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撰稿 | 郑诗蔚   责编 | 周叶斌 近年来，靶向CD19的CAR T细胞疗法在治疗儿童和青少年复发或难治性急性淋巴细胞白血病（ALL）方面卓有成效，但约一半的患者在CAR T细胞输注后一年内会出现复发，意味着我们还需要深入了解五年以上持久反应背后的分子机制。 近日，Li Tang 等带领的研究组于 Nature 发表题为 Single-cell CAR T atlas reveals type 2 function in 8-year leukaemia remission 的文章，其中详细研究了从82名复发/难治性ALL儿童患者中制造的输注前CD19靶向CAR T（CTL019）细胞，以及来自6名健康供体（HD）的CTL019细胞。作者结合单细胞RNA-seq（scRNA-seq），CITE-seq，细胞内流式以及多重分泌组学技术，构建了一份CTL019细胞的多组学图谱，并阐述了2型T细胞功能与这些患者中长达8.4年的长期缓解相关。 作者获取了695819个输注前CAR T细胞的单细胞转录组和17个表面蛋白表达数据，通过聚类分析和UMAP可视化，根据特定刺激条件和标志物（如CD4，CD8，CD69和CD62L）的表达量，识别并总结出共17个亚群。这其中有8个处于基础状态的CAR T亚群，接受刺激后这些细胞表现出多种T细胞特征，包括1型（Th1），2型（Th2），9型（Th9）和17型（Th17）特征，说明这些基础CAR T细胞亚型具有多样的免疫功能。 作者随后根据B细胞缺乏（BCA）的持续时间长短对患者分成了五组，发现较短的BCA持续时间与更高的ALL复发率相关。其中五名患者的BCA中位持续时间长达8.4年，表明CAR T细胞具有长期持久性。进一步聚类分析显示，长期持久组（BCA-L）的CAR T细胞记忆基因的表达量更高，而且细胞毒性、增殖和抑制标志物的表达量比其他组更低。这说明CAR T细胞的长期存活和保存的记忆状态跟较低的细胞活性相关。 图1:聚类分析结果和患者统计 接着，作者对APC刺激后的CAR T细胞进行聚类，进一步将这些细胞分成13个亚群。其中BCA-L组在簇0中显著占优（占所有细胞的33.8%），且富集记忆基因（CCR7，CD127）的表达，说明这些CAR T细胞在激活后有更强的中央记忆状态保持能力。此外在BCA-L和BCA-O组中，簇7的细胞表现出丰富的2型T细胞特征（如Il4、Il5、Il13和GATA3），这些特征在混合的CD4+和CD8+细胞中显现，表明2型T细胞功能的增强与CAR T细胞的持久性相关。 为验证以上结果，作者用细胞内流式观察到，BCA-L患者的CD4+和CD8+ CAR T细胞中2型细胞因子（IL-3、IL-4、IL-5、IL-13和IL-31）较其他组显著增加，多重分泌组学分析进一步证实BCA-L和BCA-O组的2型细胞因子分泌较高。结合scATAC-seq和scRNA-seq的单细胞多组学数据，作者还观察到在BCA-L组的CAR T细胞中，作为2型T细胞的关键调控因子GATA3和其他2型细胞因子的开放性显著增强，但1型调控因子中并未观察到显著差异。此外，敲除实验表明GATA3对于维持CAR T细胞的持久性至关重要。这一系列结果说明，在BCA-L和BCA-O组患者中观察到的长期治疗效果与输注的CAR T细胞中增强的2型功能有关，而这种功能的提高是由GATA3的上调所调控的。 图2:单细胞多组学聚类结果，以及GATA3在不同BCA分组患者中的可及性 为了探讨2型功能如何调节CAR T细胞以维持其持久性，作者基于scRNA-seq数据中的配体-受体（L-R）表达模式，分析了CAR T细胞间的细胞-细胞相互作用。结果显示，簇7的2型CAR T细胞主要与簇2细胞发生相互作用，后者负责细胞毒性，但其细胞因子产生减少，并表现出晚期分化的功能失调状态。体外实验和染色质可及性分析表明，IL-4能够促进2型标志物的重编程和功能提升，这说明2型细胞因子对于维持CAR T细胞的平衡和持久性至关重要。 图3:相关配体-受体（L-R）主导的细胞间相互作用 最后，作者用血清蛋白组学分析表明，长期缓解的BCA-L和BCA-O患者中2型细胞因子（尤其是IL-13）水平持续升高，表明2型细胞因子富集的免疫环境有助于CAR T细胞的持久性。在白血病小鼠模型中，2型高表达CAR T细胞显示出增强的肿瘤清除能力、扩增能力和强大的记忆反应，特别是在肿瘤复发后。这些细胞表现出较少的抑制标志物和较高的IFNγ水平，支持其持久活性。通过IL-4预处理或在制造过程中加入细胞因子增强2型低表达CAR T细胞的功能，显著提高了其在体外和体内的肿瘤控制和记忆保持能力。该方法能够改善增殖，减少衰竭，并提升治疗效果，表明2型增强有望延长CAR T细胞在ALL患者中的持久性和疗效。 综上，这篇论文研究了2型T细胞功能在CAR T细胞治疗儿童白血病中的长期持久性机制。通过多组学分析、细胞相互作用研究和体内实验，作者发现2型反应的增强，尤其是由GATA3调控的反应，有助于CAR T细胞的持久性和肿瘤控制。进一步研究表明，增强2型特征可以减少细胞功能失调并促进记忆状态，作者建议将2型细胞因子整合到CAR T细胞生产中，以延长治疗耐久性并拓宽其应用，为更强大、长期的癌症免疫疗法铺平道路。 撰文 责编 制作 排版 | Sheila   校对 | uu 延伸阅读 儿童T细胞急性淋巴细胞白血病的多组学分析 史上最大队列！儿童急性淋巴细胞白血病全基因组及基因表达图谱发表 单细胞技术鉴定对弥漫性大B细胞淋巴瘤有临床效果的CAR-T细胞亚群 *本文由深圳市拾玉儿童公益基金会“儿童肿瘤前沿”团队编译或约稿，文中图表均源引自文献原文。本文著作权归文章作者所有，欢迎个人转发分享，未经允许禁止转载，作者拥有所有法定权利，违者必究。如需转载，请留言或联系shiyu@curekids.cn。本文旨在分享儿童肿瘤科研前沿成果，不是治疗方案推荐。如需获得疾病治疗方案指导，请前往正规医院就诊。 ▼滑动查看更多▼ 原文摘要（Abstract） Despite a high response rate in chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy for acute lymphocytic leukaemia (ALL)1-3, approximately 50% of patients relapse within the first year4-6, representing an urgent question to address in the next stage of cellular immunotherapy. Here, to investigate the molecular determinants of ultralong CAR T cell persistence, we obtained a single-cell multi-omics atlas from 695,819 pre-infusion CAR T cells at the basal level or after CAR-specific stimulation from 82 paediatric patients with ALL enrolled in the first two CAR T ALL clinical trials and 6 healthy donors. We identified that elevated type 2 functionality in CAR T infusion products is significantly associated with patients maintaining a median B cell aplasia duration of 8.4 years. Analysis of ligand-receptor interactions revealed that type 2 cells regulate a dysfunctional subset to maintain whole-population homeostasis, and the addition of IL-4 during antigen-specific activation alleviates CAR T cell dysfunction while enhancing fitness at both transcriptomic and epigenomic levels. Serial proteomic profiling of sera after treatment revealed a higher level of circulating type 2 cytokines in 5-year or 8-year relapse-free responders. In a leukaemic mouse model, type 2high CAR T cell products demonstrated superior expansion and antitumour activity, particularly after leukaemia rechallenge. Restoring antitumour efficacy in type 2low CAR T cells was attainable by enhancing their type 2 functionality, either through incorporating IL-4 into the manufacturing process or by priming manufactured CAR T products with IL-4 before infusion. Our findings provide insights into the mediators of durable CAR T therapy response and suggest potential therapeutic strategies to sustain long-term remission by boosting type 2 functionality in CAR T cells. DOI: 10.1038/s41586-024-07762-w 👇点击此处，直达原文

点击上方DIA发布关注我们 地址：北京市大兴区庑殿路与吉百利路交叉口西南380米中科电商谷总部【旧宫镇政府东院】 课程概览 在药物研发和注册的征途中，了解不同专业的关键点以及相互衔接对做好注册策略至关重要。本课程邀请各个专业领域资深专家为您深入解读临床研究、非临床研究以及药学，知识产权以及市场准入等与药品开发及全生命周期密切相关的各个专业精髓，并剥茧抽丝，探讨不同领域与药品注册的关联和协同，确保您在药品注册策略制定时又更加宏观、全面、深度的视角。 课程日程 主持人 刁媛媛 DIA中国药品法规事务社区（RAC）工作组核心成员 第一三共（中国）注册副总监 12月6日 模块一：临床研究阶段 9:00- 9:30  课程概述 苏岭 博士 DIA全球Fellow 9:30- 10:30  早期临床开发的关注点及挑战 早期临床研究的定义及目的 I期临床研究的考量 IIa期临床研究的关注 中国参与全球早期临床研究的策略及关注点 陈清泉  强生创新制药强生免疫领域临床开发中国负责人 10:30- 11:30  抗肿瘤药物剂量优化及早期临床研发策略 FDA Project Optimus 出台背景以及产生的影响 早期研究要回答的深层问题 临床前到首次人体试验的考虑要点 早期试验对后续研究的指导 案例分享 陈锐 医学博士 北京协和医院临床药理研究中心I期主要研究者 11:30- 12:30  关键性临床试验的注册考量 关键性临床试验阶段的注册策略 与监管机构的沟通交流 药品通用技术文件（CTD）与审评时限 药品说明书讨论 案例分析 高辉  强生创新制药中国区注册事务部负责人 12:30-13:30 午餐 13:30- 14:30  临床开发计划制定过程中注册关注点 - 肿瘤 肿瘤新药开发的趋势与挑战 阐述肿瘤创新药开发的趋势，及目前面临的挑战 临床新药开发计划与决策  介绍肿瘤产品临床开发计划制定流程及其中关键决策点 肿瘤新药临床开发计划制定的关注点 肿瘤产品临床开发计划各模块内容及相应关注点 杨蕾  上海济煜医药科技有限公司临床医学副总经理 14:30- 15:30  临床开发计划制定过程中注册关注点-非肿瘤  临床阶段的中国法规要求 不同临床阶段的注册关注点及案例分享 CDP制定过程中注册部门的角色 跨部门沟通的挑战和经验分享 宁雅娟 雅培中国药品业务注册事务总监 模块二：非临床研究阶段 15:30- 16:30  新药研发中的非临床安全性评价 毒理学简介 不同类型药物（抗体/化药/ADC）在不同开发阶段非临床安全性评价的监管要求 FDA/CDE 非临床评价的差异性要求 不同治疗领域（肿瘤/非肿瘤）非临床安全性评价的监管要求 毒理数据如何提示临床安全性风险 王宛怡  百济神州（北京）生物科技有限公司 非临床安全性评价部副总监 16:30-17:30  创新化学药品开发过程中的DMPK考量 DMPK在药物研发过程中的作用及价值 化药和生物制品的DMPK研发的差异性 不同研发阶段监管机构对DMPK的差异性要求 不同监管机构对DMPK的差异性要求以及应对  案例分析 苏丹  百济神州（北京）生物科技有限公司 DMPK-BA 部高级研究经理 12月7日 模块三：药学研究阶段 09:00-10:00 细胞类生物制品在不同研发阶段的药学注册要求 细胞治疗类产品法规概述 IND申报阶段的药学要求 临床试验期间的药学主要挑战及经典案例分享 BLA申报时的生产体系建设策略 现场核查与注册检验 细胞治疗注册在后商业化阶段的新挑战 张长风  上药集团生物治疗 注册总监 10:00-11:00 ADC类生物制品在不同研发阶段的药学注册要求 法规和技术指导原则 ADCs药物申报IND药学审评要求 临床研究期间药学变更审评要点 ADC 药物BLA 药学审评要求 中美监管要求的主要差异 ADC药物的常见问题及案例分享 于鑫  映恩生物副总裁 11:00-12:00  抗体类生物制品全生命周期的药学注册要求解析及策略制定 临床试验申请的药学要求及临床验期间的变更管理 临床试验期间及上市申请前各类沟通交流会议的概述 上市申请的药学要求及中美申报差异 如何在申报NDA过程中应用ICH Q12的变更工具 注册现场核查和注册检验 上市后变更管理及案例分享 李薇  上海药明巨诺生物医药研发有限公司，注册负责人 12:00-13:00  午餐 模块四：医保及市场准入 13:00-14:00  市场准入策略 - RA与MA 中国创新药物准入的大环境与小环境 注册才是医保准入的第一步 医保准入与注册相关的典型二三例 来自准入团队的一点小建议 王进  北研中心 副主任 模块五：知识产权 14:00-15:00  医药生物领域的专利布局及争议解决热点问题探讨 生物技术领域专利布局热点聚焦 ——临床研发阶段的专利保护探索、ADC产品的专利申请与审查 药品专利纠纷早期解决机制（中国版专利链接）运行情况初探 ——专利链接制度原理、中国专利版链接的运行状况及热点问题 药品知识产权立法新动向 ——新药数据保护的立法现状、价值考量以及展望，药品专利期限延长制度原理及展望 闫珠君  北京育知律师事务所 执行主任 15:00-16:00  加餐 ：未来展望——AI在临床开发中的应用 AI与数字化技术概况 AI应用的场景 AI应用的风险和合规 AI应用案例分析 李高扬  羚研创新（北京）健康科技有限公司 创始人 课程亮点 全面覆盖：从非临床到临床，再到市场准入，全面覆盖药物研发的关键阶段。 专家解读：行业资深专家深入解析，提供实战经验和策略建议。 策略制定：学习如何在不同阶段制定有效的注册策略，以应对监管挑战。 案例分析：通过具体案例，理解注册要求在实际应用中的操作和影响。 适合对象 新药注册事务的专业人士 新药产品线管理/项目管理的专业人士 从事新药开发领域跨部门沟通的其他专业人士 讲者简介 （按照日程顺序） 陈清泉 博士 强生创新制药 强生免疫领域临床开发中国负责人 陈清泉，博士，毕业于中南大学湘雅医学院临床医学及药理学专业，并在意大利及美国作为药理学博士后工作3年。在多家不同的医疗器械及制药公司从事临床开发工作逾16年，现任职于强生免疫领域临床开发中国负责人，负责中国免疫治疗领域早期及晚期临床开发策略及支持上市。 陈锐 医学博士 北京协和医院临床药理研究中心I期主要研究者 陈锐，副教授，北京协和医院临床药理研究中心I期病房负责人。本科及医预阶段就读于清华大学生物系，北京协和医学院临床医学博士，英国曼彻斯特大学定量药理学硕士，并完成协和-罗氏临床药理学博士后项目。至今参与超过90项新药I期临床研究，担任PI 40余项，其中绝大多数为1类新药。主要研究方向为创新药的早期临床转化，涉及临床药理学、定量药理学和遗传药理学。目前被聘为北京协和医院伦理委员会委员、中国药理学会定量药理学专业委员会秘书长/常务委员、中国药理学会生化与分子药理学专业委员会委员、中华医学会临床药学分会青年委员等。参与药代药效、早期临床研发方面国家药监局多个指导原则的制定，参与撰写多个行业专家共识。 高辉 强生创新制药中国区注册事务部负责人 强生创新制药中国区注册事务部负责人，负责公司法规及注册事务工作。在制药行业拥有17年的法规及注册事务工作经验，包括多个治疗领域的新药研发和药品全生命周期管理，在生物制品研发、CMC及国际注册方面有着丰富的注册经验，致力于创新药的全球同步研发。曾负责肿瘤领域产品在亚太区的注册开发策略。 拥有药理学及国际药物工程管理硕士学位，中国执业药师，并获得美国医疗法规事务学会（RAC）专业认证。 杨蕾 博士 上海济煜医药科技有限公司临床医学副总经理 本/硕毕业于中山大学中山医学院临床医学/肿瘤学专业，博士毕业于南方医科大学肿瘤学专业。 副主任医师，9年三甲医院肿瘤临床诊疗及教学经验。 9年抗肿瘤新药临床研究及医学事务经验，主导和直接参与了50多个在中美不同开发阶段的临床项目，涵盖各肿瘤相关适应症，在单抗、双抗、ADC、RDC 和溶瘤病毒等新型抗肿瘤治疗产品开发领域均有丰富的实操经验。 宁雅娟 雅培中国药品业务 注册事务总监 现任雅培药品中国注册事务部负责人，负责公司现有进口药品及本地化生产的药品在中国境内的注册相关事宜，及新产品引进过程中的法规评估和注册策略制定。宁雅娟从事注册工作十八年，积累了丰富的药品注册实操经验，对法规有相对全面、深入的理解。加入雅培之前，她曾服务于诺和诺德、默沙东、诺华、三叶草生物等制药公司，负责过的产品主要涉及心血管、糖尿病、眼科、中枢神经、罕见病等各治疗领域的化药、生物类似药、疫苗等。 王宛怡 博士 百济神州（北京）生物科技有限公司 非临床安全性评价部副总监 王宛怡博士是美国毒理学会认证的毒理学家（DABT），在药物毒理学领域有超过10年的经验，曾担任毒理学专题负责人、建立GLP电生理实验室并管理hERG试验团队。现在百济神州非临床安全性评价部担任20多个小分子、生物制剂和细胞治疗等项目的毒理负责人。 苏丹 百济神州（北京）生物科技有限公司 高级研究经理 拥有丰富的创新药早期药代动力学研究（DMPK） 经验，负责的小分子创新药泽布替尼和帕米帕利已在美国和中国成功上市，在百济神州 DMPK部门任职7年，共承担了近40个大小分子项目的 DMPK 研究开发，成功支持了数十项临床试验申请；在加入 DMPK 部门之前，在百济神州体内药理学部门任职 4年，负责临床前体内体外药效学评价。现任职于 DMPK-BA 部门，高级研究经理。 张长风 博士 上药集团生物治疗 注册总监 张长风博士，深圳市“领航人才”，珠海市“珠海英才”，苏州市“姑苏人才”，南昌市“洪城人才”，宾大中国校友会副秘书长。师从“CART之父”Carl June院士，深度参与Kymriah（全球首款CART）等十余个产品在FDA的申报工作，回国后作为总负责人斩获国内首个基因敲除CART、首个多靶点联合抗体分泌CART等7个IND批件。张博士迄今已在Nature Medicine, Blood, JCI-insight等国际权威期刊发表多篇论文，并组织开展多项临床研究，治疗白血病、骨髓瘤等各类癌症患者1000余人。 于鑫 映恩生物副总裁 于鑫先生自 2021 年起担任映恩生物的药品注册事务负责人，他负责规划在中国、美国和其他地区的注册策略，并管理RA CMC。他毕业于沈阳药科大学，获得制药工程学士学位和药事管理硕士学位。项目管理专业认证（PMP®）。他拥有20年的制药行业经验，拥有多领域、不同视角（药监机构、跨国药企、CRO和初创药企）的药品研发和注册事务领域的良好履历。熟悉ICH指导原则、美国、中国和亚太地区国家的法规和注册要求。 李薇 上海药明巨诺生物科技有限公司 注册负责人 带领团队完成数十个单抗、双抗、融合蛋白及 ADC产品的中美欧 IND 申报，支持多个后期项目的上市申请，其中5个产品已在国内获批，1个即将提交NDA;支持药品生产许可证C证的申办、维护，支持MAH B证相关资料的准备;经历多次注册检验抽样;支持十多次注册现场核查、GMP 符合性检查、研制现场核查及许可检查、专项检查等事前沟通工作。与监管机构建立沟通良好沟通。获得中国药科大学药物分析学士和硕士学位，曾在上海市药检所、第一三共(中国)、汇伦生物、药明生物工作,在制药领域拥有近 20年的多元化工作经验,包括 CMC,注册事务和药政沟通等。 王进 北研中心副主任 中国卫生经济学会卫生技术经济评价专业委员会委员 中关村肾病血液净化创新联盟适宜技术评估与推广专业委员会委员 ICF（国际教练联合会）认证专业级个人领导力发展教练 毕业于白求恩医科大学和北京大学，先后就职于本土和外资企业、RDPAC行协协会、咨询和研究机构共近20年。研究和专业经历涵盖医学市场、数据洞察、管线发展、真实世界研究、卫生经济与政策研究、罕见病、公共卫生和慢病管理。从不同角度经历超过48个分子的准入上市研究工作，评估超过76个战略性BD项目，经历了自2000年之后的自费及报销的全链条准入相关专业领域。 闫珠君 北京育知律师事务所 执行主任 闫珠君，律师，专利代理师，前国家知识产权局专利局专利复审委员会审查员和条法司项目官员，具有17年的专利审查、复审、无效以及行政诉讼经验。 闫律师的主要服务领域：知识产权争议解决、专利布局、专利分析、尽职调查、商标争议解决、企业法律顾问等。处理了大量涉外专利无效宣告、专利侵权民事案件，为企业提供了大量专利布局、预警和侵权分析咨询报告，尤其擅长医药化工领域知识产权纠纷解决。 李高扬 羚研创新（北京）健康科技有限公司 创始人 李高扬从事临床试验15年，临床试验数字化应用方向，包括：数字健康技术，远程智能临床试验（DCT），统计分析，数据可视化和自动化，人工智能应用等。高扬负责和参与实施多项数字化临床试验。高扬主编和参与编写多部专业著作，包括《万物可视——临床研发数据可视化应用十大场景》《远程智能临床试验蓝皮书》《远程智能临床试验专家共识》，《远程智能临床试验》，《中国食品药品监管》药械监管科学创新技术研究专刊；《中医临床真实世界研究》和《智能无人系统产业发展报告》等。同时协助监管机构起草数字化相关技术指导原则，促进医药研发数字化化转型。） 课程组委会成员 主持人 刁媛媛 DIA中国药品法规事务社区（RAC）工作组核心成员  第一三共（中国）注册副总监 徐娜 DIA中国药品法规事务社区（RAC）工作组核心成员  思路迪医药企业战略发展部和药政事务部总监 高辉 DIA中国药品法规事务社区（RAC）工作组核心成员  强生创新制药中国注册事务部负责人 吴蕾 DIA中国药品法规事务社区（RAC）工作组核心成员  中国生物/正大创新 药政事务副总经理 王欣 DIA中国药品法规事务社区（RAC）工作组核心成员  百济神州注册副总监 金保廷 DIA中国药品法规事务社区（RAC）志愿者  萌蒂（中国）制药有限公司 药品注册专员 课程顾问委员 张磊 强生制药有限公司首席运营官 强生创新制药中央政务与市场准入代理负责人 吕玉真 罗氏 全球药品开发中国中心资深顾问 刘熠 上海济煜医药科技有限公司临床开发中心总经理 程龙 荣昌生物制药（烟台）股份有限公司 副总裁  在线注册  DIA药物研发注册策略及要求 高级研讨班 2024年12月6-7日，北京 地址：北京市大兴区庑殿路与吉百利路交叉口西南380米 中科电商谷总部【旧宫镇政府东院】 地点：一楼多功能厅 在线注册请长按识别左侧二维码，或点击文末“阅读原文” 席位有限，报名从速 特别提示：本次课程为RA能力提升课程——模块四。为了让您更全面地掌握注册申报的相关知识，我们建议您在参与本次模块四课程前，先通过线上学习以下模块： 模块一：美国FDA IND注册申报的要求 模块二：FDA NDA整体介绍 模块三：中国IND/NDA概述 模块的课程内容已经录制并上线，可通过DIA在线学习平台进行学习，为参与本次模块四课程做好充分的准备。 注册申报课程（中美） 模块一：美国FDA IND注册申报的要求 模块二：FDA NDA整体介绍 模块三：中国IND/NDA概述 扫描右侧二维码，了解课程详情 联系 DIA 注册咨询：Sunny NI Tel.: +86 021- 6418 5933 Email.: junting.ni@diaglobal.org 点击了解详情 关于DIA DIA是一个全球化、跨学科的国际性学术平台，在中立的环境中，融合医药研发领域全行业的意见领袖，探讨当前研发的技术问题，提升专业能力，以及催化行业共识，在全球医药研发领域享有很高的声誉。 扫码关注我们 微信号｜DIA发布 长按识别左侧二维码即可关注 我们努力为你提供有内容的内容。 点击阅读原文，在线注册