BCR x ABL x Bcr-Abl

亚盛医药（纳斯达克代码：AAPG；香港联交所代码：6855）今日宣布，公司自主研发的两款重磅创新药均获纳入2025年中国临床肿瘤学会（CSCO）系列指南：在研品种新型口服Bcl-2选择性抑制剂Lisaftoclax（APG-2575）首次获《CSCO淋巴瘤诊疗指南》推荐。公司原创1类新药、新一代酪氨酸激酶抑制剂（TKI）奥雷巴替尼片（商品名：耐立克®）获《CSCO儿童及青少年白血病诊疗指南》升级推荐；延续《CSCO恶性血液病诊疗指南》相关推荐。Bcl-2抑制剂Lisaftoclax（APG-2575）首次获CSCO 指南推荐作为全球第二个递交新药上市申请（NDA）的Bcl-2抑制剂、中国首个递交NDA并进入优先审评的国产原研Bcl-2抑制剂，Lisaftoclax（APG-2575）凭借其优异的临床数据，获2025版《CSCO淋巴瘤诊疗指南》推荐，用于单药治疗复发/难治性（R/R）慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤（CLL/SLL）患者。这是Lisaftoclax（APG-2575）首次获纳入CSCO 指南，并且是唯一获得指南推荐的中国原研Bcl-2抑制剂，标志着亚盛医药在推动该创新品种真正惠及患者的道路上迈出里程碑式一步，同时标志着中国原研创新药在血液肿瘤领域的重大突破。马军教授哈尔滨血液病肿瘤研究所Lisaftoclax（APG-2575）此次被纳入CSCO指南，标志着该药物的循证证据获得国内顶级学术机构认可。Lisaftoclax（APG-2575）单药总缓解率高，起效时间快，为快速控制疾病提供了可能，肿瘤溶解综合征发生率远低于同类Bcl-2抑制剂早期数据，其安全性优势可能改变临床风险管理模式。我们期待Lisaftoclax（APG-2575）通过优先审评快速上市，进一步积累真实世界数据，让创新成果更快落地临床。未来，中国创新药必将以更高质量证据参与全球竞争！2024年11月，Lisaftoclax（APG-2575）单药治疗R/R CLL/SLL的NDA申请已获国家药监局药品审评中心（CDE）受理并纳入优先审评。Lisaftoclax（APG-2575）针对CLL/SLL领域正在全球范围内同步推进两项注册III期临床： Lisaftoclax（APG-2575）联合BTK抑制剂针对BTK抑制剂经治CLL/SLL患者的全球注册III期临床研究（GLORA研究）；Lisaftoclax（APG-2575）联合阿可替尼对比免疫化疗治疗针对初治CLL/SLL患者的全球注册III期临床研究（GLORA-2研究），从而进一步拓展治疗边界。国内首个BCR-ABL抑制剂奥雷巴替尼获升级推荐此次2025版《CSCO儿童及青少年白血病诊疗指南》在针对费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病（Ph+ ALL）儿童患者的治疗中，首次将奥雷巴替尼升级为I级推荐治疗方案用于BCR-ABL1激酶区T315I突变患者。这标志着奥雷巴替尼在儿童血液领域开启了全新篇章。竺晓凡教授中国医学科学院血液病医院奥雷巴替尼作为我国自主研发的第三代TKI，在儿童Ph+ ALL治疗领域取得了突破性进展。2025版CSCO指南将其对T315I突变患者的推荐等级提升至I级，这一重要更新充分体现了其临床价值。未来，我们期待更多研究进一步验证其长期疗效，并探索更优化的联合治疗方案，为儿童Ph+ ALL患者带来更多治愈希望。同时在2025年《CSCO恶性血液病诊疗指南》中，奥雷巴替尼在CML治疗领域延续多项重要推荐，巩固了其在CML治疗中的关键地位。在CML-慢性期（CP）治疗中，奥雷巴替尼是任何线T315I突变的Ⅰ级推荐治疗方案；也是尼洛替尼或达沙替尼一线治疗失败后的二线治疗，以及对≥2种TKI不耐受或/且治疗失败后的三线治疗的Ⅰ级推荐治疗方案。在CML-进展期治疗中，奥雷巴替尼也作为I级推荐治疗方案用于CML-加速期（AP）伴T315I患者，以及从CP进展为AP、从CP或AP进展为BP患者。该指南还强调了在应对多种BCR::ABL1突变（包括T315I、V299L、F317L/V/I/C、T315A、Y253H、E255K/V、F359C/V/I等）以及任意其他突变（包括复合突变）时的治疗优势。此外，在Ph+ ALL领域，针对诱导缓解以及R/R患者的治疗中，奥雷巴替尼均延续I级推荐。奥雷巴替尼是亚盛医药原创1类新药，获国家“重大新药创制"专项支持。作为中国首个获批上市的第三代BCR-ABL抑制剂，目前奥雷巴替尼已获批用于TKI耐药、并伴有T315I突变的CML- CP或CML-AP成年患者的治疗；对一代和二代TKI耐药和/或不耐受的CML-CP成年患者的治疗，且获批适应症均已被纳入国家医保药品目录，极高地提升了患者的可及性。奥雷巴替尼在中国的商业化推广由亚盛医药和信达生物共同负责。翟一帆博士亚盛医药首席医学官CSCO指南是中国临床医生进行肿瘤临床诊断和治疗的重要依据，是国内最具有学术影响力的诊疗指南之一。奥雷巴替尼和Lisaftoclax（APG-2575）的双双纳入意味着公司创新实力获高度认可。特别是Lisaftoclax（APG-2575）作为全球第二个递交NDA的Bcl-2抑制剂，此次首次被纳入CSCO指南，体现了临床专家对创新疗法的前瞻性认可，为临床诊疗提供了新的参考，将填补治疗空白。同时，奥雷巴替尼在儿童急淋治疗领域的升级推荐也非常令人振奋。未来，我们期待更多的临床数据支持这两款创新药在指南中的推荐升级。我们也将加速推进在研药物临床进展与商业化进程，惠及更多患者！关于亚盛医药亚盛医药是一家综合性的全球生物医药企业，致力于研发创新药，以解决肿瘤等领域全球患者尚未满足的临床需求。2019年10月28日，公司在香港联交所主板挂牌上市，股票代码：6855.HK；2025年1月24日，公司在美国纳斯达克证券交易所挂牌上市，股票代码：AAPG。亚盛医药已建立丰富的创新药产品管线，包括抑制Bcl-2和 MDM2-p53 等细胞凋亡通路关键蛋白的抑制剂；新一代针对癌症治疗中出现的激酶突变体的抑制剂等，为全球唯一在细胞凋亡通路关键蛋白领域均有临床开发品种的创新公司。公司核心品种耐立克®已在中国获批上市，且获批适应症均被成功纳入国家医保药品目录。公司另一重磅品种，新型Bcl-2选择性抑制剂Lisaftoclax（APG-2575）的新药上市申请（NDA）已获CDE受理，并被纳入优先审评。截至目前，公司4个在研新药共获16项FDA和1项欧盟孤儿药资格认定，2项FDA快速通道资格以及2项FDA儿童罕见病资格认证。凭借强大的研发能力，亚盛医药已在全球范围内进行知识产权布局，并与武田、默沙东、阿斯利康、辉瑞、信达等领先的生物制药公司，以及梅奥医学中心（Mayo Clinic）、丹娜法伯癌症研究院（Dana-Farber Cancer Institute）、美国国家癌症研究所（NCI）和密西根大学等学术机构达成全球合作关系。亚盛医药已在原创新药研发与临床开发领域建立经验丰富的国际化人才团队，以及成熟的商业化生产与市场营销团队。亚盛医药将不断提高研发能力，加速推进公司产品管线的临床开发进度，真正践行"解决中国乃至全球患者尚未满足的临床需求"的使命，以造福更多患者。前瞻性声明本新闻稿包含根据美国《1995年私人证券诉讼改革法案》，以及经修订的《1933年证券法》第27A条和《1934年证券交易法》第21E条所界定的前瞻性陈述。除历史事实陈述外，本新闻稿中的所有内容均可能构成前瞻性陈述，包括亚盛医药对未来事件、经营成果或财务状况所发表的意见、预期、信念、计划、目标、假设或预测。这些前瞻性陈述受到诸多风险和不确定性的影响，具体内容已在亚盛医药向美国证券交易委员会（SEC）提交的文件中详细说明，包括2025年1月21日提交的经修订的F-1表格注册说明书和2025年4月16日提交的20-F表格中的"风险因素"和"关于前瞻性陈述及行业数据的特别说明"章节、2019年10月16日提交的首次发行上市招股书中的“前瞻性声明”、“风险因素”章节，以及我们不时向SEC或HKEX提交的其他文件。这些因素可能导致实际业绩、运营水平、经营成果或成就与前瞻性陈述中明示或暗示的信息存在重大差异。本前瞻性声明中的陈述不构成公司管理层的利润预测。因此，该等前瞻性陈述不应被视为对未来事件的预测。本新闻稿中的前瞻性陈述仅基于亚盛医药当前对未来发展及其潜在影响的预期和判断，且仅代表截至陈述发表之日的观点。无论出现新信息、未来事件或其他情况，亚盛医药均无义务更新或修订任何前瞻性陈述。

一个字形容过去一年中国创新药行业，那就是：难。 从港股18A生物药企就可窥见一斑。开闸六年多，18A生物药企的分水岭已显。大多数还在现金流紧缺、盈利困境中无法自拔中时，百济神州、信达生物、再鼎医药等超10家企业成功摘B，其中大多已经或即将实现自身商业化盈利。 过去一年里，中国biotech也杀出了好几匹黑马。亚盛医药就是其中一家。过去的2024年，亚盛医药收获了自身发展的多个里程碑。2024年6月，亚盛医药与武田制药就奥雷巴替尼的海外权益达成合作，亚盛医药可获得最高13亿美元的总收入，创下国产小分子肿瘤药对外BD的最高纪录。 2025年1月24日，亚盛医药，这家港股18A生物药企正式宣布在美国纳斯达克上市。至此，在美、港两地上市的中国创新药企数量增加到4家。 这些里程碑式事件，让亚盛医药在资本市场备受瞩目。2024年全年，亚盛医药成为股价涨幅在50%以上的六家创新药企之一。亚盛医药的逆袭之路或许可以给行业带来启示。  授权收入明显增长 过去一年里，大多数中国创新药企都是依靠授权收入实现盈利。2024年，亚盛医药也成了幸运的那一个。 2024年上半年，亚盛医药营收达到8.24亿元，其中，唯一的商业化产品奥雷巴替尼销售额达到1.13亿元，剩余的7亿元则来自于武田的授权付款。这个品种是亚盛医药在2016年通过收购顺健生物医药获得的，就此开启了在血液肿瘤药物开发的道路。 奥雷巴替尼是主要用于慢性髓细胞白血病的三代BCR/ABL抑制剂，这一领域最出名的药物就是“格列卫”，即伊马替尼。有这样的成熟产品占据市场，奥雷巴替尼必须另辟蹊径，于是亚盛医药将奥雷巴替尼聚焦在了伊马替尼等一、二代抑制剂耐药的市场。 2021年，奥雷巴替尼片成功在国内获批，是中国首个且唯一治疗慢性髓细胞白血病耐药的第三代BCR-ABL抑制剂。 生存并不容易。总体上，慢性髓细胞白血病患者数量并不算多，市场空间本就不大。而且奥雷巴替尼首发适应症十分狭小，只是一线治疗后耐药的常见突变之一。2021年，亚盛医药与同样在血液瘤领域布局的信达生物签署合作协议，共同推进奥雷巴替尼在国内的商业化销售。2023年奥雷巴替尼的累计销售额做到了3.62亿元。 2023年11月，奥雷巴替尼的适应症拓展至治疗对一、二代抑制剂耐药的慢性髓细胞白血病慢性期成年患者。2024年上半年，奥雷巴替尼销售额就环比增长了120%。去年年底，这一新适应症成功新增进入最新医保目录。患者群体扩大后，2025年，奥雷巴替尼自然会有明显的销售增长。亚盛医药的转折拐点将更快到来。  投注海外市场 2024年，18A板块仅迎来4家生物医药企业，上市生物医药企业的首发募资额、平均募资额均是2018年来的新低。 已经上市的18A生物药企日子也不好过，一些资金已经捉襟见肘，不足2亿元。相比而言，亚盛医药现金流暂时还算充裕。截至7月初，亚盛医药现金总额达到18亿元。但要想发展，亚盛医药肯定需要更多的资金。 美股上市也不是一劳永逸的办法。数据显示，自2023年初以来，纳斯达克生物技术指数仅上涨约 5%。据统计，2024年在美国上市且融资至少1亿美元的医疗保健公司共23家，其中仅6家股价高于IPO价格。 把融来的钱用在海外市场的开拓，加强自身的造血能力，这才是亚盛医药最需要的。 此次赴美上市，亚盛医药通过发售ADR募资1.264亿美元，其中相当一部分是用于海外临床的开展，如奥雷巴替尼、BCL-2抑制剂（APG-2575）在美国及其他国家地区的临床开发。 亚盛医药披露，奥雷巴替尼将在2026年向美国FDA递交上市申请。 美国作为全球药品市场高地，把产品做到美国市场是很多国内创新药企的目标。产品既能有超高定价，也有更广阔的市场前景。百济神州的泽布替尼、和黄医药的呋喹替尼、传奇生物的BCMA CAR-T等已经创造出了好几个国产创新药出海的成功案例。 奥雷巴替尼被寄予厚望。武田制药自身有在血液瘤领域的基础，自己的第三代BCR-ABL抑制剂泊那替尼因安全性问题受到诟病，专利也将在明年到期，奥雷巴替尼正是武田对抗诺华的阿思尼布所需要的产品。而对亚盛而言，产品的海外推广交给武田，自己也能省去不少力气。 撰稿丨杨曦霞 编辑丨江芸 贾亭 运营｜雾纪 插图｜视觉中国 声明：健识局原创内容，未经许可请勿转载 前地区销售经理直接举报，辉瑞新药陷入商业贿赂丑闻 全国医药行业利润下降；“药王”销售大滑坡；严打超低价中标 营业额一年涨超900倍，揭秘黑马的“造富神话”

DOI: 10.1016/j.bmcl.2024.130067 共价蛋白靶向是蛋白质表征、鉴定、和活性调节的有利工具。共价治疗的脱靶及导致的潜在的毒性是长久以来困扰着人们的重大问题。然而，最近的研究表明，许多共价结合物是安全、有效、长效的治疗方法。共价治疗也能在高度相似的蛋白质之间实现选择性靶向，并克服了突变诱导的抗性，与非共价结合物相比具有更高的效力。 选择性靶向POI特定的位点，是由结合口袋残基的几何和物理化学性质的差异，以及共价修饰剂“弹头”的几何和活性驱动的。根据共价弹头的反应性，和结合区域的性质，共价结合物可以破坏获锁定POI的构象，并抑制其活性增强。 近日，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters从共价结合物能够作用的靶标结合位点的角度出发，进行了分类分析和经验总结。原文开源，末尾点击“阅读原文”直达文献地址。 蛋白可结合位点与可共价标记位点 01 1.1、蛋白质“结合口袋” 蛋白质折叠成三级结构后，其内部或表面会形成各种动态的空腔。其中，适合配体结合的空腔即为“结合口袋”。这些口袋在与特定的配体结合时完成不同信号的转导。而蛋白质则可以通过打开、关闭、或引起结合口袋的构象变化，控制配体的可及性，从而自动调节其活性，实现特定的功能。 结合口袋周围氨基酸残基的理化性质，可以决定位点的特异性结合，以完成各种生化功能。而蛋白质的功能可以通过与外源因子的结合来调节，这也是蛋白质靶向治疗的前体，促使了大多数药物获批用于疾病治疗。 对于给定的蛋白质，有很多可能类型的结合物，每种结合物都可以结合蛋白质上不同类型的位点。鉴定蛋白质结合口袋是开发选择性、高效性结合物的第一步；这些结合物可以通过筛选化合物文库进行探索；实际上，可以利用蛋白质的三维结构，亦或是在某些情况下，基于结构预测口袋。 已经有许多类型的结合口袋被鉴定，并用于研究蛋白质靶向。 1、活性位点，也称之为正构位点，是激动剂或拮抗剂分别靶向增强或抑制蛋白质活性的常见位点。在配体结合和非结合态下，活性位点的特征都很明显。具有类似功能的结合口袋在蛋白质家族中高度保守，如激酶的ATP结合口袋，因此，使用这类结合口袋位点，选择性靶向其中一个特定异构体通常认为是不可靠的。 2、“隐形口袋”，由配体结合产生的隐形疏水口袋，不存在明显的配体非结合状态。这类口袋结合位点特别重要，尤其是当不能通过底物结合位点实现特异性结合，或者需要这种靶向性促使不同需求的蛋白质功能。 3、变构位点，也正称之为别构位点，是一类明显的效应结合口袋，在调节活性位点的构象变化中起关键作用。这类位点可分别被正调节剂或负调节剂靶向，以增强或阻止配体结合活性位点。 4、蛋白质-蛋白质界面可药物口袋，是蛋白质中可用于类药性小分子结合的空隙，一度被认为是不可药物的，因为涉及蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）的界面一般宽而浅，缺乏可结合的凹槽，用小分子靶向具有挑战性。“热点”在PPI界面上降低伴侣蛋白的结合自由能中起关键作用，是可靶向的关键残基，广泛分布在PPI界面，其氨基酸组成不同。 通常，这种蛋白质结合以非共价方式发生，相互作用主要通过氢键、盐桥、范德华力等发生在结合中，在蛋白质与结合物的结合与非结合状态之间建立平衡。这种可逆结合物具有良好的安全性，然而，可能因为结合时间短而使治疗效果低效。 1.2、蛋白质共价结合位点 共价药物通过共价弹头靶向蛋白质共价结合位点，共价弹头的结合时间延长，从而提高治疗效率，以及减少药物使用剂量。此外，共价药物在蛋白质同源异构体之间提供选择性靶向独特的亲核性残基，并克服突变诱导的对非共价抑制剂的抗性。然而，结合高反应性或非选择性共价探针可能导致潜在的特异性反应和免疫毒性。 常用的共价弹头如α,β-不饱和羰基、醛、芳基氟磺酸、磺酰氟、乙烯基砜、腈等。蛋白质可共价标记的亲核性残基如Cys、Ser、Thr、Tyr、Lys、His、Asp、Glu等。其中Cys是共价修饰最多的，因为它具有高亲核性，并且在蛋白质中含量比其它残基少，容易实现选择性靶向。 蛋白质不同位点亲核残基pKa值变化增强了共价靶向的选择性。如，Lys的ε-NH2残基pKa在生理pH值条件下为10.4，但如果Lys被其它碱性残基（如Arg、His）掩埋或包围，其pKa会降低5个单位，从而增强其对共价修饰的敏感性。同样，当Cys的巯基残基引入催化位点时，其pKa从8.5急剧下降到2.5。这些分子内反应性差异赋予了共价弹头结合的选择性。 与靶标亲核残基的成功和选择性共价结合取决于共价弹头的立体空间和活性，以及共价弹头结合位点附近的亲核残基的存在、立体空间、和活性。 共价标记可能发生在适合配体结合功能蛋白的任何位点，包括活性位点、蛋白-蛋白界面、辅因子结合位点、变构位点、或非催化位点。 共价靶向蛋白位点 02 2.1、靶向活性位点 蛋白质活性位点的共价靶向是阻碍蛋白质与配体/底物结合，并提供长时间接触，从而实现蛋白质活性抑制的直接途径。蛋白酶是共价抑制的成熟靶标，其催化位点含有Cys、Ser残基。以下是两种针对SARS-CoV主要蛋白酶和人中性粒细胞弹性酶的共价抑制剂，分别作为针对靶向半胱氨酸和丝氨酸蛋白酶的例子。 主蛋白酶（Mpro或3CLpro） 一种半胱氨酸蛋白酶，含有一对催化半胱氨酸硫代阴离子与组氨酸咪唑阳离子，在冠状病毒复制中起关键作用。Mpro活性位点有4个主要底物结合口袋组成：S1'、S1、S2、S4。其中，催化Cys位于S1'口袋中，在冠状病毒之间保守。 Mpro对底物蛋白水解的特异性由底物相应的识别基序（P1'、P1、P2、P3）决定，P1在冠状病毒主蛋白酶中是保守的谷氨酰胺（Gln），但在人类其它蛋白酶中没有此保守方式。因此，P1位置加入Gln或其模拟物是开发Mpro肽模拟抑制剂的先决条件，如下图中a、b、c、d。 此外，上图e中的化合物5、6、7是FDA批准的具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、和细胞保护活性的药物或候选药物，显示出与Cys145的共价结合，并抑制SARS-CoV Mro。 人中性粒细胞弹性蛋白酶（hNE） 一种丝氨酸蛋白酶，在免疫反应、弹性蛋白水解和炎症的调节中起重要作用。hNE通过催化活性位点的三联体（Ser195、Aspect102、His57）实现蛋白水解活性。 如下图，共价化合物8、9通过芳基磺酰氟靶向POI共价结合位点。其中，化合物8与催化活性位点Ser195的结合可以通过X射线线晶体学观察到。 化合物9同时兼有磺酰氟和O-氟硫酸酯，其活性最佳，具有亚微摩尔级抑制活性，并对结构相似的蛋白酶如hCG具有高选择性。 2.2、靶向蛋白-蛋白界面 靶向PPI界面非常具有挑战性，即使针对其中的“热点”，非共价结合的可逆结合在干扰二元蛋白之间的高亲和力相互作用时通常也不是很有效。而靶向共价抑制剂则成为了一种非常有潜力的靶向PPI的策略。 BCL-2家族蛋白 通过抑制促凋亡蛋白活性的抗凋亡蛋白（如BFL-1）控制细胞凋亡，包含有4个结构域，而BCL-2成员NOXA和BIM仅包含第三个结构域（BH3结构域）。抗凋亡蛋白通过与促凋亡蛋白的α-螺旋BH3结构域结合，抑制癌细胞凋亡。 模拟PPI界面上“热点”的二级结构元素，是高效调节PPI的策略。通过钉接使肽段刚化成α-螺旋构象，以模拟相互作用的氨基酸在界面上的排列。通过分子内交联实现钉接，最常见的使为i与i+4或i与i+7残基交联。如下图。 凋亡蛋白抑制因子（IAPs） 与半光天冬酶结合，抑制细胞凋亡，与许多疾病，如癌症、神经退行病、自身免疫性疾病有关。线粒体源性半胱天冬酶激活剂（SMAC）通过与半胱天冬酶竞争来调节IAP结合和抑制IAP功能。其成员之一，XIAP，通过第三BIR3结构域（BIR3）的N端肽（AVPF）与SMAC结合，代表着SMAC结合位点。 针对该位点开发共价抑制剂的策略之一是通过模拟AVPF肽序列，并在合适的位置安装共价弹头，如下图，通过磺酰氟或氟磺酸酯靶向BIR3结构域的Lys311残基。 2.3、靶向活性位点附近的残基（非催化位点） 蛋白亚族和异构体之间的催化位点通常高度保守，而非催化残基则不保守。因此，靶向非催化亲核残基的共价靶向是一种很有前景的方法，可以在具有高度结构相似性的蛋白质之间实现选择性靶向，并克服对催化位点结合物的突变驱动抗性。 组蛋白赖氨酸去甲基化酶（KDMs） 通过抑制蛋白尾部的单、二、三甲基化赖氨酸残基的去甲基化，对组蛋白功能的调节具有关键作用。KDMs家族一个包含20个酶亚族KDM2-7，与不同类型的癌症和发育障碍相关。其中，KDM5具有独特的Cys残基，Cys480仅在KDM5B中发现，其它亚族还有Cys497。 如下图，通过对非共价抑制的改造，在合适的位置安装共价弹头，提高了抑制剂的选择性。 HCV NS3/4A 一种病毒丝氨酸蛋白酶，可以切割HCV多蛋白，生成病毒复制所需的非结构蛋白（NS），是开发HCV抑制剂的重要靶点。 如下图，化合物18是一种可逆共价α-酮酰胺抑制剂，在催化位点Ser139形成半缩醛，然而，Ser139在人类蛋白酶中保守，因此造成脱靶。化合物19安装了不可逆共价弹头，增强了化合物18的选择性和安全性。化合物19靶向非催化位点Cys159，对HCV蛋白酶表现出更高的效价和选择性。 如下图，是人类疱疹病毒（HHV）家族蛋白酶的共价抑制剂，不可逆靶向Cys161。二硫化合物具有中等抑制活性，改造后，以不可逆的方式获得了化合物21，活性增强。 2.4、靶向辅因子结合位点 辅助因子协助许多蛋白的功能并促进它们的生物活性、稳定蛋白结构。一些辅助因子如氧化镁聚合酶、铁血红素、丙酮酰吲哚羧化酶和三磷酸腺苷（ATP）酶。而激酶ATP结合口袋是最丰富的辅助因子结合靶标，可以用于激酶的选择性靶向。 致癌BCR-ABL酪氨酸激酶 由BCR基因和ABL1基因异常融合形成的激酶，是慢性髓性白血病（CML）的主要病因，并且被竞争性ATP抑制剂靶向。BCR-ALK激酶结构域突变，将产生对竞争非共价抑制剂的抗性，特别是“守门人”T315I的突变。 下图，化合物22安装有邻硼酸苯甲醛作为共价弹头，选择性靶向致癌BCR-ABL野生型和突变型结合位点上的保守催化位点Lys271，然而，却没有细胞活性。随后，通过改造，筛选不同的共价弹头，产生了不同的可逆共价和不可逆共价抑制剂。其中化合物具有很好的细胞活性，24不具备细胞渗透性，25具有细胞内的稳定性和渗透性，但氟硫酸酯弹头的过弱的反应性也影响了其细胞活性。 BTK 具有独特的Cys481残基，促使BTK的ATP结合的选择性抑制。如下图，通过对非共价抑制剂26修饰，安装共价弹头获得共价抑制剂27，对BTK的选择性比其它酪氨酸激酶高。此外也有研究将BTK共价抑制剂与E3连接酶配体结合，构建了BTK-PROTAC。 表皮生长因子受体（EGFR) 如下图，Gefitinib是第一代EGFR可逆抑制剂。然而，守门人T790M突变导致催化结构域构象变化，在空间上阻碍了一代EGFR可逆抑制剂结合。为了解决这个问题，开发出了第二代EGFR共价抑制剂，如Afatinib。这种抑制剂的共价弹头靶向非催化性的Cys797结合位点，恢复了抗T790M突变的活性，并提供了对EGFR信号传导的长期抑制。然而，二代抑制剂对突变型与野生型选择性较差，因此，具有剂量依赖性毒性。为了解决这个问题，又开发出了三代共价抑制剂，如Osimertinib，用吡嘧啶支架代替喹唑林，提高了亲和力，同时保留共价探头。 “亲核”弹头靶向辅助因子 亲电基团在蛋白质中并不常见；然而，当它们存在时，它们在蛋白质功能中起着至关重要的作用。亲电性辅因子可以通过蛋白质的翻译后修饰（PTMs）获得，也可以从外源（外源辅因子）获得，在某些情况下，它们的来源和功能是未知的。如下图，s-腺苷-L-蛋氨酸脱羧酶（AMD1）含有一个N端Pyvl辅助因子，通过与底物胺形成希夫碱中间体来催化脱羧反应。 2.5、靶向变构位点 变构是指配体与变构位点的结合引起构象和/或动态变化，从而调节蛋白质活性的一种异型蛋白调节。配体和变构位点内原子之间的物理相互作用通过各种途径扰乱蛋白质结构。到达配体结合位点的扰动可诱导刚性或松弛构象，从而导致蛋白质活性的降低或增加。因此，虽然两个配体可能具有相似的亲和力，但随之产生的变构效应可能因不同的繁殖途径而异。 相对于正构抑制剂，变构调剂剂作为候选药物具有理想的优势。变构位点的低保守性为潜在的选择性增加提供了一个途径，也减少了脱靶结合毒性。当变构配体结合远离内源性配体的位点时，即使内源性配体被结合，它们对蛋白质活性的影响也可以被利用。如下图。 AKT1激酶抑制剂 KRAS G12C抑制剂 总结与展望 03 共价靶向并不局限于蛋白质-配体结合的位点。设计带有共价弹头的抑制剂来靶向蛋白质与蛋白质的相互作用，这是对抗不可药物蛋白质的一种有希望的方法。换句话说，与位于膨胀蛋白界面的“热点”的共价结合延长了抑制剂-蛋白的接触，并确保了伙伴相互作用的中断；与非共价竞争性抑制剂相比，共价靶向辅助因子结合位点能够识别未表征的蛋白质，并增强抑制效果；共价靶向非催化残基（在蛋白质同工异构体中较不保守）导致具有高度结构相似性的蛋白质之间的特异性靶向。 共价抑制剂通过锁定非活性构象的蛋白质与异位结合而显示出有效性，这反过来克服了抑制剂与正位结合位点结合的耐药性。蛋白质表面的许多结合凹穴具有独特的物理化学性质，可用于选择性共价修饰，为将共价结合应用于药物发现提供了机会。 声明：发表/转载本文仅仅是出于传播信息的需要，并不意味着代表本公众号观点或证实其内容的真实性。据此内容作出的任何判断，后果自负。若有侵权，告知必删！ 长按关注本公众号  粉丝群/投稿/授权/广告等 请联系公众号助手 觉得本文好看，请点这里↓