OAT1

● 前 言 乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）是ATP结合盒（ATP binding cassette, ABC）转运蛋白家族G亚家族中的重要成员，在人体肠、肝和脑等重要器官中均有表达[1]，对小分子药物具有“药泵”作用，改变药物的吸收、分布和排泄，进而影响药效及安全性[1]。药物（包括BCRP的底物和抑制剂）与BCRP作用，可能导致药物相互作用（drug‑drug interaction，DDI），也会影响药效或产生毒副作用。鉴于体外与临床DDI的相关性，美国食品和药物管理局（FDA）、欧洲药品管理局（EMA）以及中国国家药品监督管理局（NMPA）等监管机构及国际人用药品注册技术协调会（ICH）均在指导原则中推荐，通过体外模型评估在研药物是否为BCRP的底物[2-5]。本文将介绍药明康德DMPK开发的一种基于Caco‑2细胞模型的新颖的BCRP底物评估方法，该方法不仅克服了传统方法的局限性，更提高了测试的灵敏度及准确性。 基于Caco-2细胞的传统BCRP底物评估模型 工业界广泛采用细胞双向渗透模型评估在研药物是否为BCRP的底物，Caco‑2细胞为常用模型之一[2-5]。Caco-2细胞是一种人的结肠癌细胞，经特定培养，细胞间会紧密连接并分化为与人小肠细胞形态和功能极为相似的细胞，表达多种转运体，如P-糖蛋白（P‑gp）和BCRP等。 在BCRP底物评估实验中，Caco-2细胞接种于Transwell®细胞板中，经21-28天培养后用于实验。根据传统方法（图1），在含有或不含BCRP抑制剂时，将在研药物添加到单层细胞的顶端（apical，A）或基底端（basolateral，B），孵育一段时间后，检测被转运至接收端的药量。根据A-B（吸收）和B-A（流出）两个方向上的表观渗透率（apparent permeability，Papp），计算在研药物的外排率ER（efflux ratio）用于底物评估。 图1. 基于Caco-2细胞的传统BCRP底物评估方法的模型示例 同时满足以下两个条件，则表明在研药物可能为BCRP的底物： 1.不含抑制剂的外排率（ERa）≥2； 2.含有抑制剂的外排率（ERi）相较ERa下降50%及以上，即ERa/ERi>2。 Caco-2细胞可表达多种转运体，根据指导原则的建议[2-5]，开展在研药物BCRP底物评估时，需使用两种或更多已知的BCRP抑制剂来确证研究结果。由于Caco‑2细胞高表达P‑gp[6]，对既是BCRP底物又是P-gp底物的在研药物，当采用传统方法开展BCRP底物评估时，即使采用两种抑制剂进行BCRP底物评估，也可能会出现假阴性结果。比如拓扑替康（topotecan），一种喜树碱类抗癌药，文献报告其为P-gp和BCRP的双底物[7]，但在Caco-2细胞中采用传统方法进行BCRP底物评估时，却出现了假阴性结果：在含有及不含BCRP抑制剂新生霉素、柳氮磺胺吡啶时的ERa/ERi值均小于2（表1）。 表1. 在Caco-2细胞模型中采用传统方法对拓扑替康进行BCRP底物评估的结果 BCRP底物评估方法的优化 在Caco-2细胞中，拓扑替康受到BCRP及P-gp共同介导的外排转运作用。根据表1的数据，含有BCRP抑制剂新生霉素、柳氮磺胺吡啶时，拓扑替康的ERi值分别为38.1和44.8，超过不含抑制剂时ERa值的50%，这表明P-gp对拓扑替康外排转运的贡献大于BCRP。在这种情况下，P‑gp转运体可能会影响BCRP底物的评估，表现出假阴性结果。针对这种情况，我们对传统方法进行了优化，在实验体系中添加P-gp的抑制剂，抑制P-gp的转运活性，降低其对BCRP底物评估的影响（图2）。该方法已提交中国专利申请，申请号为202311673349.7。 图2. 传统方法与优化方法的实验原理对比 采用优化方法对拓扑替康进行BCRP底物评估实验，结果见表2，通过P-gp抑制剂唑喹达抑制P-gp，在含有及不含BCRP抑制剂新生霉素、柳氮磺胺吡啶时，拓扑替康的ERa和ERa/ERi的值均大于2，因此，在优化的Caco-2细胞模型中，拓扑替康能够被正确评估为BCRP的底物。 表2. 在Caco-2细胞模型中采用优化方法对拓扑替康进行BCRP底物评估的结果 传统方法与优化方法的对比 结合文献报道[3,7,8,9]，我们选择了2种BCRP底物，以及9种BCRP/P-gp双底物，在Caco‑2细胞中分别采用传统及优化方法进行BCRP底物评估，如表3所示，出现了三种情况。 表3. 模型化合物的验证结果 以雌酮3-硫酸盐（estrone-3-sulfate）为例，该化合物是BCRP的底物，但不是P-gp的底物，因此，在进行BCRP底物评估时，不受P-gp影响。采用传统方法和优化方法均能得到雌酮3‑硫酸盐是BCRP底物的结论（表4）。 表4. 雌酮3-硫酸盐的BCRP底物评估实验结果 以瑞舒伐他汀（rosuvastatin）为例，该化合物是BCRP/P-gp的双底物,但P-gp对其外排转运的贡献小于BCRP（在传统方法中，含有BCRP抑制剂时，瑞舒伐他汀的ERi值低于其不含抑制剂时ERa值的50%），因此，P-gp对瑞舒伐他汀BCRP底物评估影响相对小，采用传统方法和优化方法均能得到其是BCRP底物的结论，但在优化方法得到的ERa/ERi值更大，表明优化方法比传统方法的测试灵敏度高（表5）。 表5. 瑞舒伐他汀的BCRP底物评估实验结果 以SN38为例，该化合物是BCRP/P-gp的双底物，但P-gp对其外排转运的贡献大于BCRP（在传统方法中，含有BCRP抑制剂时，SN38的ERi值高于其不含抑制剂时ERa值的50%）。在Caco-2细胞中，采用传统方法得到SN38不是BCRP底物的假阴性结论，而采用优化方法则能准确地将其评估为BCRP的底物，表明优化方法比传统方法的测试准确性好（表6）。 表6. SN38的BCRP底物评估实验结果  小 结 相较于传统方法，优化的BCRP底物评估方法通过在实验体系中添加P-gp的抑制剂，可降低P-gp转运体对BCRP底物评估的影响，提高基于Caco-2细胞模型的BCRP底物评估的灵敏度和准确性，减少假阴性结果。 结 语 药明康德DMPK在转运体介导的药物相互作用研究领域积累了丰富的经验。目前已成功建立了7种ABC转运体（P-gp、BCRP、BSEP、MRP1/2/3/4）以及12种SLC转运体（OATP1B1、OATP1B3、OATP2B1、OAT1、OAT3、OCT1、OCT2、MATE1、MATE2-K、PEPT1、PEPT2和NTCP）的评价模型，覆盖了各大监管机构推荐的所有与药物可能会发生相互作用的转运体类型，不仅可以进行底物与抑制的评价，也可以开展转运体底物Km和Vmax及转运体抑制剂Ki的测定，为药物相互作用评估提供了更准确的临床前依据，助力客户新药研发项目。 参考文献： [1] Morrissey KM, Wen CC, Johns SJ, Zhang L, Huang SM, Giacomini KM, "The UCSF-FDA TransPortal: A Public Drug Transporter Database", Clinical Pharmacology and Therapeutics (2012) 92(5):545-6. [2] National Medical Products Administration (NMPA). 药物相互作用研究技术指导原则 Published 2021. [3] U.S. Food and Drug Administration (FDA). Guidance for Industry: In Vitro Drug Interaction Studies —Cytochrome P450 Enzyme- and Transporter-Mediated Drug Interactions Published 2020. [4] European Medicines Agency (EMA). Guideline on the Investigation of Drug Interactions Published 2013. [5] International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use (ICH). DRUG INTERACTION STUDIES M12 Published 2024. [6] Nathalie Maubon, Marc Le Vee, Analysis of drug transporter expression in human intestinal Caco-2 cells by real-time PCR, Fundamental & Clinical Pharmacology 21 (2007) 659–663 [7] Béatrice Marquez and Françoise Van Bambeke, ABC Multidrug Transporters: Target for Modulation of Drug Pharmacokinetics and Drug-Drug Interactions, Current Drug Targets, 2011, 12, 600-620 [8] Jin H, Di L. Permeability--in vitro assays for assessing drug transporter activity. Curr Drug Metab. 2008 Nov;9(9):911-20. doi: 10.2174/138920008786485056. PMID: 18991588. [9] Yoko,Nagai,Masataka,et al.Comprehensive preclinical pharmacokinetic evaluations of trastuzumab deruxtecan (DS-8201a), a HER2-targeting antibody-drug conjugate, in cynomolgus monkeys[J].Xenobiotica; the fate of foreign compounds in biological systems, 49(9):1086-1096[2024-01-13].DOI:10.1080/00498254.2018.1531158.  （下滑查看更多） 作者：陈全，王丽君，熊涛，陈根富 编辑：富罗娜·克里木，钱卉娟 设计：倪德伟，张莹莹 推荐阅读 药明康德DMPK  依托在中国（上海、苏州、南京和南通）和美国（新泽西）的研发中心，提供从早期筛选、临床前开发、到临床研究阶段的综合型药代动力学服务，助力您快速推进药物研发流程。拥有上千人的研发团队，服务超1600家全球客户，具有超过十五年的新药申报经验，已成功支持超过1500个新药临床研究申请（IND）。  免责声明：药明康德DMPK团队专注于分享药物代谢与药代动力学相关领域进展和研究经验总结。本文仅作信息交流之目的，文中观点不代表药明康德立场，亦不代表药明康德支持或反对文中观点。本文也不是治疗方案推荐。如需获得治疗方案指导，请前往正规医院就诊。 版权说明：本文来自药明康德DMPK团队，欢迎个人转发至朋友圈，谢绝媒体或机构未经授权以任何形式转载至其他平台。转载授权请在「药明康德DMPK」微信公众号回复“转载”，获取转载须知。 往期链接 “小小疫苗”养成记 | 医药公司管线盘点  人人学懂免疫学 | 人人学懂免疫学（语音版）    综述文章解读 | 文献略读 | 医学科普 | 医药前沿笔记 PROTAC技术 | 抗体药物 | 抗体药物偶联-ADC 核酸疫苗 | CAR技术 | 化学生物学 温馨提示 医药速览公众号目前已经有近12个交流群（好学，有趣且奔波于医药圈人才聚集于此）。进群加作者微信（yiyaoxueshu666）或者扫描公众号二维码添加作者，备注“姓名/昵称-企业/高校-具体研究领域/专业”，此群仅为科研交流群，非诚勿扰。 简单操作即可星标⭐️医药速览，第一时间收到我们的推送 ①点击标题下方“医药速览”   ②至右上角“...”  ③点击“设为星标

药品简介 氯马昔巴特口服溶液由美国Mirum开发，是一种口服顶端钠依赖性回肠胆汁酸转运体(ASBT)抑制剂，用于治疗1岁及以上阿拉杰里综合征（AlagilleSyndrome,ALGS）患者的胆汁淤积性瘙痒症。 ALGS是一种常染色体显性遗传的胆汁淤积性肝病，可导致终末期肝病和死亡，其发病率为1/30,000至1/50,000之间，已在NRDRS（中国国家罕见病注册系统）中注册，属于罕见疾病。 氯马昔巴特口服溶液是目前全球首个且唯一获批用于阿拉杰里综合征患者胆汁淤积性瘙痒的药物。 美国上市：2021年09月29日，通过FDA的审批，用于治疗1岁及以上阿拉杰里综合征（Alagille Syndrome,ALGS）患者的胆汁淤积性瘙痒。 欧洲上市：2022年12月09日，通过欧洲EMA审查获批上市。 中国上市：2023年05月29日，在国内获批进口上市。 医保报销：暂未纳入中国医保目录。 基本信息 通用名称：氯马昔巴特口服溶液 英文名称：Maralixibat Chloride Oral Solution 汉语拼音：Lümaxibate Koufurongye 成份：本品主要成份为氯马昔巴特。 化学名称：(4R,5R)-1-[[4-[[4-[3,3-二丁基-7-（二甲氨基）-2,3,4,5-四氢-4-羟基-1,1-二氧化-1-苯并硫杂庚英-5-基]苯氧基]甲基]苯基]甲基]-4-氮杂-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷氯化物 化学结构式： 分子式：C40H56ClN304S 分子量：710.41 适应症 用于治疗1岁及以上阿拉杰里综合征（Alagille Syndrome，ALGS）患者的胆汁淤积性瘙痒。 用法用量 1、剂量 推荐剂量为380µg/kg每日一次，于每日第一餐前约30分钟服药。起始剂量为190µg/kg口服，每日一次；一周后如果可以耐受，剂量可增加至380µg/kg，每日一次。70kg以上患者的最大日剂量体积为每日3ml或28.5mg。按体重给药的指南参见表1。选择适当的口服给药器，按给药剂量要求给药。 表1：按患者体重计算个体剂量 2、药物漏服 如果漏服一次药物，且处于常规服药时间后的12小时内，则尽快补服，并恢复原来的给药方案。如果漏服时间超过12小时，则可忽略该次给药，并恢复原给药方案。 3、用法 对于服用胆汁酸结合树脂的患者，在给予本品至少4小时之前或4小时之后再给予胆汁酸结合树脂（参见【药物相互作用】）。 4、管理不良事件的剂量调整 在开始使用本品治疗前，应确定肝功能指标变异的基线模式，以便于识别潜在的肝损伤迹象。在本品治疗期间监测肝功能（例如ALT[丙氨酸氨基转移酶]、AST[天门冬氨酸氨基转移酶]、TB[总胆红素]、DB[直接胆红素]和国际标准化比值[INR]）。如果在没有其他原因的情 况下出现新的肝功能检查异常，则应中断本品治疗。一旦肝功能指标异常值恢复到基线值或稳定在新的基线值，可考虑以190µg/kg的剂量重新开始本品治疗，并在可耐受的情况下增加至380µg/kg。如果再次出现肝功能指标异常或观察到与临床肝炎相符的症状，应考虑永久停用本品（参见【注意事项】）。 尚未在肝功能失代偿患者中开展本品临床研究。如果患者发生肝功能失代偿事件（例如静脉曲张破裂出血、腹水、肝性脑病），应永久停用本品。 5、特殊人群用药 肝功能损害患者 本品的临床研究纳入了基线时肝功能受损的ALGS患者。尚未确定在ALGS伴有临床意义的门静脉高压患者和失代偿期肝硬化患者中的疗效和安全性（参见【临床试验】、【用法用量】以及【注意事项】）。 注意事项 1、首次开瓶以后，储存在25℃以下。药瓶开封后，应在60日内使用完毕。首次开封后60日，丢弃所有剩余的药物。 2、请置于儿童触及范围之外。 3、肝功能检查异常 纳入临床试验1的患者在基线时肝功能检查异常。在临床试验1中，相对于基线值，观察到治疗后出现的肝功能指标升高或恶化。大多数异常包括ALT、AST或T/DB升高。在临床试验1中，1名患者（基线时TB升高）在28周后由于TB较基线升高而停用本品。在临床试验1的长期开放扩展期内，4名患者因ALT升高导致对本品剂量调整（n=1）、剂量中断（n=2）或永久停药（n=2）（参见【不良反应】）。 应进行肝功能检查获得基线水平，并在治疗期间进行监测。如果在没有其他原因的情况下发生异常，可以考虑减少剂量或中断治疗。对于持续性或反复肝功能异常，应考虑终止给药。 未在ALGS肝硬化患者中评价本品的使用。在本品治疗期间监测患者的肝功能指标升高以及与肝脏相关的不良反应进程。对于持续性或反复肝功能异常的患者，权衡继续使用本品的潜在风险与治疗获益。如果患者进展为门静脉高压或发生肝功能失代偿事件，应永久停用本品。 4、胃肠道不良反应 据报道，腹泻、腹痛和呕吐为本品治疗的最常见的不良反应（参见【不良反应】）。3名患者（3%）发生呕吐被认为是严重不良事件，并采取了住院或静脉输液治疗措施。 如果发生腹泻、腹痛和/或呕吐，且未发现其他病因，应考虑减少本品剂量或中断给药。对于腹泻或呕吐，应监测脱水情况并及时治疗。如果患者出现持续性腹泻或腹泻伴有便血、呕吐、需要治疗的脱水或发烧等体征和症状，应考虑中断本品给药。 当腹泻、腹痛和/或呕吐消失时，以190µg/kg/天的剂量重新开始本品治疗，并在患者可耐受的情况下增加剂量。如果再次用药后出现这些不良反应，则考虑终止本品治疗。 5、脂溶性维生素（FSV）缺乏 脂溶性维生素（FSV）包括维生素A、D、E和K（使用INR水平测量）。ALGS患者在基线时可能存在FSV缺乏。本品可能会影响脂溶性维生素的吸收。在临床试验1中，有3名（10%）患者在48周的治疗期间报告治疗后出现的FSV缺乏。 在开始本品治疗前获得基线FSV水平，并在治疗期间监测血清FSV以及任何临床表现。如果确诊为FSV缺乏，应及时补充FSV。如果已补充足量的FSV，但FSV缺乏持续存在或加重，应考虑停用本品。 特殊人群 孕妇及哺乳期妇女用药 妊娠 因为口服给药后全身吸收较少，孕妇服用本品推荐的临床剂量，预计不会导致可测量的胎儿暴露（参见【临床药理】）。 本品可能会抑制脂溶性维生素的吸收。监测FSV是否缺乏并根据需要进行补充。妊娠期间可能需要额外补充FSV（参见【注意事项】）。 哺乳 本品口服后吸收较少，在推荐剂量下，预计母乳喂养不会导致婴儿暴露于本品（参见【临床药理】）。目前还没有关于人母乳中本品是否可测得、其对母乳喂养婴儿的影响或其对乳汁生成影响的数据。ALGS患者可能患有FSV缺乏，这是其疾病的一部分。本品可能会减少脂溶性维生素的吸收（参见【注意事项】）。哺乳期间应监测FSV水平，如果观察到FSV缺乏，应补充FSV摄入量。应综合考虑母乳喂养对婴儿发育及健康的获益、母亲对本品的需求，以及本品或母亲基础疾病对母乳喂养婴儿的任何潜在不良影响。 儿童用药 本品治疗儿童ALGS患者胆汁淤积性瘙痒的安全性和有效性已在一项针对1至15岁患者（N=31）的研究中得到证实，该研究包括18周开放性治疗期、4周安慰剂对照随机撤药期和随后的26周开放性治疗期。从4项21岁以下患者（N=55）的研究中获得了其他安全性信息（参见【不良反应】和【临床试验】）。 本品在1岁以下患者中用药的安全性和有效性尚未确定。 老年用药 本品在65岁及以上的成年患者中治疗ALGS相关瘙痒的安全性和有效性尚未确定。 药物相互作用 其他药物对本品的影响 胆汁酸结合树脂 胆汁酸结合树脂可能与肠道中的氯马昔巴特结合。在给予本品至少4小时之前或4小时之后再给予胆汁酸结合树脂（例如考来烯胺、考来维仑或考来替泊）。 本品对其他药物的影响 OATP2B1底物 基于体外研究，氯马昔巴特是一种OATP2B1抑制剂。不能排除胃肠道中OATP2B1抑制剂会引起OATP2B1底物（例如他汀类药物）的口服吸收减少。可考虑根据需要监测OATP2B1底物（例如他汀类药物）的药物作用（参见药代动力学部分）。 药理作用 米氯马昔巴特是回肠胆汁酸转运蛋白（IBAT）的可逆抑制剂，可减少回肠末端对胆汁酸（主要是盐形式）的重吸收。 瘙痒是ALGS患者的常见症状，其病理生理机制尚不完全清楚。尽管氯马昔巴特改善ALGS患者瘙痒的完整机制尚不清楚，但正如所观察到的血清胆汁酸减少一样，它可能涉及对IBAT的抑制作用，从而导致胆盐的再摄取减少。 毒理研究 遗传毒性：Ames试验、染色体畸变试验和小鼠微核试验结果均为阴性。 生殖毒性：大鼠经口给予氯马昔巴特，剂量高至750（雄性）或2000（雌性）mg/kg/天，未见对生育力的影响。 妊娠大鼠于器官发生期经口给予氯马昔巴特至1000mg/kg/天[基于AUC（血浆浓度-时间曲线下面积），约为最大推荐剂量的3300至12000倍]或妊娠兔于器官发生期经口给予氯马昔巴特至250mg/kg/天[基于AUC，约为最大推荐剂量的1200至4700倍]，未见对胚胎-胎仔发育的影响。围产期毒性试验中，雌性大鼠于器官发生期至哺乳期经口给予氯马昔巴特，剂量高至750mg/kg/天，未见对产后发育的影响。基于AUC，最高试验剂量下氯马昔巴特的母体系统暴露量约为最大推荐剂量的2500至9400倍。 致癌性：TgRasH2小鼠连续26周经口给予氯马昔巴特，剂量高至25（雄性）或75（雌性）mg/kg/天，未见药物相关的肿瘤发生。 药代动力学 由于氯马昔巴特的全身吸收较少，因此无法可靠地计算推荐剂量下的药代动力学参数。在大多数血浆样品中，儿童ALGS患者的氯马昔巴特血药浓度低于定量限度（0.25ng/ml）。在临床试验1中，接受本品380µg/kg（每日一次）治疗后儿童ALGS患者中氯马昔巴特最高血药浓度为5.93ng/ml。 在健康成年人中以1mg至500mg的剂量单次口服氯马昔巴特后，剂量小于20mg时，氯马昔巴特的血浆浓度低于定量限度（0.25ng/ml），并且无法可靠地估计PK参数。 空腹状态下单次给药30mg后，中位Tmax为0.75小时，平均（SD）Cmax和AUClast分别为1.65（1.10）ng/ml和3.43（2.13）ng·h/ml。 吸收 在推荐剂量下单次或多次给药后，氯马昔巴特吸收极少，血浆浓度通常低于定量限度（0.25ng/ml）。在空腹状态下，单次口服30、45和100mg氯马昔巴特液体制剂后，当剂量增加3.3倍（从30mg增加到100mg），AUClast和Cmax剂量依赖式地分别增加4.6倍和2.4倍。在健康成年人中以高达100mg的剂量（每日一次）重复口服氯马昔巴特后，未观察到氯马昔巴特的蓄积。 食物效应 在进食高脂餐的同时单次口服氯马昔巴特，会降低吸收的速率和程度。相对于空腹状态下口服30mg，餐后状态下氯马昔巴特的AUC和Cmax数值降低64.8%至85.8%。食物对氯马昔巴特全身暴露变化的影响没有临床意义（参见【用法用量】）。 分布 氯马昔巴特在体外与人血浆蛋白的结合率较高（91%）。 清除 健康成人单次口服30mg氯马昔巴特后，平均半衰期（t1/2）为1.6小时。 代谢 在血浆中未检测到氯马昔巴特代谢物。口服[14C]氯马昔巴特后，发现了3种微量代谢物，占氯马昔巴特相关粪便放射性总量的<3%。 排泄 粪便排泄是主要清除途径。单次口服5mg14C-氯马昔巴特后，粪便中排泄73%，尿中排泄0.066%。94%的粪便排泄为氯马昔巴特原型。 特殊人群 肾功能损害患者：尚未研究肾功能损害患者（包括终末期肾脏疾病[ESRD]或接受血液透析的患者）中氯马昔巴特的药代动力学。 药物相互作用研究 其他药物对氯马昔巴特产生的影响：氯马昔巴特不是药物转运蛋白MDR1（P-gp）、BCRP、OATP1B1、OATP1B3或OATP2B2的底物；因此，预计伴随药物不会影响氯马昔巴特的分布。 氯马昔巴特对其他药物产生的影响：在体外，在临床相关浓度下，氯马昔巴特不会诱导CYP亚型1A2、2B6或3A4，也不会抑制CYP亚型1A2、2B6、2C8、2C9、2C19或2D6。氯马昔巴特在体外抑制CYP3A4，但是不太可能对CYP3A4底物的药代动力学产生临床相关影响。在体外，氯马昔巴特在临床相关浓度下不抑制转运蛋白MDR1（P-gp）、BCRP、OAT1、OAT3、OATP1B1、OATP1B3、PEPT1、OCT1、OCT2、OCT3、OCTN1、OCTN2、MRP2、MATE1或MATE2-K。 氯马昔巴特在体外抑制药物转运蛋白OATP2B1，这可能导致依赖OATP2B1介导的胃肠道摄取的药物吸收减少。在临床研究中，将4.75mg氯马昔巴特（早晨每日一次）与日剂量的辛伐他汀或洛伐他汀在晚上共同给药，对这些他汀类药物及其代谢物的药代动力学没有临床相关影响。同时使用4.75mg氯马昔巴特不会影响阿托伐他汀的药代动力学。但是，尚未在临床研究中评估氯马昔巴特在较高剂量下对OATP2B1底物药代动力学的影响。 药品中标价格 （数据来源：山西/河北/辽宁/宁夏等省份招标挂网、戊戌数据整理） END ★ 点击下方卡片，发现更多精彩

感谢关注转发，欢迎学术交流 回复药渡Cyber，领取文献原文 请点击此处链接观看CyberSAR系统详细使用教程 快看版 作为一种致癌性蛋白酪氨酸磷酸酶，SHP2在癌细胞RTK-RAS-MAPK信号通路中充当交汇节点，通过将信号传递到PD-1下游来抑制抗肿瘤免疫。加科思药业（Jacobio Pharma）研究团队在确认新变构位点可利用的额外口袋后构建了全新的（6,5 fused）, 6螺环骨架，优化后的化合物JAB-3312对SHP2的Kd值为0.37nM、IC50值为1.9nM，在KYSE-520中的抗增殖IC50值为7.4nM，对p-ERK的IC50值为0.23nM。对于JAB-3312，口服1.0mg/kg QD足以在KYSE-520异种移植小鼠模型中达到95%的TGI。JAB-3312在动物模型中耐受性良好，在肿瘤中观察到JAB-3312血浆浓度与p-ERK抑制密切相关。目前，JAB-3312正作为一种潜在的抗癌药物进行临床试验。 药渡CyberSAR系统提供了对SHP2变构抑制剂分子的深入解析。系统通过聚类结构视图和原始结构视图，展示了与靶点相关的活性分子，并以研发阶段时光轴的形式呈现了潜力Hit。此外，CyberSAR还提供了适应症和试验设计的可视化分析，帮助研发人员快速获取靶向结构信息，开拓研究思路。尽管CyberSAR在本案例分子的初步开发中未被使用，但其在解析和优化药物分子方面显示出巨大的应用潜力。 正文版 研究背景 PTPN11基因编码的SHP2是一种非受体磷酸酶，由两个N端SH2结构域（N-SH2和C-SH2）、中央蛋白PTP结构域和C端富含脯氨酸的磷酸化酪氨酸尾组成。在肿瘤细胞中，SHP2在RTK-RAS-MAPK通路中起着关键节点的作用，将细胞外的刺激信号传递给癌基因。SHP2被RTK激活后会招募GRB2-SOS以促进KRAS的GTP交换，并使包括RAS在内的各种蛋白质去磷酸化，以确保激活信号从RTK到ERK的有效传递。由于SHP2在RTK-RAS-MAPK通路中起着交汇节点的作用，因此使用RTK或KRAS抑制剂同时抑制SHP2和该通路中的其他靶点是完全抑制癌症中RTK-RAS-MAPK信号转导的可行方法。在T淋巴细胞中，PD-L1与PD-1结合后招募SHP2，SHP2使一组靶标去磷酸化，从而抑制基于TCR的T细胞激活。因此，开发一种安全有效且耐受性良好的SHP2抑制剂作为单药或联合疗法对于癌症治疗非常重要。 早期SHP2抑制剂的研究表明，由于PTP（蛋白酪氨酸磷酸酶）结构域之间的高度序列同源性和活性位点的静电特性，从正交PTP结构域开发具有足够靶向特异性和细胞渗透性药物的可能性很小。诺华公司通过高通量筛选和生化及共结晶研究，已确定了两个变构结合口袋：隧道位点和卡扣位点。在N-SH2和PTP结构域之间的裂缝形成的“卡扣”样位点中，即使是经过优化的化合物对SHP2的IC50也有数十微摩尔，且几乎不能稳定SHP2。因此，卡扣位点可能不是高效SHP2抑制剂的理想口袋。隧道位点主要由C-SH2和PTP结构域之间的界面形成，诺华公司基于氨基吡嗪骨架开发了SHP099，SHP099对SHP2的IC50值为71nM，在体外可抑制RTK依赖性癌细胞系的生长，并可抑制小鼠KYSE-520异种移植瘤模型中的肿瘤生长，同时降低肿瘤内磷酸化ERK（p-ERK）水平。此外，在结肠癌异种移植瘤模型中，还可观察到SHP099治疗后致敏性CD8 T细胞数量的增加。基于SHP099，一种更安全有效的Batoprotafib（TNO155）被开发并进入临床研究。除了TNO155外，目前还有几款SHP2抑制剂，如RMC- 4630、GDC-1971、BBP-398、ARRY-558、ET0038、ERAS601等SHP2抑制剂目前正在进行临床试验。 本研究在保留SHP099原始骨架的同时对变构隧道口袋之外的化学空间进行了探索，通过基于活性、hERG抑制作用和细胞渗透性的连续优化，发现了高效SHP2结合抑制剂JAB-3312。JAB-3312在小鼠异种移植模型中抑制了SHP2依赖性肿瘤细胞（KYSE-520）的生长，口服剂量为1.0mg/kg QD时即可实现95%的肿瘤生长抑制（TGI）。在药代动力学研究中，JAB-3312口服生物利用度良好，且在肿瘤中显示出明显的药物相关p-ERK抑制作用。目前，JAB-3312正在进行临床抗癌试验。 结果与讨论 构效关系分析 诺华公司报道的变构隧道位点抑制剂SHP099的体内活性一般，其原因可能是化合物与SHP2配位不足而影响了其对SHP2的抑制活性（IC50=71nM），这在SPR结合分析中得到了验证。为了在变构隧道位点周围开发更有效的SHP2抑制剂，本研究首先对靶点口袋进行了分析。结果显示，与SHP099结合的变构隧道位点仅是口袋的一部分，而SHP099甲基基团所指向的另一部分可以容纳306.2Å3的体积。因此，本研究拟利用这个未占用的体积来开发更有效的SHP2抑制剂。 相关研究表明，引入将氨基吡嗪和吡啶通过硫醚连接的改良骨架可以提高化合物活性，哌啶上带有芳基的化合物表现出与含有改良骨架化合物相当的SHP2抑制作用。据此，本研究首先将苯基或噻吩与哌啶上的甲基相连，所得化合物2和3的SHP2 IC50值分别为16和18nM，SPR Kd值分别为3.7和5.8nM，与参考化合物N-33相当，表明C-SH2和PTP结构域之间的未占用空间可由额外的化学基团填充。 为提高对SHP2的抑制活性，对2进行螺环化得到4，其对SHP2的IC50值为3.7nM，SPR Kd为1.3nM。切换苯基连接位置得到5，其SHP2 IC50值无明显差异，但SPR Kd值是4的8倍左右，说明5中的苯基可能无法被SHP2正确配位。将螺环戊烷扩展为螺环己烷得到6和7，其SHP2 IC50和SPR Kd均不甚理想。此外，在KYSE-520细胞中，4较其他三个化合物具有更强的抗增殖作用。 然而，4对离子通道hERG的IC50值为1.5μM，表明其可能存在心血管风险，这可能与苯基的引入导致亲脂性增加相关。对苯基进行亲水或疏水性基团取代发现，含有亲水性基团的化合物（8、9、10、13、14）的ClogP显著降低，其对hERG的抑制作用也相应减轻；含有疏水性基团的化合物（15）的ClogP升高，对hERG抑制作用增强。然而，化合物8、9、10、13、14的酶抑制作用和抗增殖活性均出现了降低，且抗增殖活性的降低程度比对SHP2抑制活性的减弱程度更为明显，这与亲水基团的引入导致化合物无法有效地穿透细胞膜有关。上述结果表明，在4的苯基上引入亲水性基团无法解决其hERG问题。 将苯基替换为五元环得到化合物16、17和18，其中18对hERG的抑制作用明显减弱，而SHP2 IC50、SPR Kd和抗增殖IC50值与4相当。在KYSE-520细胞中，18的p-ERK IC50值为0.44nM，与4相当。Caco-2细胞渗透性试验显示，18表现出中等的外排比（ER=4.4）。此外，SD大鼠体内的药代动力学数据显示，18表现出良好的口服生物利用度和药物暴露。但因18在异种移植研究中观察到了毒性问题，并未对18进行进一步的优化。将苯基替换为吡啶得到化合物19、20、21和22，其中22对hERG的抑制作用较弱，对p-ERK的抑制活性增强，且SHP2 IC50、SPR Kd和抗增殖IC50值与4相当。但22的Caco-2 ERs为7.5，可能存在体内吸收问题，因此继续对其进行优化，以解决高Caco-2 ER问题。 22与SHP2的共晶结构显示，共晶中的SHP2蛋白采用了常见的闭合构象，除（6,5 fused）, 6螺环上的吡啶外，22的共晶结构与SHP2-TNO155配合物相似，具有一组TNO155典型的相互作用：Arg111与2-氨基-3-氯吡啶和吡嗪N原子形成阳离子-π和氢键；Thr108、Glu110、Phe113螺氨基戊烷的伯胺形成氢键/极性接触；Th r253、Leu254、Gln257、Pro 491和Gln495构成了疏水口袋。与TNO15 5不同的是，22的螺氨基戊烷中的伯胺和Thr253都发生了微小的移动，进而形成了氢键。22中的吡啶结构建立了两个π堆积作用：与Glu249和Phe113一起形成阴离子(Glu249)-π(吡啶) -π(Phe113)相互作用，其中吡啶以边对面（T形）方式堆叠在Phe113上，吡啶N作为受体与水分子形成氢键，加强了阴离子-π-π堆积；与His114的羰基堆积形成羰基-π相互作用。这种22吡啶与Phe113的π-π堆积、氢键和吸电子效应都稳定了阴离子-π堆积。实验表明，22较4的SHP2解离速度更慢、结合亲和力更高，其阴离子-π-π/羰基-π和阳离子-π堆积可被视为针对SHP2结合优化的SHP2封闭构象稳定剂。可被视为针对SHP2结合优化的SHP2封闭构象稳定剂。为了保持22中有利的堆叠相互作用，保留了22（6,5 fused）, 6螺环骨架上吡啶，以进行进一步的优化。 在R1位置进行甲基取代或胺基去除得到23、24和25。虽然23和24的SHP2 IC50、SPR Kd和抗增殖IC50与22相当，但Caco-2 ERs没有明显降低。虽然25的Caco-2 ER显著降低，但其SPR Kd和抗增殖IC50劣于22。此外，23、24和25的hERG窗口比22的缩小了大约7-14倍。删除R2伯胺后，化合物1（JAB-3312）的Caco-2 ER为0.8，比22降低约10倍。JAB-3312的SHP2 IC50为1.9nM，SPR Kd为0.37nM、抗增殖IC50为7.4nM。虽然JAB-3312由于R2胺的缺失而丢失了与Glu250的氢键，但其SPR Kd与22相当。在配体亲脂性效率（LLE）方面，JAB-3312（LLE=6.8）与TNO155（LLE=5.7，pIC50=8.0）相似，处于一个平衡抑制效力和配体疏水性的有利范围内（LLE，5-7）。JAB-3312的hERG IC50为4.4μM，与经验毒性阈值（10μM）和22（hERG IC50=8.2μM）略有偏离，但其hERG窗口（592）与22（500）相当。此外，使用比格犬对JAB-3312进行心电图研究发现，在有效肿瘤抑制所需药物暴露量3倍的情况下未检测到包括Qt间期在内的心电图指标异常，表明其心血管风险较低。使用SD大鼠对JAB-3312、4和22进行药代动力学研究发现，JAB-3312具有最高的Cmax/AUC，最慢的药物清除率（CL）和良好的表观分布容积（Vss）。其中，Caco-2参数（PA-B>10×10-6cm/s，ER<1）表明，JAB-3312的药代动力学参数增强可能是由于其吸收改善所致。脱靶活性分析发现，JAB-3312在10μM时对其他22种磷酸酶（包括SHP1和SHP2的PTP结构域）和25种激酶没有抑制作用。JAB-3312在磷酸盐缓冲液（pH 6.8，37°C）中的溶解度为104.6μM，pKa为3.1、4.6和7.5。总之，JAB-3312是一种高效选择性SHP2抑制剂，具有良好的细胞渗透性/药物吸收、hERG抑制作用和药物暴露，值得进一步的体内研究。 JAB-3312的药代动力学性质 在所有物种（SD大鼠、比格犬、食蟹猴）中，JAB-3312均表现出快速的口服吸收（Tmax<2h），在大鼠、狗、猴中的生物利用度（F）分别为52.2、86.8和56.7%。JAB-3312消除缓慢，血浆清除率低（大鼠、狗、猴的CL分别为4.7、2.5和1.9mL/min/kg）。JAB-3312在比格犬血浆中的保留时间（t1/2=27.0h）长于其他两种动物（大鼠和猴的t1/2分别为4.7和7.4h）。JAB-3312在5个物种（人/猴/狗/大鼠/小鼠）中的血浆蛋白结合率分别为98.2%、96.8%、94.0%、98.5%和95.0%。 JAB-3312的体内抗肿瘤活性 对于两种异种移植模型（KYSE-520和MV-4-11），JAB-3312均表现出剂量依赖性抗肿瘤作用，每日0.1mg/kg（QD）剂量下足以达到>50% TGI（p<0.01），特别是KYSE-520异种移植物TGI达到了95%。在MV-4-11异种移植物中，0.5mg/kg（QD）JAB-3312的抗肿瘤作用弱于SHP099（50mg/kg，QD），可能需要更高的剂量才能在MV-4-11异种移植物中实现更强的抗肿瘤效果。JAB-3312的给药耐受性良好，在整个治疗过程中没有体重减轻迹象。 JAB-3312的药代动力学性质与p-ERK抑制作用在肿瘤中的关系分析 对KYSE-520模型进行单剂量（0.1、0.3和1.0mg/kg）口服JAB-3312发现，血浆和肿瘤中的JAB-3312水平随着剂量的增加而升高，。在0.1mg/kg组中，JAB-3312仅在4h时在肿瘤中检测到。JAB-3312分别在0.5h和4h达到血浆和肿瘤中的最大浓度。JAB-3312对p-ERK的抑制程度与其在肿瘤中的剂量和浓度成正比，p-ERK抑制峰值（4h）与JAB-3312浓度峰值同步，表明JAB-3312药代动力学与其体内p-ERK抑制等生物活性存在密切相关性。分析JAB-3312对p-ERK的抑制作用与血浆浓度的关系发现，JAB-3312抑制p-ERK的EC50值为19.6nM，EC90值为276nM。即使在0.1mg/kg的浓度下，血浆未结合的JAB-3312浓度也高于细胞p-ERK IC50。估计JAB-3312在人体研究的有效剂量为4.5-8mg QD。 JAB-3312的药物相互作用风险评价 人肝微粒体CYP测定结果显示，JAB-3312对7种主要CYP亚型（1A2/2B6/2C8/2C9/2C19/2D6/3A4）均无明显抑制作用。JAB-3312在培养的人原代肝细胞中未上调CYP（1A2/2B6/3A4）mRNA转录，表明CYP诱导的可能性较低。在人肝微粒体中，JAB-3312对其代谢酶CYP3A4没有时间依赖性抑制作用。JAB-3312不作为各种药物转运蛋白（BCRP、MDR1、OATP1B1、OATP1B3、OCT2、OAT1和OAT3）的底物，也不能对其有效抑制。上述结果表明，JAB-3312体内药物相互作用的风险较低。 总结 本研究通过对含有苯基结构的化合物2进行螺旋环化（4），得到了（6,5 fused）, 6螺环骨架。基于该骨架，通过将苯基替换为吡啶（22），解决了在4的hERG抑制问题。22的共晶结构显示（6,5 fused）, 6螺环骨架参与了阴离子-π-π和羰基-π的堆积，2-氨基-3-氯吡啶参与了阳离子-π的堆积，这两侧的堆叠相互作用使22成为优良的SHP2结合抑制剂。为了解决22的药物吸收问题，去除吡嗪上的伯胺得到了JAB-3312。JAB-3312是一种选择性SHP2抑制剂，能有效抑制KYSE-520细胞增殖（IC50=7.4nM）。JAB-3312在口服1.0mg/kg QD剂量下足以在KYSE-520异种移植小鼠模型中达到95%的TGI。此外，在NCI-H1373小鼠异种移植模型中，JAB-3312和Glecirasib具有协同抗肿瘤作用。在动物模型中，JAB-3312耐受性良好，并表现出良好的药代动力学特征。此外，JAB-3312的p-ERK抑制与肿瘤内药物浓度密切相关。虽然JAB-3312存在一定的hERG抑制作用（hERG IC50=4.4μM），但在动物研究中，没有观察到JAB-3312所导致包括Qt间期在内的任何心电图指标异常。并且，JAB-3312的hERG IC50/Cmax-未结合比率超过1000。一项使用Glecirasib和JAB-3312联合治疗的临床试验显示，没有药物相关的心血管异常。说明JAB-3312心血管风险较低。目前，JAB-3312正在作为单一和联合疗法进行临床研究。 文献来源 10.1021/acs.jmedchem.4c00360 请点击此处链接观看CyberSAR系统详细使用教程 1.药渡CyberSAR结合药物设计思想，挖掘了文献及专利报道的活性的结构，通过CyberSAR以方便快速获得研发人员兴趣靶向结构，以供开拓思路，就本文靶点SHP2举例如下： 2.在靶点界面选中“化学空间”选项标签下级联“聚类结构视图”选项卡，可以将CyberSAR平台收录的文献和专利具有关于靶点相关实验测试活性的分子以“母核结构聚类”的形式展示。其中“绿色字体高亮的”为文献报道的体外酶、细胞活性测试实验中IC50<1000nM的活性分子结构、具体实验、实验结果及实验来源。 3.在靶点界面选中“化学空间”选项标签下级联“原始结构视图”选项卡，可以将CyberSAR平台收录的文献具有关于靶点相关实验测试活性的分子以“研发阶段时光轴”的形式展示。其中绿色高亮展示了潜力Hit。 4.在靶点界面选中“适应症”选项标签，可以可视化直观分析现收集的各类大数据。 登录方式 CyberSAR在电脑浏览器端登录网址： https://cyber.pharmacodia.com/，欢迎猛烈试用。 请点击此处链接观看CyberSAR系统详细使用教程 如需进一步沟通，请扫码添加微信联系药渡赵博士或药渡CyberSAR沟通群。