图注意网络方法2024年6月13日【药物发现】ACS Omega | 选定抗生素的药物再利用：癌症药物发现的一种新兴方法2024年6月13日【酶抑制剂】J. Med. Chem. | 含有芳基羧酸片段的1,2,4-恶二唑衍生物作为沙贝病毒木瓜蛋白酶样抑制剂的设计、合成和生物学评价2024年6月13日【化学空间】J. Chem. Inf. Model. | 隐式化学空间中的进化多目标分子优化2024年6月12日【强化学习】J. Med. Chem. | 基于强化学习模型的综合可行导联分子从头设计：人工智能辅助发现靶向CXCR4的抗IBD导联2024年6月12日【SARS-CoV-2】ACS Chem. Biol. | SARS-CoV-2 Mpro的高分辨率底物特异性分析与SARS-CoV Mpro的比较具体信息，请滑动下方文字 1.【图注意网络】力场(FFs)是一种成熟的模拟大型复杂分子系统的工具。然而，参数化FFs是一项具有挑战性且耗时的任务，它依赖于经验启发法、实验数据和计算数据。最近的努力旨在使用预先存在的数据库和动态从头算数据自动分配FF参数。在这项研究中，我们提出了一个基于图的力场(GB-FFs)模型，直接从化学环境中推导出广义琥珀力场(GAFF)的参数，并研究了功能形式的影响。我们的端到端参数化方法通过聚集定向分子图中的基本信息来预测参数，消除了对专家定义程序的需要，并提高了GAFF在更广泛的分子复合物中的准确性和可移植性。仿真结果与原GAFF参数化进行了比较。实际上，我们的研究结果表明，该模型的可转移性得到了改善，表明其在模拟分子间和扭转相互作用方面的准确性得到了提高，同时溶剂化自由能也得到了改善。本文提出的优化方法完全适用于其他非极化ff和极化ff。链接网址：https://pubs-acs-org.libproxy1.nus.edu.sg/doi/10.1021/acs.jctc.3c01421 DOI：https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.1021/acs.jctc.3c01421 2.【药物发现】药物再利用是一种研究先前批准的药物的新治疗应用的方法。这种对“旧”药物进行再利用的方法现在非常有效，易于安排，具有成本效益，并且在治疗包括癌症在内的各种疾病方面几乎没有失败的风险。药物再利用是目前癌症治疗的一个重要研究课题。这是一种探索现有药物的最新治疗应用的方法。从理论上讲，与创造新分子实体的公认挑战相比，重新利用策略具有各种优势，包括更快、更安全、更容易、更便宜。在现实世界中，一些药物已经被重新利用，包括阿司匹林、二甲双胍和氯喹。然而，医生和科学家在重新利用药物时面临着许多挑战，比如大多数药物不具有成本效益，而且对细菌有抗药性。因此，这篇综述的目的是收集有关重新利用药物的信息，使其更具成本效益，使细菌更难抵抗。癌症患者更容易受到细菌感染。由于他们的免疫系统较弱，抗生素有助于保护他们免受各种传染病的侵害。虽然抗生素不是免疫增强剂，但它们确实通过杀死细菌和减缓癌细胞的生长而有益于防御系统。它们的使用也增加了治疗效果，并有助于避免复发。近年来，由于真核生物的原核基因组和线粒体DNA之间的进化关系，抗生素已被重新用作有效的抗癌药物。抗癌抗生素通过干扰癌细胞的DNA和阻断启动子的生长来阻止癌细胞的生长，包括蒽环类药物、柔红霉素、表柔红霉素、米托蒽醌、阿霉素和伊达柔红霉素，这是另一种经fda批准用于治疗癌症的抗生素。根据内共生假说，原核生物和真核生物被认为具有进化关系。因此，在这项研究中，我们正试图探索治疗疾病(包括癌症)所必需的抗生素，帮助人们减少与各种感染相关的死亡，并大幅延长人们的预期寿命和生活质量。链接网址：https://pubs-acs-org.libproxy1.nus.edu.sg/doi/10.1021/acsomega.4c00617 DOI：https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.1021/acsomega.4c00617 3.【酶抑制剂】木瓜蛋白酶(PLpro)因其在SARS-CoV-2生命周期中的关键作用而成为一个有希望的治疗靶点。基于SARS-CoV-2 PLpro-GRL0617配合物结构，通过成环策略设计合成了一系列1,2,4-恶二唑衍生物。系统构效关系研究表明，在GRL0617中引入恶二唑和芳基羧酸基团增强了GRL0617对PLpro的酶抑制活性、亲和力和去泛素化能力。1,2,4- oxadiazole化合物13f和26r具有PLpro抑制活性(IC50分别为1.8和1.0 μM)和抗病毒活性(EC50分别为5.4和4.3 μM)，在小鼠体内具有良好的代谢稳定性(t1/2 > 93.2 min)和较高的血浆暴露量(AUC0-t分别为17,380.08和24,289.76 ng·h/mL)。特别是化合物26r具有39.1%的中等口服生物利用度和较强的抗病毒活性，值得进一步的体内研究。我们的发现为发现靶向PLpro的抗病毒药物提供了新的见解。链接网址：https://pubs-acs-org.libproxy1.nus.edu.sg/doi/10.1021/acs.jmedchem.4c00534 DOI：https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.1021/acs.jmedchem.4c00534 4.【化学空间】优化技术在推进药物开发中发挥着关键作用，作为许多生成方法的基础，可以有效地设计从现有先导化合物衍生的优化分子。然而，现有的方法在生成同时优化多种药物性质的多样化、新颖和高性质的分子时经常遇到困难。为了克服这个瓶颈，我们提出了一个多目标分子优化框架(MOMO)。MOMO在分子序列水平上采用了一种特别设计的基于帕累托的多属性评估策略来指导隐式化学空间中的进化搜索。通过对MOMO与五种最先进的方法在两个基准多性质分子优化任务中的比较分析表明，MOMO在多样性、新颖性和优化性质方面明显优于它们。MOMO在药物发现中的实际适用性也在现实世界发现问题中的四个具有挑战性的任务中得到了验证。这些结果表明，MOMO可以为解决具有多种性质的分子优化问题提供一个有用的工具。链接网址：https://pubs-acs-org.libproxy1.nus.edu.sg/doi/10.1021/acs.jcim.4c00031 DOI：https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.1021/acs.jcim.4c00031 5.【强化学习】人工智能(AI)从头分子生成为药物发现提供了新结构的线索。然而，所生成分子的靶亲和力和可合成性对人工智能技术的成功应用提出了关键挑战。因此，我们开发了一种先进的强化学习模型，以弥合从头分子生成理论与药物发现实际方面之间的差距。该模型以化学反应模板和市售积木为起点，采用正向反应预测生成分子，同时进行实时对接和药物相似度预测，确保可合成性和药物相似度。我们应用该模型设计了靶向炎症相关受体CXCR4的活性分子，并根据ai提出的合成路线成功制备了活性分子。在随后的体外和体内实验中，一些分子表现出有效的抗cxcr4和抗炎活性。表现最好的化合物XVI缓解了炎症性肠病的相关症状，并表现出合理的药代动力学特性。链接网址：https://pubs-acs-org.libproxy1.nus.edu.sg/doi/10.1021/acs.jmedchem.4c00184 DOI：https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.1021/acs.jmedchem.4c00184 6.【SARS-CoV-2】来自COVID-19的SARS-CoV-2 Mpro蛋白酶在病毒成熟过程中在11个位点切割pp1a和pp2b多蛋白，是Nirmatrelvir的靶标，Nirmatrelvir是一线治疗药物Paxlovid的两种成分之一。我们利用YESS 2.0平台，结合蛋白酶和底物在酵母内质网中的表达、荧光活化细胞分选和下一代测序，对SARS-CoV-2 Mpro以及SARS 2003中相关的SARS- CoV Mpro进行了高分辨率底物特异性分析。即使在如此高的分辨率下，这两种酶的底物特异性特征基本上是相同的。在我们的分类中分离的裂解底物的种群是如此之深，以至于对SARS-CoV-2多蛋白pp1a和pp2b上不同裂解位点的相对催化效率进行了定性预测。这些结果不仅证明了YESS 2.0/NGS方法在蛋白酶底物特异性分析方面的精确性和可重复性，而且应该有助于设计下一代SARS-CoV-2 Mpro抑制剂，以及类似的SARS-CoV Mpro抑制剂。链接网址：https://pubs-acs-org.libproxy1.nus.edu.sg/doi/10.1021/acschembio.4c00096 DOI：https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.1021/acschembio.4c00096 上下滚动查看更多药企动态2024年6月14日【信诺维】信诺维创新ADC获FDA快速通道资格，治疗胃癌2024年6月13日【晶泰科技】晶泰科技在港交所主板挂牌上市，AI+机器人打造18C第一股2024年6月13日【BMS】BMS新一代ROS1/NTRK抑制剂获FDA批准新适应症2024年6月13日【艾伯维】17.1亿美元！明济生物与艾伯维达成授权协议2024年6月12日【君实生物】全球首个达预设PFS和OS双主要终点阳性！君实PD-1单抗第9项适应症获批！2024年6月12日【诺华】诺华「卡马替尼」在华获批上市各动态具体信息，请滑动下方文字 1.【信诺维】 6月14日，信诺维宣布其研发的靶向Claudin18.2的新一代抗体偶联药物（ADC） XNW27011获得美国FDA授予快速通道资格，用于治疗胃癌。链接网址请戳我 2.【晶泰科技】 2024年6月13日，晶泰科技（2228.HK）正式在香港交易所主板挂牌上市，上市股票发行价格为5.28港元/股，净募集资金约8.96亿港元。香港特别行政区财政司司长陈茂波，香港特别行政区政府创新科技及工业局局长孙东、副局长张曼莉，香港交易所集团主席唐家成、行政总裁陈翊庭出席上市仪式，与晶泰科技联合创始人温书豪、马健、赖力鹏一起，共同见证港交所18C第一股诞生的历史性时刻。链接网址请戳我 3.【BMS】 6月13日，BMS宣布FDA已经加速批准Augtyro（repotrectinib）新适应症，用于12岁及以上儿童和成人神经营养因子受体络氨酸激酶（NTRK）基因融合突变局部晚期或转移性实体瘤患者。链接网址请戳我 4.【艾伯维】 6月13日，明济生物制药（北京）有限公司和艾伯维共同宣布一项开发FG-M701的许可协议。FG-M701是一种用于治疗炎症性肠病的下一代TL1A抗体，目前正处于临床前开发阶段。（去年Sanofi、Roche和Merck均花重金布局TL1A抗体）链接网址请戳我 5.【君实生物】 6月12日，君实生物宣布，已收到国家药品监督管理局核准签发的《药品注册证书》，特瑞普利单抗联合依托泊苷和铂类用于广泛期小细胞肺癌（ES-SCLC）的一线治疗的新适应症上市申请获得批准。链接网址请戳我 6.【诺华】6月12日，诺华宣布，该公司盐酸卡马替尼片（妥瑞达®）获得中国国家药品监督管理局批准上市，用于未经系统治疗的携带间质上皮转化因子（MET）外显子14跳跃突变的局部晚期或转移性非小细胞肺癌（NSCLC）成人患者。链接网址请戳我上下滚动查看更多会议信息 2024年6月20-21日智药邦举办2024人工智能与生物医药生态大会2024年6月27-28日上海求实医药咨询有限公司举办ING 2024第七届免疫及基因治疗论坛2024年8月29-30日上海求实医药咨询有限公司举办ICNS 2024 第四届中枢神经系统药物深度聚焦论坛各会议具体详情和参会方式，请滑动下方文字 2024人工智能与生物医药生态大会主办方：智药邦会议时间：2024年6月20日-21日会议地点：上海会议主旨：充分介绍和讨论AI赋能生物医药领域的前沿进展、重要案例、关键问题和各方思考，加强交流与合作，加速生物制药相关技术和产业的发展。链接网址请戳我 ING 2024第七届免疫及基因治疗论坛主办方：上海求实医药咨询有限公司会议时间：2024年6月27日-28日会议地点：北京会议主旨：聚焦CGT领域开发的核心问题，破除技术壁垒，推动产业不断前进，开启生物医药产业下一个风口！链接网址请戳我 ICNS 2024 第四届中枢神经系统药物深度聚焦论坛主办方：上海求实医药咨询有限公司会议时间：2024年8月29日-30日会议地点：南京会议主旨：深化基础研究，提升药物开发成功率，突破技术瓶颈，并探索新疗法的前沿进展。链接网址请戳我上下滚动查看更多版权信息本文内容均由小编收集于公开的各个网络平台，发布的目的仅为了方便大家一站式了解AIDD行业信息，并未对发布源头进行真实性验证。如您发现相关信息有任何版权侵扰或者信息错误，请及时联系AIDD Pro（请添加微信号sixiali_fox59）进行删改处理。原创内容未经授权，禁止转载至其他平台。有问题可发邮件至sixiali@stonewise.cn 关注我，更多资讯早知道↓↓↓

2024-05-12

·生物制品圈

抗癌纳米药物载体的挑战与展望

摘要癌症是全球第二大常见的死亡原因，仅次于心血管疾病。癌症的特征之一是不受控制的细胞分裂和对细胞死亡的抵抗。已经开发了多种方法来应对这种疾病，包括手术、放疗和化疗。尽管化疗主要用于控制细胞分裂和诱导细胞死亡，但一些癌细胞能够抵抗细胞凋亡，并对这些药物产生耐受性。化疗的副作用往往是患者很难承受得起的，患者可能会经历更多的不良反应而不是收益。此外，用于化疗的药物的生物利用度和稳定性是必须解决的关键问题，因此对确保快速和准确的靶向治疗的可靠输送系统有很高的需求。在本文中，我们讨论了不同类型的纳米载体、它们的特性和配方的最新进展，以及每种载体的相关优点和缺点。前言纳米医学是一个新出现的领域，已经在世界范围内获得了极大的关注。该领域的技术可以深入探索细胞隔室，并可能有助于治疗包括癌症在内的多种疾病（Mushtaq，2021）。治疗性纳米医学递送系统的开发对全世界的研究团体来说都是一个挑战（Bamburowicz-Klimkowska，2019；Bastiancich，2019），人们对将活性成分药物与高效递送载体相结合的系统有很高的要求。传统的化疗递送策略有几个问题，包括潜在的多药耐药性的发展，这损害了这些药物的可靠使用（Karpkird，2020；Ruman，2020）。此外，经典的纳米载体的临床反应往往与抗癌治疗的预期不同。因此，人们开发了对刺激有反应的新材料和智能药物输送平台（Elzoghby，2020；Heinrich，2020；Parayath，2020）。一些临床试验表明，与游离药物相比，这些智能药物输送系统提高了几种癌症的治疗效率（Vergallo, 2021）。因此，需要开发新的纳米载体，能够有效地将特定的药物输送到其目标部位（Ruman，2020）。药物输送系统是改善抗癌药物治疗特性的一种重大策略（图1）。它们有助于克服药物的难溶性和生物利用度问题，这些问题会限制药物的治疗作用（He，2020；Laffleur and Keckeis，2020；Güven，2021；Mitchell，2021）。抗癌药物有几个主要的限制，其中包括（但不限于）：非特异性、广泛的生物分布、短半衰期和全身毒性（Taghizadeh，2015）。使用纳米载体可以帮助最大限度地减少这些与药物有关的障碍，并通过允许在特定的目标部位进行传递和控制释放来改善药物的治疗作用（Sharma & Bhatia，2021；Wang，2021）。图1 用于递送药物的不同类型的纳米载体因此，基于纳米技术的药物递送系统在开发合适的载体方面有很大的潜力，能够有效地、高效地递送药物来对抗包括癌症在内的一些疾病。此外，这些递送系统可以为其他药物的相关问题提供解决方案，包括副作用和疗效（Zheng，2020；Aranda-Lara，2021）。药物输送系统主要是指药理学载体。它们包括纳米乳剂、纳米脂质体、纳米水凝胶、纳米颗粒（nanoparticles，NPs）和纳米纤维，这些分子能够夹带或承载药物并将其运送到目标部位，引起了医学领域的关注（Zheng，2020；Tomeh & Zhao，2020；Baveloni，2021；Hasani，2021）。一般来说，包裹在纳米胶囊内的货物是纳米颗粒（尺寸小于100纳米）。它们的小尺寸使它们能够到达特定的细胞区，在那里沉积装载物（Güngör & Kahraman，2021；Martinelli，2021）。封装的聚合物也可以成功地用作递送系统，并且能够保护药物不受可能导致在胃肠道（gastrointestinal，GI）降解的环境因素的影响（Al-Hashimi, 2021; Calvino, 2021）。天然多糖（natural polysaccharides，NPLS）是最广泛使用的聚合物，其多样化的特性使其比合成聚合物更具优势（Niu，2021）。NPLS也被认为是安全的，因为它有几个独特的特性，包括无毒性、无反应性和生物相容性（Shah，2020；Chen，2021）。因此，NPLS通常被用作纳米载体递送药物的制药配方中的辅料。它们的物理和化学结构可以方便地修饰，以适应不同的应用，而且有些能够抵抗目标细胞经常拥有的酶降解过程。(Chakka and Zhou，2020；Guo，2020；Meneguin，2021；Shokri，2021）。由NPLS输送的药物能够与外层结合，使其具有增加稳定性和可溶性的优势（Salapa，2020；Torres-Pérez，2020）。用于制造纳米涂层药物的最常见的有效NPLS是果胶、淀粉、树胶、壳聚糖、海藻酸盐和纤维素（Niu，2021；Shah，2020）。它们的独特治疗效果在治疗包括癌症在内的几种疾病中是很显著的。本综述阐述了使用纳米载体递送抗癌药物的挑战，并指出了这一前景广阔的研究领域的未来远景。1 天然多糖的合成在形状、大小、结构和合成过程方面，NPs之间存在相当大的差异。存在两种主要的NP合成方法，被称为自上而下和自下而上的方法。下面将讨论这些方法。2 自上而下的方法自上而下的方法也被称为破坏性方法，即在生成所需的NPs之前，将大部分材料降解成小块（Shafey, 2020）。这种方法涉及几种技术，如激光烧蚀、热分解和机械研磨。在NP合成过程中，通过改变反应条件可以很容易地改变尺寸、形状和电荷（Lassalle & Ferreira，2007）。3 自下而上的方法在这种方法中，NPs由较小的结构（如原子）构建，最终生成所需的NPs（Yang，2014）。这种方法通常采用的一种方法是化学气相沉积旋转激光热解法。4 以癌细胞为目标的药物输送系统靶向药物递送系统是最近开发的一种向靶向肿瘤细胞有效递送特定药物的方法（Alshememry，2017；Bokan，2019），具有一些优点和缺点。优点包括由于特异性靶向癌细胞而保护正常细胞不受药物作用的影响，可大幅减少药物副作用，并降低一些肿瘤细胞的耐药率（Ahlawat，2018；Ajithkumar & Pramod，2016）。至关重要的是，药物要以足够的数量传递到其目标部位以发挥其作用，在选择和设计药物传递系统时应考虑这一点。细胞核是大多数药物的主要目标部位。尽管NPs的设计允许它们进入细胞膜，但不能保证它们能够到达细胞核。因此，有两种目标定位的方法，如下所述。5 主动靶向在主动药物靶向中，药物可以利用非常独到的结构，如抗体或肽，来进入受体和靶点。主动靶向包括超声能量和磁场等技术。主动靶向系统由三部分组成：作为靶向分子的配体、作为载体的聚合物和特定的活性药物。抗原拥有作为主动靶向系统的功能，因为它只在肿瘤细胞上表达。这允许该系统通过受体介导的内吞作用内化（Kumar Khanna，2012）。主动药物靶向方法不仅对于药物，而且对于将基因、蛋白质和治疗方法输送到其目标部位都至关重要，使正常细胞免于接触，从而减少潜在的副作用。与普通的药物递送系统相比，该系统还能增加药物递送的数量。当药物积聚在肿瘤细胞周围的间隙中时，可以被细胞的活性机制包裹。这种情况的发生是由于在纳米系统上修饰了独特的转录因子，这些转录因子附着在肿瘤细胞表面过度表达的蛋白质上。这种修饰提高了纳米系统对癌细胞表面的化学和物理亲和力（Attia，2019）。靶点是纳米系统在进入细胞之前所附着的分子。其中包括用于到达脑瘤微环境的转铁蛋白受体，转铁蛋白配体已经通过加载到固体脂质NPs（Jain，2013）、树枝状物（He，2011）、胶束（Zhang，2012）和超顺磁性氧化铁NPs（Jiang，2012）而被用于靶向胶质瘤细胞。6 被动靶向将药物直接注射到血液中是被动药物靶向（也称为物理靶向）的典型例子。在这种机制中，药物是通过身体机制（如代谢、排泄、调理和吞噬）来最大限度地减少其清除的。有充分的证据表明，在某些条件下，包括缺氧和炎症，血管会变得更具渗透性（Torchilin，2011）。肿瘤细胞通常在活跃分裂时通过血管生成过程建立新的血管。这使得新形成的血管更具渗透性，并允许大于40kDa的大分子（包括纳米系统）通过。因此，将小型药物封装成纳米形式可以增强其药代动力学并减少潜在的副作用。这种类型的靶向被称为被动靶向，因为它依赖于纳米载体的使用（Maeda，2001；Fang，2011年）。然而，应该注意的是，发生在肿瘤核心部分的缺氧和坏死病变可以阻止纳米载体和纳米药物进入整个肿瘤。这些坏死性病变是由于与主要肿瘤血液供应距离较远而导致氧气和营养物质输送不足。此外，作用在肿瘤核心部分血管上的间质压力使其渗透性低于外围血管（Fang，2011；Kobayashi，2013）。7 药物纳米递送系统有趣的是，NPLS是一种功能性大分子生物聚合物，通常从几种来源分离，包括植物（果胶和纤维素）、动物（壳聚糖）、细菌（黄原胶、树胶和葡聚糖）和藻类（藻酸盐）。这些多糖通常由十多个单糖单元组成，这些单糖单元通过糖苷以直链或支链连接，具有高度的安全性、稳定性和生物相容性。它们可以根据所需的设计和结构进行简单的修改和操作，以进一步应用于许多领域，包括生物医学和药物研究。NPLS由于其多种生物学特性，包括降血糖、抗癌和抗凝血作用，在生物医学研究中得到了有效的应用。由于存在与靶细胞受体结合的特异性配体，NPLS被用作药物纳米递送系统的候选赋形剂。这些配体参与药物的受控和靶向转运以供递送。此外，NPLS通常是可生物降解的、生物相容的，并且具有较低的毒性水平（图2）。图2 携带药物的纳米粒子与细胞膜之间的相互作用NPLS可以很容易地进行化学或生物化学修饰，以产生多种具有多种功能的活性形式，因为它们的表面结构含有羧基、羟基和氨基等官能团。特别是，这些衍生基团在与活体肌肉相关的非共价键的形成中发挥着重要作用，包括参与生物对接的粘膜和上皮。例如，NPLS海藻酸盐、果胶、淀粉和壳聚糖是有效的生物粘合剂（图3）。图3 细胞膜上的活性位点和靶向药物内化到癌症细胞中当生物粘合剂被用作药物递送系统时，细胞/药物摄取被成功地增强。NPLS的这些突出优点使其成为化疗药物，尤其是癌症治疗药物的首选方法。最近，人们对NPLS进行了广泛的研究，以深入了解其在各种纳米载体制剂中作为稳定剂的用途（Rehman，2020；Gheorghita-Puscaselu，2020；Pejin，2014）。生物聚合物（如多糖）因其高生物相容性和低免疫原性而被用作药物递送的有效纳米载体（Alsheemry，2017）。8 壳聚糖壳聚糖是一种被人熟知的线性阳离子杂多糖，由β-1,4-连接的2-氨基-2-脱氧-吡喃糖和2-乙酰氨基-2-脱氧残基-b-D-吡喃糖组成。它是最突出的天然多糖之一，由于其生物相容性和生物可降解性，被广泛用于纳米药物递送系统（Jhaveri，2021；Narmani & Jafari，2021）。壳聚糖具有多种特性，使其成为一种有效的纳米载体，包括血清中的高稳定性、低免疫原性、长循环时间、生物相容性和高生物利用度（Mushtaq，2021；Narmani & Jafari，2021；Pejin，2014）。壳聚糖是从甲壳类动物中提取的，用于各种药物和临床应用，包括作为纳米药物递送系统。壳聚糖结构中的氨基官能团使其可溶于酸性介质，对药物纳米递送系统中的生物化学适应和静电相互作用至关重要。此外，带正电荷的氨基可以提供具有免疫原性的壳聚糖，从而使其可以用作能够附着到粘膜细胞表面的生物粘合剂材料。壳聚糖的正电荷还能够打开上皮紧密连接，拓宽通过相邻细胞通路的通道，支持含有亲水性化合物的药物转运到靶组织中。壳聚糖已被广泛用作制备纳米载体的载体剂，用于治疗包括癌症在内的各种疾病的药物纳米系统。Akolade等人（2017）进行的一项研究发现，将姜黄素掺入壳聚糖中显示出包封效率的提高，负载能力达到64~76%（Akolade et al，2017）。姜黄素也被封装在壳聚糖纳米脂质体中，与阴道用传统药物结构相比，姜黄素显示出显著的负载量（Saesoo，2016）。其他药物已被掺入壳聚糖包被的藻酸钙纳米颗粒中，包括利拉鲁肽，其包封效率超过925，对糖尿病的治疗非常有效（Shamekhi，2018）。基于壳聚糖的纳米颗粒已被用于对抗几种细菌（Rashki，2021；Abd-El-Hack，2020）和病毒的感染，如冠状病毒（CoVs）（Rasul，2020）。当负载乙二醇时，研究者发现他们会在肿瘤细胞内积聚，这表明它们除了药物递送外，还可以用于其他应用（Ryu，2020）。此外，将壳聚糖与程序性死亡配体1（PD-L1）结合，以使这种参与程序性细胞死亡的蛋白质能够有效地跨粘膜递送（Jin，2021），并与碳量子点和DNA适体结合，用于在乳腺癌细胞中特异性递送5-氟尿嘧啶（5-FU）。这种方法的成功是通过测量不同凋亡相关基因（如BAX和BCL-2）的高表达谱来确定的（Zavareh，2020）。壳聚糖雷洛昔芬是Mohammadi等人首次引入的一种新型靶向治疗乳腺癌的药物，能够携带阿霉素。该制剂被发现具有近95%的载药能力（如果药物以高稳定性释放，则为60%）（Mohammadi，2020）。壳聚糖还与pluronic P123聚合物缀合以靶向肺癌细胞，并且由于修饰的脂质体与肿瘤细胞之间的高亲和力，这种缀合的配方显著增强了癌细胞的摄取。在肺癌小鼠模型中观察到了相同的情况，其中将紫杉醇负载到壳聚糖脂质体上导致84%的肿瘤生长抑制（Miao，2021）。壳聚糖作为纳米载体的使用具有许多优点，包括增强药物吸收、膜相互作用、抵抗迁移、刺激免疫反应和延长药物释放（Nandgude & Pagar，2021）。9 纤维素纤维素是最广泛存在的天然多糖元素之一。这种生物化合物主要从细菌、真菌、植物和藻类中获得（Hemmati，2018）。纤维素的结构由以特定方式排列的D-吡喃葡萄糖环组成（Bajpai，2019）。纤维素被认为是一种生物相容的生物大分子，具有低毒性，具有独特的化学和物理特性，使其在医学上有广泛的应用，包括将药物运送到目标部位。然而，这种生物大分子的原始形式不溶于水，这限制了其应用。各种类型的改性纤维素已经被创造出来以解决这个问题并增加其应用。其中有几种，如纳米纤维素、纤维素醚、甲基纤维素和羟丙基纤维素，可作为治疗各种疾病的纳米药物包装和输送。由于其功能特点，重组形式的纤维素被用作增稠剂、稳定剂，并用于制造特定药物的纳米载体。用聚乙烯吸附的纤维素已被用来制造以植物为基础的蛋白质负载的纳米脂质体，它在胃肠道中提供了磷脂蛋白的控制释放（Patel，2020）。在类风湿性关节炎中，纤维素纳米粒子已经与钠结合，在该疾病的小鼠模型中作为外用软膏递送氯喹进行治疗。使用这种递送系统的结果显示，明显比药物本身的效果好（Bhalekar，2015）。纤维素是自然界中最常见的多糖之一，其惰性和生物相容性使其成为新型纳米载体的有力候选材料。基于纤维素诱导的复合材料、涂层和薄膜，已经开发了几种配方，并以纳米形式使用。这些基于纤维素的配方被用于各个领域，包括医学、生物学，甚至电子和能源（Carvalho，2021）。纤维素可以被配制成一种细长的生物基纳米结构，称为纤维素纳米晶体。它拥有新颖的特性，可以治疗各种疾病，包括癌症（Pinto, 2021）。10 淀粉环境友好的纳米复合材料已经被开发出来，作为安全和可生物降解的纳米载体应用。这些纳米载体包括淀粉（Li，2019），一种有前途的天然多糖，由大分子量的葡萄糖长链的生物聚合物制成（Duan，2020）。最近，为了不同的应用，淀粉被进行了各种修饰，包括附着L-丙氨酸、L-赖氨酸和L-苯丙氨酸。这种修饰形成的球形分子适合作为包括萘普生在内的几种药物的纳米载体（Namazi & Abdollahzadeh, 2018）。一般来说，天然淀粉由于具有几个显著的优点，包括生物相容性、低毒性、不敏感和增加药物溶解度，已经被用来实现药物的控制释放。淀粉的一个局限性是它的乳化能力低，可以通过改性来提高胃肠道的吸收。这些修饰包括酶解、化学和物理活化（BravoNúñez，2019年）。在化学上，原生淀粉被乙酰化、氧化或羟丙基化，以获得能够显著给药的改性分子（Bai & Shi，2016；Zhu，2017）。近年来，纳米技术的发展拓宽了包括淀粉在内的几种生物聚合物的应用。为了优化使用这些改性聚合物，有必要在纳米尺度上更深入地了解其结构（Torres，2019）。与姜黄素偶联的淀粉最近在纳米尺度上被用来有效地输送前者的生物制剂。这种成分被发现具有很高的药物装载能力，增强了胶体稳定性和对酸敏感的释放曲线。此外，与游离的姜黄素相比，这种纳米配方大大增加了姜黄素的溶解度，并在暴露于紫外线和高温时保护其不被降解。这种配方已被用于治疗几种疾病，包括癌症（Chen，2020）。胆固醇和咪唑是用于氧化淀粉的生物大分子。最终产品是与胆固醇和咪唑相连的氧化淀粉，通过透析转化为纳米颗粒。这种配方被用来有效地将姜黄素送入癌细胞，其中加载的姜黄素在pH值7.4时被释放（相比之下，单独使用姜黄素时的pH值为5.5）（Zhu, 2017）。淀粉也被用来封装氧化铜纳米颗粒，并促进其在乳腺癌细胞（MDAMB-231）中的目标释放。数据显示，这种纳米配方在细胞中诱发了细胞毒性，其IC50接近21 μg/mL。细胞毒性是由活性氧（ROS）的产生和线粒体膜电位的降低引起的（Mariadoss，2020）。同样，甘露糖与5-FU偶联并加载到淀粉纳米粒子上，以锁定肝癌细胞。当加载时，发现5-FU的药物吸收效率在64.2和82.3%之间。体内研究表明，与NPs共轭的甘露糖延长了5-FU的血浆水平。此外，血浆分析显示肝脏中的5-FU水平升高，表明这种纳米载体将药物输送到目标部位的效率（Jain, 2021）。表观遗传药物（如组蛋白去乙酰化酶抑制剂CG-1521）也被封装在淀粉纳米颗粒中，以提高其生物利用度和可溶性。数据显示，CG-1521的封装降低了释放率，增加了药物在乳腺癌细胞MFC-7中的细胞毒性。这种纳米配方诱导了细胞周期停滞和细胞凋亡，表明将这种药物封装在淀粉纳米载体中可以大大改善其传递（Alp, 2019）。11 果胶果胶是一种天然存在的生物聚合物，具有由α-(1-4)-D-半乳糖醛酸组成的线性多糖，并显示出用于不同应用的前景，包括药物输送（Rehman, 2019）。果胶在胃肠道中不能被消化，其溶解度会降低。然而，通过共生细菌产生的果胶分解酶的作用，它可以在结肠中被吸收（Shishir，2019）。果胶的特点是疏水性，这一特性使它可以作为纳米载体使用，因此它已被用于一些药物的透皮给药。果胶还被用来合成纳米颗粒、纳米乳剂和纳米脂质体形式的药物负载纳米载体。一些药物已经被加载到果胶纳米载体上，包括姜黄素（Alippilakkotte & Sreejith，2018）、头孢唑啉（Shahzad，2019）和二甲双胍（Chinnaiyan，2019）。癌细胞的抗性限制了化疗药物的疗效。这个问题可以通过使用精油来解决，尽管生物利用度低仍然是一个关键因素。因此，纳米乳化剂代表了克服这一障碍的一个有前途的工具。一项研究将柑橘黄酮与多花紫草精油结合起来，以确定其抗增殖特性。该制剂被发现通过触发ROS的激活、线粒体膜电位的丧失和细胞周期在G2/M期的停滞来诱导乳腺癌细胞凋亡（Salehi，2020）。由于其自愈性，用氧化果胶、壳聚糖和γ-Fe2O3合成了复合水凝胶，将药物送入目标细胞。该配方被发现具有高溶解性和生物相容性，以及自愈性和抗增殖性，特别是当加载5-FU时，该复合材料能够在12小时内持续释放（Li, 2020）。果胶还可以与壳聚糖偶联以提高输送效率。一项研究开发了加载西妥昔单抗的果胶-壳聚糖纳米颗粒，并发现这种配方在结肠癌细胞中的细胞摄取得到了加强。这导致了癌细胞繁殖的减少和细胞周期在G2/M期的停滞，表明这种纳米配方具有抗增殖的特性（Sabra，2019）。除了其改性形式，果胶还显示了肿瘤靶向药物输送的前景。一些研究已经调查了果胶纳米颗粒与不同金属（如金）的纳米颗粒的组合，作为乳腺癌细胞的抗癌治疗（Suganya，2016）。细胞凋亡的增加和彗星试验的结果表明，这种组合作为一种抗增殖的纳米配方是有效的（Suganya，2016）。12 藻酸盐藻酸盐是线性阴离子水溶性多糖，通常天然存在于褐色海藻中。海藻酸盐具有二价阳离子，这在合成纳米药物输送系统中是很有利的。它们的安全性和生物相容性使它们对几种药物的封装很有用。阳离子（如钙离子）的存在使藻酸盐成为良好的纳米载体，并使它们可以用于制造水凝胶。利用水凝胶运输药物的过程主要依赖于pH值，由藻酸盐封装的药物在胃的酸性环境中不会释放。当化合物到达肠道，pH值增加时，药物就会被允许开始释放。由于藻酸盐的低毒性、高生物相容性和生物降解性，可以作为抗癌药物的传递工具（Jayapal & Dhanaraj，2017）。它们还可以与其他天然多糖，如壳聚糖和果胶相结合。许多研究表明，基于海藻酸盐的NPs平台有可能用于成功传递一些抗肿瘤药物（He，2020）。在一项研究中，姜黄素被加载到磁性海藻酸盐/壳聚糖NPs上，以提高其在乳腺癌细胞中的生物利用率和细胞毒性。结果表明，用负载的姜黄素处理的细胞对药物的吸收效率提高了3~6倍，表明这种纳米载体提供了一种可靠的药物输送方法（Song, 2018）。在另一项研究中，多柔比星（一种常见的化疗药物）被加载到海藻酸盐纳米水凝胶上，发现这种配方能在肿瘤细胞中使得多柔比星得到持续的释放（Zhou，2018）。其他研究人员将胰岛素加载到海藻酸盐纳米颗粒上以治疗糖尿病大鼠，发现它能使葡萄糖水平降低40%，持续时间超过18小时（Sarmento, 2007）。为了评估作为乳腺癌的治疗，口服化疗药物依西美坦被加载到海藻酸盐NPs上。体外实验的结果表明，海藻酸盐纳米颗粒（ALGNPs）作为一种可靠的药物输送系统用于乳腺癌（Jayapal & Dhanaraj，2017）。在另一项研究中，顺铂被胶结在海藻酸盐水凝胶和金NPs上进行传递；发现这种组合产生了更高的肿瘤抑制水平（Mirrahimi，2020）。研究人员还表明，儿茶酚功能化的海藻酸盐NPs可用于治疗膀胱癌。这种纳米配方是用耦合化学法制造的，体内分析显示，与未改性的形式相比，它在猪膀胱组织粘膜中的保留率有所提高。此外，这种组合还显示出较高的装载效率和容量。因此，这种纳米配方可以作为治疗膀胱癌的粘附性纳米剂（Sahatsapan，2020）。姜黄素戊二酸是活性形式姜黄素的前体，与活性形式相比，它的特点是高溶解度。为了加强这些特性，姜黄素戊二酸被封装在壳聚糖/海藻酸盐纳米粒中。这种纳米配方在结直肠癌细胞中显示出很高的细胞摄取率，与游离形式相比具有更好的抗增殖活性。因此，口服这种纳米形式可用于治疗一些癌症类型（Sorasitthiyanukarn，2018）。一项研究根据油包水乳化原理，将多柔比星以纳米形式装入海藻酸/壳聚糖中。在小鼠乳腺癌细胞中评估了这种新配方的功效，结果显示，与游离多柔比星（0.13 lg/mL）相比，纳米形式的IC50为0.15 μg/mL，表明纳米配方在传递细胞毒性药物方面更有效率（Rosch，2019）。13 透明质酸透明质酸（Hyaluronic acid，HA）是一种天然存在的多糖，存在于动物和人类的所有结缔组织中。研究人员将喜树碱与HA外壳偶联，发现这种配方能够消除小鼠的原发性乳腺癌细胞（Sun，2019）。另一项调查治疗CD44-表达的乳腺癌细胞的研究准备了HA、壳聚糖和硫辛酸NPs的组合。使用MTT、TUNEL、CASP3和罗丹明123检测确定这些组合NPs的有效性。该组合显示了持续释放、高细胞内化和在乳腺癌细胞（MCF-7）内快速释放药物。这些数据表明，这种纳米配方可能是一个有希望的平台，用于靶向输送治疗癌症的药物（Rezaei，2020）。基于HA的聚合物NPs也被用来封装IR780，用于乳腺癌治疗。这种纳米配方与多柔比星共包，以增强其治疗活性。二维和体外分析表明，与非恶性细胞相比，乳腺癌细胞对该纳米配方的细胞内化程度更高。这些结果证明了这种纳米配方在输送治疗癌症的药物方面的有效性（Alves，2019年）。多西他赛是一种常用的化疗药物，在CYP1B1的作用下失活，CYP1B1是一种由MDR乳腺癌细胞过度表达的酶。HA与纳米形式的聚乙烯亚胺相结合，加载多西他赛和a-萘酮（CYP1B1的抑制剂），以克服乳腺癌细胞中CYP1B1引起的MDR。该配方可以通过下调癌细胞中的CYP1B1来逆转MDR，从而提高多西他赛的治疗活性（Zhang，2019）。化疗药物的输送遇到了一些障碍，包括对目标细胞缺乏特异性，细胞内化率低，肝脏累积率较高。为了解决这个问题，研究人员准备了一种HA-紫杉醇-甲氧基聚乙二醇的复合纳米配方，并在表达CD44的肺癌细胞中进行了测试。结果发现，与游离药物形式相比，这种配方减少了肝脏蓄积，并在体内增强了抗肿瘤活性。因此，这种复合纳米配方可以直接应用于改善癌症治疗药物在体外和体内的传递（Luo，2020）。5-FU是一种常用的抗癌药物，其生物利用度有限。在他们的研究中，Mansoori等人开发了HA修饰的脂质体，将5-FU送入表达CD44的乳腺癌和结直肠癌细胞。凋亡试验表明，经处理的细胞在细胞周期的G0/G1期被逮捕。此外，他们的结果显示，与游离药物相比，给予5-FU-HA和5-FU-lipo时，菌落形成减少（Mansoori，2020）。HA也被用来修改Au-Ag合金NPs，以专门针对表达CD44的4T1乳腺癌细胞。该合金的过氧化物酶样活性有助于在肿瘤部位产生更多的OH并释放Ag+，从而导致该合金的高效治疗作用（Chong, 2020）。奎纳克林主要用于治疗疟疾，但也被发现具有抗癌特性。奎纳克林的主要挑战是它的肝毒性；为了克服这个问题，利用HA和乳铁蛋白制备了一种纳米复合材料，以胰腺癌细胞（PANC-1）为目标。该复合材料的IC50下降了3倍，表明其具有强大的抗癌活性。体内研究表明，该复合材料减少了肿瘤体积，提高了大鼠的生存率，对重要器官没有任何不利影响（Etman，2020）。最近，雷洛昔芬已被用于治疗肺癌和预防肝癌。雷洛昔芬耐药性仍然是使用这种药物的一个重要障碍。为了解决这个问题，研究人员将雷洛昔芬装入HA和壳聚糖纳米颗粒中，以增加药物的半衰期并增强其释放。这种配方在非小细胞肺癌（A549）和肝细胞癌（HCC）细胞上进行了测试，结果显示，它的药物吸收能力高于单独的自由药物。这是首次评估雷洛昔芬在HA和壳聚糖NPs中的装载效率的研究（Almutairi等人，2019）。在制备多西他赛时，HA与金纳米粒子（AuNPs）的组合已被证明是有用的，用于治疗癌细胞。与游离的多西他赛相比，这种组合在肿瘤模型中表现出更大的细胞毒性和对癌症生长的抑制作用（Gotov，2018)。研究人员通过在磷酸锆NPs中加入HA，将磷酸锆的药物装载特性和HA的癌细胞靶向能力结合起来。然后，该系统被加载了紫杉醇作为抗增殖药物来靶向肺癌细胞。与单独的自由药物相比，加载的药物显示出在目标细胞内的积累增加，体内分析表明抗癌活性增加（Li，2017）。14 右旋糖酐研究人员将葡聚糖与壳聚糖NPs相结合，并将其与NIK/STAT3特异性siRNA和BV6加载，以诱导不同癌症的细胞死亡，包括乳腺癌和结直肠癌。结果表明，这种组合诱导细胞凋亡，抑制细胞增殖，减少细胞迁移、血管生成和肿瘤细胞的集落形成（Nikkhoo，2020）。抗HER2抗体是一种有前途的靶向分子，用于肿瘤特异性癌症治疗。在一项研究中，这种抗体以纳米形式与葡聚糖和精胺偶联，并评估了这种配方对癌细胞的效率。结果表明，该偶联抗体对SKBR3和人类成纤维细胞没有毒性作用。当用于热疗时，发现偶联的抗HER2-精胺-葡聚糖NPs能够靶向并诱导所研究细胞的凋亡（Avazzadeh，2017）。为了提高5-FU和紫杉醇的效率，研究人员将这些分子加载到壳聚糖/葡聚糖NPs上，以促进双重药物输送。体外分析显示，该配方表现出可控的药物释放。评估了这种纳米配方对肝细胞癌细胞（HepG2）的细胞毒性作用，结果显示，这种双重药物抑制了细胞增殖并诱导细胞凋亡。此外，细胞摄取分析表明，紫杉醇和5-FU在肝癌细胞中的药物内化率很高（Wang，2020）。在另一项研究中，研究人员将甲氨蝶呤加载到葡聚糖-姜黄素纳米系统上，以促进有效输送到乳腺癌细胞（MCF-7）。他们的研究结果表明，该纳米系统能够控制甲氨蝶呤的释放，并在这些细胞中产生较高的药物内化率（Curcio, 2019）。已进行了进一步的研究，调查使用葡聚糖来改善药物输送。葡聚糖和叶酸包被的超顺磁性氧化铁的组合被用来提高长春花碱在胰腺癌细胞中的靶向效率和药物摄取。合成的纳米载体呈球形，发现该系统可以激活胰腺癌细胞中的PDL1、Casp3和NF-1，进而诱导细胞凋亡并减少细胞增殖（Albukhaty，2020）。为了克服癌细胞（尤其是乳腺癌）普遍获得的对多柔比星的抗性，多柔比星被封装在葡聚糖-壳聚糖NPs中。这种配方在癌细胞中显示出更高的细胞毒性，而对正常细胞不产生影响。此外，这种纳米配方通过增加Bax/Bcl-xL的比例以及上调p53和p21，增强了药物的吸收和诱导细胞凋亡（Siddharth, 2017）。葡聚糖还与聚乙胺和氧化铁NPs结合使用，作为磁性基因载体的一部分，将miR-320b送入骨肉瘤细胞。磁场的产生使这种纳米配方能够进入裸鼠的OS细胞，并揭示了miR-320b的抗骨肉瘤作用，它可能通过YOD1调节Hippo途径而减少增殖（Gong，2020）。葡聚糖包裹的磁性NPs也被用来高效和选择性地传递miR-29a到乳腺癌细胞中，它导致了几个抗凋亡基因的下调（Yalcin, 2019）。卡培他滨是一种抗肿瘤药物，可以加载到阳离子葡聚糖-丝氨酸聚合物上，有效地输送到胶质母细胞瘤细胞中。细胞毒性数据显示，与游离药物相比，负载药物的毒性增加，胶质母细胞瘤的吸收增强（Ghadiri, 2017）。通过将5-FU加载到结肠酶反应性的葡聚糖基寡糖NPs上，已经证明了5-FU的可控药物释放。葡聚糖酶触发了封装药物的释放，这种酶的作用可能是导致治疗结肠直肠癌的纳米配方的生物利用度增加和毒性升高的原因（Abid，2020）。右旋糖酐也被涂上Goldman NPs，用于将多柔比星送入肝癌细胞。该纳米配方表现出较高的延长多柔比星释放的能力，从而增强了药物的治疗作用。它还减少了多柔比星的不良反应，并抑制了肝癌细胞的生长和增殖。因此，该配方代表了通过改善药物输送来治疗癌症的一个有希望的步骤（Li，2018）。硫酸葡聚糖-壳聚糖NPs已被用于将拉帕替尼送入癌细胞，细胞毒性实验表明，与单独的药物相比，加载的拉帕替尼在治疗48小时后表现出强大的抗癌活性。这些结果表明，纳米载体以可控的方式有效地释放疏水药物（Mobasseri，2017）。紫杉醇最主要的问题是其低溶解度和生物利用率。Bakrania等人（2018）证明，当紫杉醇以DEAE-葡聚糖纳米配方输送到三阴性乳腺癌细胞时，这些问题可以得到解决。他们的结果显示，封装的紫杉醇通过β-干扰素诱导抑制ROS的作用更强。此外，该纳米配方还被发现可以抑制血管内皮生长因子和NOTCH1的过度表达。因此，该配方显示了对TNBC的全面抗癌活性（Bakrania，2018）。结论使用纳米载体进行药物输送为治疗包括癌症在内的一些长期被认为无法治疗的疾病提供了可能性。这些纳米制剂提高了药物的生物利用度、溶解度和吸收率，从而在增加细胞毒性的同时减少了治疗副作用。这篇评论揭示了几种类型的纳米载体，特别是生物聚合物及其在癌症治疗中的药物输送潜力。未来的研究应集中在开发新一代的纳米载体，以促进越来越多的针对不同疾病（包括癌症）的药物的输送。参考文献Jhaveri, 2021. 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放射疗法临床研究

2024-02-13

·药渡

溶酶体捕获在药物研发中的意义与体外研究策略

前言溶酶体是细胞内执行消化作用的主要细胞器，也是代谢信号的传递中枢，参与调控了细胞内的多种生理代谢过程。研究表明，多种非化疗药物（如抗疟疾药氯喹、抗抑郁药丙咪嗪、止咳药右美沙芬等）和抗癌药物（如阿霉素、尼达尼布、索拉菲尼等）分子均对溶酶体具有高亲和力。此类药物分子通常具有碱性或弱碱性，容易在溶酶体中发生大量滞留，导致治疗效果不佳，且长期服用也易于引发耐药性和一些不良反应。药物在溶酶体内蓄积会影响其药代动力学特性、有效性和安全性，因此，在药物研发的早期阶段，尽早明确候选药物是否会被溶酶体捕获，能够更好地预测药物在组织和亚细胞内的分布情况，为新药研发过程中的吸收（absorption）、分布（distribution）、代谢（metabolism）及排泄（excretion）性质预测以及早期安全性评估提供参考。本文将从溶酶体的结构与功能出发，综合阐述溶酶体捕获的机理与应用，并提供相应的体外研究策略。溶酶体的结构与功能1溶酶体的结构溶酶体是一种具有单层膜结构的囊泡状、异质化的细胞器（图1），广泛地存在于除成熟红细胞之外的所有动物细胞中。溶酶体膜上存在一种关键蛋白——H+‑ATPase质子泵（V-type ATPase），它能够利用ATP水解释放的能量，驱动H+进入溶酶体腔（pH值大致为4.5~5.0），从而形成溶酶体-细胞质的pH梯度差。V-type ATPase质子泵与膜上其它离子通道蛋白（如Cl-通道蛋白、Na+/K+通道蛋白等）协同作用，以维持腔体内环境的动态平衡。图1. 溶酶体的生理结构[1]2溶酶体的功能溶酶体主要执行消化作用。溶酶体内部含有丰富的酸性水解酶，包括蛋白酶、脂肪酶、磷酸酶等，这些酸性水解酶能够帮助溶酶体消化经自噬或内吞作用运输的多种内源性或外源性大分子物质，也可以消化衰老或损伤的其它细胞器。除了基础的消化功能外，溶酶体还可以通过自噬作用参与细胞的免疫反应。溶酶体膜上的mTOR（雷帕霉素靶蛋白复合体）能够帮助溶酶体感知细胞内营养物质的富集情况，从而调节细胞的能量代谢和信号转导过程[2]。溶酶体捕获的机理及对ADME的影响基于溶酶体内的酸性环境，药物在溶酶体中发生质子化电离，并大量滞留在溶酶体内的过程被称为“溶酶体捕获”。溶酶体捕获的发生需要两个前提条件：（1）药物具有一定的跨膜能力（脂溶性）；（2）药物具有碱性基团，在酸性环境中容易发生质子化。1溶酶体捕获的机理一般而言，油水分配系数ClogP＞2.0，且pKa在6.5~11的化合物极易发生溶酶体捕获。亲脂性的碱性药物在生理pH条件下，主要以非解离型的形式存在，能够自由地穿透生物膜，进入细胞质。当其进入溶酶体后，溶酶体腔的酸性环境会促进药物结构中的碱性基团发生质子化电离。离子型药物的跨膜能力差，从而被滞留在溶酶体中，由此形成了“溶酶体捕获”现象（图2）。图2. 溶酶体捕获的机理2溶酶体捕获与药物ADME药物在人体内的ADME过程会受到诸如给药途径（如口服给药、注射给药、呼吸道吸入给药等）、生理因素（如组织器官血流量、体液pH值、细胞膜转运蛋白表达量等）、药物的固有性质（如脂溶性、酸碱性、血浆蛋白结合率等）和组织成分等多重因素的共同调控。亲溶酶体药物一方面由于其具有良好的脂溶性，药物分子更倾向于分布在脂肪丰富的组织，如脂肪、肝脏、肾脏等；另一方面因其易被溶酶体、高尔基体等酸性细胞器捕获，因此亲溶酶体药物容易在溶酶体丰富的组织器官（如肺、肾脏、肝脏、脾脏、脑和肠道等）中表现出极高的组织分布。药物的表观分布容积越大，相应的药物消除半衰期延长，在体内的存留时间越长。此外，对于口服制剂药物，溶酶体捕获作用可能会降低药物的吸收程度和吸收速率，从而影响药效。例如，右美沙芬在生物药剂学分类系统（Biopharmaceutics Classification System，BCS）中属于BCS I类化合物，在胃肠道中具有高溶解性和高渗透性，但是由于肠细胞的溶酶体捕获作用，使得其口服制剂中药物成分的达峰时间（约2.5小时）明显晚于其他典型的BCS I类药物（如普伐他汀的达峰时间为1~1.5小时）[3]。溶酶体捕获的应用溶酶体通透化介导的肿瘤细胞死亡正常情况下，溶酶体膜高度糖基化，溶酶体内的酸性水解酶被充分隔绝在溶酶体腔中。当溶酶体膜的通透性（Lysosomal membrane permeabilization，LMP）发生改变时，可溶性溶酶体内容物（如组织蛋白酶B、组织蛋白酶D等）释放到细胞质中，会激活细胞内的级联反应和炎症小体，促进细胞凋亡或坏死，这一过程被称为“溶酶体膜通透化介导的细胞死亡”。一般而言，与正常细胞相比，肿瘤细胞中的溶酶体数量增多，体腔变大，且溶酶体内水解酶的水平升高。因此，肿瘤细胞对亲溶酶体药物的毒性作用更敏感。当阳离子两亲性药物（cationic amphiphilic drugs，CADs）在溶酶体中大量蓄积时，会促进酸性鞘磷脂酶从溶酶体膜上分离，溶酶体膜通透化，组织蛋白酶释放增加，从而引起肿瘤细胞死亡（图3）。例如，抗组胺药特非那定（Terfenadine）可诱导前列腺癌细胞死亡；阿司咪唑（Astemizole）可抑制乳腺癌细胞和淋巴癌细胞的增殖[4]。图3. 溶酶体膜通透化介导的细胞死亡基于溶酶体内药物相互作用的联合用药多种抗肿瘤、抗疟疾、抗心律失常以及抗抑郁等中枢神经系统类药物均存在溶酶体捕获现象。当药物的作用靶点位于细胞核/质时，溶酶体捕获会降低靶位点的药物浓度，因此亲溶酶体药物作为单一药物进行治疗时，往往治疗效果有限，可以通过联合用药的方式来改善治疗效果。以索拉菲尼（Sorafenib，SF）和维替泊芬（Verteporfin，VP）的合用为例（图4），索拉菲尼是肝癌治疗的一线用药，但其容易发生溶酶体捕获，无法充分发挥药效。维替泊芬是一种亲溶酶体的自噬抑制剂，采用维替泊芬处理肝癌细胞会导致溶酶体pH值升高，溶酶体膜的通透性发生改变，当二者联合用药时，能够有效地抑制肝癌细胞的生长和增殖[5]。图4. 索拉菲尼联合维替泊芬治疗肝癌的示意图药物性诱导的磷脂沉积研究表明，亲溶酶体药物在细胞内的大量蓄积，容易诱导磷脂沉积症的发生。可能的机制有两种：第一种：药物与溶酶体内的脂质结合，形成难以被脂肪酶降解的药物-脂质复合物；第二种：药物抑制溶酶体脂肪酶的活性，导致磷脂大量蓄积。2021年，Science期刊发表的一篇关于SARS-CoV-2和其它病毒的药物再利用筛选报告指出[6]，近34%的抗病毒“老”药均为CAD药物，此类药物具有亲溶酶体性，而药物的抗病毒活性则与药物性磷脂沉积密切相关，提示溶酶体捕获诱导的药物性磷脂沉积在药物的抗病毒活性中可能发挥一定的作用。尽管如此，更多的研究证据表明药物和磷脂的大量蓄积会损伤溶酶体正常的生理功能，导致巨噬细胞和多种实质细胞出现空泡化，同时引起包括神经系统、心血管系统在内的肝脏、肾脏等多器官功能损伤[7]。因此，提前对药物进行早期磷脂沉积安全性风险评估，能够为先导化合物的筛选和结构优化提供参考，并增加候选药物进入临床试验的可行性。溶酶体捕获的体外研究策略目前，有关溶酶体捕获的体外研究方法主要有两种（表1）：第一种是基于液相色谱‑联质谱（LC-MS/MS）技术的生物分析；第二种是溶酶体特异性荧光探针的细胞蓄积实验。01基于LC-MS/MS技术的直接检测法V-type ATPase抑制剂能够抑制溶酶体酸化，进而降低药物在溶酶体内的蓄积。通过对比加与不加抑制剂处理后，药物在细胞/溶酶体内的浓度差异，可反映出药物在细胞/溶酶体内的蓄积情况。目前，科学家们采用MDCK II细胞、大鼠心肌细胞H9C2和人肝癌细胞Hep G2等多种细胞模型已经成功构建出一套快捷、准确、高通量的溶酶体捕获体外筛选体系[8, 9]。02溶酶体荧光探针蓄积实验（间接检测法）亲溶酶体药物在溶酶体中蓄积，会导致溶酶体腔内的pH值升高，从而降低pH依赖性的溶酶体特异性荧光探针的摄入。加与不加药物处理后，采用高内涵荧光显微镜进行成像，通过对比荧光探针在溶酶体内的荧光强度，能够预测化合物是否存在溶酶体捕获[10]。表1. 溶酶体捕获的体外研究方法溶酶体捕获评估模型的建立由于直接检测法能够更直接、准确地反映药物在溶酶体内的蓄积程度，同时对化合物的测试浓度要求较低，因此，药明康德DMPK团队采用直接检测法，基于MDCK II细胞模型成功建立了评估溶酶体捕获的两种筛选模型：Transwell模型和孔板模型。Transwell模型将MDCK II细胞接种至Transwell板，待细胞形成完整的单层膜结构后开始渗透性实验。化合物在含有或不含抑制剂的条件下，顶端到基底端（A‑B）方向给药。采用LC-MS/MS技术，检测化合物在未知样品中的浓度，通过对比加与不加抑制剂时，化合物在A-B方向的溶液回收率的改变，从而评估其是否被溶酶体捕获。药明康德DMPK挑选了6种性质已知的模型药物（表2）开展验证实验。在测试条件下，加入抑制剂能够显著提高亲溶酶体药物（氯丙嗪、洛哌丁胺、伊马替尼、普萘洛尔和右美沙芬）在A-B方向的溶液回收率（p<0.05），而酸性化合物双氯芬酸的溶液回收率则无明显差异（p>0.05）（图5），这一结果充分证明了该MDCK II细胞Transwell实验模型体系的可行性。表 2. 溶酶体捕获的模型药物信息图5. MDCK II细胞模型药物验证（Transwell模型）（*p<0.05，即有显著性差异）随后，采用MDCK II细胞Transwell实验模型探究化合物A与化合物B是否受溶酶体捕获，如图6所示，加入抑制剂后，化合物A在MDCK II细胞中A-B方向的溶液回收率显著提高，而化合物B的溶液回收率则无明显差异。提示化合物A极可能被MDCK II细胞内的溶酶体捕获，而化合物B不易发生溶酶体捕获。图6. MDCK II细胞测试化合物验证（Transwell模型）（*p<0.05，即有显著性差异）孔板模型将MDCK II细胞接种至96孔板中，培养过夜且达到80-90%融合度后，先将细胞置于含有或不含抑制剂的预孵育液中进行预孵育，随后与测试化合物进行共孵育。孵育结束后，采用LC-MS/MS技术，检测细胞裂解样品中化合物的浓度。最后，通过对比加与不加抑制剂时，化合物在细胞内蓄积量的差异，以评估化合物被溶酶体捕获的程度。为了验证模型的可靠性，采用与Transwell模型相同的模型药物进行验证实验。在测试条件下，加入抑制剂能够明显降低亲溶酶体药物（氯丙嗪、洛哌丁胺、伊马替尼、普萘洛尔和右美沙芬）在胞内的蓄积，而酸性化合物双氯芬酸在胞内的蓄积量则无明显差异（图7），这一结果也充分证明了MDCK II细胞孔板模型实验体系的可行性。图7. MDCK II细胞模型药物验证（孔板模型）随后，采用MDCK II细胞孔板模型同时探究化合物A与化合物B是否受溶酶体捕获，如图8所示，在测试条件下，加入抑制剂后，化合物A在MDCK II细胞内的蓄积量明显降低，而化合物B在胞内的蓄积则无明显差异。表明化合物A极可能被MDCK II细胞内的溶酶体捕获，而化合物B不易发生溶酶体捕获，这与MDCK II细胞Transwell实验模型的结论一致。图8. MDCK II细胞测试化合物验证（孔板模型）两种模型的差异MDCK II细胞Transwell模型与MDCK II细胞孔板模型均可用于体外溶酶体捕获评估的高通量分析。其中，MDCK II细胞Transwell模型可在评估测试化合物被溶酶体捕获程度的同时，对化合物进行渗透性的预测，并可探究溶酶体捕获效应对该测试化合物渗透性的影响。相对于MDCK II细胞Transwell模型而言，MDCK II细胞孔板模型实验周期短、通量高且成本低，更适用于药物研发早期阶段的高通量筛选。结语溶酶体的捕获效应存在于多种已知的上市药物以及在研的候选药物中。药物在溶酶体内蓄积会影响药物的药代动力学特征、有效性和安全性。亲溶酶体药物还可以通过改变溶酶体腔内的pH值、稳态体积以及酶结合位点，从而引起药物相互作用，进一步影响药效或产生毒副作用。因此，尽早明确候选药物是否会被溶酶体捕获，能够为药物的早期研发提供更全面的指导与帮助。参考文献：[1] Trivedi PC, Bartlett JJ, Pulinilkunnil T. Cells. 2020 May 4;9(5):1131.[2] Zhang Z, Yue P, Lu T, Wang Y, Wei Y, Wei X. Role of lysosomes in physiological activities, diseases, and therapy. J Hematol Oncol. 2021 May 14;14(1):79.[3] Bolger MB, Macwan JS, Sarfraz M, Almukainzi M, Löbenberg R. The Irrelevance of In Vitro Dissolution in Setting Product Specifications for Drugs Like Dextromethorphan That are Subject to Lysosomal Trapping. J Pharm Sci. 2019 Jan;108(1):268-278.[4] Serrano-Puebla, A., and Boya, P. (2018). Lysosomal Membrane Permeabilization as a Cell Death Mechanism in Cancer Cells. Biochem. Soc. T 46, 207–215.[5] Gavini J, Dommann N, Jakob MO, Keogh A, Bouchez LC, Karkampouna S, Julio MK, Medova M, Zimmer Y, Schläfli AM, Tschan MP, Candinas D, Stroka D, Banz V. Verteporfin-induced lysosomal compartment dysregulation potentiates the effect of sorafenib in hepatocellular carcinoma. Cell Death Dis. 2019 Oct 3;10(10):749.[6] Tummino TA, Rezelj VV, Fischer B, Fischer A, O'Meara MJ, Monel B, Vallet T, White KM, Zhang Z, Alon A, Schadt H, O'Donnell HR, Lyu J, Rosales R, McGovern BL, Rathnasinghe R, Jangra S, Schotsaert M, Galarneau JR, Krogan NJ, Urban L, Shokat KM, Kruse AC, García-Sastre A, Schwartz O, Moretti F, Vignuzzi M, Pognan F, Shoichet BK. Drug-induced phospholipidosis confounds drug repurposing for SARS-CoV. Science. 2021 Jul 30;373(6554):541-547[7] Breiden B, Sandhoff K. Emerging mechanisms of drug-induced phospholipidosis. 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结核	临床前	印度	Foundation For Neglected Disease Research	2023-10-17

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