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引言非酒精性脂肪肝病（NAFLD）是全球最常见的慢性肝病，非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的发展可能导致不可逆的肝损伤。高脂血症（HLP）是NAFLD的主要风险因素。2024年3月12日，中山大学高国全、周倜及杨霞共同通讯在Signal Transduction and Targeted Therapy（IF 39）在线发表题为“Elevated Kallistatin promotes the occurrence and progression of non-alcoholic fatty liver disease”的研究论文，该研究旨在阐明Kallistatin（KAL）在介导HLP导致NAFLD过程中的致病因素和潜在机制。共招募了221名健康对照和253名HLP受试者，以及62名健康对照和44名NAFLD受试者。结果显示，HLP受试者的血浆KAL水平明显升高，特别是在高三酸甘油酯血症（HTG）受试者中，并且与肝损伤呈正相关。进一步，NAFLD患者的KAL水平也显著上调。KAL转基因小鼠诱导了肝脂肪变性、炎症和纤维化，并且随着时间的推移在高脂饮食（HFD）小鼠中加速了炎症的发展。相反，在高果糖饮食（HFruD）和甲硫氨酸和胆碱缺乏（MCD）饮食诱导的NAFLD大鼠中，KAL基因敲除改善了肝脂肪变性和炎症。在机制上，KAL通过LRP6/Gɑs/PKA/GSK3β途径通过下调过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）和上调kruppel样因子四（KLF4），从而下调脂肪脂肪酶（ATGL）和比较基因鉴定58（CGI-58）诱导肝脂肪变性和NASH。CGI-58在细胞质中与NF-κB p65结合，减少CGI-58促进p65核转位和TNFα诱导。与此同时，肝CGI-58过表达逆转了KAL转基因小鼠的NASH。此外，游离脂肪酸上调了KAL对甲状腺激素的抗性。此外，一种三酸甘油酯降低药物Fenofibrate能通过下调KAL逆转肝脂肪变性。这些结果表明，KAL的升高在HLP导致NAFLD的发展中起着至关重要的作用，并且可能作为潜在的预防和治疗靶点。非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）也被称为代谢紊乱相关性脂肪肝病（MASLD），是一种普遍的肝病，其患病率高达25％，其特点是肝细胞中三酸甘油酯（TG）沉积过多，排除了明显的饮酒和其他损害因素。亚洲的一大部分NAFLD患者并非肥胖；HLP，尤其是HTG，是NAFLD的重要危险因素。此外，据报道，与无NAFLD的相匹配的对照组相比，非肥胖NAFLD患者通常具有更高的血浆TG水平。然而，HLP和NAFLD之间的联系分子和机制尚不完全清楚。NAFLD是一系列与肝脏相关的疾病的通用术语，包括肝脂肪变性、NASH和肝硬化。TG合成与清除之间的不平衡会导致肝脂肪变性。肝脂肪变性通常是自限性和可逆的，但部分可能发展成为NASH，这将导致肝硬化、肝功能衰竭和肝细胞癌等不可逆的肝脏损伤。此外，NASH还会引起非肝脏相关的不良结果，如心血管疾病和恶性肿瘤。然而，目前尚无批准的NASH治疗药物。对肝脂肪变性向NASH和纤维化发展的病因知识仍然不完整。目前，慢性肝脏炎症被认为是NASH的主要原因，NF-κB/TNFα信号通路是NAFLD慢性炎症发展中的一个重要炎症信号通路。模式图（Credit: Signal Transduction and Targeted Therapy）KAL，由SERPINA4编码，是主要表达在肝细胞中的分泌蛋白。糖尿病患者外周血中的KAL水平明显升高，并与TG呈正相关。KAL可以激活核因子κB（NF-κB）信号通路，导致糖尿病伤口组织的炎症。然而，脂质代谢紊乱、KAL和NAFLD之间的关系仍然不清楚。血浆蛋白组学的生物信息学分析还揭示了其他几种显著上调的蛋白质，IGHV4-4（免疫球蛋白重链可变区4-4）、LAMB1（层粘蛋白亚单位β1）和VNN1（Vanin 1）。LAMB1是一种细胞外基质糖蛋白，主要与细胞黏附和迁移有关；VNN1也是一种主要表达在肝细胞中的分泌蛋白，然而，已有报道称VNN1的敲除可以促进禁食状态下肝脏TG的积累，这表明升高的VNN1可能不是NAFLD的诱发因素。因此，作者选择SERPINA4（KAL）进行进一步研究。本研究旨在阐明KAL在NAFLD发生和发展中的作用，以及HLP和NAFLD之间的中介作用。该研究首次证明血清KAL在NAFLD中增加，并且作为肝脂肪变性和炎症的强效起始物，促进HFD小鼠从脂肪变性进展到NASH。相反，Serpina4−/−单独对脂质代谢和肝损伤没有影响，但在HFruD和MCD诱导的NAFLD大鼠中改善了肝脂肪变性和炎症。在机制上，KAL通过下调ATGL和CGI-58通过LRP6/Gɑs/PKA/GSK3β途径诱导肝脂肪变性和NASH。因此，减少CGI-58激活了NF-κB/TNFα信号通路。这些数据表明，KAL是介导NAFLD发生和发展的关键调控分子。原文链接https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.1038/s41392-024-01781-9责编|探索君排版|探索君文章来源|“iNature”End往期精选围观一文读透细胞死亡(Cell Death) | 24年Cell重磅综述（长文收藏版）热文Nature | 破除传统：为何我们需要重新思考肿瘤的命名方式热文Nature | 2024年值得关注的七项技术热文Nature | 自身免疫性疾病能被治愈吗？科学家们终于看到了希望热文CRISPR技术进化史 | 24年Cell综述

▎药明康德内容团队编辑2024年2月，非同生物宣布其研发的新型5T4 x 4-1BB双特异性抗体FTL008.16获得美国FDA批准临床试验，拟开发用于治疗恶性实体肿瘤。2024年1月，爱科瑞思宣布其研发的靶向5T4的抗体偶联药物（ADC）ADC2154获得中国NMPA批准临床试验，拟开发用于治疗晚期实体瘤。在2023年，英百瑞生物也曾宣布其开发的靶向5T4的CAR-NK细胞疗法已获中国NMPA批准临床，拟开发用于实体肿瘤患者的治疗。那么，5T4是什么？从双特异性抗体、ADC到细胞疗法，5T4因何具有这么广的开发潜力？除了上述药物，当前还有哪些靶向5T4的创新疗法已进入到临床试验阶段？它们又有望惠及哪些肿瘤患者？本文将结合公开资料带大家来了解下。图片来源：123RF——✦5T4：肿瘤免疫治疗新星✦——5T4又称滋养层糖蛋白（Trophoblast glycoprotein, TPBG）、Wnt激活抑制因子 1（WAIF1），是由TPBG基因编码的脊椎动物特异性单次跨膜蛋白。5T4蛋白首次在人胎盘组织中发现[1]，是N端高度糖基化的跨膜蛋白。人类5T4全长蛋白的分子量约为72kDa，蛋白序列保守，由420个氨基酸组成。该蛋白在胞外结构域中包含一个细胞外区、一个跨膜区（356-376aa）和一个胞内区（如下图所示）[2,3]，其中胞内区含有PDZ结合基序（Ser-Asp-Val），该结合基序可以与位于细胞附近囊泡相关的细胞质蛋白膜TIP-2/GIPC互相作用，从而可参与细胞迁移和黏附信号转导过程的调控[4]。▲5T4结构（截图来源：Front Mol Neurosci [5]）研究发现，5T4广泛表达于胚胎发育期的各种滋养层细胞，其在成人正常组织中表达受限，只在几种上皮细胞中表达，但却在很多癌症细胞中有表达，包括子宫癌、结肠癌、胃癌、卵巢癌、口腔癌、前列腺癌、肺癌或肾癌等。这一特点使其成为了一种有吸引力的肿瘤免疫治疗新靶点。对于5T4影响肿瘤的作用机制，目前尚不十分清晰。但有相关研究发现，5T4具有阻断经典Wnt/β-catenin通路和非经典Wnt信号通路的双重作用：一方面，5T4会与Wnt共受体LRP6结合并抑制其与Wnt受体的内吞，从而阻断Wnt/β-catenin经典信号通路，继而抑制细胞黏附和细胞骨架的形成，促进肿瘤迁移和扩散；另一方面，5T4还可通过活化DKK1来激活非经典Wnt通路，促进细胞迁移和浸润[6]。此外，还有研究认为，5T4也可能是通过影响上皮间质转化（EMT）和CXCR4/CXCL12相关通路来影响肿瘤细胞的发生、发展、转移等。基于5T4肿瘤表达的选择性模式、与肿瘤起始表型的相关性以及其在癌症扩散中的作用，研究人员认为可以针对该靶点开发不同的免疫疗法[7]，包括疫苗、抗体偶联药物、细胞疗法等等，为患者带来潜在的治疗新选择。——✦多款5T4靶向疗法已迈入临床阶段✦——公开资料显示，目前全球尚无靶向5T4的药物获批上市，但已有很多5T4靶向疗法进入到临床试验阶段。这些在研药物包括双特异性抗体、ADC、细胞疗法、融合蛋白等多种药物类型，针对的适应症均为肿瘤。下面我们将介绍部分已进入临床阶段的在研产品，仅供读者参阅。Aptevo、Alligator：ALG.APV-527作用机制：5T4 x 4-1BB双抗Aptevo Therapeutics和Alligator Biosciences共同开发的ALG.APV-527是一款同时靶向5T4和共刺激受体4-1BB（CD137）的双特异性抗体。在第35届肿瘤免疫治疗学会年会（SITC 2020）上，Aptevo曾展示了ALG.APV-527的研究结果。数据显示，ALG.APV-527具有选择性刺激和增强肿瘤中T细胞反应的潜力，而不会刺激身体其他部位的免疫系统，并在体内动物模型中有效抑制了肿瘤。目前，该候选药正在开展针对实体瘤的1/2期临床研究。非同生物：FTL008.16作用机制：5T4 x 4-1BB双抗FTL008.16是非同生物研发的一款新型5T4 x 4-1BB双特异性抗体，拟开发用于治疗恶性实体肿瘤。该产品可通过5T4抗体引导药物分子聚集于表达5T4抗原的肿瘤部位，由共刺激分子4-1BB抗体诱导肿瘤特异性的免疫细胞激活，产生肿瘤杀伤作用，同时将作用限制在肿瘤部位以降低系统毒性。2024年2月，FTL008.16获美国FDA批准临床试验。NeoTX公司：NAP作用机制：靶向5T4的融合蛋白NeoTX Therapeutics开发的NAP（Naptumomab Estafenatox，ABR-217620）是一款靶向5T4的融合蛋白，该药已完成两项分别针对晚期肾细胞癌患者、晚期或转移性NSCLC受试者的2期临床试验。此外，NAP还正在开展多项1期临床试验，分别为：与阿斯利康（AstraZeneca）PD-L1抑制剂durvalumab联合治疗晚期或转移性实体瘤患者的1期临床；以及联合默沙东（MSD）PD-1抑制剂pembrolizumab治疗尿路上皮癌患者的1期临床。爱科瑞思：ADC2154作用机制：靶向5T4的ADCADC2154是爱科瑞思研发的一款靶向5T4的抗体偶联药物（ADC）。ADC2154结构采用全新结构的拓扑异构酶抑制剂为载荷和全新释放机制的连接子，具有循环系统稳定、靶向肿瘤组织和胞内释放的特点。2024年1月，该药已获中国NMPA批准临床，拟开发用于晚期实体瘤，包括但不限于食管癌、结直肠癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌、肾癌、乳腺癌。Asana公司、Mersana公司：ASN004作用机制：靶向5T4的ADCASN004是Asana Biosciences与Mersana Therapeutics合作开发的一款靶向5T4的ADC，拟用于治疗实体瘤。根据Asana公司官网资料，ASN004结合了一种新型单链scFv-Fc抗体，该抗体与经过临床验证的auristatin F-羟丙基酰胺细胞毒性药物相连。在临床前癌症模型中，ASN004单次给药实现了完全和持久的肿瘤消退。目前该药正处于1期临床试验阶段。Byondis：SYD-1875作用机制：靶向5T4的ADCSYD-1875是Byondis公司开发的一款靶向5T4的ADC。临床前研究显示，在5T4低、中、高表达的多种肿瘤细胞系和人源性组织异种移植（PDX）模型中，SYD-1875不仅能够实现靶向杀伤，也能够诱导旁观者效应介导的抗肿瘤活性。食蟹猴GLP毒性研究显示，该候选药具有可接受的毒性和PK特征，游离毒素水平极低。目前该药已完成了一项1期临床试验。英百瑞：IBR854作用机制：靶向5T4的CAR-raNK细胞产品IBR854是英百瑞生物研发的一款针对实体肿瘤的非基因修饰的CAR-raNK细胞疗法。其核心构造是将靶向5T4的特异性抗体通过连接子与同种异体的NK细胞进行共价偶联，能够与表达5T4靶抗原的肿瘤细胞特异性结合，从而达到靶向识别和杀伤肿瘤细胞的目的。目前，IBR854正在中国开展一项1期临床试验，该研究旨在评价IBR854细胞注射液在不可切除的局部晚期或转移性实体肿瘤患者中的安全性、耐受性及初步疗效。Barinthus公司：VTP-800、VTP850作用机制：靶向5T4的免疫药物Barinthus Biotherapeutics公司开发了两款靶向5T4的免疫治疗候选药物VTP-800和VTP850，拟用于治疗前列腺癌。其中，VTP-800是Barinthus公司开发的一款靶向5T4的第一代免疫候选药物，其与PD-1抑制剂纳武利尤单抗的组合疗法已在针对前列腺癌的1期临床中取得积极效果。VTP-850是Barinthus公司基于VTP-800的1/2a期积极临床试验数据开发的一款下一代免疫候选药物，它可靶向多个与前列腺癌相关的抗原，包括5T4、PSA、PAP、STEAP等。根据Barinthus公司官网信息，该公司预计将于2025年获得VTP-850治疗前列腺癌的1/2期临床数据。当然，除了肿瘤，研究显示靶向5T4还有治疗更多疾病的可能。近年来，该靶点还被发现是帕金森病相关的新潜在基因、是先兆子痫预测和治疗的潜在遗传生物标志物、并在嗅觉和视觉系统的感觉处理中起着关键作用等[8-10]。期待5T4靶向疗法领域能够取得更多的突破，早日造福广大病患！参考资料：（可上下滑动查看） [1] Hole N, Stern PL. (1988) A 72 kD trophoblast glycoprotein defined by a monoclonal antibody. Br J Cancer. https://pubmed-ncbi-nlm-nih-gov.libproxy1.nus.edu.sg/3355761/[2] Myers KA, Rahi-Saund V, Davison MD, et al. (1994) Isolation of a cDNA encoding 5T4 oncofetal trophoblast glycoprotein. An antigen associated with metastasis contains leucine-rich repeats. J Biol Chem. https://pubmed-ncbi-nlm-nih-gov.libproxy1.nus.edu.sg/8132670/[3] Zhao Y, Malinauskas T, Harlos K, et al. (2014) Structural insights into the inhibition of Wnt signaling by cancer antigen 5T4/Wnt-activated inhibitory factor 1. Structure. https://pubmed-ncbi-nlm-nih-gov.libproxy1.nus.edu.sg/24582434/[4] Awan A, Lucic MR, Shaw DM, et al. (2002) 5T4 interacts with TIP-2/GIPC, a PDZ protein, with implications for metastasis. Biochem Biophys Res Commun. https://pubmed-ncbi-nlm-nih-gov.libproxy1.nus.edu.sg/11798178/[5] Tsuboi A. (2020) LRR-Containing Oncofetal Trophoblast Glycoprotein 5T4 Shapes Neural Circuits in Olfactory and Visual Systems. Front Mol Neurosci. https://pubmed-ncbi-nlm-nih-gov.libproxy1.nus.edu.sg/33192298/[6] Kagermeier-Schenk B, Wehner D, Ozhan-Kizil G,  et al. (2011) Waif1/5T4 inhibits Wnt/β-catenin signaling and activates noncanonical Wnt pathways by modifying LRP6 subcellular localization. Dev Cell.  https://pubmed-ncbi-nlm-nih-gov.libproxy1.nus.edu.sg/22100263/[7] Stern PL, Harrop R. (2017) 5T4 oncofoetal antigen: an attractive target for immune intervention in cancer. Cancer Immunol Immunother. https://pubmed-ncbi-nlm-nih-gov.libproxy1.nus.edu.sg/27757559/[8] Wang Y, Li B, Zhao Y. (2022) Inflammation in Preeclampsia: Genetic Biomarkers, Mechanisms, and Therapeutic Strategies. Front Immunol. https://pubmed-ncbi-nlm-nih-gov.libproxy1.nus.edu.sg/35880174/[9] Park S, Yoo JE, Yeon GB, et al. (2021) Trophoblast glycoprotein is a new candidate gene for Parkinson's disease. NPJ Parkinsons Dis. https://pubmed-ncbi-nlm-nih-gov.libproxy1.nus.edu.sg/34876581/[10] Tsuboi A. (2020) LRR-Containing Oncofetal Trophoblast Glycoprotein 5T4 Shapes Neural Circuits in Olfactory and Visual Systems. Front Mol Neurosci. https://pubmed-ncbi-nlm-nih-gov.libproxy1.nus.edu.sg/33192298/[11]各公司官网本文来自药明康德内容团队，欢迎个人转发至朋友圈，谢绝媒体或机构未经授权以任何形式转载至其他平台。转载授权请在「医药观澜」微信公众号留言联系我们。其他合作需求，请联系wuxi_media@wuxiapptec.com。免责声明：药明康德内容团队专注介绍全球生物医药健康研究进展。本文仅作信息交流之目的，文中观点不代表药明康德立场，亦不代表药明康德支持或反对文中观点。本文也不是治疗方案推荐。如需获得治疗方案指导，请前往正规医院就诊。

引言肠道和肝脏通过胆道、门静脉和体循环相互沟通。然而，目前尚不清楚这种肠-肝轴如何调节肠道生理。2024年1月26日，美国国立卫生研究院吴船团队在Cell 在线发表题为“Gut-liver axis calibrates intestinal stem cell fitness”的研究论文，该研究通过肝切除术和转录组学和蛋白质组学分析发现了色素上皮衍生因子(PEDF)，一种肝源性可溶性Wnt抑制剂，通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制肠干细胞(ISC)过度增殖，维持肠道稳态。该研究发现肠道炎症引起的微生物危险信号可以被肝脏感知，从而通过过氧化物酶体增殖物激活受体-α (PPARα)抑制PEDF的产生。这种抑制释放ISC增殖，加速肠道组织修复。此外，用非诺贝特(一种用于治疗低血脂的临床PPARα激动剂)治疗小鼠，由于PEDF活性，增加了结肠炎的易感性。因此，确定了PEDF在通过肠道和肝脏之间的相互作用校准肠内稳态ISC扩张中的独特作用。肝脏通过胆道将胆汁酸和其他生物活性底物运送到肠道肠道微分子和大分子可通过门静脉影响肝脏生理和病理生理。几十年来，临床报告已经表明肠-肝轴在炎症性肠病(IBD)进展中的假定作用，并且已经观察到IBD和慢性肝病(CLD)之间的强烈关联。IBD在西方世界普遍存在，其特征是胃肠道的慢性炎症。这种慢性炎症导致屏障完整性受损，随后微生物转移到血液中的增加，这是肝脏通过门静脉循环感觉到的。过量微生物相关分子模式(Excessive microbial-associated molecular pattern, MAMP)引发的肝脏炎症部分解释了肠道因素，尤其是微生物群如何影响CLD的进展。此外，已有研究表明胆汁酸可促进结直肠癌的进展，强调肝脏在肠道炎症中的关键作用。尽管有这些知识，肠道和肝脏相互沟通调节肠道稳态和炎症的潜在机制仍然知之甚少。肠上皮不断自我更新，以4-5天的周转时间维持肠道屏障的完整性。这一更新过程涉及隐窝基部肠上皮细胞(IECs)的活跃增殖，其特征为Lgr5+肠干细胞(ISCs)。Lgr5+ ISCs的增殖和维持受不同生态位因子的控制，包括Wnt、表皮生长因子(EGF)和骨形态发生蛋白(BMP)。ISC干性的一个关键驱动因素是典型的Wnt/b-catenin信号通路，其中Wnt配体结合卷曲受体和脂蛋白受体相关蛋白5 (LRP5)或LRP6的跨膜辅助受体复合物，导致β-catenin在细胞质中的稳定和积累。然而，ISCs的快速增殖动力学可能导致过度增殖和肿瘤发生，因此，精确校准ISCs中的Wnt信号对于维持肠道生理至关重要。模式图（Credit: Cell）众所周知，随着营养状况的变化，肝细胞会主动分泌多种形式的可溶性因子，包括代谢物、酶和肝因子。鉴于40%的肝脏蛋白被分泌到血液循环中，肝脏分泌组在血浆蛋白质组学中作为代谢性疾病的生物标志物和潜在治疗靶点具有特别的意义。值得注意的是，某些肝因子在肥胖、胰岛素抵抗和脂肪肝疾病的发展中直接作用于脂肪组织、中枢神经系统和骨骼肌，使器官间与肝脏相互作用。总之，该研究证明了肠-肝轴形成了一个负反馈回路，通过调节肝脏PEDF的产生，有助于维持ISC稳态和肠道生理。该研究阐明了PEDF作为一个看门人抑制Wnt/β-catenin信号传导，保护ISCs免于过度增殖。进一步证明，肠道炎症期间微生物群向肝脏的移位抑制了肝细胞产生PEDF，表明这种肠-肝通讯能够自我校准PEDF的产生，从而实现肠道内稳态。原文链接https://www-cell-com.libproxy1.nus.edu.sg/cell/fulltext/S0092-8674(24)00003-5责编|探索君排版|探索君文章来源|“iNature”End往期精选围观Nature | 自身免疫性疾病能被治愈吗？科学家们终于看到了希望热文Science最新发布：全世界最前沿的125个科学问题热文Nature | 2024年值得关注的七项技术热文新发现推翻古老假说：梅毒微生物家族与人类共存已有数千年热文Nat Methods | 自主生物发光成像技术在真核生物中的创新进展