Riken Corp.

日本在创新医药和医疗器械方面拥有显著的全球优势，不仅体现在技术研发、产品质量上，还体现在其企业的国际化合作战略上。日本拥有世界领先的生物技术和医药研发能力，特别是在再生医疗、基因治疗、细胞治疗等领域，日本企业取得了显著进展。能够不断推出具有创新性的医药产品和医疗器械。 日本医药行业注重国际化开放合作：日本企业积极寻求国际合作，通过与国际知名企业建立战略伙伴关系，共同研发新产品、拓展新市场。日本在医药和医疗领域与中国企业的有广泛而深入的合作历史。 前途汇将邀约国内医药企业的有志之士共同赴日考察，通过合作，双方可以共享研发资源、技术和市场经验，加速新产品的推出和上市速度。中国企业也可以借助日本企业的技术优势和产品质量，提升自身产品的竞争力。还可以通过合作培养高素质的研发和管理人才，为未来的合作和发展奠定基础，实现互利共赢的合作发展。 <<<往届参访团照片回顾>>> 本期行程安排 第1天 3月9日 国内出发~大阪 第2天 3月10日 ★ 上午：日本未来医疗推进机构 未来医疗国际据点 Nakanoshima Qross 由政府提倡，大阪大学为学术背景的最先端医药及医疗器械孵化器（参观+座谈） 【亮点】是日本政府重点推广的生物制药及再生医疗的孵化器。除了大阪大学、京都大学和理化学研究所等相对集中的研究机构外，还聚集了大量制药公司在开发治疗癌症和疑难杂症的突破性新药。各家公司还与大学和研究机构联合开展再生医学研究。为了在日趋激烈的再生医学国际竞争中立于不败之地，推进产业化进程并形成一个国际未来医学中心。 通过未来医学的创造、实践和分享，推动未来医疗前沿技术的产业化，为国内外患者提供未来医学服务，做出国际贡献。中之岛Qross由2个中心和1个论坛构成，拥有能够“汇集”、“连接”世界各地的多样化人才和最新信息的系统。 未来医疗研发中心是创造未来医疗的场所，将致力于再生医学相关产品和细胞产品研究开发的公司聚集在这里。为了积累和培育初创企业，我们还拥有一个结合实验室和办公室的租赁空间，可以进行细胞实验。 未来医学付诸实践的地方就是未来医学MED中心。除了与未来医疗研发中心合作提供尖端医疗服务的医院和诊所外，还将设有会员制的高级体检中心。 中之岛国际论坛负责共享医学未来的最新成果。它由用于举办活动、国际学术会议等的会议中心和交流的场所Qrossover Lounge 梦组成。会议中心是举办与未来医疗相关的学术会议和研讨会等活动和会议的场所，而“Qrossover Lounge 梦”是未来医疗国际据点相关人士可以自由交流思想，碰撞火花，不断产生新想法的地方。 ★ 下午：日本盐野义制药株式会社 【亮点】大多数制药公司的内部药物研发比例为 20%-30%，而盐野义制药的创药比率为71%。盐野义的研究优势在于其小分子药物研发引擎，它能够高效地开发创新药物。药物化学、药理学和安全性与药代动力学团队的高水平技术能力及其通过合作解决问题的经验是盐野义竞争力的源泉。 日本盐野义制药株式会社创立于1878年，于1919年成立，注册资本212亿日元，年销售额达1993亿日元。目前设有中央研究所，神崎川研究所，医学科学研究所，油日实验农场及杭濑，摄津，赤穗，金崎等四个工厂。产品主要涵盖[循环代谢]、[感染/免疫]、[癌/疼痛]三个专业领域。公司的主要产品有:头孢卡品(cefcapene，Flomox)、万古霉素(vancomycin)和氟氧头孢钠(flomoxef，Flumarin)。其抗生素类药在日本市场具有较高知名度和美誉度。 在中国和亚洲其他地区，我们将及时申报新药并获得批准，让更多患者能够用上新药。为此，我们积极推进与当地企业的合作，为人们的健康做出贡献。 第3天 3月11日 ★ 上午：日本新药株式会社 【亮点】日本新药致力于开发及引进难病的孤儿药。同时，最主要的研发方向是核酸药物。2016 年，日本新药推出了自主发现和开发的肺动脉高压治疗药物 Uptravi®。Uputravi® 是世界上第一种口服选择性前列环素受体激动剂，目前正在向全球患者提供。 日本新药株式会社位于京都市南区，成立于1919年10月1日，主要从事药品、功能性食品的制造、销售。会长：前川重信，社长：中井彻，注册资金51.74亿日元，员工人数2,213人（截至2024年3月，合并），销售收入1,482.55亿日元（2023财年，合并） IFRS 日本新药是一家研究开发型新药的制药企业，1919年公司创立100多年来，秉持着“用自己的双手研究开发新药”的理念，努力进取，不断创新，致力于向尚未有治疗药物的医疗领域提供创新药品和服务，开发具有高附加值的独特功能药品，为人类的健康不断的做出贡献。这就是日本新药的DNA。 公司的经营理念：为创造人类的健康和富裕的生活努力奋斗。创新医疗：积极挑战尚未有治疗药物的领域，提供革新性新药和服务。开发高品质功能食品，满足市场需求。 ★ 下午：京都创药研究所 【亮点】京都创药研究所，是由日本京都大学产业基金投资的一家围绕眼科疾病的创新药企业。利用京都大血开发的新型小分子化合物「KUS（Kyoto University Substances）」，开发治疗视网膜中央动脉闭塞症和视网膜色素变性等罕见疾病以及青光眼等难治性眼病的新药的公司。 株式会社 京都创药研究所位于大阪市中央区淡路町，2015年5月15日成立，法人代表CEO 武藤荣，注册资金6960万日元，主营业务有：药品、诊断试剂、再生医疗等制品，医疗器械，研究用消耗品等的研究开发等。 经营理念：京都创药研究所从世界基础研究中发现药物，以眼科为中心，进行创新药研究，开发难治性眼镜疾病的治疗方法，让笑容浮现在每个患者的脸上。 第4天 3月12日 ★ 上午：向富山移动 ★ 下午：富山医药品联合会座谈 【亮点】日本药都富山县的官方行业制药协会，其会员均为日本代表性的骨干型制药企业。通过访问可以快速建立起与药都内各个企业的沟通通道。 在日本，有一种说法叫“药在富山”，它指的是位于日本海沿岸北陆地区的制药强县——富山县。这个人口仅有109万的小县，却享有日本“药都”美誉，与传统中医药有莫大的关系。 本会于1952年6月由富山县医药工业协会和富山县家庭医学协同组合会合并成立，并经富山县知事批准为社团法人。作为富山县医药行业的中心组织，联合会积极实施指导教育、拓展销售渠道、完善管理等扩销工程，着力促进行业的健康发展，提高国民的卫生保健水平。 截止2024年4月1日，本协会有制药企业会员62家  药品批发和关联企业 84家 其他组织团体5家。 第5天 3月13日 ★ 上午：前田药品工业 【亮点】日本市场占有率第一的外用膏体的制造商，积极参与和拓展国际业务以及对围绕健康的创新商业模式。 前田药品工业株式会社成立于1966年2月8日（创业1958年），注册资金9300万日元，董事长 前田 大介，主要从事医药品及医药部外品的制造、销售，员工人数177人（男性81人・女性96人) 【2023年10月1日节点】，总公司（富山工厂）位于富山县富山市向新城町 1-18-47，A 栋（一般制剂），B 栋（一般液体制剂），C 栋（类固醇制剂），D 栋（化妆品）。立山工厂位于富山县中新川郡立山町冢越。 <<往期前途汇参访照片>> ★ 下午：日医工&阳进堂 【亮点】阳进堂是是日本为数不多的拥有从原药开发到最终产品制造的一体化生产系统的制药厂家，可稳定供应高质量的非专利药品。此外，在输液透析等所有医疗领域都不可或缺的基本药物业务方面，近年来，公司还挑战进入生物制药等新领域。 从高品质的非专利药品到输液、透析的精华药物，进而研究开发生物医药品。 阳进堂常年致力于仿制药的生产和销售，为人民的健康和社会做出贡献。建立了从原料药到制剂的完整的研究开发、生产、销售体制，作为生产高品质、低价格的仿制药的厂家，获得了广大的信赖。 现在，阳进堂株式会社正在推进输液、透析等精华药物，以及生物医药的研究和开发。通过独自的研究开发积累新的技术和技术，以成为今后日本“不可或缺的制药企业”为目标。阳进堂敢于挑战超越非专利的新领域。 此外，通过生物医药品的受托生产，获得生产技术和管理经验，进行生物仿制药的临床开发等，这些企业今后也将成为社会不可或缺的企业。 【亮点】日本第一大仿制药生产企业。 日本日医工株式会社发明生产的一款安眠药剂。“日医工”，1965年，由田村四郎先生创立，原名“日本医薬品工业株式会社”，1980年上市，总部位于富山县富山市。日医工的意思是日本日医工株式会社发明生产的一款安眠药剂日医工（Nichi-lko）是日本最大的仿制药商，2017财年营业收入达1647亿日元，有1028个产品上市销售，市场份额约为12.9%。 第6天 3月14日 ★ 上午：富山向东京移动 ★ 下午：银座游览，自由活动 ★ 晚上：入住台场日航大酒店 第7天 3月15日 东京返回国内 往届考察团中国企业家名单 费用及说明 人民币46800元每人此次学习费用包含以下费用： (1)会议租用费、培训费、参观费、翻译费、资料用品费、案例费等 (2)行程内餐饮(日式精美套餐)、住宿(五星级酒店双人间，单间差1080元/晚/人)及日本地面交通费 (3)人身意外伤害保险费 (4)指定景点观光旅游费：门票、导游费及小费 (5)税费 (6)单次签证办理费用 学费费用不包含以下费用： (1)往返日本的机票费用 (2)往返国内城市的交通、住宿 (3)行程列明以外的所有私人费用及个人原因引起的额外费用 【付款账户】 开户名称：前途汇医药科技（北京）有限公司 开户银行：中国建设银行股份有限公司北京自贸区高端产业片区支行 银行账号：11001184100052501294 报名方式 游学咨询：姚美丽185 0090 0639

摘要：抗体-药物偶联物（ADCs）是一类生物制药，其中细胞毒性剂与单克隆抗体（mAbs）偶联，允许靶向药物传递。目前的异质性ADCs（在随机可变位置偶联）存在稳定性、可重复性、效力等问题。最近的进步已经导致了通过位点特异性偶联的均质ADC制剂的开发，允许控制药物-抗体比率。这些方法增加了ADC制剂的治疗窗口、效力和批次间一致性。抗体在Fc区域携带一对异质性N-糖链，这对抗体功能至关重要。通过糖基工程已经实现了药物偶联，包括使用内切β-N-乙酰葡萄糖胺酶（ENGases）和单糖基转移酶突变体。在本文中，我们总结了不同的糖基工程方法用于抗体-药物偶联，并讨论了它们对下一代均质ADCs开发的优势。 1.引言 抗体-药物偶联物（ADCs）是通过将细胞毒性剂与单克隆抗体（mAbs）偶联而制备的一类靶向疗法。截至2021年1月，已有九种ADCs正在使用，超过80种ADCs处于临床试验中。目前商业化的ADCs是异质性的（在随机可变位置偶联），因为有效载荷是通过抗体的氨基或硫醇基团偶联的，导致药物-抗体比率和连接位点的变化。这种非选择性方法不是最优的。异质性ADCs存在可重复性、效力和稳定性问题，可能带来显著风险，阻碍了临床开发。因此，目前期待新一代改进的ADCs。为了最大化下一代ADCs的可重复性、耐受性、效力和治疗窗口，非常需要开发能够产生均质ADC制剂的方法。 IgG普遍在Fc区域的Asn297上携带一对N-糖链，由于其复杂的生物合成过程，这在很大程度上是异质性的。糖链结构在抗体功能中起着至关重要的作用。例如，Fc N-糖链上核心岩藻糖的缺失可导致抗体依赖性细胞毒性（ADCC）增强100倍。在非人细胞中生产的mAbs表达的糖链结构在人类血清IgGs中不常见，导致严重的免疫原性。此外，据报道，商业化的曲妥珠单抗的N-糖链结构在不同批次之间存在差异。因此，调节Fc N-糖链结构非常重要。最近，使用内切β-N-乙酰葡萄糖胺酶（ENGase）突变体的IgG糖基工程变得可能，这可以提供具有均质糖链结构的抗体制剂。这种方法的扩展将允许生产具有糖链连接的均质ADC制剂。在N-糖链位点偶联有效载荷是理想的，因为Fc N-糖链位于Asn297，远离抗原结合区域。因此，这种糖链的修饰不会影响抗原结合能力。 最近，我们通过ENGase突变体介导的糖基工程实现了均质ADC制剂的制备。除了ENGases，还有其他方法可以将有效载荷偶联到抗体的糖基部分。在这里，我们总结了基于糖基工程的均质ADC制备方法，并特别关注我们的方法。 Shino Manabe教授于1996年在东京大学Kenji Koga教授的指导下获得了博士学位。在此期间，她加入了哥伦比亚大学Gilbert Stork教授的研究小组，担任研究员，并在天然产物合成领域工作。之后，她转到RIKEN工作，并在日本科学技术振兴机构的胚胎科学与技术（PRESTO）计划中任职。在那段时间里，她获得了日本药学会青年科学家奖。目前，她是星药科大学全职教授，同时在东北大学药学研究生院及药学部药物开发研究中心任职。她的主要研究兴趣涉及糖缀合物合成技术的开发展。 山口义树教授于1998年在日本东京大学药学研究生院（导师为Isao Shimada教授和Yoji Arata教授）获得了博士学位。他继续在同一研究小组作为博士后研究员，然后作为研究员进行研究。从2001年到2007年，他在名古屋市立大学（Koichi Kato教授）担任讲师，之后他转到RIKEN，先是作为结构糖生物学团队的团队领导（2007-2017年），然后在合成细胞化学实验室继续研究（2017-2018年）。2018年，他转到东北医疗药科大学，担任他目前的教授职位。他目前正在研究糖缀合物和糖结合蛋白的三维结构和功能。 2.使用ENGase/ENGase突变体的抗体糖基工程  2.1.ENGase突变体的作用  ENGases是水解酶，能够切断N-糖链N,N'-二乙酰壳二糖核心中的β-1,4-糖苷键。从不同来源分离出多种ENGases。ENGases催化的水解机制涉及壳二糖核心中第二个GlcNAc残基的邻近基团参与（方案1）。在活性位点中氨基酸的位移产生了ENGase突变体，这些突变体抑制了糖链水解活性，但仍具有糖链转移活性（表1）。因此，ENGase突变体将糖链整体转移到糖链截短的抗体上，从而生产具有均质糖链结构的抗体。在ENGases中，EndoS和Endo S2突变体特别用于抗体糖链重塑，因为它们对IgG具有高亲和力（方案2）。 方案 1. EndoS 和 Endo S2 内切酶的糖链水解机制。 方案 2. 使用内切酶/内切酶突变体制备具有均质糖链结构的抗体的策略示意图。括号内显示的是异质性组分。 首先，在水解过程中通过底物辅助催化生成一个恶唑啉中间体。高能态的糖链恶唑啉是ENGase突变体介导的糖链转移反应的良好糖链供体。因此，在水解原始异质糖链后，EndoS/Endo S2突变体和糖链恶唑啉可以结合，介导后者转移到IgG分子上，从而提供具有均质糖链结构的抗体。准备的具有均质糖链的抗体揭示了糖链的重要性以及糖链结构与抗体功能（包括稳定性、ADCC活性和与Fcγ受体的结合能力）之间的关系。 2.2.ENGase突变体介导的糖链转移反应条件 ENGase突变体介导的糖链转移反应的条件必须仔细优化。在没有ENGase突变体的情况下，糖链恶唑啉在碱性条件下与赖氨酸氨基基团反应（方案3）。我们通过亲水作用色谱（HILIC）的UPLC分析实现了这一副反应的实时监测。这种方法可以用来监测和优化反应。优化后，我们将反应介质的pH设定为6.5。在这些条件下，氨基被质子化以减少亲核性。由于糖链恶唑啉在pH 6.5下不稳定，因此在反应过程中分批添加以保持足够的浓度。 方案 3. 糖链氧化哌啶酮与氨基之间的副反应。 此外，选择合适的ENGase突变体是一个重要问题。虽然Endo M N175Q经常用于GlcNAc肽的糖链转移，但这种突变体对携带核心岩藻糖的抗体的糖链转移效果不佳。我们使用了Endo CC1，它具有与Endo M N175Q相似的特性，但热稳定性更高，用于添加到缺乏核心岩藻糖的抗CCR4抗体。 2.3.高效糖链转移的方法 为了避免副反应，我们使用唾液酸糖肽（SGP）1作为供体，而不是高反应性的恶唑啉2。因为SGP 1不是过渡态模拟化合物，其反应性与恶唑啉2相比低。因此，糖链转移需要高浓度的SGP 1。另一种避免副反应的方法是结合两种ENGase突变体和SGP 1（方案4）。在这两种ENGase突变体中，Endo M N175Q用于生成活性糖链中间体，推测是恶唑啉，尽管确切结构未被鉴定。生成的活性糖链中间体使用ENGase突变体EndoS D233Q进行原位糖链转移。这一程序降低了恶唑啉浓度，从而抑制了副反应。这种方法的其他优点是避免了相对不稳定的恶唑啉的分离，并且恶唑啉的制备和糖链转移可以在一锅操作中进行。 方案 4. 通过结合两种内切酶突变体，在一锅操作中原位生成氧化哌啶酮和糖链转移反应。 尽管ENGase突变体的水解活性受到抑制，但由于剩余的水解活性，糖链转移产率有时仍然不足。使用固定化ENGase突变体的流动化学是提高产率的关键技术。虽然使用固定化Endo M N175Q的流动反应产率可以高于90%，但在静态条件下产率低于90%。固定化的ENGase可以回收利用，这也是一个优势。 2.4.均质ADC的制备 基于上述协议，通过携带有效载荷偶联功能团的糖链恶唑啉，可以准备均质ADCs（方案5）。在唾液酸糖链3的唾液酸的羧基上，通过使用苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基磷酰六氟磷酸盐（PyBOP）形成酰胺键引入叠氮基团。然后，根据Shoda协议在水中通过脱水反应制备恶唑啉4（方案6）。最后，需要进行双正交反应以将有效载荷添加到连接位点，从而实现均质ADC的制备。 方案 5. 糖链偶联均质ADCs制备策略的示意图。括号内显示的是异质性组分。 方案 6. 制备携带叠氮基团的糖链氧化哌啶酮。 曲妥珠单抗是一种与HER2抗原结合的mAb，广泛用于治疗乳腺癌和胃癌。曲妥珠单抗也常在ADC研究中使用。通过EndoS D233Q将携带叠氮的糖链转移到曲妥珠单抗后，每个抗体上安装了四个叠氮基团。通过与张力炔烃的双正交反应，将带有溶酶体酶cathepsin B可切割的Val-Cit（瓜氨酸）连接子和单甲基auristatin E（MMAE）5载荷偶联（图1）。MMAE是一种有效的抗有丝分裂药物，源自海洋生物中的肽类，已被固定在琼脂糖上，并且与糖结合域融合的EndoS D233和D233Q已被固定在纤维素上。如上所述，这些固定化的ENGase突变体有效地转移糖链。固定化野生型EndoS与上述ENGase突变体的结合允许进行抗体糖基工程，而无需纯化糖链截短的抗体。此外，在ADC brentuximab vedotin中，并且目前在几种使用的ADCs中使用。 图 1. 用于糖链偶联ADC的载荷。 我们通过UPLC、MS和肽图谱确认了所准备ADC的均质性。完整MS清楚地显示了4:1的药物-抗体比率。流式细胞仪表明，ADC的结合亲和力与天然曲妥珠单抗相同。此外，ADC对高HER2表达的乳腺癌SK-BR-3细胞或胃癌OE-19和N-87细胞系具有高度的细胞毒性。特别是，SK-BR-3细胞的IC50与MMAE本身相同（0.3 nM）。另一方面，ADC对低HER2表达的乳腺癌MCF-7和胃癌MKN-45细胞系没有细胞毒性。这些结果证明了糖链偶联ADC的有效性。 已经报道了用于均质糖链偶联ADC制备的类似方法。在二醇基团氧化裂解后，使用腙键引入叠氮基团（图2）。糖链转移后，有效载荷6被偶联，ADC对SK-BR-3细胞系显示出强大的细胞毒性。 图 2. 用于载荷偶联的糖链氧化哌啶酮水合物。 心房利钠肽用于治疗充血性心力衰竭等心血管疾病。然而，心房利钠肽在体内的半衰期很短（2.4±0.7分钟）。通过EndoS D233Q/Q303 L突变体的糖基工程，将PEG 7与心房利钠肽偶联。ADC的半衰期延长至14.9天，并且降低血压的效果维持超过28天。 3.抗体糖基工程的其他方法  3.1.1,2-顺式二醇的氧化断裂  由于岩藻糖和唾液酸含有邻位顺式二醇，通过NaIO4的选择性氧化断裂可以产生无甲壳类动物Dolabella auricularia的甲壳素，这些甲壳素被称为多拉定。可被组织蛋白酶裂解的连接子首次由研究小组开发。 由于抗体没有甲酰基团，生成的甲酰基团可以作为在糖基部分专一性地固定载荷的官能团。唾液酸的无环二醇基团与其他单糖相比具有更大的灵活性和无阻碍性；因此，唾液酸可以在相对温和的条件下被氧化。然而，抗体通常含有低水平（<10-14%）的唾液酸。为了增加唾液酸含量，可以通过商业可获得的半乳糖基转移酶和α-2,6-唾液酸转移酶，使用尿苷二磷酸半乳糖（UDP-半乳糖）和胞苷酸唾液酸（CMP-唾液酸）作为糖基供体，来延长寡糖链。使用NaIO4处理HPCM2（一种抗磷脂IgM），用于糖链125I和111In的偶联。这些偶联抗体被证明保留了它们的结合亲和力。相比之下，通过赖氨酸、天冬氨酸或谷氨酸的偶联降低了它们的亲和力。体内生物分布和肿瘤定位数据表明，通过糖链放射性标记的抗体可能对免疫扫描成像有益。 这些方法要求抗体长时间暴露于低pH值、剧烈的氧化条件，以及对氨基酸残基（如半胱氨酸、蛋氨酸和色氨酸）的修饰，这可能会引起潜在问题。3.2.唾液酸转移的修饰 由于唾液酸转移酶对唾液酸C-5和C-9位置的修饰具有耐受性，可以将9-叠氮基团功能化的CMP-唾液酸转移至糖链（方案7）。利用唾液酸转移酶的耐受性，可以在糖链上引入叠氮基团以备ADC制备。为了增加唾液酸含量，使用半乳糖基转移酶和UDP-半乳糖添加半乳糖。然后，使用重组α-2,6-唾液酸转移酶I和9-叠氮-CMP-唾液酸，将带有叠氮基团的唾液酸并入。二苄基环辛基羰基（DIBO）基团中的炔烃与叠氮烃通过无铜Huisgen反应（炔烃-叠氮环加成）反应，并可用于生产生物缀合物。修饰抗体的唾液酸部分C-9的叠氮基团可以使用FITC、生物素或水合霉素等DIBO修饰的反应。制备的ADC在体内以剂量依赖性方式显示出细胞毒性。 方案 7. 使用9-叠氮基唾液酸和唾液酸转移酶的均质糖链偶联ADC。括号内显示的是异质性组分。 3.3.改良的半乳糖转移 由于半乳糖基转移酶能够容忍改良的半乳糖基供体结构，因此可以通过半乳糖基转移酶添加带有功能团的半乳糖。C2-酮半乳糖或叠氮-GalNAc已通过β(1,4)Gal-T1-Y289L半乳糖基转移酶突变体并入。半乳糖被半乳糖苷酶处理和β(1,4)Gal-T1-Y289L转变为带有叠氮基团的GalNAc（方案8）。然后，放射性同位素或细胞毒性化合物可以添加到叠氮基团上。还报道了另一种方法（方案9），在EndoS处理后，叠氮-GalNAc被转移到GlcNAc上，产生短糖链结构。这两种均质糖链偶联抗体在异种移植小鼠模型中显示出比异质赖氨酸偶联抗体更多的积累。 方案 8. 使用半乳糖基转移酶突变体的ADC制备方法。括号内显示的是异质性组分。 方案 9. 使用半乳糖基转移酶突变体的替代ADC制备方法。括号内显示的是异质性组分。 4.总结与展望  在这里，我们总结了抗体糖基工程技术和开发均质ADC制剂的方法。由于对ADC和抗体药物的需求持续增加，了解糖链功能至关重要。尽管已经报道了不同的均质ADC制备方法，但本文报道的化学-酶法途径具有许多优势。由于N-糖链位于Fc区域，有效载荷的偶联不会干扰抗原结合。此外，糖链原本就存在于Fc区域，因此引入的突变或外来序列的免疫原性不是问题。 目前，许多ADC和治疗性抗体生产的商业制造过程使用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞。然而，这种系统的生产力仍然很低。因此，正在研究CHO细胞的替代品，如微生物蛋白生产系统、蚕和酵母。这些系统产生的抗体带有高甘露糖糖链。正在探索通过糖基重构技术将高甘露糖型糖链转变为人类型复杂型糖链，以降低抗体生产成本的尝试。 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

TIS2024第四届自免疾病细胞疗法与干细胞疗法论坛重磅来袭，详询：王晨 180 1628 8769 文章来源： 北联干细胞 数据显示，中国现有心衰患者约890万名，近半的患者在心衰诊断后5年内死亡，其5年生存率比大部分恶性肿瘤还低。过去，心衰无法根治，医学手段只能延缓病情发展。近年，随着科技进步，心衰患者迎来了新的治疗手段。 　　2020年5月，《Nature》杂志报道，两位终末期心衰患者在中国接受了基于重编程干细胞的心衰治疗，并在一年后康复出院。据悉，患者于2019年5月注射了从iPSC分化得到的心肌细胞，这是已知的全球首个用于治疗受损心脏的iPSC技术的临床应用。iPSC（induced pluripotent stem cells），即诱导性多能干细胞，是指通过人工对体细胞进行重编程，逆分化培养出的一类多能干细胞。iPSC具有多向分化和强大自我复制潜能，在一定条件下可以分化成多种功能细胞，且可以在体外培养获得数百万甚至数十亿的临床相关表型细胞。 　　科研人员通过获取体细胞（如成纤维细胞等）进行体外重编程诱导成iPSC，再衍生分化为目标细胞（如心肌细胞等），进而移植到患者体内，达到修复组织和增强免疫的效果。2006年，日本京都大学山中伸弥教授利用病毒载体将四个转录因子（Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc）的组合转入小鼠皮肤细胞中，成功诱导出iPSC。因此，山中伸弥在6年后获得了2012年诺贝尔生理学或医学奖。而后，大规模关于iPSC的研究在全球范围内全面展开。 　　目前，iPSC在疾病的临床治疗上已有多种应用尝试，适应症包括心衰、脑卒中、膝骨关节炎、帕金森、白血病等。2022年4月,中国首次批准了一项iPSC来源的细胞治疗产品进入临床试验。此外，iPSC还可用于药企端的药物筛选CRO（研发外包）服务、科研端的建立疾病模型等。 　　细胞治疗时代，iPSC或成最优解 　　2015年，著名癌症医生、作家悉达多•穆克吉在《忘记药丸吧，细胞疗法即将到来》的演讲中提到，药物治疗曾给人类历史带来一场巨大变革，让肺炎、梅毒、肺结核等疾病得以治愈。药物治疗的模型是——“疾病，药物，靶点”。例如，感染了肺炎，可以服用青霉素，杀死微生物。然而，药物治疗疾病的模型并不总是奏效。自然界提供了另一视角去看待疾病：细胞结合成器官，器官聚合成生命，最终构造了丰富的生态系统。穆克吉认为，对于大量非感染导致的疾病，包括糖尿病、高血压、心脏病等慢性退行性疾病，相比“杀死某些东西”，人们要做的或许是“培养一些东西”，即细胞。细胞治疗的模型是：“细胞、组织、环境”。细胞治疗将成为未来疾病治疗的重要方式之一，其具有独特作用机制，主要优势在于：疗效显著持久、个性化治疗、以及可治疗传统药物治疗方式中无药可医的疾病。一般认为，细胞治疗包括免疫细胞治疗、干细胞治疗、以及其他细胞治疗。 　　在细胞家族中，干细胞是建设与修复者，免疫细胞是防卫军，它们为打造出一个健康人体的目标而相互协同。当人体还在成长时，干细胞通过源源不断的分裂和分化出新的细胞，增加细胞的种类和数量；当成年后身体不再成长，干细胞又能及时替换和更新衰老或受损的细胞；而当有外敌（如细菌和病毒）入侵，或内部出现叛变分子（如正常细胞突变为癌细胞），免疫细胞就会将其快速识别并清除。就干细胞而言，其按来源可分为胚胎干细胞、围产期干细胞和成体干细胞。 l  胚胎干细胞是从胚胎中分离的干细胞； l  围产期干细胞是从胎儿出生时附属的脐带血、脐带、胎盘等组织中提取的干细胞； l  成体干细胞是从成人身体组织中提取的干细胞，如骨髓、脂肪、神经、皮肤等。 　　用某科学家的话来说，“成体干细胞好比大树的树干，胚胎干细胞相当于大树的树根。胚胎干细胞不但保持无限的自我更新的特性，同时可分化为体内的各种组织细胞类型，被认为是最具临床应用价值的‘万用细胞’”。不过，由于胚胎干细胞需要从胚胎中提取，在临床应用时有伦理风险。而iPSC具有类似胚胎干细胞的分化潜能，且可用成年人体细胞进行诱导，解决了再生医学长久以来面临的伦理学问题和异体移植所产生的排异反应，来源便捷，兼具通用型和个性化治疗产品能力，具有更广阔的应用前景。 　　iPSC亦可分化为免疫细胞。目前，人类iPSC来源的CAR（嵌合抗原受体）-T、CAR-NK、CAR-M等细胞疗法已问世，并开始逐渐向临床转化。一个里程碑事件是，2020年10月，日本千叶大学和理化学研究所的研究团队宣布，已成功地完成了世界首例将基于iPSC分化的NKT细胞移植至癌症患者体内的移植手术。这也是日本首次尝试利用iPSC治疗肿瘤。目前进入临床上应用的免疫细胞治疗产品，基本以患者自体免疫细胞为原材料。自体来源的免疫细胞治疗产品高度个体化，生产规模有限，质量控制难度较大，制备周期长，病情进展迅速的患者无法从中受益。而通过iPSC技术，可制备异体来源的“现货型”免疫细胞治疗产品，逆转机体损伤或疾病。iPSC还可用来培养类器官。 　　iPSC可与CRISPR等基因编辑技术结合，在许多类型细胞中精确、定向地进行基因敲除或敲入，包括单碱基改变，纠正干细胞基因组内的基因差误，为个性化医疗增添新的途径。iPSC作为一种新兴技术，把免疫细胞治疗、干细胞治疗、甚至类器官培养和基因编辑等技术都“串”了起来，显示出巨大的应用潜力。就目前来说，iPSC可能是最优的细胞治疗方案。 　　理论上，任何类型的体细胞都容易被重编程，但iPSC基本由易于获取的细胞（如来自皮肤或血液的细胞）制备。以经典四因子法为例，制备iPSC主要涉及四大步骤：体细胞的分离与培养→介导载体的构建→诱导因子的导入及细胞培养→iPSC的筛选及鉴定。 　　目前，多个国家及地区已建立了iPSC超级供体库，中国也在2018年制备完成首例由“超级供体”诱导的多能干细胞株。和美国类似，中国的人群HLA复杂，其超级供体大约只能覆盖50%的中国人群，因而需要建立个人iPSC库，作为未来可用储备。 END 免责声明：本文仅作知识交流与分享及科普目的，不涉及商业宣传，不作为相关医疗指导或用药建议。文章如有侵权请联系删除。 TIS2024第四届免疫细胞疗法与干细胞疗法论坛重磅来袭，详询：王晨 180 1628 8769 戳“阅读原文”立即领取TIS2024论坛限量免费票！