Lipidoses

近日，第115届美国癌症研究协会（AACR）大会在美国加利福尼亚州圣地亚哥召开，来自全球各地的药企纷纷秀出了自家创新产品的研究成果，其中也包括众多中国药企。近两年，中国药企以ADC赛道的火热为跳板，通过出色的产品疗效和频现的license out交易向全世界宣告了中国创新力量的崛起。与之相配的结果是，今年在AACR 2024大会上亮相的国产ADC数量已占整体ADC一半。科伦博泰、映恩生物、百利天恒等公司在中国加入全球ADC赛道竞争的宏图大业中已留下浓墨重彩的一笔，其中科伦博泰与默沙东（MSD）2022年达成的超百亿美元授权交易仍是迄今为止海外授权交易金额最高的一笔。自2022年年末至今，科伦博泰授权MSD的几款ADC已有颇多进展，尤其是靶向滋养层细胞表面抗原2（TROP2）的芦康沙妥珠单抗（sacituzumab tirumotecan，sac-TMT/SKB264/MK-2870）。本次，科伦博泰在AACR 2024大会上展示了SKB264/sac-TMT的两项最新研究结果，其一为胃癌或胃食管交界部（G/GEJ）癌II期研究结果，其二为非小细胞肺癌II期研究结果。胃癌治疗的新希望在TROP2 ADC赛道，SKB264/sac-TMT是第一款公布胃癌临床结果的产品。据GLOBOCAN 2020报告，2020年全球新发胃癌病例数和死亡病例数分别居全球肿瘤第5位和第3位。在中国，胃癌形式更为严峻，每年新发胃癌病例数占全球40%。目前临床上尚无彻底治愈胃癌的疗法。在现有疗法下，早期胃癌患者的5年生存率可达90%，但IV期胃癌患者的5年生存率仅为6%-14%，亟需有效且安全的新治疗选择。目前，除化疗药物外，全球共5款药物获批一线治疗胃癌，分别为曲妥珠单抗、帕博利珠单抗、纳武利尤单抗、信迪利单抗和替雷利珠单抗。此外，全球共5款药物获批为胃癌的后线治疗方案，其中曲妥珠单抗和维迪西妥单抗仅针对HER2阳性患者，而纳武利尤单抗、雷莫西尤单抗和阿帕替尼不限制患者的生物标志物水平，但这些方案收效甚微，临床上仍然需要全新且更加有效的治疗选择。研究表明，TROP2在47%-66%的胃癌中过表达[1,2]，因而TROP2靶点也成为了胃癌领域较受关注的新的突破方向。在KL264-01研究中，科伦博泰纳入了48例既往接受过治疗的晚期G/GEJ癌患者。在接受每两周1次5mg/kg的SKB264治疗后，客观缓解率（ORR）为22.0%，疾病控制率（DCR）为80.5%，中位持续缓解时间（DoR）为7.5个月。在随访时间较长（中位随访时间为14.6个月）的三线以上患者（24例患者，其中54.2%既往接受过至少四线治疗）中，中位无进展生存期（mPFS）为3.7个月，中位总生存期（mOS）为7.6个月。这样的疗效已明显优于现有三线标准疗法。SKB264与现有胃癌三线治疗方案的疗效对比注：仅统计不限制生物标志物水平的治疗药物此外，科伦博泰在招募患者时并未在纳入标准中设定TROP2表达水平，从这个角度来看， SKB264/sac-TMT对不论TROP2表达水平的G/GEJ癌患者的疗效尚且不错，或许对TROP2高表达人群的治疗效果将更加卓越，而SKB264/sac-TMT也有望借此争夺更大的市场份额。基于以上积极结果，一项SKB264/sac-TMT单药治疗对比标准治疗（SOC）化疗用于3L+胃癌或食管胃交界部腺癌患者的全球III期研究正在筹划中。此外，帕博利珠单抗已获批胃癌一线治疗，而SKB264与帕博利珠单抗联用组合也将具备一线拓展潜力。进击NSCLC的称手武器NSCLC作为肿瘤领域患者规模最大的癌症类型，有着此消彼长的临床需求，也是抗肿瘤药物入局者的首选赛道。TROP2在64%的肺癌中过表达[6]的特点，TROP2亦是肺癌领域寻求治疗突破的热门方向。截至目前，已有一款TROP2 ADC产品（Dato-DXd）递交了用于治疗NSCLC的上市申请。除此之外，SKB264/sac-TMT和戈沙妥珠单抗的开发进度紧随其后，均在开展针对NSCLC的III期临床试验。不幸的是，Dato-Dxd二线治疗NSCLC的III期 Tropion-lung01研究的数据读出并不理想，而戈沙妥珠单抗二线治疗NSCLC的III期EVOKE-01研究也于今年1月宣告失败。在这种情况下，SKB264/sac-TMT能否在肺癌治疗上取得突破也成了业内的关注点。在本次AACR大会上，科伦博泰更新了SKB264/sac-TMT治疗既往接受过治疗的晚期NSCLC患者的II期研究结果，数据相比去年有所变化。SKB264治疗NSCLC的II期研究最新数据注：#统计数据截至2023年11月22日得益于持续迭代的EGFR抑制剂，EGFR突变型NSCLC患者的生存情况得到了极大改善，但EGFR野生型NSCLC患者并不能从中获益，化疗仍然是其首选治疗方案。即使是已经申报上市的Dato-DXd，其对NSCLC患者的PFS延长效果也仅有4.4个月，而其未能显著延长NSCLC患者的OS也令人遗憾。SKB264/sac-TMT针对EGFR野生型NSCLC三线以上患者的mOS达到14.1个月，对比同样线次的治疗方案（安罗替尼）的mOS（9.6个月[7]）显著延长。从SKB264/sac-TMT目前的表现来看，其有希望为这类患者带来全新的治疗选择，并进一步加强其“best-in-class”的市场地位。科伦博泰与其合作伙伴默沙东目前正在极力挖掘SKB264在肺癌治疗上的应用潜力，已启动多项针对NSCLC的III期临床试验：MK-2870-009研究（n=520）：单药对比双药化疗二线治疗既往接受过TKI治疗的EGFR突变型晚期非鳞状NSCLC患者。MK-2870-019研究（n=780）：联合帕博利珠单抗对比帕博利珠单抗辅助治疗可切除的II-IIIB期NSCLC患者。MK-2870-007研究（n=614）：联合帕博利珠单抗对比帕博利珠单抗一线治疗PD-L1高表达的转移性NSCLC患者。MK-2870-004研究（n=556）：单药对比化疗三线治疗EGFR突变型晚期非鳞状NSCLC患者。SKB264-III-09研究（n=356）：单药对比双药化疗二线治疗EGFR突变型局部晚期或转移性非鳞状NSCLC患者总结在ADC蓬勃发展的东风下，科伦博泰已凭借其特色的OptiDC平台成为了国内ADC头部企业，并在国际大舞台充分展示了中国创新力量，其核心产品芦康沙妥珠单抗SKB264/sac-TMT在其中所提供的推动力不可谓少。在TROP2赛道上，SKB264/sac-TMT一步一步在三阴性乳腺癌、NSCLC、G/GEJ癌等多个癌种上取得突破，并以此不停向“best in class”进发。未来，SKB264/sac-TMT究竟能在肿瘤这块蛋糕吞下多大的市场份额，且拭目以待吧。- 上下滑动查看参考资料 - [1] Clinicopathologic significance of TROP2 and phospho-TROP2 in gastric cancer.[2] Trop2 is overexpressed in gastric cancer and predicts poor prognosis.[3] Nivolumab in patients with advanced gastric or gastro-oesophageal junction cancer refractory to, or intolerant of, at least two previous chemotherapy regimens (ONO-4538-12, ATTRACTION-2): a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 3 trial.[4] Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Phase III Trial of Apatinib in Patients With Chemotherapy-Refractory Advanced or Metastatic Adenocarcinoma of the Stomach or Gastroesophageal Junction[5] Abstract CT038: Preliminary efficacy and safety results of anti-TROP2 ADC SKB264 (MK-2870) in patients (pts) with previously treated advanced gastric (G) or gastroesophageal junction (GEJ) cancer from a Phase 2 study.[6] Upregulation of Trop-2 quantitatively stimulates human cancer growth.[7] Effect of Anlotinib as a Third-Line or Further Treatment on Overall Survival of Patients With Advanced Non-Small Cell Lung Cancer: The ALTER 0303 Phase 3 Randomized Clinical Trial.Copyright © 2024 PHARMCUBE. All Rights Reserved.欢迎转发分享及合理引用，引用时请在显要位置标明文章来源；如需转载，请给微信公众号后台留言或发送消息，并注明公众号名称及ID。免责申明：本微信文章中的信息仅供一般参考之用，不可直接作为决策内容，医药魔方不对任何主体因使用本文内容而导致的任何损失承担责任。

近日，基因疗法领域再次迎来重大突破。慢病毒基因疗法公司Orchard Therapeutics宣布，其基因疗法Lenmeldy获FDA批准，用于治疗满足特定条件的异染性脑白质营养不良（MLD）儿童患者。据不完全统计，自2017年全球首款基因疗法获批上市以来，目前已有12款基因疗法获批上市（不含细胞疗法、小核酸药物）。多款疗法的相继获批体现了FDA对基因疗法的信任，同时也给市场带来了更多的信心。不过，尽管基因疗法显示出巨大潜力，但其难度和安全性也成为企业推进研发的阻碍。此外，基因疗法的研发成本和高昂定价之间的矛盾成为困住企业实现商业化的围墙，上百万美元的价格让普通家庭的患者难以企及。尽管基因疗法成功获批上市，但如何走通商业模式实现盈利成为企业的一大难题。随着国内外市场兴起对基因编辑治疗药物的开发热潮，关于基因疗法领域的诸多争议也随之而来。为此，动脉网有幸专访到神拓生物联合创始人周露博士，聊了聊当下基因疗法行业的现状、挑战与未来发展趋势。周露博士，2006年获得英国瓦特大学生化博士学位，2008—2015年在普利茅斯半岛医学院进行癌症方面的研究，独立和合作的研究在世界级期刊Nature自然杂志子刊《Oncogene》《Cell细胞》《Cancer Cell癌症细胞》、Science科学杂志子刊《Science Signaling》等杂志上发表，科研成果被引用超1000次。神拓生物在2023年12月完成了天使轮的融资，公司团队正致力于开发第五代慢病毒载体（5G载体）平台，为体内基因治疗提供更加安全有效的递送工具。降低基因疗法安全风险的三大关键：优化载体设计、提高药物靶向性、降低给药剂量动脉网：目前已有多款基因疗法获批上市，如全球首款CRISPR/Cas9基因疗法Casgevy，蓝鸟生物的三款慢病毒载体（LVV）基因疗法Lyfgenia、Skysona、Zynteglo等。您如何看待基因疗法被称为“神药”？它们与其他疗法相比有哪些异同？周露博士：目前来看，基因疗法与其他疗法最主要的区别是，它能够为小分子药物、大分子药物等无法治愈的疾病提供了新的治疗方法。以罕见病为例，目前全球发现的罕见病超过7000种、罕见病患者约3.5亿人，发展至今，仍有绝大部分罕见病没有任何治疗方案。另一方面，因药物抵抗性和耐药性，难治性疾病亟需新疗法出现。基因疗法恰好为这些患者带来了一个治愈的曙光。从基因疗法的临床数据和治疗情况看，其疗效是毋庸置疑的。但对于“基因疗法被称为神药”的看法，目前仍无法判断和证明，近几年基因疗法才在市场上出现，但其疗效和最终结果需要10—15年甚至是一辈子验证。但对于整个医疗行业而言，基因疗法无疑是一个巨大的进步。以前药物研发多从疾病症状出发，针对不同症状有不同的治疗方法。但如果从疾病的根本病因入手，或将可以实现“一次治疗，永久治愈”的效果。如果把人看作一串代码，DNA即其中一个个代码，那么基因疗法就是从源代码上找到解决人出“bug”的办法，将错误的程序改写正确，实现一次治愈的目的。动脉网：基因疗法的疗效大家有目共睹，但关于其存在的致癌风险、脱靶效应等安全性问题的争议也颇多，例如此前FDA就Casgevy召开咨询委员会（AC）会议时，讨论的问题就聚焦其安全性。您如何看待这一问题？周露博士：FDA的担心是很正常的，但监管是谨慎又积极的。基因疗法是一个很新的东西，FDA和CDE（国家药品监督管理局药品审评中心）的评审过程是一个权衡安全性和有效性的过程。当基因治疗药物的临床收益足够大，大到我们可以暂时地接受目前的安全隐患，那监管部门就会考虑批准这个药物，这将会是一个可以为患者带来治疗希望的创新药物。安全性探讨的重点在于如何解决问题，载体工具设计、提高靶向性、降低给药剂量是目前降低基因疗法安全风险的三个关键，其中，最大的难点是载体的靶向性和精准性问题。所以，需要从源头研发上用技术逐渐完善载体工具的设计，并在生产过程中优化它，提高药物的精准靶向性，在此基础上，将给药剂量降低，最后将能得到一个效果优异且安全性高的基因治疗药物，因为药物的安全性和剂量一定是相关联的。动脉网：基于此，神拓生物给出的差异化解决方案是什么？周露博士：基因编辑领域先驱Jennifer Doudna教授曾说过，目前基因治疗最大的问题是递送。当药物没有递送到它该去的地方，药效不足、脱靶效应等问题也随之而来。递送载体是目前行业发展的一个难点，当研发出一个高效精准的载体工具时，才能把编辑工具递送到要去的地方，药物的安全风险和批次生产等问题都将逐渐解决。神拓生物正在通过工程化的思维对载体进行改造，提高其靶向性和安全性。目前，公司正在构建一个第五代慢病毒载体（5G载体）平台，将突破此前1-4代载体平台的局限性，可开发出创新型的可全面编程的慢病毒载体，以提高其特异组织靶向性，为体内基因治疗提供安全有效的递送工具。研究试验数据也显示，研发的载体工具能在目的细胞中高效表达，转染效率也非常高。创新技术、多方合力降低成本，是研发患者用得起基因疗法的核心动脉网：从350万美元的Hemgenix到425万美元的Lenmeldy，基因疗法不断刷新“天价”的上限，普通家庭患者难以企及，您如何看待这一现象？周露博士：定价高的最主要原因是成本高，因此需要知道企业成本在哪里。第一是研发成本。基因疗法针对的适应症领域主要是罕见病，而目前关于罕见病的研究较少，前期需要花费许多额外的成本研究疾病的机制。第二是生产成本。基因疗法生产环节繁杂，全过程都需要在符合GMP要求等高规格的条件下完成，高生产成本难以忽略。第三是商业化成本。在临床试验阶段，由于全球罕见病患者少且分布广，患者招募难度大，额外成本随之而来。在市场推广阶段，也由于患者的数量和地区原因，市场推广难度和成本再度增加。罕见的疾病机制、小众的患者群体、复杂的制备周期等因素注定了基因疗法定价高昂，当把所有看似小的成本累积到一起时，得到的将是一个大数字。而企业也要走通商业化模式，通过药物销售获利支撑公司“活”下去，只有这样才能覆盖企业支出、确保持续研发。动脉网：在此情况下，您认为企业如何降低成本，突破定价困境？周露博士：对于企业而言，技术创新是降低成本的关键。在研发和生产成本方面，可通过创新提高研发技术，提升研发效率，多维度降低研发和生产成本。在商业化成本方面，不同企业之间可进行合作，打通市场销售渠道，降低行业整体的商业成本。当各个环节成本下降，药物定价也将下降，最终形成一个正向循环，患者、药物制造商等各方都将从中受益。动脉网：您认为未来会有哪些创新支付方案出现，让患者真正用得起基因治疗药物？周露博士：不断创新支付方式、探索多种药物支付模型是未来提高药物可及性，让患者用得起基因疗法的重要因素，也是各方在成本效益、风险和可持续性发展之间找到平衡的方式。从目前来看，商业保险是主要的支付方式。根据药物经济学的测算，在治疗过程中，如果病人所需费用低于保险，那么该价格将是市场可接受的范围。当基因治疗药物实现“一次给药、终身治愈”的效果时，在保险的支持下，患者将无须支付上百万美元费用。以疗效作为支付的凭证也是一种新方式。“按疗效”即患者的支付费用与一定时间内患者的治疗效果挂钩，如果效果低于预期，那么药物制造商将向支付方退还部分/全部治疗费用。该模式在一定程度上降低了患者的经济风险，同时也促进了企业不断优化和改进治疗方案。此外，患者还可通过社会各方力量，例如慈善机构等接受药物治疗。在未来，患者或许还可通过按揭支付等方式来购买药物。当患者治愈回归社会后，通过个人生产的社会价值支付治疗费用。动脉网：回到神拓生物本身，公司未来在成本、支付方式等方面有哪些创新，突破这一困境？周露博士：神拓生物走了一条不同的路。我们希望通过技术创新，将药物剂量降下来。因为药物安全性和成本都与剂量挂钩，通过技术手段，可在研发生产和成药的全流程中保证药效不变的情况下，将药物剂量降至最低，企业的总成本也将降低。目前神拓生物正在建立独有的CMC生产体系，有望将生产成本降到目前的十分之一。未来，公司也将与其他企业联合开发技术，合力从源头上降低成本。基因治疗时代已来，基因疗法将从罕见病扩展至不同疾病领域动脉网：目前众多药企布局基因治疗赛道，也有更多产品获批上市，您认为“基因治疗时代”是否已经来临？周露博士：我认为“基因治疗时代”是否来临没有一个明显的界限，因为许多事物的发生是悄无声息的，并且其发展是一个渐变的过程。但可以确定的是，我们已处于基因治疗时代并且正在朝着更好的方向发展。FDA此前表示，随着进入早期临床开发阶段的细胞和基因疗法数目激增，预计自2020年起每年将接受多达200个临床试验申请，同时预计从2025年起每年批准10—20个细胞和基因疗法，这体现了FDA对基因治疗的积极态度与期望。目前越来越多的企业正在进入基因治疗赛道，当大家都积极参与进来时，未来该领域将有众多里程碑式进展。动脉网：未来，基因治疗领域发展将面临哪些挑战和机遇？产业值得关注的趋势又有哪些？周露博士：我觉得挑战是多方面，首先是技术层面，如何把载体设计得更好、更完美，实现高效递送、精准靶向，从而突破现有疗效局限，满足临床真正意义上的核心需求。当攻克技术这个核心问题后，支付方式、商业化落地等问题也将迎刃而解。机遇方面也十分广阔。从适应症领域来看，基因疗法将从罕见病扩展到常见病、基础病领域，例如用基因疗法治疗糖尿病、心血管病、癌症，或是用于研发疫苗、减缓衰老等等。从技术上来看，下一代载体的开发将成为重点，这也是神拓生物正在做的事情，通过开发5G载体解决递送问题。另外则是编辑工具的优化，研发出更精准、更小型化、更高效的编辑工具是未来发展的一大方向。而未来产业的一个重点趋势是，医院的结构会发生变化，从以医生为主变为以科学家参与的联合诊疗为主，即大量做基因治疗研究的科学家将与医院紧密结合，让基因疗法更精准地作用到患者身上。但是，不管面临多少挑战，基因治疗未来发展前景是积极广阔的。随着基因疗法不断获批上市，该行业将会更受关注，营商环境也将向好变化，推动整个行业向前发展，最终为不同疾病领域患者提供更安全高效的治疗方法。动脉网：未来几年，神拓生物将迎来哪些里程碑进展？周露博士：神拓生物的5G载体平台由目前使用全方位设计的慢病毒载体平台构成，可支持多种脑肿瘤疾病、神经系统罕见病的基因疗法开发。目前，公司在完善神经纤维瘤的PDX模型，核心团队多项科研成果已在全球核心科学期刊发表，并且公司已与国内多家三甲医院建立了临床研发合作关系，有丰富的患者资源和成熟的临床试验中心。目前神拓生物已布局多条体内基因治疗管线，并预计在5-8年内推进产品上市。未来，神拓生物与医院、患者的联系将更紧密，充分了解患者需要什么、医生需要什么、临床需要什么，围绕三大导向，研发出患者用得起的高效安全的基因治疗药物。动脉网第八届未来医疗100强大会现已升级为，将于2024年5月7日-10日在北京·北人亦创国际会展中心盛大举行。本届展会为15000+人次、10000平规模，围绕新产品、新技术、新服务、新生态、新合作构建体系，为医疗健康产业的创新力展示搭建最佳舞台。这里是，公认的医疗产业创新洞察的生成地，年度趋势分享与学习交流的口碑盛会；优秀的医疗创新企业和创新产品都在这，是企业展示创新和面谈合作的最佳场景；这里有，最具前瞻力的思享盛会：500+大咖嘉宾莅临分享，3天主论坛、40余场主题论坛，只做干货议题！最具创新力的生态链接：5大展区，200+首发首创新品、3000+企业、500+投资团，全球买手云集！最具影响力的榜单发布：上市公司创新力榜+未来医疗100强榜+创新力产品榜，700+上榜企业现场交流！目前已有超过600家企业和产品确认参加展会，展览面积预订超过70%，全球买手团已合作了印度尼西亚、新加坡、比利时、爱尔兰、西班牙、德国、澳大利亚、英国、加拿大等国家。余下的合作席位已不多，欢迎企业、品牌方、买手团或相关组织洽谈参会。在这个充满不确定性的时代，寻求高价值资源和高效率链接，将是您的首选。即刻报名，限时福利！声明：动脉网所刊载内容之知识产权为动脉网及相关权利人专属所有或持有。未经许可，禁止进行转载、摘编、复制及建立镜像等任何使用。动脉网，未来医疗服务平台

▲ 详细日程见文末 ▲摘要：猪流行性腹泻(PED)是由流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种高度传染性肠道疾病，新生仔猪死亡率高达100%。2010年出现了高致病性基因群2 (G2) PEDV，其给全球猪肉产业造成了巨大的经济损失。2013年首次在美国报道并在全国暴发疫情，2013 - 2014年PED给许多猪肉生产商带来了巨大的灾难。怀孕母猪/后备母猪接种减毒活疫苗(LAV)是诱导乳原免疫的最有效策略，并通过初乳和乳汁为哺乳仔猪提供抗PED的被动保护。然而，经过大约十年的努力，仍然没有安全有效的疫苗。最大的困扰之一是LAV在野外的潜在毒力恢复。本文依据PEDV - LAV的发展现状及主要困难进行综述。我们还讨论了转录调控序列在PEDV转录中的功能，有助于重组以及防止LAV逆转的可能策略。关键词：猪流行性腹泻病毒；减毒活疫苗；重组；安全问题1概述猪流行性腹泻病毒(PEDV)是一种主要的猪肠道病原体，可引起新生仔猪严重的肠道感染，导致急性腹泻、呕吐、脱水和死亡。1971年在英国首次发现猪流行性腹泻(PED)的疾病，然后传播到欧洲多个猪肉生产国，当时其背后的病原体仍未被发现。1978年，比利时的研究人员首次确定PEDV为该病的病原体。它在欧洲农场引起了广泛的感染，导致20世纪70年代和80年代乳猪的损失严重。然后，它在20世纪90年代在欧洲变得罕见，在成年猪中零星爆发或在乳猪中出现轻微症状。1982年在亚洲报告了首例PED病例，疫情一直持续到20世纪90年代。然后，它成为地方性流行病，直到2010年，高毒性PEDV毒株在中国出现。2013年PEDV传入美国，并迅速在全国蔓延。在2013-2014年疫情期间，在养猪健康监测项目跟踪的猪场中，超过50%的猪场发生了新的疫情，估计造成9亿-18亿美元的经济损失。PEDV是尼多病毒目冠状病毒科甲型冠状病毒属的一员。它是最大的RNA病毒之一，核苷酸长大约28000个，正义单链RNA基因组，5＇帽和3＇聚腺苷化尾部。因为RNA基因组很大，包括PEDV在内的冠状病毒已适应了具有校对酶，可以平衡复制保真度和遗传多样性之间的冲突。PEDV通过积累突变和重组事件经历了一条进化路径，从而提高了病毒的适应性。两个大的ORF, ORF1a和ORF1b，编码在PEDV基因组的5＇2 / 3处，其次是四个结构蛋白和一个辅助蛋白的ORF:刺突(S)，ORF3，包膜(E)，膜(M)和核衣壳(N)蛋白。在病毒复制过程中，ORF1a和ORF1b被翻译成两种多蛋白前体，这些前体在翻译后被病毒蛋白酶进一步加工成16种非结构蛋白(nsp1-nsp16)。在PEDV编码的所有蛋白中，S糖蛋白在病毒粒子表面形成三聚体突起，负责附着于宿主受体，并通过膜融合介导病毒进入细胞，启动感染过程。此外，S基因在PEDV株中是一个高变区域。因此，它可以作为确定PEDV遗传多样性的系统发育标记。根据S蛋白的遗传多样性，PEDV可分为两个基因组:基因组1 (G1)和基因组2 (G2)，基因组2又可分为G1a、G1b和G2a、G2b、G2c亚群。PEDV G1a包括在比利时发现的原型毒株CV777，所有毒株都与CV777具有较高的遗传同源性。新出现的高毒力毒株被归类为G2。由于冠状病毒在复制过程中会合成一组共用相同5＇端的亚基因组RNA (sgRNAs)，因此在包括PEDV在内的冠状病毒中，不同毒株之间的同源重组率相对较高。因此，G1a和G2毒株之间潜在的重组事件导致了S-INDEL毒株、G1b和新近定义的G2c毒株的出现，这表明PEDV的进化复杂而快速。尽管群体免疫和生物安全仍然是预防PEDV最有效的方法，但新变种的不断出现，包括来自重组事件的毒株，其已经导致疫苗失败，并阻碍了PEDV的预防和控制。本文综述了PEDV病毒转录的分子基础，以及安全有效的PEDV减毒活疫苗的合理设计。2PEDV复制和转录中的功能元件PEDV感染的第一步是通过S蛋白识别并结合宿主受体。研究人员已经确定了几种冠状病毒的宿主受体用法。中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)识别二肽基肽酶4 (DPP4)受体结合。严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)和SARS-CoV-2结合血管紧张素转换酶2 (ACE2)引发感染。而一些冠状病毒，包括传染性胃肠炎病毒(TGEV)及其变体、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、人冠状病毒(HCoV)-229E和猫冠状病毒II型，利用氨基肽酶N (APN)作为受体。APN是一种150kDa的跨膜蛋白水解酶，可从肽中切割中性或碱性NH2末端残基。它是一种在上皮细胞、巨噬细胞和粒细胞中普遍表达的蛋白。APN参与了广泛的生物过程，包括细胞增殖、运动、粘附和内吞作用。以往的研究表明APN是PEDV感染的共受体。PEDV的S蛋白能有效结合人和猪的APN。然后，一种外源表达人或猪APN (pAPN)的非受纳犬肾细胞系MDCK可以支持PEDV感染和连续病毒传代。相反，用抗pAPN抗体预处理易感细胞和允许细胞可阻断PEDV的生产性感染。与此同时，PEDV在表达pAPN的转基因小鼠模型中复制。然而，由于APN缺陷细胞系Vero和pAPN敲除猪支持PEDV复制，因此PEDV一定存在未知受体。在进入宿主细胞后，PEDV基因组被释放到细胞质中，并进入细胞器进行病毒复制。PEDV有一个正链RNA基因组，作为初始病毒蛋白翻译的mRNA。ORF1a和ORF1b编码pp1a和pp1ab两种多蛋白，它们是多蛋白前体，并分别被在nsp3和nsp5中存在的木瓜蛋白酶(PLpro)和3c样蛋白酶(3CLpro)两种病毒蛋白酶自加工成16种非结构蛋白(nsps)(图1)。图1.PEDV基因组结构和它的结构蛋白（S,E,M,和N），非结构（nsp1-16）和辅助（ORF3）蛋白。位于5＇UTR或每个ORF上游的绿色和红色条代表领导TRS和TRS主体区域。缩略词：pp1a和pp1ab的数字表示非结构蛋白1-16。PLpro：木瓜蛋白酶样的蛋白酶；3CLpro：糜蛋白酶样蛋白酶；RdRp:RNA依赖的RNA聚合酶；ExoN:核糖核酸外切酶;N7-MTase:N7-甲基转移酶;EndoU:内切核糖核酸酶;2＇-O-MTase:2＇-O甲基转移酶；S:刺突蛋白；E：包膜蛋白；M：膜蛋白；N：核蛋白。在病毒复制过程中，nsp1在翻译后迅速从多蛋白中产生和释放。它以宿主翻译机制和干扰素(IFN)应答系统为靶点，诱导宿主mRNA降解并拮抗IFN应答。复制-转录复合体(RTC)负责病毒RNA合成，由多种病毒非结构蛋白组成。在参与RTC的蛋白质中，nsp3-nsp6负责调节胞内膜和组装双膜囊泡(DMV)，而DMV是病毒RNA合成的地方。此外，剩余的nsps含有RNA合成中涉及的核心酶功能。例如，nsp7和nsp8的异源二聚体启动新生RNA合成并产生用于复制的短RNA引物，与nsp12形成冠状病毒复制复合体的最小核心。Nsp12是一种RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)，用于复合体内的RNA合成。在新生RNA的延长过程中，RNA结合蛋白nsp9和解旋酶nsp13也参与其中。此外，双功能蛋白nsp14具有3＇-5＇外切酶(ExoN)和N7 -甲基转移酶(MTase)活性。外切酶结构域通过在RNA延伸期间去除错误结合的核苷酸来负责校对活动，以保持高复制保真度。而且，N7-MTase结构域与2＇-O-MTase nsp16一起介导病毒RNA的加帽过程，nsp10作为辅助因子参与其中。此外，nsp15是一种在冠状病毒中保守的尿嘧啶特异性核糖核酸内切酶(EndoU)，它处理病毒的dsRNA以逃避宿主防御系统的检测，从而导致免疫逃避。RTC初始翻译和组装后的病毒RNA合成包括病毒基因组复制和转录。在病毒基因组复制中，RTC可以识别PEDV正链RNA基因组并持续复制，产生互补的负链基因组。然后，负链基因组拷贝作为模板，更多新生的正链基因组RNA被合成并最终整合到子代病毒粒子中。与连续的基因组复制不同，PEDV利用非连续的转录策略。在负链RNA合成过程中，有一组5＇和3＇共末端亚基因组RNA (sgRNAs)通过中断机制产生，负链sgRNAs随后作为模板产生正链亚基因组信使RNA (sgmRNA)。所有sgmRNAs共享相同的5＇区，称为先导序列，位于冠状病毒基因组的开头，而在sgmRNAs的合成过程中，需要一组顺式作用元件，称为转录调控序列(TRS)。TRS是位于每个体ORF上游的同源性较高的短序列(称为“主体TRS”)和5＇前导序列下游（称为“前导TRS”）(图1）。在负链RNA合成过程中，当RTC在3＇1/3的病毒基因组中遇到N、M、E、ORF3和S基因的主体TRSs时，新生链的延伸被中断。在这种情况下，主体TRS作为RTC的“减速”或“停止”信号，RTC要么通读转录下一个ORF，要么将模板切换到先导TRS，产生sgRNA，携带5＇先导序列的反向互补序列（图2）。图2.PEDV的中断复制模型。当RTC遇到TRS区域时，要么“通读”，要么“模板切换”，生成中断的sgRNA。修改自Baker, s.c.，2008。主体TRS的模板切换事件涉及新生负链的RNA反向互补TRS(负义体TRS或新生抗体TRS)与基因组RNA的5 ' UTR(正链先导TRS)之间的相互作用。在TRS区域内，存在一个由6 ~ 8个核苷酸组成的保守核心序列(CS)并在其第5＇和3＇端两侧有可变序列。基于系统分析，Yang等发现前导TRS-CS在一个属内保守，但在属间不同，但β冠状病毒属的厄贝孔冠状病毒的TRS-L CS与α冠状病毒相似，而与β冠状病毒属不同。例如，α冠状病毒包括TGEV, SADS-CoV和PEDV共享TRS-CS(5＇-CUAAAC-3＇)。对于TRS-CS体，即使是同一属的病毒也表现出多样性。TGEV具有9个高度保守的TRS-CSs体，序列为5＇-CUAAAC-3＇，包括每个ORF的5＇端各1个 (1a, S, 3a, 3b, E, M, N和7)，以及S基因的内部CS。对于PEDV，CV777株的TRS-CS体的E,M和N基因经实验分别确定为5＇-CUAGAC-3＇，5＇-AUAAAC-3＇和5＇-CUAAAC-3＇。推断S和ORF3的TRS-CSs分别是5＇-GUAAAC-3＇和5＇-CCUUAC-3＇。PEDV的主体TRS-CS与先导TRS-CS最多可相差3个核苷酸。先前的研究报道了CS在指导碱基配对和新生负链与基因组5＇末端的先导TRS位点之间的二链体形成方面的关键作用。控制不同ORF表达的TRS-CSs体与PEDV中的先导TRS-CS表现出多种相似性，这可能是控制不同sgmRNAs丰度以及病毒蛋白的另一种策略。除了序列相似性，RNA二级结构也被认为是RNA合成所需的顺式作用元件。5＇UTR在病毒基因组复制中的结构功能首次在基于缺陷干扰RNA (DI RNA)的BCoV系统中得到验证。在BCoV 5＇UTR中预测了四个茎环(SLs)， SL I, II, III和IV，突变分析表明这些结构对病毒复制至关重要。随后，从甲型冠状病毒(HCoV-NL63、HCoV-229E和TGEV)、乙型冠状病毒(HCoV-OC43、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MHV)和γ冠状病毒IBV中鉴定出3个保守的SLs (SL1、SL2和SL4)。MHV作为一个模型，证明了这些保守结构对病毒复制至关重要。SL1与部分展开的构象处于平衡状态。SL1因碱基配对减少而导致的结构不稳定被证明是致命的或导致病毒复制减少，而重新建立SL1碱基配对的补偿性突变使病毒复制恢复到与野生型病毒相似的水平。在保守的SLs中，SL2在所有属间的一致性最高。它有一个U-turn基序，这可能是RNA-RNA相互作用的原因。突变分析报告，突变破坏SL2茎的稳定性，显著削弱MHV的复制，导致感染滴度峰值降低，与野生型MHV相比，斑块更小。此外，具有不稳定SL2的突变体合成的RNA量显著低于野生型病毒。相反，恢复碱基配对的补偿性突变可以将这些不稳定突变体的病毒复制恢复到与野生型病毒相当的水平。另外，携带颠覆性突变的突变体破坏了茎，无法存活。这表明SL2通过调节RNA合成对病毒复制至关重要。SL4是一个位于先导TRS下游的长发夹结构。有人提出，SL4的基底部分处于一种柔性状态，这可能是导致sgRNA合成过程中模板切换的瞬时远程RNA-RNA相互作用的原因。根据Mfold [http://www.unafold.org/mfold/applications/ rna-folding-form.php(于2022年5月26日访问)]的分析，在PEDV CV777毒株的5＇UTR范围内预测了SL1、SL2、SL4和SL5四个二级结构(图3)。除了保守的SLs外，在核苷酸(nt)残基123和305之间还发现了一个SL5。它是一个包含三个发夹环的大型结构，延伸到ORF1a。迄今为止，在5＇UTR中，这些与先导TRS相邻的二级结构的功能仍然不清楚，需要进一步的实验来证实它们在PEDV RNA复制中的作用。图3.PEDV CV777典型毒株5 ' UTR的二级结构。4个保守茎环（SLs）用Mfold http://www.unafold.org/ mfold/ applications/rnafolding-form.php（2022.05.26），计算了每个SL的吉布斯自由能，并以kcal/mol表示。3PEDV疫苗研制现状产生的感染将基于基因组内各种病毒蛋白和功能元件的协同作用而启动，感染触发宿主对病毒感染的全身和局部粘膜免疫反应。早期的一项研究表明，先前接触引起的免疫反应可以防止断奶仔猪再次感染。此外，PED暴露的后备母猪可以通过肠道-乳腺-分泌IgA轴被动地转移母体免疫，并在攻击后为仔猪提供高达100%的PED保护。这提示病毒复制诱导的宿主免疫，特别是乳原免疫是预防PED的有效途径。Won等和Lv等评论了PEDV疫苗，包括LAV疫苗、灭活疫苗、病媒疫苗和亚单位PEDV疫苗。2010年之前，G1a型PEDV疫苗包括灭活疫苗和减毒活疫苗，其有效地控制了PEDV在亚洲国家的爆发。Ma等人于1994年制备了一种基于细胞适应CV777毒株的灭活疫苗，母猪接种后，3日龄猪的保护率为85.19%，仔猪的被动免疫保护率为85.0%。随后，该团队又于1995年成功研制出TGEV和PEDV二价灭活疫苗，并在中国实现商业化。除了灭活疫苗，Tong等人报道了一种体外连续传代CV777生产的LAV。对3 - 6日龄仔猪的保护率为95.52%，被动免疫保护率为96.2%。1999年成功开发了PEDV和TGEV的二价LAV，对PEDV的主动和被动保护率分别高达97.7和98%。这两种二价疫苗在2010年PEDV高毒变株突发事件之前，在中国广泛使用，有效控制了PEDV和TGEV的传播。日本和韩国也开发了疫苗。一种日本毒株PEDV 83P-5在Vero细胞中连续传代后被减毒，并作为LAV在市售。重要的是，母猪接种83P-5被动保护了80%的仔猪免受G2 PEDV攻击的死亡。两株韩国毒力毒株SM98-1和DR-13也进行了体外传代和减毒。SM98-1毒株已被用作肌肉注射LAV或灭活疫苗，DR-13毒株可作为口服LAV。Song等人的研究表明，晚期妊娠母猪口服DR-13后，87%的哺乳仔猪能抵抗同源病毒的攻击。从2010年底开始，由于出现了G2分支的高毒力PEDV变体，中国经历了严重的PED疫情，对养猪业造成了毁灭性的破坏，并传播到其他亚洲和北美国家以及欧洲(乌克兰)。2015年，两种多价疫苗在中国正式获批上市。一种是由TEGV、PEDV (CV777株)和猪轮状病毒减毒研制的三价疫苗，另一种是含有TGEV和PEDV的二价减毒疫苗(ZJ08株，G1b)，但由于G1和G2株之间的交叉保护较差，其有效性值得怀疑。一项比较研究评估了G1b和基于G2b的疫苗对2周龄断奶仔猪G2b毒株攻击的效果。这表明，基于G1b毒株的灭活疫苗对G2b的攻击提供了足够的保护，证明了粪便中PEDV RNA在高峰脱落期间减少了3-4个logs，病毒脱落持续时间更短，但G1b毒株衍生的疫苗失败了。在韩国和泰国也观察到类似的现象，在这两个国家，市售的G1毒株衍生的疫苗未能对目前流行的G2毒株提供完全的保护。迄今为止，高毒力PEDV是中国主要的猪病毒病原体之一(占世界生猪存栏量> 50%)。因此，迫切需要针对G2株的有效疫苗来预防和控制仔猪的这种致命病毒感染。大多数许可的PEDV疫苗是灭活疫苗或由已被杀死或完全减毒的整个病原体组成的LAV。这种全病原体疫苗可以引起强烈的保护性免疫反应。Collin等人研制了一种G2b型灭活疫苗，基于分离的美国变异NPL-PEDV 2013 P10.1株。根据基于细胞的病毒中和试验，该疫苗通过肌肉注射引起了相当水平的针对PEDV的体液免疫。然而，灭活疫苗不能复制，只能诱导较小范围的免疫反应。此外，由灭活疫苗诱导的免疫不像LAV那样持久，导致需要多次剂量才能增强。此外，由LAV触发的强被动乳原免疫是保护新生哺乳仔猪免受包括PEDV在内的肠道疾病侵害的最有希望和最有效的方法。在非自然寄主组织培养中进行连续传代导致病毒致弱是培养LAV的常规方法。迄今为止，已经报道了几种细胞减毒的G2毒株，包括美国分离株PC22A，亚洲株YN, Pingtung-52和KNU-141112。Hou等人对四种减毒毒株的突变模式和分子机制进行了全面的评论。一般来说，细胞适应毒株在仔猪中是减毒的，并且通过激发高水平的中和抗体而具有高度的免疫原性。然而，对于这些报道的G2 PEDV为基础的LAV候选物的保护功效存在一些担忧。首先，由于最脆弱的种群是乳猪，在它们遇到病毒之前没有足够的时间诱导主动免疫，因此PEDV疫苗接种的理想策略是在母猪/后备母猪中诱导保护性乳原免疫反应。由于在母猪/后备母猪中进行PEDV攻击研究是昂贵且劳动密集型的，科学家们利用基于细胞的病毒中和试验来测试疫苗接种诱导的保护性免疫反应，这可能作为保护的指标。此外，新生儿猪模型用于测试病毒致弱，保育猪(或断奶猪)用于评估病毒的免疫原性和筛选有希望的候选病毒。例如，在细胞培养适应的PC22A株的研究中，100代(P100)和P120在断奶仔猪中完全减毒，但在新生仔猪中部分减毒。然而，与P120病毒相比，PC22A的P100在毒力毒株攻击后诱导了更高的血清PEDV IgA、IgG和病毒中和(VN)抗体滴度和更多的PEDV IgA抗体分泌细胞。这些结果表明PEDV的致弱是一把双刃剑。在仔猪中完全减毒的LAV候选物不能在母猪中诱导足够的乳原免疫。年龄较大的猪比仔猪更能抵抗PEDV感染和疾病。因此，仔猪中PEDV的完全衰减通常会导致减毒病毒的低效复制和老龄猪中病毒免疫原性的降低，从而导致保护性免疫的低效。其次，G1组和G2组之间的交叉保护程度较低，G2a组和G2b组之间的交叉保护效率也是疫苗开发中需要关注的问题。Liu等证实CH/HBXT/2018 (G2a)和CH/HNPJ/2017 (G2b)灭活疫苗对异源株的VN抗体滴度均显著低于同源株。因此，在进一步的疫苗研究中，异种毒株的攻击对阐明交叉保护具有重要意义。4PEDV减毒活疫苗毒力逆转的风险与预防除了保护效率之外，阻碍PEDV LAVs应用的最大问题之一是安全问题。减毒毒株携带突变，通过系列传代或分子工程引入，使其没有致病性。然而，一些疫苗毒株通过(1)病毒基因组内突变的积累和(2)重组在初级疫苗受体传代过程中表现出毒力的逆转。在本节中，我们将回顾抵制PEDV - LAV发展的逆转事件的策略。有两种方法可以产生有希望的减毒候选疫苗:(1)经典方法是通过在非自然宿主或环境中连续传代病毒，使其适应新条件并减少在自然宿主中的复制，或者(2)通过对多种基因进行遗传修饰的反向遗传学方法，这些基因对于降低病毒的致病性是必不可少的。然而，由于宿主的免疫功能低下或弱病毒的遗传不稳定，衰减突变的逆转和基因组中其他地方的补偿性突变都可能导致毒力的逆转。nsp16的2＇-O-MTase在冠状病毒中高度保守，在复制和转录过程中介导病毒基因组RNA和sgmRNAs的加帽过程。在老龄小鼠模型中，一种SARS-CoV nsp16突变体(dNSP16)在异源攻击后显示出作为候选疫苗的有效性。然而，在缺乏功能性B细胞和T细胞(RAG - / -)的小鼠模型中，接种dNSP16突变体后，62.5%(5/8)的免疫受损小鼠表现出体重减轻和死亡，而这在老年小鼠模型中是不存在的，表明毒力的逆转。同时，虽然引入的靶向nsp16的突变在逆转录物中被保留，但在nsp3、nsp12和nsp15中发现了6个突变，这些突变可能具有代偿性突变的作用。先前的一项研究表明，PEDV nsp14-ExoN突变体E191A显著减弱，但具有高度的遗传不稳定性，并且在体外和体内均观察到反向突变。重组MHV和SARS-CoV携带断裂的nsp14外显子结构域也有类似的报道。在体外连续传代(250次)后，尽管在外显子(-)活性位点未发现反向突变，但具有工程外显子的MHV突变体(MHV-ExoN(-)- p250)积累的突变比野生型MHV多8倍，并且显示出更高的复制保真度，这表明在病毒复制过程中出现了外显子功能的代偿突变。为了减轻这种突变驱动的逆转，可以将针对不同基因的多个突变结合到病毒基因组中，并通过不同的机制减弱病毒。例如，我们形成了重组PEDV icPC22A-KDKE4A-SYA，携带失活的nsp16 2＇ -O-MTase和S蛋白的内吞信号。如上所述，nsp16 2＇-O-MTase功能障碍在小鼠中减弱了SARS-CoV、MHV和MERS-CoV。S蛋白胞质尾部的保守基序YxxΦ调节被感染细胞表面S蛋白的水平，并作为毒力因子发挥作用。重组突变体icPC22A-KDKE4A-SYA在猪体内传代三次后保留了引入的突变，表明其体内遗传稳定性。在SARS-CoV LAV发展过程中也采用了类似的方法，通过将失活的nsp14-ExoN和nsp16-2＇-O MTase结合产生dNSP16/ExoN。与dNSP16突变体不同，dNSP16/外显子不会引起重大疾病，并且在接种后30天免疫功能低下小鼠模型中被清除，而不会恢复到毒力形成。总的来说，多种突变的组合通过各种途径减弱病毒，为对抗突变驱动的冠状病毒LAV的逆转提供了答案。此外，重组是许多RNA病毒的重要进化因素，特别是冠状病毒，在密切相关毒株的混合感染中，其重组率高达20%。重组驱动的逆转，即当一种疫苗毒株与产生新变体的野毒毒株重组时，对LAV的应用构成了障碍。几种动物病毒的LAV包括犬细小病毒、传染性法氏囊病病毒、牛疱疹病毒1，以及冠状病毒、IBV和PEDV的成员，他们都发生了由重组驱动的逆转引起的疫苗失败。在中国几个养猪业大省发现了PEDV重组变异体。一种在田间表现出高致病性的变异源于低致病性疫苗与强毒田间菌株之间的重组事件。病毒基因组重组的一般机制有三种:(i) DNA基因组中的断裂和修复，(ii) RNA基因组中的聚合酶模板切换，以及(iii)分段RNA基因组中的片段重组。作为一种非分段RNA病毒，冠状病毒可以在两个不同分子之间进行分子间重组，也可以通过模板切换在同一分子内进行分子内重组。分子内重组是指复制酶在先导区和主体TRS区之间切换，产生一组sgmRNAs，而分子间重组是指复制酶从不同亲本毒株的供体模板跳到受体模板，在RNA合成过程中共享同源序列，偶尔会产生重组病毒子代。对冠状病毒TRS位点和重组事件的系统分析表明，近10%的主体TRS区域参与断点热点，重组热点经常与主体TRS相关。因此，TRS线路成为阻止冠状病毒复制过程中分子间重组的主要靶点。通过将3-nt引入与野生型TRS序列有三个核苷酸差异的重组TRS中，设计了一种抗重组SARS- CoV。重装TRS线路与野生型线路不相容，它是导致携带混合野生型和重装的TRS的拯救嵌合病毒失败的原因。随后，同一组的研究人员进一步优化了调控回路，设计了一个7-nt重组的TRS，该TRS具有增强的遗传稳定性，基因组可作为SARS - CoV减毒疫苗开发的有效抗重组平台。对于PEDV来说，重装TRS线路有两个困难:(1)与在大多数冠状病毒中观察到的TRS-CSs的高度一致性不同，PEDV的TRS-CSs表现出令人难以置信的多样性，其中，TRS-CS主体与先导TRS-CS可以有三个核苷酸的差异(见第2节);(2)在PEDV基因组中，所有的体TRS-CSs都与上游ORF重叠。因此，将突变引入TRS区域可能会改变上游ORF的氨基酸序列，导致不利突变。需要新的方法而不是直接重新编码TRS-CSs来防止TRS相关的重组驱动的逆转。第一种可能的方法是通过引入沉默突变来重新设计与上游ORF重叠的TRS-CSs，以保留原始氨基酸序列。除了沉默突变外，保守氨基酸替代策略也可用于设计TRS-CSs，该策略将蛋白质中的一个氨基酸替换为具有相似生化特性的另一个氨基酸。除了序列相似性方面，TRS区域的RNA二级结构被认为是顺式作用元件，也调节RNA转录。正如我们在第2节中所讨论的，PEDV基因组5＇UTR的二级结构在病毒复制中起着重要作用。然而，对于二级结构的准确预测信息有限，尤其是对主体TRS的预测。研究人员根据SARS-CoV-2报道了冠状病毒基因组在其生命周期中的二级结构动态。例如，与感染细胞中的病毒RNA相比，病毒粒子内的RNA基因组经历了主要的构象改变，并表现出过渡的密封。虽然预测了PEDV CV777毒株5＇UTR的二级结构(图3)，通过靶向主体TRS区域内的关键结构元件来重新编码PEDV TRS系统的更多方法将受益于PEDV基因组结构在病毒复制过程中的动态说明。这些区域的结构变化也可能调节RTC的模板开关事件，导致转录回路的改变。使用这些方法，重新编码的主体TRS-CSs将与野生型不兼容，但保留上游ORF的保守置换。最后，我们可以通过人为引入间隙，将PEDV的TRS区域与上游ORF区分离，从而破坏原有的TRS位点，重组PEDV的基因组。因此，引入的间隙有望作为调节PEDV转录的功能元件，我们可以像之前在SARS-CoV中描述的那样重新连接转录回路。目前，我们正在设计一个改造的TRS，几乎没有改变原来5＇的二级结构UTR。一个重塑的PEDV突变体RMT已经被拯救，在体外和体内有效地复制。RMT在新生仔猪中显示出部分减毒表型和诱导的部分保护作用(未发表的数据)。它也显示出与野生型S-INDEL PEDV菌株的重组减少。因此，它可以作为未来开发抗重组PEDV LAV的平台。5结论新出现的高毒力PEDV在哺乳仔猪中引起了大规模暴发，死亡率很高，给猪肉工业造成了重大损失，但很少有疫苗能有效预防这种疾病。由于新生仔猪的脆弱性，最有效的疫苗接种策略是在妊娠母猪体内诱导强乳原免疫，通过初乳和乳汁将保护性中和抗体被动传递给哺乳仔猪。同时，保护母猪肠道的主动粘膜免疫在这一过程中起着至关重要的作用。先前对另一种猪肠道冠状病毒TGEV的研究表明，只有用活病毒免疫，而不是灭活疫苗或亚单位疫苗免疫，才能触发足够的乳原免疫。因此，在母猪体内使用易于触发乳原免疫的LAV是预防和控制PED的一种很有前途的方法。未来需要同源和异源挑战来证明疫苗对野外流行毒株的交叉保护作用。此外，弱毒株的毒力回复的安全性问题仍未得到解决，这阻碍了LAV的应用。利用反向遗传学和新开发的方法，结合几种不降低病毒免疫原性的致弱突变(例如，nsp1突变)和重新连接的TRSs，可以帮助提高候选疫苗的遗传稳定性，从而可能对突变和重组驱动的逆转更具抵抗力。参考资料：Niu X, Wang Q. Prevention and Control of Porcine Epidemic Diarrhea: The Development of Recombination-Resistant Live Attenuated Vaccines. Viruses. 2022 Jun 16;14(6):1317. doi: 10.3390/v14061317. PMID: 35746788; PMCID: PMC9227446.为了推动兽用生物制品行业交流，共同探讨该领域的最新研发进展、产业化现状及未来发展趋势，生物制品圈联合四叶草会展、乘风济海将于2024年4月17日-18日在南京共同举办“兽用生物制品研发和产业化大会”，系中国医药全产业链新资源大会（CBC大会）中的一个分领域专业会议。诚邀全国相关领域研究者共享学术盛会。名称：兽用生物制品研发和产业化大会时间：2024年4月17日-18日（周三-周四）地点：南京国际展览中心主办单位：生物制品圈、抗体圈、四叶草会展，乘风济海媒体支持：药时空、细胞基因研究圈报名方式：扫描下方二维码→ 填写表格 → 报名成功组委会获得报名信息后，根据报名信息进行初筛，并进一步与报名者沟通确认，实现精准邀请（严格审核通过）。注：大会日程以会议现场为准。中国医药全产业链新资源大会（CBC大会）是一场将“政、产、学、研、用、管、投”各方精英围绕全产业链新资源展开的合作大会，将于2024年4月16日-18日在南京国际展览中心举办。大会将主打“全产业链新资源对接”，围绕投资、立项、临床前研发、临床研究、生产、供应链国产化、销售、MAH合作、国际品种合作、公司股权合作与并购全产业链，为中国医药同仁带来全新的资源与商机。大会下设的同期会议包括：宠物药品、食品、保健品新资源大会兽用生物制品研发和产业化大会透皮技术研发生产与注册开年分享会吸入制剂研发、生产与注册新机遇新进展分享会中国改良新药与缓控释制剂全产业链合作大会多肽产业创新与发展大会新药典新型辅料与包材产品与技术交流会新药典新型实验室仪器与耗材实操演示交流会陆续更新中......识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。