Telaprevir

来源：药渡 撰文：哥哈骎     编辑：哦呼 共价药物并不是新鲜事物，以1899年开始使用的阿司匹林为滥觞，人们就已经开始了对共价药物的上下求索。 所谓共价药物，指的是药物配体上存在亲电基团（通常被称作warhead，弹头），与受体上的亲核基团发生共价反应，产生较为稳固的共价键型配体-受体加合物。 这个过程既可以是可逆的，也可以是不可逆的。比如阿司匹林，它的乙酰水杨酸结构中的乙酰基团可以与受体丝氨酸蛋白酶中的丝氨酸侧链羟基发生共价反应，产生的乙酰基丝氨酸导致了蛋白酶活性的丧失。 共价药物的主要优点在于它的起效快和剂量低。除此之外，很多受体由于不具备良好的口袋结合域，而被认作undruggable（不可成药）。在这种情况下，很难通过合理的非共价结合来靶向这种不可成药的受体。但共价药物的出现，为这些不可成药受体参与的致病过程提供了解决的曙光。 关于小分子和多肽类共价药物 图1显示了共价药物的发展历程，从1899年开始使用的抗炎药阿司匹林，到2019年批准的镰状细胞并疗法Voxelotor，共价药物在进入新世纪后实现了快速发展，尤其是一干tinib酪氨酸激酶抑制剂抗肿瘤药物，其特征性的丙烯酰胺等亲电弹头结构表明了它们的共价药物身份（图2）。 图1. 共价键药物发展历史图（红色结构为亲电弹头） 图2. 带有丙烯酰胺亲电弹头结构的“替尼布”类酪氨酸激酶抑制剂药物化学结构 （绿色结构为丙烯酰胺亲电弹头） 随着小分子共价药物发展壮大的，是多肽类共价药物。以Covid-19药物Paxlovid中的活性成分nirmatrelvir为代表。nirmatrelvir靶向3C样蛋白酶（3C-like protease，3CLPRO，亦称Mpro），这个蛋白酶对于裂解SARS-CoV-2病毒的刺突S糖蛋白起关键作用。抑制了Mpro蛋白酶的生理功能，就有可能阻断病毒感染健康细胞的途径。Nirmatrelvir上的亲电弹头氰基，可以与Mpro蛋白酶上的Cys145残基侧链的巯基作用，形成thioimidate（硫代亚胺酸酯），从而完成共价键的形成并抑制Mpro蛋白酶的生物活性（图3）。 图3. Paxlovid活性成分nirmatrelvir共价抑制剂作用机理示意图 多肽共价药物还包括丙肝疗法特拉匹韦（telaprevir）、波西普韦（Boceprevir）和Narlaprevir等（图4）。 图4. 共价多肽抗丙肝病毒药物化学结构 （红色结构为亲电弹头） 共价生物制剂 如果说小分子和多肽分别代表共价药物发展历程的第一和第二阶段，那么共价生物制剂的出现则将共价药物推到了一个崭新的阶段。 对于分子量相对较小的蛋白质药物（普通抗体的十分之一），它们会较快通过肾脏被清除。对于开发这样的蛋白质药物疗法，共价生物制剂是一种潜在有效的途径。共价生物制剂的设计不仅充分利用了抗体等药物通常具有的选择性和特异性，而且还充分规避了小型生物制剂的致命弱点，即高清除率。 尽管抗体在治疗实体瘤方面取得了巨大成功，但它们由于所谓的屏障效应而难以穿透实体瘤。实体肿瘤通常具有致密且复杂的细胞外基质（ECM），这是一种由蛋白质和其他分子组成的网络，为细胞提供结构支持。这种致密的ECM会物理上阻碍抗体在肿瘤组织中的移动。这意味着抗体可能难以渗透到肿瘤部位，它们倾向于与更靠近表面的受体结合。 除此之外，肿瘤内部的血管通常结构异常，功能也不正常。这些异常的血管会导致血流不畅，并增加肿瘤内部的间质压力，使得抗体难以顺利到达肿瘤深处。针对这种挑战，研究人员选择较小的蛋白质生物制剂，可以更有效地递送到目标细胞。 共价生物制剂融资最新进展 Enlaza Therapeutics最近获得了1亿美元A轮融资，促进其进一步开发专有的共价蛋白技术，并支持其新兴产品线进入临床。Enlaza的目标是就是将共价药物引入生物疗法。Enlaza的融资由摩根大通资产管理公司私募资本部门的生命科学集团牵头，投资者包括Frazier Life Sciences，Avalon Ventures，Lightspeed Venture Partners和Samsara BioCapital等。两年前，Enlaza以6100万美元的种子轮融资首次亮相公众。 共价生物制剂未来展望 将传统的ADC转化为相应的共价药物模式，正好针对了ADC的主要缺陷，即药物有效载荷不稳定性所导致的提前释放，以及由此产生的不良反应。制药领域主要通过开发专一性更高的接头来解决这一问题，但共价药物也是另外一个维度上的潜在解决方案。 Enlaza希望利用其War-Lock技术将共价因素引入生物制剂。以更安全、更耐受、可以更频繁地用药且剂量更低的下一代蛋白质疗法形象出现。War-Lock技术将具有扩展化学功能的非天然氨基酸融入蛋白质药物中，使药物与其靶点之间形成共价键。这些专有的氨基酸残基可以整合到任何蛋白质形式中，而不会影响所需靶标的治疗特异性。 共价生物制剂在循环中不结合时靶标时，它是暂时惰性的。只有在特定靶标参与时，化学反应才会被激活，从而在药物和靶标之间形成共价键。Enlaza为其肿瘤候选药物生成了临床前数据。有效的肿瘤渗透、快速的系统清除、高结合率和低脱靶成为了这些共价生物制剂的背书。Enlaza目前已经开发了一系列共价蛋白药物。除了针对肿瘤学之外，Enlaza 还希望进军自身免疫疾病领域。 共价生物制剂可以通过抑制细胞外配体和受体之间的蛋白质-蛋白质相互作用来抑制病原体对细胞的感染并破坏各种信号传导。例如有几种适体靶向检查点蛋白，将共价弹头引入这些适体中可能会产生相应的共价生物药物，这些药物可以干扰癌细胞用来逃避免疫系统清除的免疫检查点机制。这种共价生物药物比传统的抗体小得多，可能能够更好地浸润实体癌，而实体癌对单抗类型的检查点抑制剂疗法反应较差。 除了检查点蛋白外，许多在病理上起到关键作用的分子一直是传统单抗疗法的靶标，而许多这些靶标都有相应适体。这些适体尚未应用于转化医学，因为它们在体内易于被核酸酶消化以及快速被肾脏清除，但可以通过引入共价弹头的方式将其转换为有效的共价生物制剂。 单抗疗法对许多医学领域产生了巨大影响，尤其是肿瘤学领域。对于抗体药物的改进可以升级此类药物在肿瘤学疗法开发中的地位和作用，同时规避抗体药物的一些内在缺陷（尤其是分子体量造成的问题）。共价生物制剂由于其对目标靶标的高特异性和亲和力，具有替代抗体药物，包括新型的ADC药物的潜力。 然而由于可能产生长期和不可逆的副作用，此类模态的药物尚未被广泛接受，目前没有任何一款共价生物制剂药物上市。但由于多点分子识别机制，共价生物药物可以严格结合靶蛋白，并改善小分子共价药物的缺陷。可逆共价生物药物，尤其是适体类药物，应该可以最大程度地减轻不可逆共价键合造成的潜在不良反应。 此外，共价生物药物可以像抗体一样提高体内半衰期，这是通过共价结合靶蛋白以及对核酸酶/蛋白酶更高的稳定性所决定的。相信在不久的将来，共价生物药物会作为一种全新的药物模态出现在医药领域，提供与抗体，ADC和其它生物制剂正交的功效，就像替尼布类共价小分子肿瘤药物一样，将生物制剂的功效在原有的基础之上实现升级。 编者按： 目前，共价生物制剂领域正迎来前所未有的发展机遇。Enlaza Therapeutics等创新型企业纷纷获得大额融资，推动共价药物技术的研发和临床应用。未来，随着共价药物技术的不断成熟和完善，我们有理由相信，这类药物将在更多领域发挥重要作用。 参考文献 Enlaza Nets $100M to Advance Covalent Biologics Platform. Inside Precision Medicine. 01. 05. 2024. Peter, R. M. Covalent biologics: a new class of drugs on the horizon. Labiotech. 30. 05. 2024. Yang, J. et al. bioTCIs: Middle-to-Macro Biomolecular Targeted Covalent Inhibitors Possessing Both Semi-Permanent Drug Action and Stringent Target Specificity as Potential Antibody Replacements. nt. J. Mol. Sci. 2023, 24(4), 3525; https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.3390/ijms24043525 专栏作者 哥哈骎 南开大学本科、硕士，德国比勒菲尔德大学博士。多肽化学、多肽API GMP生产专家、欧洲制药公司首席科学家； 拥有Lean Six Sigma黑带认证； 著有专著《Side Reactions in Peptide Synthesis》。 *声明：本文仅是介绍医药疾病领域研究进展或简述研究概况或分享医药相关讯息，并非也不会进行治疗或诊断方案推荐，也不对相关投资构成任何建议。内容如有疏漏，欢迎沟通指出！ 点击下方“药渡“，关注更多精彩内容 成药性差? 一文带你了解一种新型强效具口服VHL配体如何杀出重围！难溶性药物增溶的底层逻辑：弹簧与降落伞一文速览：2024年ICH最新指南发布动态及我国适用清单 点击蓝字 关注我们

侃言共价抑制剂一般是指不可逆共价抑制剂；但是细分研究，可以分为不可逆共价抑制剂（ICIs）、和可逆共价抑制剂（RCIs）。这次仅聊聊可逆共价抑制剂。谈谈它的重要特征、设计规则、分析方法、以及Case Study（JAK3、BTK、EV71）、和发展展望。化合物定制1共价“喜”与“忧”共价抑制剂已经有一百多年的发展历史，相关研究有迹可循。多年以来，共价抑制让人欢喜让人忧！喜的是，共价抑制剂有非共价抑制剂（NCIs）不具有的优势：1、延长抑制剂靶向靶标蛋白的停留时间，具有抗耐药性；2、抑制传统意义上的“不可成药”靶标。包括那些具有延展的、或浅而平坦的口袋、或者根本没有口袋的靶标，以及参与蛋白质交互作用（PPIs）的大而平坦的功能作用界面。3、靶向蛋白靶标双重选择模式，赋予药物亲和力元件额外的亲和力，增强靶向效力。这是因为共价抑制一般包括两个步骤：先是如同非共价抑制的那般，抑制剂亲和性结合靶标蛋白；随后和靶标反应性氨基酸残基形成共价键，通过不可逆失活的自杀式抑制、或者通过形成共价加成物增加亲和力使抑制剂获得更强的竞争性抑制活性。共价弹头提高了抑制剂对靶标蛋白的亲和力粘性，抑制剂和靶标氨基酸残基的反应可以是永久性不可逆的，也可以是暂时性可逆的；不可逆共价抑制剂如同胶水般将亲和力元件和靶标永久性粘合在一起，而不可逆共价抑制剂好比是在抑制剂和靶标之间绑了个“活扣”，还可复原。因此，如上图，影响NCI、ICI、RCI平衡常数的因素不同。以上共价抑制的优势使其重新复兴。但是共价自身的特点，也给研究人员带来了一些担忧。从结构上看，共价抑制剂由亲和性元件、和反应性弹头构成。因此，担心它过分活力四射、脱靶，伤害了“无辜的”蛋白质靶标。ICIs还是永久性伤害；RCIs也会“伤害无辜”，但可逆性动力学致使它还会“释放无辜”。担心它的稳定性，经不起血浆或体内代谢过程中复杂环境的考验，提前“失活”，甚至反应性官能团在代谢过程中带来毒性。一些包含有活性基团的成分进入到血浆和体内，一般表现出较差的药代动力学和较低的稳定性。担心它导致免疫激活，如抑制剂与蛋白形成的加合物或者降解产物导致过敏反应等。以上的担忧曾一度限制了共价药物的发展，研究人员多是追寻着一条经验主义的黄金法则——开发可逆性药物，即非共价抑制剂。然而，即使是非共价抑制剂，也有很多因为毒性而退出了历史的舞台。也有大量的共价药物在治疗中发挥着举足轻重的作用。因此，对共价抑制不利的担忧完全可以变成研发中设计和攻克的目标。在药物开发中，研究人员致力于扩大药物的治疗效力，而降低其副作用。对于共价抑制剂来说，脱靶问题、以及药代动力学问题、和代谢稳定性问题是不可避免的，需要在药物开发过程中予以解决。2可逆共价抑制的化学结构特征和优势共价抑制剂的亲电弹头大多时候都比较明显，具有显著的结构特征，如具有环张力的β-内酰胺、α,β-不饱和羰基化合物等；还有一些隐藏在前药中，在代谢后才崭露出共价结构，如奥美拉唑等；还有一些，通过结构观察不是很明确，但在机理验证中证实为共价机制，如作为异柠檬酸裂解酶3的共价抑制剂3-硝基丙酸、作为磷酸肌醇-3激酶共价抑制剂的Wortmannin等（上图）。对于可逆共价抑制剂，反应动力学使它对“无辜的”靶标可逆的、非永久性的修饰，最后还是会释放抑制剂和“无辜者”，因此，这就减轻或者避免了脱靶效应及其毒性。符合可逆共价抑制剂的弹头近些年来也有一定的发展，如上图。靶向靶标氨基酸残基的作用机制不同，主要可以分为3类：1、靶向半胱氨酸残基类主要有α-氰基丙烯酰胺及其衍生物、氰基类、醛基类、α-氟取代丙烯磺酸酯、氟氯双取代甲基酮、巯甲基四氮嗪等。2、靶向丝氨酸/苏氨酸残基类主要有α-羰基酰胺、硼酸等。3、靶向赖氨酸残基及N末端类主要有醛基，另外有邻位羟基提供氢键稳定，或者硼酸提供氢键配位稳定亚胺结构。如下图，是近些年报道的一些发现的可逆共价抑制剂，红色标记的是可逆共价弹头。如上图，是可逆共价抑制的两步过程：亲和力结合、可逆成键。很明显，可逆共价抑制不会永久性改造蛋白靶标导致其变性等，因此一定程度上减轻了共价抑制的脱靶、和免疫激活的风险。这类弹头的反应性会更弱，在血浆和体内的稳定性相对于ICIs也会有所改善。等式中K代表平衡常数，τ代表抑制剂-靶标加合物的停留时间，研究人员的目标是获得的共价抑制剂，其Ki*尽可能地小，而τ尽可能地大。3可逆共价弹头的生化分析怎样确定抑制剂是可逆共价抑制剂呢？对机制地研究和确认，肯定不能仅靠经验从化学结构上判断。需要验证抑制剂弹头与靶标残基的可逆性反应、活性确定、保留时间测定、脱靶效应评估等。这些都需要一定的技术支持。3.1 可逆性分析可逆性的确认相对比较容易解决，一般可以通过①核磁共振（NMR）的技术方法、②质谱（MS）的方法、③生物发光共振能量转移（BRET）的方法等来确认。NMR法：对比RCI-Target加合物与未结合靶标的RCI的NMR化学信号，很容易区分两者的差别。稀释共价加合物的NMR样品浓度，如果是可逆共价结合，体系会重新平衡，降低加合物的浓度，获得更多的未结合的RCIs。此外，如果结合物或者RCIs具有明显的紫外/可见光谱信号，也可以通过这种方法确定Kd。MS法：将共价加合物注射进质谱分析仪，在MS试验的过程中，加合物会分解，抑制剂和天然蛋白会被释放，能过够在MS谱上观察到。BRET法：利用生物发光共振能量转移的竞争抑制试验，联合冲洗试验法验证可逆共价。首先蛋白靶标被共价抑制剂饱和性结合，然后引入荧光追踪试剂，用来取代共价抑制剂，如果能够竞争性取代，则共价抑制为可逆共价抑制的动力学结合。此外，共价抑制剂-蛋白加合物降解或者变性以及随后的抑制剂的复原，也进一步证明是可逆共价抑制。3.2 停留时间分析可逆共价抑制剂（RCIs）的停留时间可以通过荧光竞争法、或药代动力学/药效学（PK/PD）分析来测定。3.3 脱靶效应评估共价抑制不可避免的需要面临和解决脱靶效应的毒性问题，因此，对于共价抑制剂的脱靶效应评估至关重要，确定哪些蛋白质可以与共价抑制剂形成加合物，目前主要有三种方法报道。经典方法包括：与放射性标记的抑制剂共孵育，随后进行凝胶层析、电泳、切胶并进行Edman测序、进而鉴定出氨基酸-抑制剂加合物。现代化的方法包括质谱的方法：对目标兴趣蛋白进行分离（如色谱法、电泳法）后共价修饰分析（如果修饰位点已知，则可不进行蛋白消化；如果修饰位点未知，则需要进行蛋白消化）。化学蛋白质组学是另一种探测共价抑制剂脱靶效应的方法：通过标记可逆共价抑制剂（如亲和、荧光、或放射标记等），可以分离分析加合物（如使用亲和标记从凝胶中分离，或使用荧光或放射性标记从凝胶中分离）。这种方法已经应用于识别药物发现中的靶标化合物，也可以用于识别脱靶蛋白。需要指出的是，共价加合物的存在并不意味着与之联系的一定是不利的影响。脱靶加合物的识别可以为副作用的假设提供证据，但脱靶加合物的成分如果未知，必须进行进一步的探索，说不定会有意想不到的发现！4可逆共价抑制剂设计开发有效的可逆共价抑制剂，需要考虑一系列的问题：必须要有一个共价弹头；共价弹头必须对特定的亲核性残基有一定的选择性；共价加合物必需是可逆的；共价药物对期望靶标需要有良好的亲和结合力；一个好的可逆共价抑制剂具有一些通性，因此对于最佳可逆共价抑制剂的设计有如下一个总结性的通用流程，如上图所示。Step 1: 计算分析和虚拟建模。通过计算分析和虚拟建模确保靶标具有一个适合不可逆共价抑制剂靶向的亲核性残基（如丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸、半胱氨酸 、或者N末端氨基等）；但是计算分析和虚拟建模这一过程对于RCIs的成功开发不是必需的，尤其是对于没有靶标高质量结构数据的情况下；目前已有一些RCIs的建模理论框架，以及利用量子力学（QM）、QM/分子力学（MM）、或者QM/MM结合分子动力学方法进行建模试验。Step 2: 结合质量作用定律描述生成物和反应物的平衡状态。引入质量作用定律，通过动态平衡和停留时间评估抑制剂-靶标的结合动力学。平衡有利于共价加合物的形成；脱靶效应的逆反应的热力学有利性；如果解离常数Ka较小时，可逆性和不可逆性抑制剂没有差异；优化靶向酶和脱靶酶的停留时间等。Step 3: 抑制剂与可逆性共价抑制剂结合动力学的相似性。包括抑制剂沿着动力学描述的表征；测定组蛋白脱乙酰酶4进行生化表征后的光谱学试验方法；其他方法还有洗涤后进行标记追踪（如JAK3抑制剂）、胰蛋白酶消化后抑制剂复原等。Step 4: 抑制剂-谷胱甘肽结合物不可长期积聚。谷胱甘肽与亲电性应激有关；必需有高度的可逆性才能避免应激反应；进行竞争性谷胱甘肽消化试验以解决应激反应的问题。Step 5：最小化全局应激反应。共价抑制可能导致蛋白质错误折叠，如果是非特异性的共价抑制剂，可能会导致全局蛋白错误折叠应激反应。通过共价抑观察蛋白错误折叠应激；确保有限的脱靶效应。Step 6：对免疫细胞的影响。除了有效的靶标结合外，开发共价抑制剂的一个重要考虑因素是对免疫细胞的影响。免疫细胞对亲电应激高度敏感，可引起免疫刺激或免疫抑制作用。因此，检测抑制剂对b细胞、t细胞和巨噬细胞作用，以确定抑制剂是否引起促炎或抗炎。细胞因子的表达和分泌，对于避免免疫激活的潜在并发症很重要。5可逆共价抑制剂设计Case Study5.1 蛋白激酶类——JAK3抑制剂Janus激酶（JAK）是介导细胞信号反应的关键调控酶，特别是在涉及免疫细胞反应的细胞因子信号的分泌中。人类有四类JAK亚型，包括JAK1、JAK2、JAK3、以及TYK2，每一个都高度相似，因此开发高选择性药物非常具有挑战性。目前临床上已经开发了泛-JAK抑制剂，如FDA批准的tofacitinib (上图Comp. 5），但是其多亚型抑制效果还不清晰，特别是不同的JAK亚型在免疫健康中作用不同。研究发现JAK3拥有一个独特的半胱氨酸残基（Cys909），其余亚型在相同位置的残基为丝氨酸，因此选择性靶向的共价抑制剂的设计将非常具有潜力。利用上图中新开发的不可逆共价抑制剂1-3、已知的不可逆JAK3共价抑制剂化合物4、以及两种已知的非共价JAK3抑制剂5、6，研究人员表征和确定了新型的、具有较好活性（低nM)、和选择性(>500倍)的不可逆JAK3共价抑制。抑制剂1-3虽然具有良好的体外抑制活性，但是他们的亲电弹头在进攻JAK3之前发生了脱靶反应，导致不良反应。因此，研究人员基于化合物7的多环骨架进行可逆共价抑制剂设计，并与弹头反应性官能团饱和等价物进行对比，发现可逆共价抑制设计的抑制活性是饱和等价物的4倍以上。包含有可逆共价抑制弹头的13、14对JAK3具有良好的抑制活性（127 pM、154 pM）以及相对于其他亚型的高选择性（400倍到5800倍）。5.2 蛋白激酶类——BTK抑制剂BTK是与抗体信号和免疫细胞募集相关的免疫调节反应的关键酶，在大多数造血细胞中表达BTK，在B细胞的信号级联反应中起关键作用，是一种重要的免疫治疗靶点。BTK还有半胱氨酸残基，而类似的激酶还有丝氨酸，为设计选择性靶向的共价抑制剂提高了先天性条件。如上图，ibrutinib、acalabrutinib、zanubru-tinib、和tirabrutinib是已获批的BTK不可逆共价抑制剂，靶向Cys481残基。虽然他们对BTK具有很强的抑制作用，但是与Cys481相似的半胱氨酸的激酶也容易产生不可逆的抑制作用，造成脱靶。对此，研究人员开发了可逆共价抑制剂rilzabru-tinib。通过脱靶效应测试，其脱靶的副作用得到了很好的限制，目前已经进入了临床II/IIIq期研究。5.3 蛋白水解酶类——EV71 cPro 抑制剂蛋白水解酶（又称蛋白酶）存在于所有的生命结构域中，而蛋白水解酶抑制剂已广泛应用于抗癌、抗菌、高血压、2型糖尿病、阿尔兹海默病、非酒精性脂肪肝、和纤维化治疗中。蛋白水解酶一般根据其催化反应性残基进行分类，不同类型的作用机制不同，因此，可逆共价抑制剂可以作为选择性靶向抑制剂设计的有效工具。针对蛋白水解酶，临床上已经有不少成功的可逆共价抑制剂开发。如针对苏氨酸蛋白水解酶可逆共价抑制剂Bortezomib、Ixazomib；丝氨酸蛋白水解酶可逆共价抑制剂Boceprevir、Saxaglibtin、Telaprevir；半胱氨酸蛋白水解酶可逆共价抑制剂Nirmatrelvir等；最近一个关于半胱氨酸蛋白水解酶可逆共价抑制剂的开发的例子是肠病毒71(EV71）——用于治疗手足口病相关病原体之一。Rupintrivir是一个已知的EV71同源人源鼻病毒的不可逆共价抑制剂，共价弹头为靶向半胱氨酸残基的丙烯酸乙酯。研究人员对Rupintrivir的共价弹头进行修饰，得到共价化合物15-22，以期待获得对EV71 3C蛋白水解酶具有高效力、可逆的、选择性共价抑制剂。其中，分别选择了α-羰基-N-丙基乙酰胺、醛基、丙烯酰胺甲酯/甲胺、α-卤素取代丙烯酰胺甲酯、α-氰基取代丙烯酰胺基甲氨基叔丁基甲酸酯、α-氰基取代丙烯酰叔丁酯等作为共价弹头。研究人员利用MS检测抑制剂的可逆性，通过动力学拟合数据，检测靶标的活性。展望近年来，随着技术的发展，已经能够很好地解决共价抑制带来的脱靶效应、代谢稳定性等导致的毒性，以及药代动力学等问题，共价抑制剂再次兴起，其中一种就是开发可逆共价抑制剂（RCIs)。在RCIs的开发过程中，可以充分利用质量作用定律，其中一系列反应的平衡取决于底物的活性和浓度。其结果是，在稳态下，产物的浓度(如靶蛋白的同价加合物)将依赖于其他副反应的平衡。通过设计一种强结合抑制剂，平衡将最终导致抑制期望的目标，而非目标抑制是不利的。虽然脱靶结合会发生，但共价加合物的可逆性将限制脱靶结合的表型后果。从不可逆的共价抑制到可逆的共价抑制，显著的脱靶效应被规避，药物更安全;采用可逆性共价抑制将使有希望的药物很少因脱靶反应而产生明显的副作用。除了药物设计和酶抑制，可逆共价加合物也已被用于细胞成像、和材料科学(这里以动态共价键的名义)。RCIs未来的发展，包括：改进建模，以准确识别足够的非催化的亲核残基，以形成加合物；改进非丙烯酰胺弹头反应的反应性和可逆性的规则或指南，并开发强有力、易于执行的检测方法，以检测来自亲电应激的意外免疫反应；此外，还有新型亲电弹头的发现，特别是如果它们可以很容易地用荧光团或放射性标签进行修饰，以方便在细胞内或体内进行定位等。参考文献ACS Chem. Biol.2024, acschembio.3c00805.https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.1021/acschembio.3c00805.声明：发表/转载本文仅仅是出于传播信息的需要，并不意味着代表本公众号观点或证实其内容的真实性。据此内容作出的任何判断，后果自负。若有侵权，告知必删！长按关注本公众号   粉丝群/投稿/授权/广告等请联系公众号助手 觉得本文好看，请点这里↓