NKG2D

Astellas remains committed to Xyphos’ Advanced Cellular Control through Engineered Ligands (ACCEL) technology, a company spokesperson said. \n On Astellas Pharma’s mission to develop new cell therapies in cancers and other diseases, not all candidates are destined to reach the finish line. Now, following a review of its pipeline, the Japan-based drugmaker has jettisoned an early CAR-T prospect leveraging technology from its subsidiary Xyphos.The asset in question, an autologous CAR-T dubbed ASP2802 aimed at CD20-positive B-cell lymphomas, had been undergoing a phase 1 trial to determine a suitable dose for further studies as well as the candidate’s tolerability and safety. But an Astellas spokesperson confirmed to Fierce Biotech that “as a result of our prioritization efforts, we have made the difficult decision to terminate ASP2802.”“Astellas is continually evaluating how to streamline its operations and prioritize its resources in our continuous effort to deliver meaningful solutions to our patients,” the spokesperson added.They also noted that the work done on ASP2802 has yielded “important progress” and “drug development knowledge” that will benefit the company’s efforts in other disease areas. Additionally, Astellas remains committed to Xyphos’ Advanced Cellular Control through Engineered Ligands (ACCEL) technology, the spokesperson said.Word of the study\'s termination was first reported by Endpoints News.  Astellas paid $120 million upfront to acquire Xyphos in 2019. As part of the pact, Xyphos is also in line to receive potential development milestone payments that could work out to a total deal value of $665 million, Astellas said at the time.The transaction allowed Astellas to get its hands on Xyphos’ synthetic biology platform, which, in the case of CAR cells, leverages an engineered modification to a natural human receptor known as NKG2D. Through protein engineering, Xyphos has modified several natural ligands of NKG2D, allowing them to be wed with tumor-seeking antibodies among other functional molecules.In turn, CAR cells leveraging this approach can be directed by the ligand-bound antibody to seek, become activated and attack a targeted cancer cell, Astellas and Xyphos have said previously.In the case of ASP2802, which was developed using Xyphos’ technology, the CAR-T prospect was accompanied by a so-called MicAbody protein designed to direct and activate the CAR-T component.Despite the decision to scrap ASP2802, Astellas has stayed busy inking cell therapy deals through Xyphos in recent months. Xyphos linked arms with Kelonia in February 2024 for a research and licensing deal worth more than $800 million. The accord saw the companies combine their technologies to work on up to two programs in immuno-oncology, with the second contingent upon Xyphos opting in.Three months later, Xyphos signed a deal with Poseida Therapeutics to develop two cell therapy candidates for solid tumors that will fuse Poseida’s allogeneic CAR-T platform with Xyphos’ ACCEL technology.Aside from ASP2802, Astellas is working on a wide range of cell therapies seeking to tackle cancers, vascular disease, autoimmune diseases and more. 

点击蓝字 关注我们 癌症，一直是人类健康的重大威胁。近年来，免疫治疗成为癌症治疗领域的新希望，但疗效受肿瘤免疫微环境（TIME）的复杂性和异质性等因素影响。不过，科学家们从未停止探索的脚步，近日，来自北京大学陈鹏团队、北京大学席建忠团队、中国医学科学院康晓征团队、南京大学李颜团队和北京大学林坚团队在Cell上发表了题为“Multimodal targeting chimeras enable integrated immunotherapy leveraging tumor-immune microenvironment”的研究论文，该研究成果为癌症免疫治疗带来了新的曙光。 背景与创新思路 免疫疗法在癌症治疗中有重要意义，但疗效受肿瘤免疫微环境（TIME）复杂性和异质性影响。传统联合疗法存在毒性风险且多为独立作用而非协同。而将多种疗法整合到单一药剂中的策略，虽有潜力解决联合疗法的问题，但当前的双特异性或多特异性抗体存在局限性，如多数只能结合一种免疫细胞，少数能结合两种的又可能牺牲肿瘤靶向性。 本研究的创新之处在于开发了一种基于三重正交连接子（T - Linker）的可编程平台，能够整合多种治疗模块到单克隆抗体，形成多模态靶向嵌合体（Multi - TACs），实现对肿瘤免疫微环境中多种免疫细胞的协同调控，克服现有抗体疗法的局限性。 核心研究结果 01 T - Linker 技术的开发 为了实现多种治疗模块的整合，该研究团队致力于开发一种特殊的支架。他们筛选出叠氮化物/二苯并环辛炔（DBCO）和四嗪（TZ）/双环[2.1.0]壬炔（BCN）这两个生物正交对，以及分选酶A（SrtA）转肽反应，它们具有高效且相互正交的特性。在构建 T - Linker 时，利用这些正交反应将不同的治疗模块（如肿瘤靶向模块、免疫细胞结合模块等）精确地连接在一起。例如，通过特定的反应顺序，先利用一种正交反应将一个模块连接到 T - Linker 上，然后在不影响已连接模块的情况下，利用另一种正交反应连接其他模块。这种方式使得 T - Linker 能够以可编程的方式整合多个模块，从而构建出多模态靶向嵌合体（Multi - TACs）。 T - Linker 具有独特的三分支核心和三种反应性基团，能够与携带互补反应手柄的三个模块精确结合，就像一个智能连接器，将不同的功能组件连接在一起。 而且，经过体内毒性实验验证，T - Linker 安全且生物相容性良好，这为后续构建多功能的治疗分子奠定了坚实基础，也实现对肿瘤免疫微环境中多种免疫细胞的协同调控，提高癌症免疫治疗的效果。 02 Multi - TAC 平台的建立 为了构建Multi-TAC，研究人员系统地准备了一系列治疗模块。首先，他们制备了三种针对淋巴细胞的接合模块，包括抗 CD3 纳米抗体（作为 T 细胞结合部分）、抗 CD16 和抗 NKG2D 纳米抗体（用于招募 NK 细胞）以及巨细胞病毒（CMV）肽（作为激活抗原特异性 T 细胞的代表抗原）。这些模块能够特异性地识别和作用于淋巴细胞，为后续协同免疫反应的启动奠定基础。其次，研究人员合成了针对髓系细胞的不同类型治疗模块，如抗程序性死亡配体 1（PDL1）和C型凝集素域家族9A（CLEC9A）纳米抗体（用于与树突状细胞结合）、包括咪唑喹啉（IMDQ）、胞苷 - 磷酸 - 鸟苷（CPG）寡脱氧核苷酸和二酰胺基苯并咪唑（diABZI）等作为 Toll 样受体（TLR）7/8、TLR9 和干扰素基因刺激物（STING）的激动剂（用于激活髓系细胞），以及信号转导和转录激活因子 3（STAT3）反义寡核苷酸（用于抑制抑制性髓系细胞）。这些模块能够调节髓系细胞的功能，增强其在抗肿瘤免疫中的作用。最后，研究人员生产了抗表皮生长因子受体（EGFR）纳米抗体和抗人表皮生长因子受体 2（HER2）作为肿瘤靶向基团，确保治疗分子能够精准地识别并结合肿瘤细胞，提高治疗的特异性和有效性。 以合成的T-Linker为基础，通过特定顺序将治疗模块与之偶联。首先，将携带 “LPETG” 序列的模块与T-Linker反应，然后依次连接携带 DBCO 和 BCN 生物正交基团的模块。这种基于T-Linker的三重正交偶联方式，使得各种治疗模块能够按照预定设计成功构建到 Multi-TACs 上，实现了对不同免疫细胞和肿瘤细胞的多功能靶向调控。例如，通过这种方式构建了EGFR-CD3-PDL1 Multi-TAC，它能够同时结合肿瘤细胞的EGFR、T细胞的 CD3 和 DC 细胞的PDL1，实现了T-DC 细胞在肿瘤部位的共结合，促进了免疫细胞之间的协同作用，有效激活抗肿瘤免疫反应。 除了上述的EGFR-CD3-PDL1 Multi-TAC外，研究人员成功构建了多种不同功能的Multi-TACs，例如EGFR-CD3-CLEC9A、EGFR-CD3-CD16、EGFR-CD3-NKG2D、HER2 - CD3 - (IMDQ)、HER2-CD3-(diABZI) 以及 EGFR-CD3-CPG、EGFR-CD3-STAT3、EGFR-CD3-(CMV) 等。这些 Multi-TACs 能够针对不同的肿瘤类型和免疫细胞组合，实现多样化的免疫调节和肿瘤靶向治疗策略，为癌症免疫治疗提供了丰富的选择和强大的工具。 03 EGFR-CD3-PDL1 Multi-TAC的卓越功能 这款多特异性分子可以同时结合肿瘤细胞 EGFR、T 细胞 CD3 和 DC 细胞 PDL1，就像一把精准的钥匙，同时开启了肿瘤细胞识别、T 细胞激活和 DC 细胞调节的三把锁。在体外三细胞共培养实验中，它显著增强了 T 细胞的免疫活性，促使 T 细胞大量分泌炎症因子，例如IFN-γ和颗粒酶B等，有效激活 DC 细胞，使其表面活化标记物显著上调，从而大幅促进了肿瘤杀伤，且效果明显优于双特异性对照。 在多种人源化小鼠模型（PBMC 人源化小鼠、HSC 人源化小鼠、转基因人源化小鼠）中，EGFR - CD3 - PDL1 Multi - TAC 均表现出出色的肿瘤靶向性，就像精准的导弹一样，能够准确地找到肿瘤并与之结合。它有效促进了肿瘤内 T 细胞和 DC 细胞的反应，重塑了抗肿瘤微环境，成功产生了抗原特异性免疫，显著抑制了肿瘤生长。在患者来源肿瘤模型（PTCs）中，它对多种癌症样本也展现出较高的有效率，总体有效率达到 75%，在非小细胞肺癌中的有效率更是高达 87%，为癌症患者带来了新的希望。 04 拓展 Multi - TAC 策略用于其他免疫细胞协同 为了进一步扩大Multi-TAC平台的能力，研究人员试图整合NK细胞的抗肿瘤能力。作为适应性和先天免疫中的两种主要效应物，T细胞和NK细胞可以协同工作以对抗肿瘤异质性和免疫逃逸。因此，他们构建了 EGFR - CD3 - CD16 Multi - TAC，用于 T - NK细胞协同作战。它能够同时激活T细胞和NK细胞，在肿瘤细胞与 T、NK细胞共培养实验中，其协同杀伤肿瘤的能力显著强于双特异性对照，就像给免疫系统增添了一对有力的翅膀，使其对肿瘤的攻击更加猛烈。 另外，越来越多的证据表明，一群骨髓细胞如DC、巨噬细胞和单核细胞可以对T细胞免疫疗法提供协调的应答。因此，研究人员扩展了他们的技术以共同参与T细胞和骨髓细胞。HER2 - CD3 - (IMDQ) Multi - TAC被构建用于 T - 髓系细胞协同。它可以在肿瘤微环境中释放 IMDQ，从而激活髓系细胞，在肿瘤细胞与 T 细胞共培养实验中，成功诱导了髓系细胞的活化，进一步促进了肿瘤杀伤，为免疫系统对抗肿瘤提供了更多的武器和策略。 研究意义与展望 Multi - TAC 平台为癌症免疫治疗开辟了新的道路。通过多种免疫细胞的协同作用，它有望克服肿瘤异质性、免疫逃逸和耐药性等难题，就像一支多兵种协同作战的部队，能够更有效地攻克肿瘤这座坚固的堡垒。未来，该平台有望应用于更多癌症类型，根据患者 TIME 特征设计优化 Multi - TACs，利用患者来源肿瘤模型实现个性化治疗，真正做到精准医疗。此外，该平台在生产其他类型多特异性药物（如 ADCs、PROTACs、LYTACs 等）方面也具有巨大潜力，有望为癌症治疗带来更多创新的解决方案。 END 声明：本文由“肿瘤界”整理与汇编，欢迎分享转载，如需使用本文内容，请务必注明出处。 来源： 浙江大学智能创新药物研究院 原标题：研途启智 | 癌症免疫治疗新突破：多模态靶向嵌合体（Multi - TACs）引领精准免疫协同疗法 排版：lagertha 校对：松月

1 前言 自然杀伤（NK）细胞是起源于淋巴的细胞毒性先天免疫细胞。1973年，人们发现了一种非T非B淋巴细胞亚群可有效杀死被抗体识别的细胞，随后首次被描述为“null”杀伤细胞。两年后，有报道称这种细胞能够杀死各种类型的肿瘤细胞，并创造了术语“自然”杀伤细胞。NK细胞不仅在抗肿瘤反应中发挥作用，而且在抵抗微生物感染方面也发挥作用。 NK细胞表达多种激活和抑制受体，这些受体介导的信号之间的平衡决定了NK细胞激活的结果。NK细胞在没有预先致敏的情况下杀死癌细胞的能力在肿瘤免疫监测中发挥重要作用。以 NK 细胞为基础的肿瘤免疫治疗领域已经到了一个激动人心的关头。虽然这些疗法还没有取得与过继性 T 细胞疗法同样程度的临床成功，但是早期的令人鼓舞的结果使 NK 细胞疗法的开发热情越来越高。 2 NK细胞生物学 NK细胞是第一个被鉴定的先天性淋巴细胞（ILC）亚型，能对病毒感染和/或转化的细胞产生多种效应器功能，主要是细胞杀伤和产生促炎细胞因子。NK细胞和其他ILC家族成员（—1型ILC（ILC1s）、ILC2s和ILC3s）与B细胞和T细胞来源于相同的淋巴祖细胞。NK细胞的细胞毒性活性使它们在功能上与CD8+T细胞最为相似，而ILC1、ILC2和ILC3群体的细胞因子生成模式将这些细胞分别对应CD4+T细胞的TH1、TH2和TH17亚群。 NK细胞的两个最典型的亚群是CD56brightCD16-和CD56dimCD16+群体。CD56bright细胞在外周血中的数量较少（循环中90%的NK细胞是CD56dim），而组织中的NK细胞主要是CD56bright。CD56bright NK细胞是强有力的细胞因子产生者，除非受到促炎性细胞因子如IL-15的刺激，否则细胞毒性较弱。相比之下，CD56dim NK细胞群可介导感染细胞和恶性细胞的连续杀伤，主要通过包含颗粒酶B和穿孔素的预先组装的溶细胞颗粒在免疫突触中的胞吐，最终诱导靶细胞凋亡。 3 NK细胞的抗肿瘤效应机制 NK细胞具有多种功能，可以限制癌细胞的生长和扩散。在TME先天性和适应性免疫细胞产生促炎性趋化因子的指导下，循环NK细胞可被招募到肿瘤发生的部位。CXCR3–CXCR4、CX3CR1和CCR3–CCR5是NK细胞亚群差异表达的主要趋化受体。 进入TME后，NK细胞可以通过“丢失自我”机制杀死癌细胞。许多癌细胞下调MHC I分子的表达，以逃避细胞毒性CD8+T细胞的检测，然而NK细胞能够识别和响应这种缺失的自我表型的细胞，最终导致靶细胞裂解。因此，在T细胞不能识别MHC I下调癌细胞的情况下，NK细胞具有治疗潜力。  ADCC是NK细胞介导的杀伤癌细胞的另一个关键机制。除了直接诱导细胞毒性外，NK细胞还通过产生促炎性细胞因子（包括IFN-γ和TNF）对转化细胞作出反应。 4 NK细胞的免疫检查点抑制 关于ICI的研究主要集中在抗肿瘤T细胞的去抑制，这种治疗模式增强NK细胞的活性也引起了相当大的关注。例如，人源化抗NKG2A单克隆抗体monalizumab目前正在对多种癌症患者进行单药试验，或与其他免疫检查点抑制剂联合应用，临床前数据表明这种药物能显著增强NK细胞和T细胞的细胞毒性。 TIGIT是另一种由NK细胞和T细胞表达的抑制性受体，其配体在人类肿瘤浸润的NK细胞上过表达。在一些小鼠模型中，TIGIT抑制逆转NK细胞衰竭并促进NK细胞依赖性抗肿瘤免疫。已经设计了一些积极的临床试验来测试单独抗TIGIT药物以及与其他免疫检查点抑制剂联合使用的有效性和/或安全性。（如NCT03119428、NCT04150965、NCT04047862、NCT04256421、NCT03563716和NCT04294810） 另外还有LAG-3和TIM-3，来自小鼠NK细胞研究的数据表明LAG-3在介导对肿瘤细胞系的细胞毒性方面起着积极作用；肺腺癌患者NK细胞上TIM-3表达增加预示着不良预后，体外抑制这种NK细胞的TIM-3增强了其细胞毒性和IFNγ的产生。目前，多个临床试验正在对各种癌症患者进行LAG-3和TIM-3抑制剂的试验，（包括NCT01968109、NCT04150965、NCT04140500、NCT03625323、NCT0331142、NCT03066648、NCT03489343、NCT03680508和NCT04139902等）。 其它基于NK细胞的免疫检查点还包括CD96、 Siglec-7/9、CD200R、CD47、CTLA-4、PD-1和B7-H3，将这些检查点结合起来进行协同抗肿瘤反应是未来充分发挥NK细胞杀伤肿瘤作用的方向。 5 过继性NK细胞疗法 异基因外周血NK细胞只是治疗性NK细胞众多潜在来源之一。NK细胞约占外周血淋巴细胞总数的10%，而脐带血（UCB）中的NK细胞占淋巴细胞总数的30%；因此，UCB是治疗效应NK细胞的可靠来源。UCBNK细胞的治疗效果目前正在一些临床试验中进行评估（如NCT01619761和NCT02280525）。 克隆性NK细胞系，如NK-92、KHYG-1和YT细胞，是异基因NK细胞的替代来源，NK-92细胞系已在临床试验中得到广泛测试。然而，这些细胞是非整倍体，因此遗传不稳定，这就要求它们在输注前接受辐照。辐照的NK-92细胞被观察到可以杀死癌症患者的肿瘤细胞。 此外，临床上正在对来自多种来源的干细胞衍生NK细胞产物进行检测，包括来自UCB干细胞或诱导多能干细胞（IPSC）的NK细胞产物。将成年细胞重新编程为多能干细胞，以使其分化为NK细胞并扩展生成最终产物，是基于iPSC的方法的一个独特特征。一项临床试验目前正在招募血液或实体癌患者，以测试这些现成的iPSC衍生NK细胞的安全性。 适应性NK细胞是治疗性NK细胞的另一个新兴来源。适应性NK细胞是一种自然发生的细胞群，在HCMV感染或再激活后在人类中扩增。HCMV UL40衍生肽抗原-HLA-E复合物与NK细胞上NKG2C之间的相互作用，导致NKG2ChiCD57+NK细胞增殖，NKG2ChiCD57+NK细胞下调参与细胞内信号传导的某些蛋白质，包括PLZF、SYK和FcεRIγ。适应性NK细胞具有一些独特的效应器特性，包括增强的ADCC、增强的细胞因子反应和对MDSCs和Treg细胞免疫抑制作用的固有抵抗。目前，三项临床试验正在评估这些适应性NK细胞对各种癌症患者的疗效。 细胞因子诱导记忆样（CIML）NK细胞是异基因细胞治疗的另一种选择，与其他类型的NK细胞产品相比具有独特的优势。CIML-NK细胞在体外通过IL-12、IL-15和IL-18的短暂启动，产生对细胞因子反应增强的NK细胞，并激活持续数周至数月的受体刺激。将这些CIML-NK细胞输注到携带AML异种移植物的小鼠体内可产生强大的抗肿瘤作用并显著延长存活时间。在I期试验中，CIML NK细胞具有良好的安全性，在44%的可评估AML患者（4/9）体内扩增并诱导病情缓解。 6 CAR-NK 嵌合抗原受体（CAR）是一种受体蛋白，它赋予免疫细胞新的能力，以靶向特定的抗原蛋白。CAR-NK细胞免疫疗法比CAR-T细胞免疫疗法更安全，而且NK细胞的安全性已在一些临床领域得到验证。例如，一些I/II期试验显示，同种异体NK细胞输注耐受性良好，不会引起GVHD和明显的毒性。因此，NK细胞是一种适应性更强的CAR载体，而不仅仅局限于自体细胞。 NK细胞上表达的功能性CAR分子由三部分组成：胞外结构域、跨膜区以及胞内的信号结构域。胞外结构域由一个信号肽和识别抗原的单链抗体片段（scFv）组成，一段铰链区将这个结构连接到跨膜区，它也在细胞内连接到包含激活信号的胞内结构域。成功的CAR设计是通过仔细的设计和功能测试相结合来实现的。 载体骨架和启动子 载体骨架包含表达CAR所需的所有元件，如启动子、polyA信号和转录调控片段。 启动子的选择直接影响到转基因的表达水平。目前，对不同启动子在NK细胞系中的CAR表达和功能的比较只有一次报道，而对原代NK细胞没有比较数据。就这一次单个报告来看，还不能确定CAR-NK细胞的最佳启动子。 目前关于CAR-NK细胞的报道显示，多种启动子被用于驱动CAR的表达，无论是细胞系来源的还是原代NK细胞。在原代CAR-NK和CAR-NK细胞系中，病毒启动子（CMV、MPSV、MMLV、SFFV等）比组成性活性启动子（如EF1α、CMV和PGK）更常用。 信号肽 在信号肽中存在着巨大的异质性，这直接转化为不同水平的蛋白质分泌效率。对于CAR-NK和CAR-T细胞，还没有确定最佳信号肽的比较研究。目前，CD8a-SP是原代NK细胞最常用的信号肽序列（16%，71%的研究中未公布）和NK细胞系的免疫球蛋白重链或轻链信号肽（29%）。 单链抗体 单链抗体片段是CAR的肿瘤抗原结合域，该结构域将决定CAR-NK细胞的特异性和功能。 由于单链抗体不是抗体的天然形式，因此重链和轻链的顺序是人工确定的。到目前为止，对于CAR-NK设计，大多数更喜欢VH-VL方向，而不是VL-VH方向。 Fujiwara等人证明重链和轻链的顺序不影响T细胞上抗KDR CAR的表达水平。 此外，细胞可以配备多个单链抗体，从而扩大CAR效应细胞的抗原识别能力。在这里，有多种选择：CARs可以用双元件的载体转导，诱导两个CAR结构的表达；或者将两个单链抗体融合在一个结构中，产生串联单链抗体的“单柄”CAR。虽然这些技术已用于生产CAR-T细胞，但CAR-NK细胞仍未知。 目前大多数临床CAR-T细胞试验都使用了来自小鼠抗体的单链抗体，这增加了抗小鼠IgG细胞宿主抗移植物病的风险，这个问题可以通过人源化或筛选全人抗体避免。然而不幸的是，由于这些CAR受体的嵌合特性，即使是人源化的单链抗体也可能诱导宿主抗独特型免疫反应。幸运的是，在迄今为止数量有限的CAR-NK临床试验中，没有发现与抗CAR免疫反应相关的重大副作用。 连接区 重链和轻链之间的连接区有助于稳定单链抗体的构象，过短会导致多聚体的形成，过长可能导致水解或降低VH和VL结构域之间的关联。对于CAR-NK细胞，五肽GGGGS的多聚体应用最为广泛，通常为3个重复。另一个旨在增强蛋白水解稳定性的连接体是Whitlow“218”连接体：GSTGSGSKPGSGEGSTKG。 目前，虽然大多数CAR-NK研究没有提供连接细节，但已有的研究报道中，有22项使用了G4S连接，有2项应用了218连接。 铰链区 铰链区是连接单链抗体单位和跨膜结构域的CAR细胞外结构区，它通常维持效应细胞中稳健的CAR表达和活性所需的稳定性。大多数CAR-NK构建使用CD8α或CD28胞外结构域的衍生物或基于IgG的铰链区。 铰链区的类型和长度对CAR的功能活动有重要影响。但是目前大多数信息全来自CAR-T领域，能否直接转化为CAR-NK还有待证明。 在CD28和CD8α铰链区之间的直接比较中，发现CD28更有可能促进CAR分子的二聚化，因此，CD28铰链区的CAR产生的激活刺激更强。虽然这可能是有益的，但也可能导致更严重的副作用。 IgG为基础的铰链区也广泛应用于CAR结构。基于IgG铰链区的一个主要优点是结构的灵活性，该结构通常由IgG1或IgG4的FC部分或Fc部分的CH2/CH3结构域组成。铰链区的长度可以调节以适应抗原识别，但研究发现，间隔区越短，细胞因子的产生越高，CAR-T细胞增殖越快，体内持久性和抗肿瘤效果越好。 对于CAR-NK细胞，大多数研究在原代NK细胞（16/35）和CAR-NK细胞系（41/72）中均采用CD8α铰链区。其它使用的铰链区包括CD28、IgG Fc结构域和DAP12。 跨膜结构域  跨膜（TM）结构域连接CAR的胞外结构域和细胞内激活信号结构域，CAR-NK最常用的TM部分来自CD3ζ、CD8和CD28，但其他如NKG2D、2B4、DNAM1也有被使用。 TM结构域的选择影响了CAR结构在细胞功能上的活化程度。通常在NK细胞上表达的分子如DNAM-1、2B4和NKG2D的TM会导致更多的CD107a脱颗粒和更高的细胞毒性，因此，TM的具体来源将决定CAR-NK的活性。 TM结构域的一个重要方面是，最佳TM区域应遵循T细胞或NK细胞上跨膜蛋白的蛋白质自然取向（N端到C端顺序）。NKG2D虽然是一种强大的NK细胞激活剂，然而，天然NKG2D具有C端到N端的跨膜区。 目前，CD8α和CD28修饰的TM在原代CAR-NK细胞中最常见，而CD28是CAR-NK细胞系的首选TM区域。 CAR-NK激活信号 CAR的细胞内激活信号的数量决定了其属于哪一“代”CAR。 第一代CAR-NK细胞与CAR-T细胞一样，只含有CD3ζ信号。第二代和第三代CAR-NK分别携带一个和两个额外的共刺激信号，共刺激分子通常来源于CD28家族（CD28和ICOS）、TNFR家族（4-1BB、OX40和CD27）或SLAM相关受体家族（2B4）。到目前为止，唯一公布的CAR-NK临床试验采用了第二代CAR-NK构建，该构建通过加入IL-15表达和诱导Caspase9增强活性。 目前大多数CAR结构依赖于CD3ζ链信号域，强烈的激活信号对于诱导有效的抗肿瘤反应很重要，但也可能导致效应细胞的快速衰竭。因此，共刺激域的组合可用于校准所需的免疫细胞反应。与基于4-1BB的 CARs相比，基于CD28的CARs表现出更快的效应器特征，诱导更高水平的IFN-γ、颗粒酶B、TNF-α。然而，这种强烈的共刺激信号也会导致活化诱导的细胞死亡（AICD）。 相比较，4-1BB-CD3ζ信号优先诱导记忆相关基因和持续的抗肿瘤活性。原因可能是4-1BB结构域改善了CD28结构域引起的T细胞耗竭。 如上图所示，在CAR-NK细胞系和原代CAR-NK细胞的研究中，CD3ζ几乎被普遍用作主要的激活域，其中大约一半携带一个额外的激活域，通常添加4-1BB或CD28。至于第三代结构，CD28/4-1BB/CD3ζ的组合是最常用的。 7 NK细胞定向接合器 各种免疫逃避机制限制了NK细胞在体内与肿瘤细胞的结合程度，是实现广泛有效的NK细胞治疗的主要障碍。为了增强肿瘤浸润性NK细胞的自然细胞毒性，许多研究团队已经在开发一些分子，使这些细胞以抗原特异性的方式与肿瘤细胞接触。这些分子通常是由多个抗体（通常为单链抗体）组成的双特异或三特异性接合器，使得一个结构域针对NK细胞激活受体，另一个与特定肿瘤相关抗原结合。例如，一种由两个单链抗体组成的三特异性杀伤接合器（TriKE），一个针对NK细胞上的CD16，另一个针对AML细胞的CD33，通过IL-15结构域连接，该结构域旨在增强NK细胞的存活和增殖。 这种抗CD16、IL-15和抗CD33 TriKE（GTB-3550）增强了NK细胞效应器功能的其他几个重要方面，在临床前研究中观察到了改善迁移能力、增加连续杀伤和缩短首次杀伤时间。 在临床前研究中，其他几种NKCE分子也被证明具有强大的抗肿瘤作用。AFM13靶向淋巴瘤相关抗原CD30和CD16a，后者是NK细胞表达的CD16的跨膜形式。AFM13在AACR 2022中表现惊艳，AFM13+脐血来源NK细胞治疗，完全缓解率达到62%。 8 展望 自然杀伤细胞是一组独特的抗肿瘤效应细胞，具有不受MHC限制的细胞毒性、产生细胞因子和免疫记忆等功能，使其成为先天性和适应性免疫反应系统中的关键角色。一些癌症的发生与功能失调的NK细胞有关。因此，修复这种NK细胞可能是抗肿瘤免疫治疗的一个潜在选择。这种修复的一种方法是抑制免疫检查点，即癌细胞通过控制免疫细胞表面的抑制受体进行免疫逃逸。 利用NK细胞与抗体、免疫细胞接合器、CARs和其它检查点抑制剂的组合方法进行试验，这些方法旨在调节抑制检查点和增强抗肿瘤能力。目标是找到一种基于NK细胞的治疗策略，这种策略是安全的，并且具有广泛临床应用所需的确切疗效。 参考文献： 1.Exploring the NK cell platform for cancer immunotherapy. Nat RevClin Oncol. 2020 Sep 15. 2. K Cell-Based Immune Checkpoint Inhibition. Front. Immunol., 13February 2020  3. CAR-expressing NK cells for cancer therapy: a new hope. BiosciTrends. 2020 Sep 6. 4. Chimeric antigen receptornatural killer (CAR-NK) cell design and engineering for cancer therapy. JHematol Oncol. 2021; 14: 73. 往期链接 “小小疫苗”养成记 | 医药公司管线盘点  人人学懂免疫学 | 人人学懂免疫学（语音版）    综述文章解读 | 文献略读 | 医学科普 | 医药前沿笔记 PROTAC技术 | 抗体药物 | 抗体药物偶联-ADC 核酸疫苗 | CAR技术 | 化学生物学 温馨提示 医药速览公众号目前已经有近12个交流群（好学，有趣且奔波于医药圈人才聚集于此）。进群加作者微信（yiyaoxueshu666）或者扫描公众号二维码添加作者，备注“姓名/昵称-企业/高校-具体研究领域/专业”，此群仅为科研交流群，非诚勿扰。 简单操作即可星标⭐️医药速览，第一时间收到我们的推送 ①点击标题下方“医药速览”   ②至右上角“...”  ③点击“设为星标