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2024年7月，在生物医药领域，1家公司采取IPO形式上市，3家公司SPAC合并上市，3家公司反向并购上市。 IPO上市 7月，有1家医药公司采用IPO形式上市，融资规模为1.67亿美元。 今年以来，生物医药领域已经有15家公司IPO上市，累计融资规模超23.5亿美元，其中不乏CG Oncology、Kyverna Therapeutics等IPO规模超3亿美元的公司。 1、Artiva(NASDAQ:ARTV) 6月7日，Artiva在纳斯达克交易所上市，发行价为美股12美元，发行1392万股，IPO规模达1.67亿美元，是今年第九家IPO规模超过1亿美元的创新药公司。 2021年，Artiva曾尝试进行IPO，但后来转而专注于与Affimed的合作。2023年10月，Artiva与默沙东高达10亿美元的合作终止，促使Artiva重新启动IPO计划。 Artiva Biotherapeutics是一家专注于开发基于自然杀伤（NK）细胞疗法的公司，主要产品候选物AlloNK®，是一种无需基因修饰的冷冻保存同种异体的NK细胞，可利用单克隆抗体（mAb）进行靶向。 Artiva建立了针对CAR-NK的研发平台，可为NK细胞装载了经过优化的CAR以增强其治疗活性和肿瘤靶向能力，能够保持CD16的高表达，联合单克隆抗体则可以实现双靶向治疗。 为了生产AlloNK，Artiva选择具有CD16 158 V/V变异的脐带血，再基于生物反应器的大规模NK细胞扩增和活化过程以产生数千剂纯净的NK细胞，并保留CD16和其他肿瘤激活受体（如NKG2D、DNAM-1、NKp30、NKp46等）的高表达且一致表达的特征而无需额外的工程化处理，所产生的NK细胞经过优化的冷冻保存技术能够最大限度保证细胞活力，适应长距离物流运输，可以在门诊环境中重复给药。 Artiva可以使用不同的mAbs来靶向基于靶细胞抗原表达的不同B细胞群体。例如，CD19和CD20在记忆B细胞上表达，而CD38和BCMA在浆细胞上表达。 在适应症的选择上，Artiva也跟随诸多细胞疗法公司进入自身免疫领域的浪潮，正在开展AlloNK®针对系统性红斑狼疮（SLE）和狼疮性肾炎（LN）的研究，管线包括： AB-101：一款脐带血来源、同种异体、冷冻保存、非转基因、ADCC（抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用）增强的NK细胞治疗候选药物，可在门诊与单克隆抗体或先天细胞接合剂联合使用。该疗法目前正处于临床I/II期试验中，与利妥昔单抗联合用于治疗狼疮肾炎（LN）、类风湿性关节炎（RA）、寻常型天疱疮（PV）、B细胞非霍奇金淋巴瘤（NHL）等适应症。 AB-201：一种新型HER2特异性CAR-NK细胞疗法，用于治疗HER2+实体瘤。公司计划在2022年提交IND申请。 AB-202：一种CD19特异性CAR-NK细胞疗法，用于治疗B细胞恶性肿瘤。公司同样计划在2022年提交IND申请。 公司CEO Fred Aslan博士，在生物医药行业拥有20年丰富经验，曾担任Vividion Therapeutics的总裁兼首席财务官（被拜耳以20亿美元收购），亦曾在知名Biotech投资机构Venrock工作了12年，期间主导创立了Receptos Pharmaceuticals(被新基以70亿美元的价格收购)、Zeltiq(被艾尔建以20亿美元的价格收购)，并参与了Fate Therapeutics的组建。 在一级市场，Artiva受到资本的追捧，进行了两轮融资： 2020年6月，公司完成了7800万美元的A轮融资。本轮融资由5AM Ventures,venBio Partners,RA Capital领投,Medivate Partners、GC LabCell等机构跟投； 2021年6月，公司宣布完成1.2亿美元B轮融资。本轮融资由Venrock领投，5AM Ventures, RA Capital、venBio Partners等机构跟投。 不过，Artiva所在的CAR NK领域在近几个月却接连遭遇挫折，Caribou宣布削减临床前CAR-NK资产，裁员12%，而另一同行Catamaran Bio公司也在今年早些时候关闭。 SPAC上市 7月，生物医药领域有3家公司宣布或完成与SPAC公司的合并。 1、Adagio Medical(NASDAQ:ADGM) 7月31日，Adagio完成与SPAC公司ARYD的合并，该合并交易对Adagio的估值为1.13亿美元。 在合并的同时，Perceptive Advisors、RA Capital、RTW Investments和ATW Partners等投资者已承诺为公司提供2000万美元的可转换债务和2200万美元的股权融资。 Adagio Medical公司由James Cox博士和Olav Bergheim先生于2011年创立，致力于开发新一代心脏心律失常导管消融技术，用于治疗心律失常，包括心房扑动、室性心动过速以及阵发性和持续性心房颤动。 液氮作为一种强大的冷剂，在医疗器械中广泛应用，其中也包括冷冻消融领域。然而，液氮在从液态转变为气态时体积会急剧膨胀，这一缺陷限制了其在心内膜冷冻消融中的应用。 自2004年以来，Adagio Medical的首席技术官Alex Babkin博士一直在深入研究和开发近临界氮气（NCN）冷冻消融技术，不仅克服了传统液氮冷冻剂在体积膨胀方面的问题，而且还保留了其作为冷冻剂的强大能力，能够创造持续性病变所需的稳定能量来源，为心内膜冷冻消融提供了一个创新的解决方案。 此外，NCN的优点还包括： NCN的高冷却能力还为可伸缩技术提供了可能，使医生能够根据患者的具体情况进行个性化治疗； NCN的无蒸汽锁特性，还能够实现可靠的启动和停止控制，使得医生在治疗过程中能够更加精确地控制冷冻消融的范围和深度； NCN的低粘度特性使得它能够通过小导管（直径小于或等于9Fr）进行心内膜途径的冷冻消融，为心脏任何部位的长而连续病变的创造提供了可能。 目前，公司正全力推进专有的超低温冷冻（ULTC）和脉冲场冷冻消融（PFCA）技术的临床试验计划，计划在2024年公布部分关键数据并推出新产品： 超低温冷冻消融（ULTC）：该技术可通过连续的透壁病变，去治疗包括阵发性和持续性房颤、心房扑动和室性心动过速在内的心律失常,能够通过单一消融周期在心房和心室产生各种广泛的连续贯穿损伤。 2024年3月，ULTC获得CE标志批准，用于治疗单形室性心动速。由升级的冷冻消融控制台和vCLAS心室冷冻消融导管组成，冷冻消融控制台也能够支持使用商用iCLAS 导管。2024年5月，ULTC获得FDA批准，可针对室性心动过速和持续性房颤进行试验。 脉冲场冷冻消融技术（PFCA）：该技术是ULTC和脉冲电场消融（PFA）的独特组合，共用一根导管，可以避免气泡，创造良好的组织接触，减少肌肉骨骼收缩，消融较深的病灶。 结合了ULTC和PFA的优势，PFCA技术未来有可能成为心脏病治疗领域的重要突破。目前，PFCA技术正在欧洲进行试验。 公司创始人兼CEO Olav Bergheim，亦是Fjord Ventures LLC的创始人和常务董事，此前Bergheim先生是Domain Associates的普通合伙人，负责多家公司的组建，包括3F Therapeutics(被美敦力收购);Vessix Vascular(被波士顿科学收购)，Volcano Therapeutics(被飞利浦收购)以及Glaukos(纳斯达克:GKOS)。在加入Domain之前，Bergheim先生在医疗器械巨头百特集团担任副总裁。 公司最近一轮融资是2020年11月的E轮融资，融资规模达4250万美元，投资方包括ArrowMark, RA Capital、Perceptive、JMR Capital、 Fjord Ventures等机构。 反向并购上市（Reverse Merger） 7月，共有3家生物医药公司宣布了反向并购上市。 1、Pieris(NASDAQ:PIRS) 7月25日，Pieris(NASDAQ:PIRS)宣布与Palvella Therapeutics合并，合并后的实体将作为Palvella运营，将继续在纳斯达克交易所上市，受此消息影响，Pieris股价当日暴涨88.6%。 在宣布合并的同时，Pieris(NASDAQ:PIRS)获得7890万美元的PIPE融资，该融资由BVF Partners，Frazier Life Sciences领投，Blue Owl、Nantahala Capital、DAFNA Capital、ADAR1 Capital、Samsara BioCapital、Ligand(Nasdaq: LGND)等机构跟投，预计合并完成后的公司拥有8500万美元的现金。 Palvella的专有QTORIN™技术平台可以克服高分子量、化学和物理不稳定性、高药物浓度、有限的全身吸收等局部给药的局限性。此外，QTORIN™平台还可与多种药物兼容，用于靶向递送至病理部位，通常在表皮或真皮的深层内。 目前，Palvella的主要在研药物是一款3.9%的雷帕霉素无水凝胶：QTORIN™ ，用于治疗微囊性淋巴畸形(微囊性LMs)、静脉畸形等适应症。 微囊性淋巴管畸形是一种罕见的、慢性衰弱性遗传病，由PI3K/mTOR通路失调引起。该病以突出于皮肤屏障的局限性畸形淋巴管团，和持续漏出的淋巴液和出血为特征，此疾病经常导致患者反复严重感染和蜂窝织炎。该疾病目前没有获FDA批准的治疗方法。 2023年11月，FDA授予Qtorin雷帕霉素突破性疗法认定，该认定主要基于一项每日一次Qtorin雷帕霉素治疗微囊性淋巴管畸形的多中心、开放标签2期试验的积极结果。在该试验中，根据临床医生疗效总评量表的变化，100%接受Qtorin雷帕霉素治疗12周的受试者（n=12）被评定为“大幅改善”或“极大幅改善”。目前，Palvella正在开展一项关键性3期研究。 除了突破性疗法认定，美国FDA此前还授予Qtorin雷帕霉素治疗微囊型淋巴管畸形的快速通道资格和孤儿药资格。欧洲药品管理局（EMA）也授予Qtorin雷帕霉素治疗微囊型淋巴管畸形的孤儿药资格。 公司的首席科学官Shroot博士在皮肤疾病的药物研发方面拥有30多年的经验，并在Diffein、Atralin、Vethic和Diflucan等多个药物的开发中发挥了关键作用，是美国皮肤协会终身成就奖的获得者，也是皮肤病研究学会的终身荣誉会员。 在一级市场，Palvella曾于2020年5月，完成4500万美元的C轮融资，投资方包括Samsara BioCapital，BVF Partners，Adams Street Partners，Opaleye Management，Ligand Pharmaceuticals等机构，并于2023年1月完成3770万美元D轮融资，投资方包括Petrichor、Gore Range Capital、Agent Capital、Nolan Capital、BioAdvance等机构。 封面图来源：123rf 版权声明/免责声明 本文为授权转载文章。 本文仅作信息交流之目的，不提供任何商用、医用、投资用建议。 文中图片、视频、字体、音乐等素材或为药时代购买的授权正版作品，或来自微信公共图片库，或取自公司官网/网络，部分素材根据CC0协议使用，版权归拥有者，药时代尽力注明来源。 如有任何问题，请与我们联系。 衷心感谢! 药时代官方网站:www.drugtimes.cn 联系方式: 电话:13651980212 微信:27674131 邮箱:contact@drugtimes.cn 租金减免!创新基金!专业辅导!勃林格殷格翰邀您参赛 股价暴涨220% ！“卖不动” 的CGT再成焦点 一款长效激素疗法获批，以取代武田退市的甲状旁腺功能减退药物 点击这里，发现价值信息！

导读：相比优化CD8+细胞毒性T淋巴细胞的抗肿瘤功能，激活自然杀伤细胞（NK 细胞）是另外一种新兴的肿瘤免疫治疗手段。迄今为止，工程化NK细胞主要是通过慢病毒载体和电穿孔进行制备。尽管它们效率高，但由于使用病毒成分、生产成本高以及电穿孔毒性高等限制因素，急需开发新的递送工具。采用mRNA-LNP技术在NK细胞表达任何感兴趣的靶蛋白是一种极具吸引力的非病毒递送方式。其中IL2是一种关键靶点，在激活、扩增NK细胞，增强NK细胞杀伤活性方面发挥非常关键的作用。 2024年6月24号，法国国家科学研究中心（CNRS）与赛诺菲公司团队合作在Molecular Therapy Nucleic Acids发表文章：Enhancing Natural killer cells proliferation and cytotoxicity using Imidazole-based lipid nanoparticles encapsulating interleukin-2 mRNA。他们开发了一种基于咪唑脂质的递送平台（ iCD-Lx和iD-LNP），可高效转染NK-92 细胞、KHYG-1 细胞和原代 NK 细胞，而不会产生细胞毒性。有趣的是，这种基于咪唑的脂质递送平台转染未修饰mRNA的翻译速率反而高于修饰mRNA。利用基于咪唑的脂质递送平台向NK细胞系和原代NK细胞递送IL2 mRNA，可延长存活期、维系激活标志物表达水平、增强细胞毒性。这项工作为构建工程化NK细胞提供了一种高效的非病毒载体方式。 01  研究背景：IL-2的免疫作用 IL2在激活、扩增NK细胞，增强NK细胞杀伤活性方面发挥非常关键的作用。IL2 主要由 T 细胞产生，与NK细胞表面存在由 IL2Rα和 IL2Rβ链组成的受体复合物结合，导致各种细胞内信号传导途径的激活，包括JAK-STAT途径，从而导致 NK 细胞的增殖和激活。通过增加激活受体的表达、释放细胞毒颗粒以及增强其他细胞因子的产生，IL2 能增强 NK 细胞对癌细胞和病毒感染细胞的细胞毒性。 IL2注射液是30 年前首次获批准的免疫疗法 。高剂量注射IL2会过度激活抑制性调节 T 细胞（Treg），展示出明显的毒性。在细胞移植治疗（ACT）中，低剂量IL-2与Treg耗竭策略结合使用，可降低毒性并维持转移细胞的活力。对于NK细胞疗法来说，寻找更加安全有效的IL2使用策略成为当务之急。 02  咪唑脂质递送平台的开发和优化 研究人员通过微流控设备制备了2种基于咪唑功能化脂质的递送系统：第一种称为iCD-Lx，由一种可电离咪唑脂质（IL）、携带咪唑鎓的阳离子脂质（CL）及不同的辅助脂质构成；第二种称为iD-LNP，由相同的可电离咪唑脂质和辅助脂质组成。 2.1 优化iCD-Lx递送系统 制备ARCA eGFP mRNA（无修饰） iCD-Lx制剂，转染NK-92细胞。当制剂配方中CL摩尔百分比从10%增加至20%时，转染细胞数量从20%增加到75%，荧光信号强度从400增加至800。一旦CL摩尔百分比超过20%，转染细胞数量会骤降。CL摩尔百分为10%时，对细胞毒性最强。随着制剂CL摩尔百分比增加超过10%，对细胞的毒性反而呈现下降趋势。 在ARCA eGFP mRNA（无修饰） iCD-Lx制剂配方中使用20%CL，用DMG-PEG替代DMPE-PEG后，转染细胞数量降低至50%，细胞毒性从5%上升至10%，荧光强度MFI无显著变化。 将iCD-Lx制剂配方中的胆固醇替换为β-谷甾醇后，细胞转染效率未发生改变，然而，如果iCD-Lx制剂配方采用β-谷甾醇和DMPE-PEG的组合，转染细胞数量会发生显著下降。 由20%CL，40%IL，胆固醇，DMPE-PEG制备的iCD-Lx制剂，其转染效率（75%）和mRNA翻译强度（MFE为800）是最佳的。 此外，当N/P比例为1时，iCD-Lx转染效率最高，而当N/P比例达到3:1时，不仅iCD-Lx转染效率发生骤降，细胞毒性也出现明显增加（20%）。 脂质体（iCD-Lip）与脂质体复合物（iCD-Lx）在PBS缓冲液中4℃条件下可稳定存放8周，脂质体尺寸大小和分散系数（PDI）均不会发生显著变化。4℃存放的iCD-Lx的转染效率与即时制备的iCD-Lx无显著差异。此外，iCD-Lx无论是否在血清中，在37℃条件均可稳定存放10h。 2.2 优化iD-LNP递送系统 根据不同比例的可电离咪唑脂质（IL）或者Dlin-MC3-DMA制备一系列LNP，包封0.2ug eGFP mRNA (5-MoU)，转染NK-92细胞。与IL-LNP相比，MC3-LNP转染NK-92细胞的效率极低。转染效率最佳（60%）的iD-LNP19制剂配方为：50% IL、39% β-谷甾醇、10% DOPE 和 1% DMG-PEG 以及 N/P 20。iD-LNP19制剂可在4℃条件下稳定存放8周。无论是否存在血清，在37℃条件可稳定存在10h。 03  mRNA修饰对咪唑脂质递送效率的影响 研究人员合成4种eGFP mRNA：ARCA UNR(未修饰)；UNR cap1（未修饰）；MNR 5-MoU cap1（5‘moU修饰核苷酸）；MNR PsiU Cap1(甲基甲尿嘧啶修饰核苷酸)，采用iCD-Lx或者 iD-LNP作为递送载体，转染NK-92或者KHYG-1细胞。对于未修饰的eGFP mRNA来说，携带Cap1结构要比ARCA表现出更高的转染效率和翻译效率。令人感到惊奇的是，与未修饰mRNA相比，修饰mRNA居然会表现出更低的转染效率和翻译效率。值得注意的是，iCD-Lx的翻译效率要高于iD-LNP，这与mRNA类型无关。在荧光显微镜下观察到，采用 iD-LNP或者iCD-Lx递送不同类型的mRNA均不会影响转染NK-92细胞的形态。 对于 iD-LNP或者iCD-Lx递送系统来说，转染效率均在3-4天达到平台期，但是，eGFP mRNA的翻译效率自转染后第一天开始后持续下降。与修饰eGFP mRNA相比，携带Cap1的无修饰eGFP mRNA（UNR）的转染效率和翻译效率均是最高的。 04  咪唑脂质与其他转染试剂或递送系统的比较 对于NK-92细胞来说。市售商业化转染试剂（ScreenFect,mRNA-Fect,Lipofectamine）的转染效率和翻译效率均明显低于 iD-LNP或者iCD-Lx。与SM102、ALC0315、MC3可电离脂质制备的LNP相比， iD-LNP转染NK-92细胞的翻译效率和转染效率明显处于最佳，相比之下， iD-LNP转染Jurkat细胞的效率与其他LNP类似，但翻译效率是最高。上述数据说明，可电离咪唑脂质（IL）非常有希望成为一种通用型的可电离脂质。 05  NK细胞靶向的IL2 mRNA咪唑脂质递送平台 NK-92细胞是一种IL-2依赖性的细胞系，培养基中需要添加IL-2以维持NK-92细胞的存活和增殖。当培养基中缺乏IL-2，培养3天后，NK-92细胞全数死亡。在培养基中加入IL-2重组蛋白后，NK-92细胞可存活6天。洗涤细胞，并且耗尽培养基中的IL-2，采用iD-LNP或者iCD-Lx向NK-92细胞中递送cap1 UNR IL-2 mRNA，NK-92细胞同样也可存活6天。有意思的是，iCD-Lx作为递送载体，可使得转染cap1 UNR IL-2 mRNA的NK-92细胞存活时间延伸至8天。此外，iCD-Lx共递送等量的UNR eGFP mRNA与IL-2 mRNA，可在NK-92细胞中实现IL-2与 eGFP的正常表达。 K562是一种人类慢性髓系白血病细胞系，对NK细胞杀伤极其敏感，激活Caspase-3/7可诱导K562细胞凋亡。与IL-2饥饿NK-92细胞相比，添加重组蛋白IL-2，IL-2 mRNA iCD-Lx，IL-2 mRNA iD-LNP均会增强K562癌细胞中Caspase3/7表达，同时，维持CD69、NKG2D或者NKP30、TNF-α水平不会发生下降。总的来说，在NK-92细胞中转染IL-2 mRNA可达到补充IL-2重组蛋白同样的效果。 06  咪唑脂质递送系统在原代NK细胞中的转染效率 对于eGFP mRNA转染原代NK细胞来说，iCD-Lx转染效率可达到80%，而iD-LNP转染效率大致在50%左右。同时，这两种咪唑脂质递送系统均不会对原代NK细胞的存活率造成不利影响。与NK-92细胞类似，缺乏IL-2会导致原代NK细胞相比转染IL-2 mRNA或者补充重组蛋白IL-2的细胞中的CD69、NKG2D、NKP30表达水平减少。转染IL-2 mRNA或者补充重组蛋白IL-2的原代NK细胞增殖能力类似，均高于缺乏IL-2的饥饿原代NK细胞。无论是添加重组蛋白IL-2还是转染IL-2 mRNA均会导致原代NK细胞中的TNF-α表达水平相比于饥饿细胞有所升高，这导致与原代NK细胞共同孵育的K562细胞中的caspase3/7表达显著提升，引发非常显著的细胞毒性反应。 07  总结 NK细胞免疫疗法的一般流程为：分离NK细胞，并在体外合适的条件下扩增NK细胞，然后，输送会患者体内，以此抑制或者杀死肿瘤细胞。工程化NK细胞表达靶向特定肿瘤抗原的嵌合抗原受体制备的CAR-NK细胞具有更低的潜在毒性和更广泛的抗肿瘤效果，近年来备受关注。随着CAR结构的不断升级，引入细胞因子或趋化因子受体结构的第四代CAR结构能够改善免疫细胞一些固有缺陷并赋予其额外的特定功能，从而促进肿瘤免疫治疗效果。 但是，要实现NK细胞的工程化改造，必须借助于递送载体。由于电穿孔和病毒递送载体的局限性，科学家希望借助正处于风口之上的mRNA-LNP技术，更加高效地对NK细胞实现基因改造。这项工作最为重要的贡献在于优化了基于咪唑脂质的递送系统：iCD-Lx和iD-LNP，使其高效转染NK细胞系和原代NK细胞。令人感到欣喜的是，咪唑脂质递送系统的在细胞水平的转染效率和翻译效率明显优于市售的转染试剂和已知的可电离脂质制备的LNP（SM102、ALC0315、MC3）。同时，利用iCD-Lx和iD-LNP向NK细胞系和原代NK细胞递送IL2 mRNA，可明显提升NK细胞的增殖能力和细胞毒性。未来，还需要再体内进一步验证咪唑脂质递送系统的效率和毒性。 参考文献  [1] Christophe Delehedde, Ivan Ciganek, et al. Enhancing natural killer cells proliferation and cytotoxicity using imidazole-based lipid nanoparticles encapsulating interleukin-2 mRNA. 2024, 35(3): 102263 DOI: 10.1016/j.omtn.2024.102263. 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

■ 双抗 (bsAb) 可使用新作用机制进行治疗和应用，而传统 IgG 抗体无法实现。因此在过去十年中，双抗的开发引起了研究人员的极大兴趣，截至 2023 年底，已有 14 种双抗成功获批：11 种用于治疗癌症，3种用于非肿瘤适应症。 ■ 本文概述了用于治疗癌症的双抗领域的最新进展，专注于已获批或处于临床开发中的双抗，包括双抗介导的信号通路双重调节剂、肿瘤靶向受体激动剂、双抗-药物偶联物、双特异性 T 细胞、自然杀伤细胞和先天免疫细胞接合剂以及双特异性检查点抑制剂和共刺激器。 双特异性抗体（bsAb，bispecific antibodies）是一种通过基因重组、化学偶联或四重杂交瘤的方式构建的、包含两个靶向结合单元的抗体分子，其中每个单元均可独立识别特异性表位，bsAb在体内可以通过不同作用模式（MoA，mechanism of action），以组合或专性方式发挥作用，能够介导超越天然单抗的治疗效果，例如通过向癌细胞招募免疫效应细胞或用单个分子靶向不同的信号传导途径。 靶标选择、表位位置、亲和力、化合价、结合位点之间的距离、分子大小、灵活性、是否存在 Fc 区以及 Fc 介导的效应器功能等特性都是可开发性的重要影响因素。越来越多的癌症治疗方法正在开发中（图 1）。根据癌症类型、临床阶段和作用方式进行分组，临床开发中50% 的双抗处于 II 期和 III 期或已获批。 大约75%的 bsAb 被开发用于治疗实体瘤，实体瘤的治疗主要以 T 细胞接合剂 (TCE；32.9%) 和具有检查点抑制和/或免疫调节作用机制的 bsAb (45.1%) 为主。 大约25%用于治疗血液恶性肿瘤，主要是TCE（75%）和其他 MoA（21.9%），涉及免疫活性，例如由于可用性而通过检查点抑制和/或免疫调节来参与自然杀伤细胞和其他免疫细胞高度肿瘤选择性或谱系特异性抗原。大约 10% 的用于治疗实体瘤的双抗使用了双重信号抑制。迄今为止，bsAb 抗体-药物偶联物 (ADC) 已被开发用于治疗实体瘤。 CPI，检查点抑制剂；ICE，先天免疫细胞接合器；NKCE，自然杀伤细胞接合器。 对 ClinicalTrials.gov、Cortellis 和抗体协会提供的数据进行的搜索显示，有超过 300 项临床试验涉及 200 多种不同的双特异性分子，其中大约 75% 用于治疗实体瘤，（图 1）。前有10种双抗药物被获批用于癌症治疗，其中9种在美国和欧洲获批，卡多利单抗在中国获批。在这 10 种双抗中，有 9 种可归类为 TCE。卡妥索单抗是第一个获批的双抗，于 2013 年撤回市场（表 1 和图 2）。 表 1 | 获批用于癌症治疗的双抗 ADCC，抗体依赖性细胞毒性；ALL，急性淋巴细胞白血病；BCMA，B细胞成熟抗原； BiTE，双特异性 T 细胞接合器；bsAb，双抗；DLBCL，弥漫性大B细胞淋巴瘤；EGFR，表皮生长因子受体；EpCAM，上皮细胞粘附分子；GPRC5D，C类G蛋白偶联受体5组成员D； MoA，作用机制；NSCLC，非小细胞肺癌；NHL，非霍奇金淋巴瘤；scFv，单链可变片段； TCR，T细胞受体；TDCC，T 细胞依赖性细胞毒性。获批地区仅限于美国、欧盟 (EU)、日本和中国；产品也可能在其他国家获批，截至 2023 年底。 与疾病相关的表型经常由不止一种途径触发，允许细胞通过使用其他补偿性信号传导途径，通过单一靶标或途径克服药理生长抑制或诱导细胞毒性。同时调节不同疾病相关信号受体和/或途径的双抗可以减少或克服这一限制。 阿米万他单抗 (JNJ-61186372) 靶向 EGFR 和肝细胞生长因子受体 (MET)，这两种受体都会触发非小细胞肺癌 (NSCLC) 的增殖，因此，阻断这两种受体可以比仅阻断一种途径更有效地抑制 NSCLC 生长。 可以通过干扰受体二聚化或络合，或通过阻断受体的配体结合位点来抑制受体激活。在癌症中，来自多个互补或代偿途径的配体和受体通常会导致肿瘤进展和治疗耐药。双抗可以同时阻断两种不同的配体，无论是可溶性的还是细胞膜附着的，或者是配体和受体的组合。 许多抗肿瘤反应是通过激活细胞表面受体介导的，包括免疫反应或通过诱导细胞凋亡导致的细胞死亡。癌症治疗的一种方法是靶向递送受体激活配体，如生长因子、细胞因子和(共)免疫刺激配体，通过将它们融合到抗体或抗体片段上，诱导局部或组织特异性激动活性，从而产生细胞反应。越来越多的抗体-配体融合蛋白正在进入临床试验阶段。 有两种方法使用双抗来靶向递送有效负载（例如细胞毒性剂或放射性）。第一种方法是预靶向治疗，利用双抗的一种结合特异性来靶向肿瘤细胞，另一种结合特异性随后捕获肿瘤上的有效负载。有一种新的自组装双特异性预靶向概念，称为 SADA，使用修饰的 p53 四聚化结构域来延长 GD2 × DOTA 的肿瘤保留。双抗GD2 x DOTA可识别 GD2（一种在癌症中高表达的二唾液酸神经节苷脂）和放射性有效负载 177 Lu-DOTA ，在 TME 中组装并保留，但如果没有四聚化，缺乏半衰期延长，它会迅速从外围清除。到目前为止，临床试验中很少有双抗使用这种 MoA，这可能是由于放射性预先靶向所涉及的复杂后勤工作，不具普遍适用性。 图2| 已获批用于癌症治疗的双抗概述。a，双特异性 T 细胞接合器 (TCE)。b，其他双抗 (bsAb)（非 T 细胞接合剂）。11 种获批的 bsAb 中的 6 种具有 IgG 样结构，由 2 条重链（以深灰色显示的恒定区和以深蓝色或深红色显示的 Vh 结构域）和 2 条轻链（以浅灰色显示的恒定区和以深蓝色或深红色显示的 Vl 结构域）组成）。BCMA，B细胞成熟抗原；EGFR，表皮生长因子受体；EpCAM，上皮细胞粘附分子；GPRC5D，C 类 G 蛋白偶联受体第5成员D。 目前临床开发中很大一部分双抗已处于后期阶段（II 期和 III 期）。治疗实体瘤的bsAb以免疫调节剂为主，包括双CPI（约45%）和TCE（约33%），其次是针对双通路、ICE和双ADC的bsAb。相比之下，TCE 是用于治疗血液恶性肿瘤的主要 bsAb 类别（约 75%），其次是 ICE、双重 CPI 和 NKCE（图 3）。 图3| 目前在临床试验中的双特异性抗体的作用方式。a，通过受体阻断两种不同信号受体（用不同颜色表示）来抑制信号。b，通过抑制可溶性配体（蓝色）和受体来抑制信号。c，通过两种不同配体的双重阻断来抑制信号。d，通过双抗 (bsAb) 药物缀合物进行药物输送（缀合物以浅蓝色表示）。e，有针对性地阻断“别吃我”信号（CD47-SIRPα相互作用），导致巨噬细胞吞噬。f，封锁“不要吃我信号”与检查点抑制相结合。g，效应细胞通过作为 T 细胞上 T 细胞受体 (TCR) 一部分的 CD3 或自然杀伤细胞上 CD16 (FcγRIIIa) 的参与。h，肿瘤细胞结合介导的免疫细胞（共）刺激。i，PDL1 结合介导的免疫细胞（共）刺激。j、双重免疫细胞共刺激。k，肿瘤靶向 PDL1 通路抑制。l，肿瘤靶向PD1通路抑制。m，检查点结合介导的免疫细胞（共）刺激。n，双重检查点抑制。o，通过配体阻断实现双重检查点和可溶性转化生长因子-β (TGFβ) 信号传导抑制。展示了实体瘤和血液恶性肿瘤的靶分子和肿瘤相关抗原 (TAA) 的示例。注意：bsAb 可以同时发挥多种作用模式 (MoA)。 Ang2，血管生成素2；APC，抗原呈递细胞；BCMA，B细胞成熟抗原；CDH17、钙粘蛋白17；DLL4，类δ典型Notch配体4；EGFR，表皮生长因子受体；EpCAM，上皮细胞粘附分子；FRα，叶酸受体-α；GPRC5D，C类G蛋白偶联受体5组成员D；HLA，人类白细胞抗原；ICOS，诱导性T细胞共刺激；LAG3，淋巴细胞相关基因3；TIGIT，具有免疫球蛋白和 ITIM 结构域的 T 细胞免疫受体；VEGF，血管内皮生长因子。 癌症免疫治疗中使用的大多数双抗或是通过 T 细胞驱动的天然或内源免疫发挥作用，例如通过增强预先存在的抗肿瘤反应和/或克服检查点抑制，或是通过双抗驱动参与、激活等提供合成免疫或通过提供合成免疫，例如通过bsabb驱动的免疫细胞的参与、激活和募集(图3)。本文概述了 bsAb 和多特异性抗体的最重要的 MoA，包括 CPI、效应细胞接合器（包括 TCE 和 ICE）以及共刺激 bsAb。 表 2 | 后期临床开发中选定的双抗概述 BiTE，双特异性 T 细胞接合器；BCMA，B细胞成熟抗原；bsAb，双抗；BTC，胆道癌；cL，共同轻链；DART，双重亲和力重新定位；DLL4，δ样典型Notch配体4；EGFR，表皮生长因子受体；EpCAM，上皮细胞粘附分子；Fchet，异二聚化Fc；LAG3，淋巴细胞相关基因3；Nb，纳米抗体；NHL，非霍奇金淋巴瘤；NSCLC，非小细胞肺癌；PDC，胰腺导管腺癌；scFv，单链可变片段；TIGIT，具有免疫球蛋白和 ITIM 结构域的 T 细胞免疫受体；TGFβ，转化生长因子-β；VEGF，血管内皮生长因子。a晚期包括关键的II期、II/III期和III期临床研究。 许多干扰免疫检查点的单特异性抗体（例如 CTLA4 或 PD1/PDL1）被获批用于癌症免疫治疗，包括 ipilimumab、tremelimumab、nivolumab、pembrolizumab、atezolizumab、avelumab、durvalumab 或 cemiplimab59。 效应细胞接合器 在过去的二十年中，特异性结合肿瘤表面抗原和 TCR 的 CD3ε 链的 TCE 在此类 bsAb 中占据主导地位。第一个获批上市的bsAb是小鼠/大鼠嵌合上皮细胞粘附分子（EpCAM）×CD3ε bsAb catumaxomab101，该药物于2009年在欧盟（EU）获批用于腹腔内治疗恶性卵巢腹水，但随后被撤回。目前中国正在再次进行腹腔给药临床试验评估。 尽管 TCE 在效应细胞接合器领域占据主导地位，但仍在大力开发下一代 ICE，其中包括 NKCE 和 bsAb，可接合骨髓源性细胞 (MDC) 进行吞噬作用，包括中性粒细胞和巨噬细胞/单核细胞。与传统单克隆抗体相比，几种具有增强 ADCC 功能的 Fc 工程化 IgG1 抗体已获批，包括 obinutuzumab、mogamulizumab、tafasitamab、margetuximab 和 amivantamab190。 为了进一步增强 ADCC 功能，使其超越 Fc 工程 IgG1 抗体的功能，针对自然杀伤细胞上不同表面分子（例如 CD16、NKG2D、NKp46 或 NKp30）的各种双特异性 NKCE191 已被开发为免疫疗法。这些 NKCE 中最先进的是用于治疗霍奇金淋巴瘤的短半衰期 CD30 × CD16 双特异性 bsAb，可用作单一疗法、与检查点抑制相结合或与自然杀伤细胞输注相结合。 bsAbs领域仍在不断进步，以进一步探索和扩展技术和应用。学术界、生物技术和制药行业所追求的各种早期探索性双抗方法都是有前景的。 a，三特异性 T 细胞接合器 (TCE)，具有集成共刺激，通过 CD3 结合同时激活 T 细胞受体 (TCR)（信号 1），并通过与 CD28 结合进行共刺激（信号 2）。 b，双抗（bsAb）前药的作用模式。灭活抗体以产生前药并重新激活位于所需作用位点的前药的一般概念包括封锁结合位点以灭活和蛋白酶诱导的被封锁抗原结合位点的激活、响应于目标环境（例如酸性 pH 或 ATP）的亲和力调节以及组装 或由于补充前药通过高局部浓度局部富集而引起的交换反应。 c，蛋白水解靶向嵌合体 (PROTAC) 方法通过与表面抗原（肿瘤相关抗原 (TAA)）和降解剂部分（例如膜 E3 连接酶）结合，导致细胞表面靶标的内化和蛋白酶体降解。 d，bsAb 递送（例如通过基因疗法）至 CAR-T 细胞中。 e，细胞因子模拟bsAb通过将受体结构域引入空间附近来触发细胞因子受体途径， bsAb 领域最近取得了实质性进展，到 2023 年底，已有十多种 bsAb 获批，许多不同的方法正在临床中进行测试。抗体需要针对某些应用进行定制，并且将依赖与其他方法的组合来最大化其功效和安全窗口。在不久的将来，具有多种特异性的抗体疗法的开发可能会出现在以下四个领域： ①针对具有明确依赖性的肿瘤的肿瘤相关 RTK 的 bsAb； ②bsADC 用于以更高的选择性靶向肿瘤； ③用于靶向降解适用于各种途径的细胞表面蛋白的双特异性 PROTAC； ④以及用于癌症免疫治疗的多特异性抗体，如T细胞疗法，TCE或CAR-T 。 与其他癌症药物一样，通过改进诊断方法和新开发模式，将bsab和基于多特异性抗体的疗法应用于疾病早期的患者，对于实现治愈癌症患者的目标至关重要。 参考文献： Brinkmann, U. & Kontermann, R. 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