DAAO

近日，JACS期刊上发表了一篇名为“Dual-Action-Only PROTACs”的文章。文章标题该研究致力于解决PROTAC类药物在高效降解靶蛋白过程中，因缺乏细胞特异性而引发的脱靶毒性问题。目前，多数可激活PROTAC策略主要依赖单一病理刺激，然而这仍存在在非靶组织中被激活的风险。为了提高药物的选择性，该研究创新性地提出了一种“双激活门控”策略，即只有同时存在两个肿瘤相关刺激——低氧环境和组织蛋白酶L（Cath-L）活性时，才能激活PROTAC的功能。这一巧妙设计充分利用了肿瘤微环境中低氧与Cath-L共存的独特特性，从而实现更加精准的蛋白降解，显著提升了靶向治疗的安全性和有效性。双激活门控DAO-PROTAC的作用机制示意简图该研究的核心设计是开发一种具有“AND逻辑门”特性的双激活专属PROTAC（DAO-PROTAC）分子，通过双重封闭策略显著提升靶向蛋白降解剂的选择性和安全性。作者巧妙地设计了一种结构上同时封闭E3连接酶配体和靶蛋白配体的PROTAC分子。具体而言，该分子分别采用对低氧敏感的4-硝基苄基和对组织蛋白酶L（Cath-L）响应的ε-乙酰化N-Boc-赖氨酸基团进行修饰。只有当低氧环境和Cath-L活性这两种病理相关刺激同时存在于细胞内时，才会分别触发两个自我脱保护反应，使分子恢复为活性结构，从而启动靶蛋白的泛素化与降解过程。为了验证这一设计的通用性，作者成功设计了两个代表性分子：DAO-dBET1和DAO-THAL-SNS-032，并通过实验验证了其有效性。验证DAO策略的有效性作者以BRD4降解剂dBET1为模型，构建了其双封闭版本DAO-dBET1。在MDA-MB-231乳腺癌细胞的实验中，研究发现，当同时施加CoCl₂（用于模拟低氧环境）和高表达Cath-L的条件时，DAO-dBET1能够高效降解BRD4，其半数降解浓度（DC₅₀）为277 nM，与原始dBET1的降解效率（DC₅₀=158 nM）相当。在对照实验中，若缺少任一激活条件，DAO-dBET1均无法引起有效的降解，且未诱导明显的细胞凋亡或毒性反应。流式细胞术检测结果显示，在双刺激条件下，细胞凋亡比例接近dBET1（52%vs.59%），而在无刺激条件下，凋亡比例仅为约9%。这一结果充分验证了DAO策略能够精准响应特定病理环境，显著提升药物的特异性，减少对非靶细胞的影响，为PROTAC药物的设计提供了一条更为安全的路径。验证单一刺激仍具有部分细胞毒性（DAO设计的必要性）为了深入探究DAO设计的必要性，作者分别合成了两种单刺激响应的中间体——Hyp-dBET1（仅对低氧响应）和Cath-L-dBET1（仅对Cath-L响应），以模拟DAO-dBET1在单一条件下的部分脱保护状态。研究结果显示，这些中间体即使在未完全激活的状态下，仍表现出一定程度的生物活性。例如，Hyp-dBET1在低氧条件下能够显著诱导BRD4的降解，并降低c-Myc的表达水平；而Cath-L-dBET1在高Cath-L活性的环境中则会影响ZFP-91的水平。这两种中间体均能诱导细胞凋亡，表现为caspase 3/7活性的显著上升。此外，Hyp-dBET1和Cath-L-dBET1的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为3.4 μM和2.8 μM，与JQ1和thalidomide这两种原药的活性水平相当。这一结果表明，仅单侧封闭的PROTAC在特定条件下仍可能释放一个活性端，从而产生“部分激活”效应，进而引发非特异性细胞毒性。因此，完全的双重封闭设计是降低脱靶毒性、确保药物安全性的关键所在。验证对正常细胞的安全性为了验证DAO-PROTAC在正常细胞中的安全性，作者选择了Cath-L表达水平较低的人类肾细胞HEK-293作为模型。实验中，通过CoCl₂处理模拟肿瘤缺氧环境，并同步检测DAO-dBET1在该环境中的降解能力与毒性表现。尽管低氧条件成功诱导了HIF-1α的表达（表明低氧响应元件已被激活），但由于Cath-L表达不足，DAO-dBET1无法完成双重脱保护。因此，BRD4几乎不被降解，且ZFP-91和c-Myc等下游蛋白的表达也未出现显著变化。细胞存活率保持在较高水平，凋亡率与对照组相近，这表明DAO-dBET1在健康组织中基本保持惰性。这一结果凸显了“AND门控”设计的高选择性，有效避免了在单一刺激触发下可能引发的“假激活”或非靶向伤害。这种设计保障了DAO-PROTAC在正常细胞环境中的低毒性和安全性，是其向临床转化的重要优势。验证DAO策略通用性为了验证DAO策略的通用性，作者将其应用扩展至另一个PROTAC分子THAL-SNS-032，该分子靶向癌症中关键的转录调控因子CDK9。在构建的DAO-THAL-SNS-032中，虽然保留了双封闭策略，但对低氧与Cath-L响应基团在分子两端的分布进行了调整：低氧响应基团封闭了E3连接酶结合端（thalidomide），而Cath-L响应基团则修饰了CDK9配体（SNS-032）。在MDA-MB-231细胞中，DAO-THAL-SNS-032在双重刺激条件下实现了高效的CDK9降解（DC₅₀=265 nM），与未封闭版本（172 nM）相当，同时表现出强烈的细胞毒性与凋亡效应。相比之下，在单刺激或无刺激条件下，几乎观察不到降解和毒性作用。免疫印迹实验进一步显示，DAO-THAL-SNS-032成功下调了CDK9下游蛋白MCL-1，从而验证了其靶向功能。这一结果表明，DAO策略可适用于不同的蛋白靶标，具有高度的模块化和广泛的适用性，是一种具有药物开发潜力的通用设计框架。该文提出并验证了一种新型“双激活专属PROTAC（DAO-PROTAC）”策略，通过引入可响应低氧和组织蛋白酶L（Cath-L）的双重触发结构，实现了对靶向蛋白降解剂的高选择性调控。作者以BRD4靶向PROTAC dBET1为模型，构建了其双封闭版本DAO-dBET1，并系统验证了其在两种刺激共存时的高效活化能力，以及在单刺激或无刺激条件下的显著惰性。此外，研究还指出，单侧脱保护中间体仍可能引发一定程度的细胞毒性，从而强调了双重门控设计的必要性。DAO-PROTAC在健康细胞中保持低活性，其安全性优于传统或单封闭PROTAC。进一步地，作者成功将该策略扩展至另一个靶点CDK9，验证了该方法的通用性和模块化特征。总体而言，该研究为提升PROTAC类药物的肿瘤选择性和治疗安全性提供了一种有效的新思路和模块化设计平台。点击下方阅读原文获取文章来源欢迎感兴趣的朋友进群讨论，群二维码如下：推文用于传递知识，如因版权等有疑问，请于本文刊发30日内联系医药速览。原创内容未经授权，禁止转载至其他平台。有问题可发邮件至yong_wang@pku.edu.cn获取更多信息。©2021 医药速览 保留所有权利往期链接“小小疫苗”养成记 | 医药公司管线盘点 人人学懂免疫学| 人人学懂免疫学（语音版）综述文章解读 | 文献略读 | 医学科普|医药前沿笔记PROTAC技术| 抗体药物| 抗体药物偶联-ADC核酸疫苗 | CAR技术| 化学生物学温馨提示医药速览公众号目前已经有近12个交流群（好学，有趣且奔波于医药圈人才聚集于此）。进群请扫描上方二维码，备注“姓名/昵称-企业/高校-具体研究领域/专业”，此群仅为科研交流群，非诚勿扰。简单操作即可星标⭐️医药速览，第一时间收到我们的推送①点击标题下方“医药速览”  ②至右上角“...”  ③点击“设为星标

近期全球知名《BMC胃肠病学》杂志报道的一项新研究表明， 益生菌与免疫检查点抑制剂、化疗联合使用，能显著改善转移性结直肠癌（mCRC）患者的消化健康、免疫反应及总体预后。 该研究还指出， 益生菌疗法可作为癌症治疗策略的重要补充，有助于提高患者生存率，减少治疗相关并发症。 ▲截图源自“BMC” 一、结直肠癌的治疗困境与转机 结直肠癌作为一种五年生存率相对较低的恶性肿瘤，严重威胁着人类健康。目前，中国在结直肠癌的发病率和死亡率方面均位列世界第三，这一严峻形势不容忽视。对于高危人群而言，早期诊断和早期治疗是降低结直肠癌患病率的关键举措，能够有效改善患者的预后情况。 当病情发展到转移性结直肠癌（mCRC）阶段，患者的治疗面临着更多挑战。在靶向治疗中，由于药物种类繁多，副作用表现各不相同，但腹泻、肝酶升高以及心脏毒性等较为常见。而免疫治疗则为癌症治疗开辟了新的路径，它通过精准刺激或抑制人体免疫系统，在高效清除肿瘤细胞的同时，将对正常组织的影响降至最低。当前，结直肠癌的免疫治疗手段主要涵盖免疫检查点抑制剂（ICI）、肿瘤疫苗以及过继性 T 细胞疗法。 二、结直肠癌现阶段的治疗困境 在结直肠癌的发展和治疗过程中，诸多因素会对肠道健康产生不良影响。饮食结构的改变、肿瘤的不断恶化、消化环境的持续变差以及各类治疗干预措施，常常会导致肠粘膜出现缺血缺氧的状况。 比如化疗，虽然它在杀伤肿瘤细胞方面发挥着重要作用，但同时也会对患者肠道上皮细胞造成损伤，并且其毒性作用会抑制相关炎症细胞，进而影响机体的免疫力。 此外，结直肠癌患者在手术治疗前后接受广谱抗生素治疗，会导致泻药作用相对减弱，引发肠道损伤。 这一系列问题会进一步引发肠道屏障受损、胃肠功能障碍等，使得人体极易被致病菌定植，最终引发肠道感染和腹泻等并发症。结直肠癌标准治疗过程中存在的高发性和副作用问题，寻找有效的解决方案来减少这些并发症就显得尤为迫切了。 三、益生菌为结直肠癌治疗带来转机 近期研究表明，将益生菌作为辅助治疗策略，对于维持肠道菌群平衡、增强肠道免疫力以及减少癌症治疗相关的胃肠道副作用具有显著的积极作用，为结直肠癌的综合治疗提供了新的思路和方向。 首先，益生菌在改善患者健康状况方面具有独特优势。它能够调节微生态平衡，直接补充患者因化疗和手术而缺失的生理菌群，从而维持肠道微生态的稳定和肠道屏障的正常功能。同时，肠道菌群在结直肠癌的预防和治疗领域逐渐崭露头角，成为研究的新热点。 从作用机制来看，益生菌能够促进受损上皮细胞的修复，保障肠黏膜的完整性。肠道益生菌不仅可以促进消化液的正常分泌，还能产生过氧化氢、细菌素、防御素等抑菌物质，强化化学屏障，抑制致病菌的定植。此外，像乳酸杆菌、双歧杆菌等厌氧菌，能够与黏膜上的特异受体紧密结合，形成稳固的生物屏障和强大的抗定植能力，有效抵御细菌的入侵。 四、益生菌显著提升转移性结直肠癌生存率及生活质量、降低化疗相关并发症 《BMC胃肠病学》杂志报道的这项研究，共入组96例转移性结直肠癌患者，将其分为两组，即 对照组（n=48，仅接受免疫检查点抑制剂或单独化疗） 、 干预组（n=48，接受免疫检查点抑制剂或化疗，联合益生菌治疗） 。对照组患者年龄分布为33至58岁，平均年龄45.83±4.23岁，平均体重为51.94±8.17公斤。干预组患者年龄分布为34至59岁，平均年龄56.25±4.16岁，平均体重为52.06±8.34公斤。结果显示如下： 1、 生存率 ：治疗6个月生存率分别为 97.92%（益生菌干预组，47例） vs 93.75%（对照组，45例） 。治疗1年生存率分别为 89.58%（益生菌干预组，43例） vs 83.33%（对照组，40例） 。治疗2年生存率分别为 83.33%（益生菌干预组，40例） vs 75.00%（对照组，36例） 。显然，在为期两年的随访期内， 益生菌组患者在治疗6个月、1年和2年后生存率，均高于对照组患者 。 ▼两组生存率对比图 ▲图源“BMC”，版权归原作者所有，如无意中侵犯了知识产权，请联系我们删除 2、 肠道健康 ：该研究还评估了益生菌对肠道健康和免疫功能的影响。 服用益生菌组患者的肠道有益菌（如双歧杆菌和乳酸杆菌）含量明显增加 ，其含量明显高于治疗前及对照组治疗后（P < 0.05）； 肠球菌和大肠杆菌等有害菌含量则明显减少 。 3、 免疫功能 ：从免疫角度来看， 服用益生菌的患者CD3+和CD4+T细胞水平高于对照组 （P<0.05）， CD4+/CD8+比例也更高，表明免疫反应增强 。 4、 肠道屏障 ：治疗前，肠道屏障功能无明显差异（P > 0.05）。但治疗后， 益生菌组的肠道屏障完整性标志物 [包括 D-乳酸、二胺氧化酶（DAO）] 含量增幅较小，表明肠道功能得到改善。 5、 生活质量 ：根据 QLQC-30 量表测量，治疗后， 益生菌干预组QLQC-30量表各维度评分均高于对照组 （P< 0.05），这也在一定程度上说明了 益生菌组患者的生活质量明显优于仅接受标准治疗的患者。 6、 化疗相关并发症 ：值得注意的是， 益生菌组的化疗相关并发症（如恶心、呕吐、腹胀、腹泻）的发生率明显较低 。具体表现为：恶心呕吐发生率分别为 27.08%（益生菌组，13例） vs 41.67%（对照组，20例） ；食欲不振发生率分别为 12.50%（益生菌组，6例） vs 32.5%（对照组，15例） ；白细胞减少发生率分别为 27.08%（益生菌组，13例） vs 32.5%（对照组，15例） ；腹胀发生率分别为 6.25%（益生菌组，3例） vs 22.92%（对照组，11例） ；腹泻发生率分别为 8.33%（益生菌组，4例） vs 33.33%（对照组，16例） 。这表明益生菌可能在减轻癌症治疗的胃肠道副作用方面发挥着至关重要的作用。 ▼并发症发生率比较 ▲图源“BMC”，版权归原作者所有，如无意中侵犯了知识产权，请联系我们删除 五、小编寄语 上述研究成果清晰地显示，免疫检查点抑制剂与化疗药物联合，或者与益生菌共同治疗，能够显著改善转移性结直肠癌患者的预后情况。其中，益生菌在改善化疗导致的肠道菌群失调方面效果显著，它可以促进肠道蠕动，切实保护患者的肠道功能。这项研究充分彰显了益生菌作为传统癌症治疗补充手段的巨大潜力。通过维护肠道和免疫健康，益生菌不仅能够增强转移性结直肠癌患者的治疗效果，还能有效平衡肠道菌群，改善肠道功能，减少治疗过程中的不良反应，具有极高的临床推广价值。 然而，全球肿瘤医生网小编还需提醒广大癌友，癌症作为一种及其复杂的疾病，在应用益生菌时务必慎之又慎。建议患者在专业营养师的指导下，尽可能选择“私人订制”版的个体化益生菌，这类益生菌根据不同病种筛选特定菌种组成，能够有效重整肠道环境，辅助肠道构建优势菌种架构，排除毒素和有害菌，从而有力促进病情的明显改善，达到预期治疗效果。 另外，在服用益生菌时也有一些注意事项。一般来说，早晨空腹及睡前服用效果更佳。一旦癌症患者出现无法维持健康体重和正常营养需求的情况，应及时接受肠外营养支持、口服营养补充等专业的营养支持措施。如果您还想了解定制益生菌/益生菌的更多内容，可将治疗经历、近期病理检查结果等，提交至 全球肿瘤医生网医学部， 初步评估营养状况。 六、参考资料 [1]Wang X,et al.Effect of probiotics combined with immune checkpoint suppressors and chemotherapeutic agents on digestive system function, intestinal immunity and prognosis in patients with metastatic colorectal carcinoma: a quasi-experimental study[J]. BMC gastroenterology, 2025, 25(1): 38. https://bmcgastroenterol-biomedcentral-com.libproxy1.nus.edu.sg/articles/10.1186/s12876-025-03604-9 本文为全球肿瘤医生网原创，未经授权严禁转载

2025年2月19日至21日，由韩国经济新闻主办的“HANKYUNG BIO INSIGHT FORUM 2025”在韩国济州岛乐天酒店举行，来自全球制药企业、新药研发机构、临床研究组织、医疗机构及监管部门等单位200余位行业代表参会。公司受邀参会，副总裁韩成权发表了主旨演讲，公布了公司核心药物“重组人肝细胞生长因子裸质粒注射液”(代号NL003，通用名：赛多明基注射液）治疗严重下肢缺血性疾病（CLI）的Ⅲ期临床试验关键数据，引发与会人员高度关注。 （图片转载自韩国经济新闻） 下肢缺血性疾病存在未满足临床需求 外周动脉疾病（PAD）是临床上常见的一种疾病，通常因动脉硬化闭塞症（ASO）、糖尿病性动脉硬化闭塞症（DAO）和血栓闭塞性脉管炎（TAO）等引发下肢动脉狭窄或闭塞、血流灌注不足，进而导致下肢间歇性跛行、疼痛、溃疡或坏疽等缺血表现。根据缺血程度的不同，临床上采用Rutherford分级，将下肢缺血性疾病从轻到重分为0-6级，其中4-6级属于严重下肢缺血性疾病（CLI），临床症状主要以腿部和脚部静息痛、溃疡及坏疽为主，随疾病的进展，感染、溃疡和坏疽逐渐恶化，严重者将面临截肢甚至死亡。 流行病学数据表明，PAD影响着全球超过2亿人的身心健康，其中，下肢PAD是外周动脉疾病最常见的类型。据中华心血管健康与疾病报告2022报道，在我国35岁以上的自然人群中下肢PAD（外周动脉疾病）的患病率为6.6%，约有4530万例，约10%的下肢PAD患者会进展为 CLI，且CLI发病率高、病程长、致残率高，5年死亡率超过50%，远高于大部分癌症等危重疾病。随着我国社会经济的发展和医疗条件的改善，人均寿命延长，老年人口数量不断增加，老龄化进程加快，未来PAD患病人数预计持续增加。目前，世界范围内尚无有效的治疗药物，临床治疗主要依靠介入及血管搭桥等外科手术方式，治疗效果不理想，存在显著的未满足医疗需求。 NL003治疗策略具有创新性 NL003是一种创新型基因治疗药物，以裸质粒为载体，通过在缺血部位的局部肌肉注射NL003，质粒转染横纹肌细胞并持续表达和分泌具有促进血管生长作用的肝细胞生长因子HGF蛋白，促进新生血管再生，在缺血部位形成侧支循环，建立“分子搭桥”机制，增加缺血部位的血流供应，从而达到疾病治疗作用。 与现有治疗手段相比，NL003能通过治疗性血管生成，解决血管闭塞导致的远端缺血，达到治疗目的，治疗策略具有创新性，在创伤性、操作便捷性、病人依从度、疗效和持久性上具有明显优势，可为患者带来持续的临床获益。 NL003Ⅲ期临床试验结果符合预期 NL003Ⅲ期临床试验主要针对CLI，分为溃疡（Rutherford 5级）和静息痛（Rutherford 4级）两个适应症分别开展试验。试验采取随机、双盲、安慰剂、平行对照研究机制，以北京协和医院血管外科为组长单位，在全国共24家医院开展临床研究。其中溃疡适应症入组242例、静息痛试验入组302例。 溃疡试验于2024年2月揭盲，与安慰剂相比，主要终点指标180天溃疡完全愈合率为43.5% vs 18.5%，具有显著临床意义（P＜0.0001）;同时在动脉硬化闭塞症、血栓闭塞性脉管炎及糖尿病性下肢缺血等不同疾病的亚组人群中都达到主要终点，在全球范围内的同类药物研究中，通过大规模Ⅲ期试验确证有效性尚属首次。 静息痛适应症于2024年8月揭盲，与安慰剂相比，主要终点指标180天疼痛完全消失率为44.1% vs 18%，NL003组显著优于安慰剂对照组（p<0.0001)；安全性良好，未发现与药物相关的严重不良反应。 多措并举筹备商业化进程 NL003是我公司首款递交NDA申请的裸质粒基因治疗药物，有望成为国内首个裸质粒基因治疗药物。目前，NL003正在接受新药审评，根据药品审评中心官网最新进度，目前已经完成药理毒理、临床、药学、临床药理、合规等环节的技术审评，有望2025年内获批。公司此前已联手国际著名的医药咨询公司IQVIA积极部署NL003商业化工作，并于2024年10月设立上海分公司，组建营销团队，积极开展市场调研以及销售策略和政策的制定；同时，公司也加紧布局NL003Ⅲ期临床试验长期随访研究以及真实世界研究，并进一步拓展适应症。在研发端推进的同时，公司生物工程药厂建设也在加速，综合办公楼、生产车间、智能化仓库三栋主体建筑已于全面封顶，生产车间设备招采、智能园区建设正在积极推进中，将于本年内完成生产线建设，具备原液生产条件。自建生产基地建设期间，公司采取委托生产方式，保证新药获批和生产的同步进行。期待NL003早日获批上市，为下肢缺血性疾病患者提供新的治疗选择。