Optic Atrophy

声明：因水平有限，错误不可避免，或有些信息非最及时，欢迎留言指出。本文仅作医疗健康相关药物介绍，非治疗方案推荐（若涉及）;本文不构成任何投资建议。2025年4月29日，Abeona Therapeutics宣布美国FDA已批准其基因疗法ZEVASKYN™（prademagene zamikerace，pz-cel）上市，用于治疗隐性营养不良型大疱性表皮松解症（RDEB）成人及儿童患者的伤口。RDEB目前还无法治愈，Zevaskyn是首款获批用于治疗RDEB的基于细胞的基因疗法。ZEVASKYN 预计将于2025年第三季度通过 ZEVASKYN 合格治疗中心 (QTC) 开始供应。合格治疗中心是全美公认的具有细胞和基因治疗经验的表皮松解症治疗中心，以确保全国的患者都能获得这种重要的治疗。pz-cel的上市之路并非一帆风顺。2023年11月，Abeona Therapeutics宣布美国FDA接受pz-cel的生物制品许可申请（BLA），并授予其优先审评资格。2024年4月22日，FDA拒绝了该疗法上市，并要求其提供治疗的有效信息，以及满足额外的CMC要求才能批准申请。2024年10月29日，Abeona宣布重新向FDA提交pz-cel的BLA申请。Pz-cel是Abeona开发的一种自体COL7A1基因校正表皮片，旨在将功能性、产生VII型胶原蛋白的COL7A1基因递送到患者自身的皮肤细胞中，并通过使用逆转录病毒载体稳定整合到靶细胞的DNA中，实现长期基因表达。隐性营养不良型大疱性表皮松解症 (RDEB) 是一种罕见的结缔组织疾病，目前尚无治愈方法。其特征是严重的皮肤伤口，引起疼痛，并可能导致全身并发症，影响患者寿命和生活质量。RDEB 患者的 COL7A1 基因双拷贝均存在缺陷，导致他们无法产生功能性 VII 型胶原蛋白，而 VII 型胶原蛋白是连接皮肤真皮层和表皮层所必需的。此次pz-cel的获批主要基于关键3期VIITAL研究以及另一项1/2a期研究的临床疗效和安全性数据。两项研究均显示，在大型和慢性伤口上单次使用pz-cel治疗可实现持续伤口愈合和疼痛减轻。该疗法在VIITAL试验中达到主要终点，81%接受pz-cel治疗的伤口显示出≥50%的愈合程度，对照组这一数值只有16%。并且与对照伤口相比，pz-cel治疗的伤口疼痛严重程度减轻更为显著。Abeona首席执行官Vish Seshadri博士表示：“ZEVASKYN获批代表着 RDEB 治疗领域的关键时刻，它回应了那些饱受这种毁灭性疾病临床、经济和人文影响的患者的呼唤。我们从 RDEB 患者群体了解到，他们一直渴望获得可靠的 RDEB 伤口治疗方案，尤其是那些慢性且易感染的伤口。ZEVASKYN现在只需一次手术，就能为 RDEB 患者带来伤口愈合和疼痛减轻的机会，即使是最严重的伤口，我们也从关键的 3 期临床研究结果中获得了证明。”公司管线里还有6款在研药物：ABO-503：用于治疗 X 连锁视网膜劈裂症（XLRS），目前处于临床前阶段。ABO-504：用于治疗斯特加德特病（Stargardt Disease），目前处于临床前阶段。ABO-505：用于治疗常染色体显性视神经萎缩（ADOA），目前处于临床前阶段。UX111：用于治疗 Sanfilippo 综合征 A 型（MPS IIIA），目前处于 1/2 期临床试验。TSHA-102 和 TSHA-118：分别用于治疗婴儿巴顿病（CLN1 疾病）等罕见疾病，目前处于 1/2 期临床试验。公司管线参考资料：公司官网

引言我们身体的每一个细胞都像一座永不停歇的能量工厂，而在这座工厂的核心地带，存在着一群被称为线粒体 (mitochondria) 的微小细胞器。它们拥有着自己独特的遗传密码——线粒体DNA (mtDNA)，虽然只占细胞基因组的极小一部分，却肩负着为细胞提供能量、维持生命活力的重任。一旦这套精密的能量系统出现故障，例如线粒体DNA上的“字母”发生了错误，就可能引发一系列严重的疾病，累及肌肉、神经、心脏等多个器官，给患者带来无尽的痛苦。长期以来，研究人员一直在探索如何才能精准地修复这些“错误的字母”。基因编辑技术的出现，为我们带来了前所未有的希望。其中，一种名为TALEDs (Transcription activator-like effector-linked deaminases) 的新兴技术，因其能够特异性地编辑线粒体DNA而备受瞩目。然而，这种“精准手术刀”在线粒体内部究竟是如何工作的？我们又该如何进一步提升它的效率和安全性，使其更好地服务于人类健康呢？3月25日一项发表在《Nature Biotechnology》上的重磅研究“Leveraging base excision repair for efficient adenine base editing of mitochondrial DNA”，为我们揭开了TALEDs在线粒体中进行基因编辑的神秘面纱。这项研究不仅首次阐明了TALEDs依赖于细胞自身的“修复机制”——碱基切除修复 (base excision repair, BER) 通路，还创新性地开发出了性能更强大的升级版TALEDs (eTALEDs)。这些新型“超级编辑器”展现出了更高的编辑效率和更优的安全性，为未来治疗线粒体疾病带来了新的曙光。线粒体拥有自己独立的遗传物质，即线粒体DNA (mtDNA)。与我们细胞核中的DNA不同，线粒体DNA是一个环状的双链分子，并且数量众多，每个线粒体中可能包含数百甚至数千个拷贝。虽然线粒体DNA仅占细胞总基因组的一小部分，但其编码的基因对于线粒体的正常功能至关重要。一旦线粒体DNA发生突变或损伤，就可能导致线粒体功能障碍，进而引发一系列被称为线粒体疾病的遗传性疾病。线粒体疾病的临床表现多种多样，可以影响身体的任何器官和组织，尤其是一些对能量需求较高的器官，如肌肉、神经系统、心脏和眼睛。患者可能出现肌无力、运动障碍、神经退行性疾病、心肌病、视力下降、听力障碍、糖尿病等多种症状。这些疾病往往病情复杂，诊断困难，且目前缺乏有效的治疗方法，给患者及其家庭带来了沉重的负担。因此，开发能够精准修复线粒体DNA缺陷的技术，对于治疗这些疾病具有重要的意义。基因编辑新纪元：TALEDs精准“狙击”线粒体DNA 随着基因编辑技术的飞速发展，研究人员看到了治疗线粒体疾病的新曙光。近年来，一种新兴的基因编辑工具——转录激活因子样效应子连接的脱氨酶 (Transcription activator-like effector-linked deaminase, TALED) 技术，因其能够特异性地编辑线粒体DNA而备受关注。传统的基因编辑工具，如CRISPR-Cas9系统，虽然在核DNA编辑方面取得了巨大的成功，但在应用于线粒体DNA编辑时面临着诸多挑战，例如难以将Cas9蛋白有效地递送到线粒体内部，以及可能造成的脱靶效应等。而TALEDs技术则巧妙地克服了这些难题。TALEDs由两部分组成：一部分是能够特异性识别目标DNA序列的转录激活因子样效应子 (Transcription activator-like effector, TALE)，另一部分是具有碱基编辑功能的脱氨酶。通过将这两部分巧妙地连接在一起，TALEDs能够像一个精准的“导弹”，被引导至特定的线粒体DNA序列，并对其进行精确的修改。TALEDs的核心优势在于其能够实现碱基编辑，即在不切断DNA双链的情况下，对单个碱基进行精确的转换。目前，TALEDs主要用于实现腺嘌呤（A）到鸟嘌呤（G）的转换，这种类型的编辑对于修复许多与线粒体疾病相关的突变至关重要。例如，Leber遗传性视神经病变 (Leber's hereditary optic neuropathy, LHON) 等疾病就与线粒体DNA中特定位点的A到G突变有关。因此，开发高效且安全的TALEDs技术，对于治疗这类疾病具有巨大的潜力。解密TALEDs的“神操作”：DddA与BER的巧妙配合尽管TALEDs在线粒体DNA编辑领域展现出了巨大的潜力，但研究人员对其具体的工作机制仍存在一些疑问。为了更深入地理解TALEDs是如何在线粒体中实现精准的碱基编辑的，并为进一步优化该技术提供理论指导，研究团队进行了一项深入细致的研究。他们的研究发现，TALEDs介导的腺嘌呤（A）到鸟嘌呤（G）的编辑过程，并非TALEDs中的腺嘌呤脱氨酶 (adenosine deaminase) TadA8e直接作用的结果，而是巧妙地利用了细胞自身的一套DNA修复机制，即碱基切除修复 (base excision repair, BER) 通路。这个发现为我们揭示了TALEDs在线粒体中“精准替换”错误“字母”的分子奥秘。具体来说，TALEDs的工作流程是这样的：首先，TALEDs中的双链DNA特异性胞嘧啶脱氨酶 (double-stranded DNA-specific cytidine deaminase, DddA) 会靶向线粒体DNA双链中的特定胞嘧啶（C），并将其脱氨转化为尿嘧啶（U）。这个U碱基的出现，就像在线粒体DNA上标记了一个“错误”，从而触发了细胞的BER通路。TadA8e的“神来之笔”：单链DNA上的精准A-to-G编辑 一旦BER通路被激活，细胞内的尿嘧啶DNA糖苷酶 (uracil DNA glycosylase) 就会识别并切除这个错误的U碱基，从而在线粒体DNA链上产生一个单链的缺口 (single-stranded DNA region, ssDNA)。这个单链区域的形成至关重要，因为它为TALEDs中的关键酶——TadA8e (adenosine deaminase) 创造了发挥作用的“舞台”。TadA8e是一种单链DNA特异性的腺嘌呤脱氨酶，它的“特长”是将单链DNA中的腺嘌呤（A）脱氨转化为次黄嘌呤（I）。在正常的DNA复制过程中，次黄嘌呤（I）会被细胞的复制机制错误地识别为鸟嘌呤（G），从而最终实现了从最初的A到G的碱基转换。因此，整个编辑过程可以被形象地比喻为一场精心策划的“接力赛”：DddA首先在线粒体DNA上“制造”一个临时的“错误”（C到U的转换），BER通路中的尿嘧啶DNA糖苷酶识别并清除了这个“错误”，留下了单链的“空位”，最后，TadA8e抓住这个机会，在这个单链区域将目标腺嘌呤（A）转换为次黄嘌呤（I），最终在DNA复制后变成鸟嘌呤（G）。这项研究首次清晰地阐明了TALEDs在线粒体中进行碱基编辑的详细分子机制，为我们理解和优化这项技术奠定了坚实的基础。性能全面升级：新型eTALEDs如何实现“超进化”？ 既然我们已经深入了解了TALEDs在线粒体中的工作原理，那么如何才能进一步提升其编辑效率和安全性，使其更好地应用于疾病治疗呢？研究团队并没有满足于已有的发现，他们巧妙地利用对TALEDs工作机制的新认知，开发出了一系列性能更强大的增强型TALEDs (enhanced TALEDs, eTALEDs)。为了提高起始步骤的效率，研究人员将TALEDs中原有的DddA酶替换成了一种活性更高的变体，称为DddA6。这种替换就像给“制造错误信号”的环节配备了一个更强劲的引擎，能够更快、更有效地将胞嘧啶转化为尿嘧啶，从而加速了后续BER通路的启动。更具创新性的是，研究团队还尝试将人源的尿嘧啶DNA糖苷酶 (human uracil DNA glycosylase) 直接融合到TadA8e酶上。这种巧妙的设计就像给TadA8e配备了一个“精准导航系统”，使其能够更快速、更准确地找到并切除U碱基，从而进一步提高了A到G的编辑效率。他们将这些经过精心改造的TALEDs命名为eTALED6s。为了进一步提升TALEDs的性能，研究人员还对TadA8e酶本身进行了工程改造，创造出了更高级的版本，称为eTALED6Rs。实验结果显示，与最初的TALEDs相比，这些新型的eTALEDs不仅在目标位点的编辑效率有了显著的提升，而且还展现出了更高的靶向性和更低的脱靶效应。这意味着它们能够更精准地修改目标基因，同时最大限度地减少对其他非目标基因的潜在影响，从而提高了基因编辑的安全性。实验数据硬核支撑：eTALEDs展现卓越的编辑效率与安全性 为了充分验证这些新型eTALEDs的性能，研究团队进行了严谨细致的实验。他们选择线粒体DNA中的一个特定基因——编码NADH脱氢酶亚基1 (NADH dehydrogenase subunit 1, ND1) 的基因作为研究目标，并在该基因的特定位点进行了A到G的编辑测试。通过对不同版本的TALEDs的编辑效率进行对比分析，他们获得了令人信服的实验数据。实验结果清晰地表明，与最初的sTALED相比，新型的eTALED6s和eTALED6Rs在目标ND1基因位点的A到G编辑频率有了显著的提高。通过热图 (heatmaps) 的可视化分析，可以清晰地看到，使用eTALED6s和eTALED6Rs处理的细胞，其目标位点的A到G编辑比例明显高于使用原始sTALED处理的细胞。这充分证明了新型eTALEDs在提高线粒体基因编辑效率方面的强大优势。与此同时，研究人员还对这些新型编辑器的基因组脱靶效应进行了全面的评估。他们通过对细胞核基因组进行全基因组测序 (whole-genome sequencing) 分析，仔细寻找可能由eTALED6s和eTALED6Rs引起的非目标突变。分析结果显示，与原始的sTALED相比，新型eTALEDs引起的核基因组脱靶突变数量并没有显著增加，这表明它们具有良好的基因组特异性，能够更安全地应用于基因编辑治疗。此外，研究团队还通过细胞活力检测 (MTS assay) 等实验方法，评估了这些新型编辑器对细胞的毒性。实验结果表明，在进行线粒体基因编辑后，使用新型eTALEDs处理的细胞仍然保持着较高的活力，这表明这些编辑器对细胞的损伤较小，具有良好的生物安全性。这些实验数据有力地证明了新型eTALEDs在提高线粒体基因编辑效率和安全性的巨大潜力，为未来的临床应用奠定了坚实的基础。线粒体基因编辑技术将如何重塑医疗格局？这项研究的突破性进展，不仅极大地深化了我们对线粒体基因编辑分子机制的理解，更为开发更高效、更安全的线粒体疾病治疗方法开辟了全新的道路。我们可以想象，在不久的将来，通过利用这些精准的基因编辑工具，我们将能够像修复电脑程序中的错误代码一样，精确地修复线粒体DNA中的缺陷，从而为那些曾经被认为无法治愈的线粒体疾病患者带来真正的希望。虽然这项技术目前仍处于研究阶段，但其巨大的潜力已经开始显现。随着未来研究的不断深入和技术的持续完善，我们有理由相信，线粒体基因编辑技术将在未来的医疗领域发挥越来越重要的作用，甚至可能引发一场革命性的变革。它不仅有望为众多的线粒体疾病患者带来福音，还有可能在延缓衰老、治疗癌症等其他涉及线粒体功能异常的疾病领域发挥重要的作用。让我们共同期待着这项充满希望的技术，在未来能够为人类健康做出更大的贡献！参考文献Fan Y, Xu W, Gao BQ, Qin H, Wu X, Wei J, Ni Q, Zhou L, Xiang J, Wu J, Yang B, Yang L, Chen J. Leveraging base excision repair for efficient adenine base editing of mitochondrial DNA. Nat Biotechnol. 2025 Mar 25. doi: 10.1038/s41587-025-02608-w. Epub ahead of print. PMID: 40133517.责编|探索君排版|探索君转载请注明来源于【生物探索】声明：本文仅用于分享，不代表平台立场，如涉及版权等问题，请尽快联系我们，我们第一时间更正，谢谢！End往期精选围观Science | 你每天吃的食用油，可能正在悄悄喂养癌细胞热文Nature Methods | 癌症治疗大翻盘：长读长测序揭开73%漏诊的致命靶点热文Nature | 颠覆百年认知！肝脏"纤维化元凶"竟是代谢再生总指挥热文Science | 心脏发育暗藏的"生物光缆"如何颠覆医学认知？热文Nature | 线粒体的"能量之门"被破解：研究人员首次看清代谢引擎的分子开关

2025年3月25日，国际学术期刊Nature Biotechnology杂志在线发表了正序生物科学创始人、上海科技大学生命科学与技术学院的陈佳教授科研团队的研究成果“Leveraging base excision repair for efficient adenine base editing of mitochondrial DNA”。该研究揭示了线粒体DNA腺嘌呤碱基编辑器TALEDs的工作机制，并开发出一系列增强型工具——eTALED6s，显著提升了编辑效率与精准度，为线粒体疾病治疗提供了新工具。 ▲ Nature Biotechnology发文 线粒体作为细胞的“能量工厂”，在产生三磷酸腺苷（ATP）中起着至关重要的作用。线粒体拥有自己独立的DNA（线粒体DNA，mtDNA），它编码线粒体功能所需的特定基因。与核DNA相比，由于在氧化磷酸化过程中会产生大量的活性氧，mtDNA更容易发生突变。其中大多数突变都是碱基替换，会导致各种线粒体遗传性疾病，如Leber遗传性视神经病变（LHON）、Leigh综合征和线粒体脑肌病、乳酸酸中毒和中风样发作（MELAS）等。 在已知疾病相关的碱基替换中，超过40%是G-to-A/C-to-T突变，可通过A-to-G碱基编辑恢复。尽管基于CRISPR的碱基编辑系统已被广泛用于核基因组DNA中，但由于引导RNA（gRNA）难以递送至线粒体，尚未有效应用于mtDNA中。近期，转录激活因子样效应物（TALE）连接的脱氨酶（TALEDs）被报道，包括TALE阵列、双链DNA（dsDNA）特异性胞苷脱氨酶（DddA）和单链DNA特异性腺苷脱氨酶（TadA8e），实现了线粒体DNA的A-to-G编辑。然而，与mtDNA中DddA介导的C-to-T编辑不同，TALEDs实现A-to-G编辑的详细机制尚未完全清楚。 正序生物科学创始人陈佳教授科研团队长期专注于DNA修复研究、碱基编辑等工具的开发，在这项最新的研究中，科研团队通过一系列精巧实验，解开了TALEDs实现A-to-G编辑的工作机制，同时开发出了升级版的碱基编辑器——eTALED6s。 首先，科研团队通过构建多个BER相关基因的敲除细胞株，结合体外脱氨实验，发现TALEDs并非直接在双链DNA上进行A-to-G编辑，而是依赖DddA诱导C-to-U的脱氨反应，触发线粒体碱基切除修复（BER）过程。 TALED中的DddA首先介导了C-to-U的脱氨，体内的尿嘧啶糖苷酶会进一步切除所产生的尿嘧啶（U），形成碱基缺乏（AP）位点，含有AP位点的DNA单链被APE1催化切割或自发断裂，产生DNA单链断裂（SSB）。SSB被核酸外切酶hMGME1进一步加工形成单链DNA（ssDNA），TALED中的TadA8e以ssDNA为底物介导A-to-I的脱氨反应，并在随后的修复过程中完成A-to-G的编辑（图1）。 图1：TALED工作机制示意图 然后，科研团队利用BER开发了一系列增强型TALEDs (eTALED6s)，显著提高了TALEDs在靶向位点处的编辑效率。 通过对腺嘌呤脱氨酶TadA8e进行工程化改造，使得TALEDs在转录组水平上的脱靶突变显著降低，同时还缩小了编辑窗口，减少了旁观者效应，显著提高了编辑产物纯度。科研团队还使用esTALED6和工程化的esTALED6R在线粒体基因组中模拟了与Leigh综合征和MELAS相关的致病突变m.A13514G（图2），通过测量氧耗率（OCR），证实eTALEDs成功诱导了预期的线粒体功能异常。 图2：sTALED、esTALED6和esTALED6R和在线粒体基因组m.13514位点处介导的编辑效率（上），编辑产物纯度（中）以及转录组脱靶数量（下） 这项研究不仅填补了TALED分子机制研究的空白，还在分子机制研究的基础上进一步构建了一系列精准、高效、低脱靶的新型线粒体腺嘌呤碱基编辑工具，使其在线粒体疾病模型构建、遗传修复和相关基础研究中具有广泛的应用前景。 Nature Biotechnology论文链接： https://www-nature-com.libproxy1.nus.edu.sg/articles/s41587-025-02608-w 转载自：上科大生命学院公众号