The goal of this clinical trial is to measure the immune response in the blood, nose, and lungs after participants receive either the FDA-approved inactivated influenza vaccine or the FDA-approved intranasal FluMist vaccine. The study will evaluate immune responses in groups of healthy, non-pregnant, volunteers between the ages of 18 and 40. The main purpose of the study is to measure the change in influenza vaccine-specific antibodies in the lower lungs and nose between vaccination and 14 days after participants receive the vaccine. All participants will be randomized to receive one of the two seasonal flu vaccines and will have blood and back of the nose swabs collected throughout the study. Some study participants will choose to undergo optional bronchoscopy procedures and will be included in the part of the study looking at lower lung immune responses.

开始日期2025-09-09

申办/合作机构

Washington University School of Medicine

[+1]

NCT05921448

/ Not yet recruiting早期临床1期IIT

In-depth Immunological Analysis of Airway Immunity Following Nasal Live Attenuated and Intramuscular Influenza Vaccine

The study aims to compare the effectiveness of live attenuated influenza vaccines (LAIV) and intramuscular-inactivated vaccines (IIV) in healthy individuals aged 18-49. It will investigate cellular and humoral responses, identify immunological markers for targeted vaccine improvement, and establish a collaborative platform for accelerated immunological and clinical vaccine research.

开始日期2025-08-01

申办/合作机构-

JPRN-jRCT2031240116

/ SuspendedN/AIIT

A comparative use-result survey by test-negative case-control study for evaluation the effectiveness of FluMist intranasal spray in preventing influenza over time - A comparative use-result survey by test-negative case-control study for evaluation the effectiveness of FluMist intranasal spray in preventing influenza over time

开始日期2025-01-01

申办/合作机构-

100 项与 Influenza virus vaccine live intranasal (quadrivalent)(MedImmune LLC) 相关的临床结果

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100 项与 Influenza virus vaccine live intranasal (quadrivalent)(MedImmune LLC) 相关的转化医学

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100 项与 Influenza virus vaccine live intranasal (quadrivalent)(MedImmune LLC) 相关的专利（医药）

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117

项与 Influenza virus vaccine live intranasal (quadrivalent)(MedImmune LLC) 相关的文献（医药）

2025-08-01·JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE

Broadly active intranasal influenza vaccine with a nanocomplex particulate adjuvant targeting mast cells and toll-like receptor 9

Article

作者: Williamson, Grace L ; Staats, Herman F ; Lukesh, Nicole R ; Petrovsky, Nikolai ; Hendy, Dylan A ; Ashcraft, Kathleen A ; Abraham, Mathew A ; Ross, Ted M ; Bachelder, Eric M ; Heise, Mark T ; Landon, Chelsea D ; Murphy, Connor T ; Pena, Erik S ; Carlock, Michael ; Abraham, Soman N ; Ontiveros-Padilla, Luis ; Ainslie, Kristy M

Flumist is the only FDA-approved intranasal influenza vaccine. Although it has recently been approved for at-home use, it has significant limitations. These include reduced effectiveness in generating a protective immune response in patients with extensive influenza exposure, safety concerns due to its live attenuated virus formulation, and reduced efficacy due to viral drift/shift. To address this limitation, we have developed a nanocomplex comprised of a mast cell (MC) agonist and toll-like receptor 9 (TLR9) ligand to adjuvant a broadly acting influenza antigen. The newly reported MC agonist was identified by screening mastoparan-7 analogs for MC degranulation activity, which led to a more active peptide analog, MP12W. Positively charged MP12W spontaneously forms nanoparticulate complexes (NPs) with CpG 1826 that were then used to intranasally vaccinate mice with a computationally optimized broadly reactive antigen (COBRA) hemagglutinin (HA) protein. The NPs were further optimized by substituting CpG 1826 with CpG 55.2, a TLR-9 agonist identified by machine learning to be more active in humans. MP12W-CpG 1826 NPs showed an increased pro-inflammatory response and decreased cytotoxicity in vitro compared to M7 complexes, translating into a safer profile in a model of increased hypersensitivity, collaborative cross mice 027 (CC027). Intranasal vaccination with this complex and broadly reactive HA resulted in higher mucosal antibody concentration and increased cytokine production with antigen recall. These responses were enhanced with MP12W-CpG 55.2 NP vaccination. MP12W-CpG NPs provided similar protection in an influenza challenge model. This study demonstrates the potential of this novel intranasal nanocomplex for vaccination.

2025-02-01·JOURNAL OF INFECTION AND CHEMOTHERAPY

The efficacy and safety of a quadrivalent live attenuated influenza nasal vaccine in Japanese children: A phase 3, randomized, placebo-controlled study

Article

作者: Oe, Keiji ; Hayashi, Takuya ; Nakayama, Tetsuo ; Makino, Kentaro

BACKGROUND:

Vaccination is the primary method of preventing influenza infection and complications in young children. We evaluated the efficacy and safety of a single dose of MEDI3250 (intranasal, quadrivalent, live attenuated influenza vaccine) in healthy Japanese children during the 2016/17 influenza season.

METHODS:

In this multicenter, randomized, double-blind, phase 3 study (jRCT2080223345), participants aged 2-18 years received MEDI3250 or placebo (2:1), stratified by age (2-6 years, 7-18 years). The primary and secondary endpoints were the incidence of confirmed symptomatic onset of influenza caused by a circulating wild-type strain or by a vaccine-matched strain, respectively. Safety outcomes included the incidence of adverse events (AEs) and vaccine-related AEs.

RESULTS:

Overall, 910 participants received MEDI3250 (n = 608) or placebo (n = 302). For the primary endpoint (regardless of the influenza subtype), the incidence of influenza onset was 25.5 % (MEDI3250) and 35.9 % (placebo); relative risk reduction, 28.8 % (95 % confidence interval, 12.5 %, 42.0 %). For the secondary endpoint (vaccine-matched strain), the incidence was 10.9 % (MEDI3250) and 17.2 % (placebo); relative risk reduction, 36.6 % (95 % confidence interval, 6.5 %, 56.8 %). Solicited AEs occurred in 67.6 % (MEDI3250) and 63.6 % (placebo). Most events were mild; nasal discharge was most common (59.2 % [MEDI3250] and 52.6 % [placebo]). Unsolicited AEs occurred in 36.0 % (MEDI3250) and 33.1 % (placebo). The most common unsolicited vaccine-related AE was diarrhea (2.3 %, both groups).

CONCLUSIONS:

MEDI3250 had a greater preventive effect against influenza onset in Japanese children than placebo; no new safety signals were observed relative to previous clinical and post-marketing studies of MEDI3250.

2024-01-01·Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)

Distinct Functional Humoral Immune Responses Are Induced after Live Attenuated and Inactivated Seasonal Influenza Vaccination

Article

作者: Hanley, Hannah B ; Lingwood, Daniel ; Ross, Ted M ; Alter, Galit ; Carlock, Michael A ; Deng, Yixiang ; Tong, Xin ; McNamara, Ryan P ; Cizmeci, Deniz ; Fontana, Laura

Abstract:

Influenza viruses infect 5–30% of the world’s population annually, resulting in millions of incidents of hospitalization and thousands of mortalities worldwide every year. Although annual vaccination has significantly reduced hospitalization rates in vulnerable populations, the current vaccines are estimated to offer a wide range of protection from 10 to 60% annually. Such incomplete immunity may be related to both poor antigenic coverage of circulating strains, as well as to the insufficient induction of protective immunity. Beyond the role of hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA), vaccine-induced Abs have the capacity to induce a broader array of Ab effector functions, including Ab-dependent cellular cytotoxicity, that has been implicated in universal immunity against influenza viruses. However, whether different vaccine platforms can induce functional humoral immunity in a distinct manner remains incompletely defined. In this study, we compared vaccine-induced humoral immune responses induced by two seasonal influenza vaccines in Homo sapiens, the i.m. inactivated vaccine (IIV/Fluzone) and the live attenuated mucosal vaccine (LAIV/FluMist). Whereas the inactivated influenza vaccine induced superior Ab titers and FcγR binding capacity to diverse HA and NA Ags, the live attenuated influenza mucosal vaccine induced a more robust functional humoral immune response against both the HA and NA domains. Multivariate Ab analysis further highlighted the significantly different overall functional humoral immune profiles induced by the two vaccines, marked by differences in IgG titers, FcR binding, and both NK cell–recruiting and opsonophagocytic Ab functions. These results highlight the striking differences in Ab Fc-effector profiles induced systemically by two distinct influenza vaccine platforms.

项与 Influenza virus vaccine live intranasal (quadrivalent)(MedImmune LLC) 相关的新闻（医药）

2025-09-02

·IVD资讯

一管检测14个目标！罗氏多重分子检测获批！

来源：诊断科学在呼吸道疾病检测领域，精准、高效的检测手段至关重要。罗氏（Roche）的cobas Respiratory 4 - flex for use on the cobas 5800/6800/8800 Systems是一款备受关注的检测产品。 Cobas® Respiratory 4-flex可与Cobas® 5800、6800和8800系统一起使用在今天这篇文章当中，我将基于该产品审评报告全文，为大家拆解其技术细节与临床价值。产品概述 cobas® Respiratory 4-flex用于在罗氏公司的全自动分子诊断平台——cobas® 5800、6800和8800系统上运行，可同时检测并区分四种常见的呼吸道病原体：甲型流感病毒（Influenza A）、乙型流感病毒（Influenza B）、呼吸道合胞病毒（RSV）以及新型冠状病毒（SARS-CoV-2），同时包含内参RNA（RNA IC）用于监控检测流程的可靠性。该系统采用高度自动化的检测流程，从样本处理到结果报告一气呵成。首先，系统会对患者样本中的核酸以及加入的内参RNA分子进行同步提取。提取过程中，通过加入蛋白酶和裂解试剂释放样本中的核酸，这些核酸随后会结合到外加的磁性玻璃颗粒的硅表面，而样本中的杂质如变性的蛋白质、细胞碎片及潜在的PCR抑制物等，则会在后续的清洗步骤中被去除。最终，纯净的核酸会在高温条件下从磁性玻璃颗粒上洗脱下来，以供后续的PCR扩增使用。外部阳性与阴性对照样本也采用相同的处理流程。在核酸提取完成后，系统利用针对各目标病毒基因组保守区域设计的特异性引物，对目标核酸进行选择性扩增。其中，甲型流感检测的是基质蛋白1（M1）基因，乙型流感检测非结构蛋白NS1/NEP，RSV检测基质蛋白（M），SARS-CoV-2则同时检测ORF1ab和ORF1a两个多聚蛋白基因。内参RNA的扩增则使用与其病毒目标基因无同源性的特异性引物，确保其扩增过程独立于病毒目标。扩增后的目标核酸通过荧光标记的寡核苷酸探针进行检测。该系统采用了罗氏独有的温度辅助信号生成技术（TAGS），该技术通过对不同温度下荧光信号的捕捉，实现每个荧光通道区分多个目标，从而在一个反应孔内最多可检测多达14个目标（包括内参）。 TAGS技术依赖于温度依赖性的荧光激活机制，即只有在DNA聚合酶的核酸外切酶活性切割探针、并伴随反应温度升高时，原本处于“休眠”状态的荧光基团才会被激活并发出信号。因此，在每个PCR循环中，该技术能够在五个荧光通道与三个不同的温度点（T1、T2、T3）上捕捉荧光信号，从而显著提升了多目标检测的精准度与区分能力。该检测所使用的master mix（反应预混液）中包含针对四种病毒目标及内参RNA的特异性探针，并以脱氧尿苷三磷酸（dUTP）替代常规的脱氧胸苷三磷酸（dTTP）用于新合成DNA链的构建。预混液中还含有尿嘧啶-N-糖基化酶（AmpErase酶），可在PCR第一轮热循环时通过高温灭活之前残留的扩增子，从而有效防止污染。但新合成的扩增子不会被破坏，因为AmpErase酶在温度超过55°C时会失活。最终，系统可对四种呼吸道病毒（甲型流感、乙型流感、RSV和SARS-CoV-2）进行定性检测与区分，并同步报告内参RNA的结果，以监控检测过程是否正常。该系统还支持RESP-4FLEX ASAP功能，允许用户根据需要对每个样本灵活选择检测四种病毒目标中的任意组合，并可在cobas® 5800系统上进一步进行数字反射计算，以获取额外的目标分析数据。预期用途注册资料主要描述了cobas® Respiratory 4-flex检测系统在临床使用中的用途与限制，重点说明了其设计目的、适用样本类型、检测对象以及结果解读的注意事项。该检测是一种基于实时聚合酶链反应（real-time PCR）技术的自动化多重核酸检测方法，专门用于在配备有cobas® 5800、6800或8800系统的实验室平台上运行。它的主要用途是对出现呼吸道感染相关症状的个体，从鼻咽拭子样本中同时进行定性检测并区分四种常见的呼吸道病毒：严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-CoV-2）、甲型流感病毒（Influenza A）、乙型流感病毒（Influenza B）以及呼吸道合胞病毒（RSV）。这些病毒引起的临床症状往往相似，因此该检测的主要价值在于帮助临床医生在面对疑似呼吸道病毒感染的患者时，更准确地区分具体是由哪一种病毒引起感染，从而为诊断提供参考依据。但该检测并不用于检测丙型流感病毒。该检测所针对的病毒核酸通常在感染的急性期阶段可以在鼻咽拭子样本中被检测到。当患者出现呼吸道感染相关症状时，如果从样本中检测出特定病毒的核酸，这通常提示该患者体内存在相应的病毒，结合其他临床信息、流行病学背景以及实验室数据，可以为诊断提供支持。然而，该检测结果不能作为诊断、治疗或其他患者管理决策的唯一依据。也就是说，即使检测结果为阴性，也不能完全排除患者感染了SARS-CoV-2、甲型流感、乙型流感或RSV的可能性；同样地，检测结果为阳性也不意味着患者没有同时感染其他病原体，也不能确定所检出的病毒就是导致当前病症的唯一或主要原因。性能参数注册资料主要围绕cobas® Respiratory 4-flex检测系统的技术特性展开，重点描述了其在监管分类、预期用途、检测原理及与已上市同类产品（即对照设备BioFire Respiratory Panel 2.1，简称RP2.1）之间的技术对比情况，旨在说明该系统在技术上与市场上已有合法销售的同类核酸扩增检测产品具有实质等同性。从整体技术特征来看，cobas® Respiratory 4-flex是一种基于实时聚合酶链反应（PCR）技术的自动化多重核酸检测方法，其设计目的、应用场景以及核心功能，与当前市场上其他用于定性检测和区分甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒（RSV）以及SARS-CoV-2病毒的合法上市核酸扩增检测产品基本一致。这意味着它在技术原理、临床用途和监管定位等方面，均属于已被验证和接受的技术类型。具体到与对照设备BioFire RP2.1的对比，两者在多个关键维度上具有相似之处，同时也存在一些显著差异。首先，在监管层面，二者都遵循相同的美国法规编号（21 CFR 866.3981），同属II类医疗器械，并受到特殊控制，拥有相同的设备分类名称和产品代码（QOF）。它们的预期用途也高度相似，都是用于对出现呼吸道感染症状的患者，通过鼻咽拭子样本进行多种呼吸道相关微生物核酸的定性检测，以辅助临床诊断。不过，两者的检测范围有所不同：cobas® Respiratory 4-flex专注于四种主要呼吸道病毒——SARS-CoV-2、甲型流感、乙型流感和RSV，而BioFire RP2.1的检测范围更广，除了这些病毒外，还包括多种其他呼吸道病毒（如腺病毒、多种冠状病毒、人偏肺病毒、鼻病毒/肠病毒、副流感病毒等）以及若干细菌（如肺炎支原体、肺炎衣原体、百日咳杆菌等）。在适用条件方面，两款设备均仅限于处方使用，且都接受鼻咽拭子作为检测样本。但在样本处理和检测原理上，两者采用了不同的技术路径：cobas® Respiratory 4-flex的样本处理过程完全由cobas® 5800/6800/8800系统自动化完成，其检测基于PCR扩增与荧光探针技术，并利用罗氏特有的温度依赖性荧光淬灭机制（TAGS技术）来实现多重目标检测；而BioFire RP2.1则通过其配套系统（FilmArray 2.0或Torch）进行自动化样本处理，采用两步巢式多重PCR方法，包括逆转录、第一阶段多重PCR反应以及第二阶段的荧光双链结合染料检测，并辅以终点熔解曲线分析来识别目标扩增子。在质控方面，两者都使用了包括样本处理内参（IC）以及阳性和阴性对照在内的质量控制手段，但具体的控制机制略有不同：cobas® Respiratory 4-flex使用常规的内部对照RNA，而BioFire RP2.1则设有两个过程控制，包括RNA过程控制（IC）和PCR2控制，后者用于确认第二阶段PCR反应成功。最后，在结果分析方式上，cobas® Respiratory 4-flex主要依靠PCR循环阈值（Ct值）进行分析，而BioFire RP2.1则结合终点熔解曲线数据来检测目标特异性扩增子。分析灵敏度（检测限）注册资料主要描述了cobas® Respiratory 4-flex检测系统在非临床性能评估中的分析灵敏度（即检测限，Limit of Detection，简称LoD）研究，目的是确定该检测方法对四种主要呼吸道病毒——甲型流感病毒（包括H1N1和H3N2亚型）、乙型流感病毒（包括Victoria和Yamagata谱系）、呼吸道合胞病毒（RSV）以及新型冠状病毒（SARS-CoV-2）——在鼻咽拭子样本中能够可靠检测出的最低浓度水平。分析灵敏度的研究是通过一系列稀释实验来完成的。具体来说，研究人员将培养获得的RSV、甲型流感、乙型流感病毒以及灭活的SARS-CoV-2病毒，按照不同的浓度梯度进行稀释，并将这些病毒混悬在模拟鼻咽样本的基质中，形成多个浓度水平的测试样本组，每个浓度组至少包含五个不同的浓度，再加上空白对照。这些样本在三个不同批次的试剂、多次运行、不同操作人员、不同实验日期以及不同检测仪器上进行了反复测试，以确保结果具有广泛的代表性和重复性。最终，通过统计每个浓度水平下检测出阳性结果的比例（即“命中率”），确定在至少95%的重复测试中能够检测出病毒核酸的最低浓度，这个浓度即被定义为该检测系统对该特定病毒株的检测限。研究结果显示，对于甲型流感病毒的H1N1亚型（菌株为Brisbane/02/2018），其检测限为每毫升1.00×10²个拷贝（cp/mL），在63次重复测试中有95.2%（60次）检测为阳性；甲型流感H3N2亚型（菌株A/Darwin/6/2021）的检测限稍低，为每毫升5.00×10¹个拷贝，同样在63次测试中有95.2%的阳性率；乙型流感Victoria谱系（菌株B/Austria/1359417/2021）的检测限为每毫升2.50×10²个拷贝，所有63次测试均为阳性（100%）；乙型流感Yamagata谱系（菌株Phuket/3073/13）的检测限为每毫升8.00×10²个拷贝，在63次测试中有98.4%（62次）为阳性。对于呼吸道合胞病毒A型（菌株A2），其检测限为每毫升4.00×10³个拷贝，阳性率为98.4%（62/63）。而对于SARS-CoV-2病毒，研究使用了世界卫生组织（WHO）的第一号国际标准（NIBSC代码20/146，为灭活病毒），测得其检测限为每毫升8.00×10¹个国际单位（IU/mL），在63次测试中同样有95.2%（60次）的阳性率。此外，还进行了额外的研究，以验证每种病毒单独存在时的检测限与它们在混合样本中（即共同加入样本中进行检测时）的检测限是否一致。结果表明，每种病毒株在单独测试时的检测限与其在混合样本中检测时的表现是相当的，说明该检测系统对于多病毒共检的情况下，依然能够维持对各目标病毒灵敏而可靠的检测能力。精密度该部分内容详细介绍了cobas® Respiratory 4-flex检测系统在非临床性能评估中的精密度（Precision）和再现性（Reproducibility）研究，旨在评估该检测方法在不同实验条件下的稳定性和一致性，确保其在实际应用中能够可靠地检测出目标病毒。首先，在精密度评估中，主要关注的是在同一实验室内，使用同一批试剂、仪器和操作流程时，检测结果的一致性。研究通过分析包含不同细胞培养病毒株的样本组，这些样本被稳定在UTM™基质中，并模拟临床阴性样本背景。实验设置了两个不同的病毒浓度水平：一个是接近检测限（约1倍LoD）的水平，另一个是高于检测限（约3倍LoD）的水平。每个浓度水平进行了216次重复测试，总共跨越三个试剂批次、六台检测仪器、五名操作人员以及十二个不同的测试日。所有样本均通过全自动化cobas® 5800/6800/8800系统完成整个检测流程，因此所报告的精密度结果涵盖了检测过程中的所有环节。研究结果显示，在接近检测限的浓度水平（约1倍LoD）和高于检测限的浓度水平（约3倍LoD），该检测系统均表现出极高的检测稳定性与一致性。具体来说，在约3倍LoD的浓度下，所有目标病毒（包括甲型流感H3N2、乙型流感Victoria、RSV A以及SARS-CoV-2）的检测阳性率均达到了100%；而在约1倍LoD的浓度下，除RSV A有99.07%的阳性率、乙型流感Victoria有99.54%的阳性率之外，其余目标也均保持了极高的检测率，且空白对照样本没有出现假阳性结果。从数据统计来看，各目标病毒在不同浓度水平下的阳性结果命中率非常高，并且通过计算得出的置信区间也显示出结果具有高度的可靠性。此外，还针对每个浓度水平下PCR扩增过程中获得的循环阈值（Ct值）进行了进一步分析，以评估检测结果在不同实验条件下的细微变异程度。数据显示，在各个浓度水平下，无论是仪器之间、批次之间、天与天之间，还是单次运行内部，Ct值的变异系数（CV%）都保持在较低水平，表明检测结果不仅稳定，而且重复性良好。例如，在约1倍LoD的甲型流感H3N2样本中，虽然Ct值在不同因素间存在轻微波动，但总体变异不大，显示出系统在接近检测限的情况下依然能够提供一致的结果。其次，在再现性评估中，研究进一步拓展了评估范围，旨在验证该检测系统在不同实验室条件、不同试剂批次、不同检测仪器、不同操作人员以及不同测试日等多种变量影响下的整体表现。实验设置更为复杂，包括多个测试地点（三个）、多台检测系统（九台）、多个试剂批次（三个），并在六个测试日内进行，每个病毒目标均设置了两个浓度水平（约1倍LoD和约3倍LoD），每个浓度水平进行了504次重复测试，其中还包含了一个所有病毒均为阴性的对照样本。研究结果表明，该系统在整体上表现出了优异的再现性。对于阴性样本，检测结果显示出99.6%的阴性符合率，说明系统在面对不含目标病毒的样本时，几乎不会产生假阳性结果。对于各个病毒目标，在约1倍LoD和约3倍LoD的浓度水平下，绝大多数样本均获得了预期的检测结果，阳性符合率基本达到100%，即使有个别样本因技术原因出现无效结果，也不影响整体数据的可靠性。例如，在乙型流感Victoria的约1倍LoD水平下，有501个有效阳性结果，符合率达到99.4%；而在约3倍LoD水平下，则503个样本全部为有效阳性，符合率达到了100%。从Ct值的统计分析来看，在不同实验变量（如检测地点、试剂批次、测试日、运行批次等）之间，Ct值的变异程度均保持在较低水平，总体标准偏差（SD）和变异系数（CV%）普遍较小，说明检测结果在不同条件下的波动非常有限。尤其是在约3倍LoD的浓度水平下，几乎所有病毒目标的Ct值变异都非常小，显示出系统在较高病毒浓度下具有极佳的稳定性和再现性。即使在约1倍LoD这种接近检测限的挑战性条件下，绝大部分目标病毒的检测结果依然保持一致，仅有个别指标显示出轻微的变异，但总体仍符合高度可靠的检测标准。包容性注册资料主要描述了cobas® Respiratory 4-flex检测系统在病毒检测范围上的包容性（Inclusivity）评估，即该检测方法对于不同流感病毒（包括甲型和乙型流感）、呼吸道合胞病毒（RSV）以及新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的各种已知毒株是否均能有效检测的能力。评估的核心目标是验证该检测系统能否广泛识别不同谱系、不同亚型或变异株的目标病毒，确保其在面对病毒变异和多样性时依然具备可靠的检测性能。在评估方法上，研究人员选取了与每个目标病毒相关的多种代表性毒株，包括不同流感病毒亚型（如甲型流感的H1N1、H3N2、H5N1、H7N9等，乙型流感的Victoria和Yamagata谱系）、多种SARS-CoV-2变异株（如B.1.1.7、B.1.351、P.1、B.1.617.2、B.1.1.529等），以及不同类型的RSV（A型和B型）。针对每一个毒株，研究在接近检测限（LoD）的浓度条件下进行了测试，初始浓度从大约3倍LoD开始，每个毒株至少测试三个重复样本，逐步调整浓度直到找到能够达到100%检测命中率的最低浓度。这个浓度即表明在该水平下，系统对相应毒株的检测具有全面而稳定的识别能力。具体来说，在SARS-CoV-2方面，评估涵盖了包括早期毒株（如USA-WA1/2020）和多个在全球范围内广泛传播的重要变异株（如英国株B.1.1.7、南非株B.1.351、巴西株P.1、印度株B.1.617.2、奥密克戎株B.1.1.529等）。研究显示，这些变异株在约3倍LoD的浓度下均能被100%检测到。此外，还通过生物信息学（in silico）分析对SARS-CoV-2检测所使用的引物和探针结合区域进行了评估，分析对象包括NCBI和GISAID两大国际病毒序列数据库中的大量已知病毒序列（NCBI超过832万条，GISAID超过1596万条），结果显示该检测方法理论上能够覆盖几乎所有已知的SARS-CoV-2序列，预测失败率极低，表明其对当前及潜在的SARS-CoV-2变异株具有广泛的包容性。对于甲型流感病毒，评估包括了季节性H1N1、H3N2亚型，以及高致病性禽流感如H5N1、H5N2、H5N3、H7N2、H7N8、H7N9和H9N7等不同亚型。测试涵盖了从常见的季节性流行株到较为罕见的禽类相关毒株，所有测试毒株在约3倍或稍高的LoD浓度下都达到了100%的检测命中率，显示出系统对甲型流感病毒的高度包容性。乙型流感病毒的评估则包括Victoria和Yamagata两大主要流行谱系，以及一些其他未明确分类的乙型流感毒株。这些毒株在约3倍LoD浓度下也均被系统100%检测到，表明该检测方法对乙型流感的不同谱系同样具有广泛的识别能力。对于呼吸道合胞病毒（RSV），研究选取了A型和B型中的多个代表性毒株，包括常见的临床分离株和实验室标准株。这些毒株在约3倍LoD的浓度水平下同样实现了100%的检测率，证明该检测系统对RSV的不同类型也具有稳定的检测包容性。基质效应注册资料评估了鼻咽拭子和稳定于UTM™的模拟临床基质之间的等效性。将混合的阴性个体临床样本（鼻咽）和稳定于UTM™的模拟临床基质用两种共配制的检测板进行加标，这些检测板含有RSV、流感A和SARS-CoV-2以及流感B，浓度水平约为检测限（LoD）的2倍。每种样本类型测试了42个重复样本。所有用2倍LoD检测板测试的重复样本在两种基质中对相应的病毒目标均为阳性，命中率为100%。分析特异性（交叉和干扰）注册资料全面描述了cobas® Respiratory 4-flex检测系统在非临床性能评估中关于分析特异性（analytical specificity）的多个方面，包括交叉反应性、微生物干扰、内源性干扰物质、药物干扰、潜在共感染情况下的竞争性干扰以及样本间交叉污染的评估，旨在验证该检测方法在复杂样本环境中的准确性与特异性，确保其只对目标病毒产生反应，而不受其他无关微生物、物质或环境因素的影响。首先，在分析特异性中的交叉反应性评估中，研究人员通过向检测系统中加入一系列可能在呼吸道中存在的微生物，包括细菌、真菌和病毒，以评估这些非目标微生物是否会导致假阳性结果。这些微生物涵盖了常见的呼吸道定植菌、机会致病菌以及一些其他呼吸道或全身性病毒，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、白念珠菌、博德特氏菌、巨细胞病毒、EB病毒、麻疹病毒、中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）以及SARS冠状病毒（SARS-CoV）等。测试时，这些微生物的浓度被设定为较高水平（细菌和真菌为每毫升10⁶单位，病毒为每毫升10⁵单位），并且分别在单独存在以及与目标病毒（RSV、甲型流感、乙型流感、SARS-CoV-2，浓度约为3倍LoD）共同存在的情况下进行检测。结果显示，当样本中仅含有这些非目标微生物时，检测系统未产生任何阳性结果；而当这些微生物与目标病毒共同存在时，系统仅对目标病毒产生了阳性反应，对其他微生物均未出现交叉反应。这充分证明了该检测系统对于常见呼吸道微生物及其他潜在干扰病原体具有高度的特异性，不会因它们的存在而误判。其次，在内源性干扰物质评估中，研究考察了可能存在于临床样本中的一些天然物质，如粘液（浓度为0.3–0.5% w/v）和血液（浓度为1.5–3.0% v/v），是否会干扰检测结果。测试表明，在这些物质存在的情况下，无论是否同时含有目标病毒（浓度约为3倍LoD），检测系统均能正常工作，未出现性能下降或结果偏差。此外，还评估了几种不同品牌和类型的鼻咽拭子样本采集保存液（如M4RT、M5、M6以及VACUETTE®病毒稳定管），包括未加标和加标目标病毒的样本，结果同样显示这些替代性采集介质不会对检测结果造成干扰，说明该检测方法对于不同临床采样和保存条件下获得的样本均具有良好的适应性。在药物干扰评估中，研究人员测试了一系列可能用于呼吸道感染治疗或预防的药物成分，包括鼻喷剂、含药漱口水、眼药水、鼻用软膏、抗生素注射剂以及抗病毒药物等，如氟替卡松、莫匹罗星、布地奈德、苯佐卡因、氯己定、氧甲唑啉、妥布霉素、扎那米韦、奥司他韦等。这些药物在存在和不存在目标病毒的情况下分别进行了测试，结果显示，除两种特殊物质外，其余药物均未对检测结果造成干扰。特别地，FluMist®（一种鼻喷式四价流感疫苗，含有活的减毒流感病毒）在单独测试时，系统正确地检测出了其中的甲型和乙型流感病毒成分，而对其他目标未产生反应；而Snuff Tobacco（鼻烟烟草，含尼古丁）则被确认为一种潜在干扰物，在不含病毒但含有0.1%浓度鼻烟烟草的样本中，检测系统出现了无效结果，提示该物质可能对检测流程造成一定干扰。在共感染（竞争性干扰）评估中，为验证当样本中同时存在多种病毒且浓度差异较大时，高浓度病毒是否会抑制低浓度病毒的检测，研究人员设计了包含不同病毒组合的测试样本，每个组合中一种病毒以高浓度（≥10⁶单位/mL）存在，另一种目标病毒则以较低浓度（约3倍LoD）存在。总共测试了12种不同的病毒组合，包括甲型流感与SARS-CoV-2、乙型流感与SARS-CoV-2、RSV与SARS-CoV-2等相互组合。结果显示，在所有组合中，高浓度的病毒均未对低浓度目标病毒的检测产生竞争性抑制，系统能够准确识别出所有低浓度目标病毒的存在，说明该检测方法在面对潜在的共感染情况时，依然能够可靠地检测出每一种目标病毒，不受其他高浓度病毒的影响。最后，在交叉污染评估中，通过设计包含大量阴性样本与高浓度阳性样本（SARS-CoV-2，约6.5×10⁸颗粒/mL）交替排列的检测方案，模拟实际检测过程中可能出现的样本间交叉污染情况。测试在cobas® 5800和cobas® 6800/8800系统上分别进行了多次运行，总共检测了480份阴性模拟样本和430份高滴度阳性样本。最终结果显示，所有480份阴性样本均未出现假阳性结果，交叉污染率为0%（单侧95%置信区间上限为0.62%），表明该检测系统在实际运行中具有极高的防交叉污染能力，能够有效避免样本间的相互干扰，确保检测结果的纯净与准确。临床评估（前瞻性样本）该部分内容聚焦于cobas® Respiratory 4-flex检测系统在真实临床环境中的性能评估，通过将其检测结果与一种已获美国FDA 510(k)许可的同类对比检测方法进行比较，全面验证了该系统在实际应用于呼吸道病毒感染患者鼻咽拭子样本时的临床准确性，包括其对不同目标病毒（甲型流感、乙型流感、呼吸道合胞病毒和SARS-CoV-2）的检测能力。研究采用了前瞻性收集的临床样本，这些样本来自2022-2023和2023-2024两个呼吸道病毒流行季，在多个采样点采集后分为新鲜样本（即采后即测）和冷冻样本（采集后经冷冻保存再检测）两类。新鲜样本主要在2023-2024流行季由11个采样点采集，并在4个检测点使用cobas® 6800/8800系统进行检测；冷冻样本则分别来自2022-2023流行季的7个采样点和2023-2024流行季的14个采样点，之后在3个检测点进行检测。总共纳入了4,475份鼻咽拭子样本，其中1,869份为新鲜样本，2,606份为冷冻样本。经过筛选和检测流程后，最终有4,378份样本（1,832份新鲜样本和2,546份冷冻样本）在cobas® Respiratory 4-flex系统和对比方法上均完成了检测，但有部分样本由于仪器故障、样本处理失误、运输丢失或样本量不足等原因未能检测或被排除分析，最终有4,341份样本（1,827份新鲜样本和2,514份冷冻样本）被认定为有效评估样本。研究重点评估了cobas® Respiratory 4-flex系统对四种主要呼吸道病毒——甲型流感、乙型流感、呼吸道合胞病毒（RSV）和SARS-CoV-2——的检测性能，主要通过两个核心指标来衡量其临床准确性：阳性符合率（Positive Percent Agreement，PPA，即真阳性率，指系统和对比方法同时检出目标病毒的比例）和阴性符合率（Negative Percent Agreement，NPA，即真阴性率，指系统和对比方法同时未检出目标病毒的比例）。这些指标反映了该检测系统在实际临床使用中与已获批对比方法之间的一致性程度。具体而言，在甲型流感的检测上，无论是新鲜样本还是冷冻样本，cobas® Respiratory 4-flex均表现出很高的阳性与阴性符合率。综合新鲜和冷冻样本来看，其阳性符合率为96.4%，意味着在所有确实感染甲型流感且被对比方法检出的病例中，该系统也成功检测出了96.4%的病例；而阴性符合率高达99.7%，说明在所有未被对比方法检出甲型流感的样本中，该系统也正确地给出了阴性结果的比例非常高。类似地，对于乙型流感，该系统同样展示了卓越的性能，总体阳性符合率为98.9%，几乎能够检测出所有真正感染乙型流感的患者，而阴性符合率更是达到了99.9%，几乎无假阴性情况出现。在呼吸道合胞病毒（RSV）的检测方面，尽管其阳性符合率略低于甲型和乙型流感，但仍保持在较高水平，总体达到89.7%。特别是在冷冻样本中，阳性符合率为90.4%，而在新鲜样本中为88.7%。其阴性符合率则继续保持优异，所有样本的阴性符合率均达到100%，表明当患者未感染RSV时，该系统几乎不会误报。对于SARS-CoV-2的检测，cobas® Respiratory 4-flex同样展现了出色的临床性能。综合新鲜与冷冻样本，其阳性符合率为97.3%，意味着在几乎所有真正感染新冠病毒的患者中，该系统均能准确识别；而阴性符合率为98.5%，说明在未感染新冠病毒的样本中，该系统正确判断的比例也非常高。无论是新鲜样本还是冷冻样本，SARS-CoV-2的阳性与阴性符合率都保持在相近的高水平，进一步验证了该系统对新冠病毒检测的可靠性。临床评估（回顾性样本）该部分内容主要描述了cobas® Respiratory 4-flex检测系统在回顾性临床样本中的性能评估结果，通过将系统检测数据与已获批的对比检测方法进行比对，进一步验证了该系统在实际临床应用中对于甲型流感、乙型流感和呼吸道合胞病毒（RSV）的检测准确性和可靠性。与前瞻性研究使用新鲜或冷冻的近期样本不同，回顾性研究采用的是2014至2022年间收集并保存的冷冻鼻咽拭子样本（保存于UTM或UVT基质中）。这些样本来自有呼吸道病毒感染症状的患者，当初在采集时已通过某种检测方法得到了历史检测结果，因此可以根据这些已知结果来评估cobas® Respiratory 4-flex的检测表现。研究选取了770份此类回顾性样本，在美国三个检测点使用cobas® 6800/8800系统进行检测，并以一种经美国FDA批准的分子检测方法作为对比方法，用于评估两者之间的一致性。在样本筛选过程中，部分样本因各种原因被排除分析，包括cobas® Respiratory 4-flex检测结果无效、对比方法检测失败或结果无效等。最终，针对不同病毒目标，分别有数量不等的样本被排除，剩余可供评估的样本数量为：甲型流感657份、乙型流感647份、RSV 659份。研究同样采用阳性符合率（PPA）和阴性符合率（NPA）这两个核心指标来评价检测性能。阳性符合率指的是当对比方法和cobas® Respiratory 4-flex均检测出目标病毒时，系统正确识别出阳性样本的比例；阴性符合率则是指当两种方法均未检测出目标病毒时，系统正确判断为阴性的比例。结果显示，在甲型流感的检测上，cobas® Respiratory 4-flex表现出了极高的准确性：所有61份被对比方法判定为阳性的样本，该系统也全部正确检出，阳性符合率达到100%；而在596份被对比方法判定为阴性的样本中，该系统也正确识别出了589份，阴性符合率为98.8%。这表明该系统在检测甲型流感时，不仅能够准确识别出真正感染的患者，同时也能可靠地排除未感染的患者。对于乙型流感，cobas® Respiratory 4-flex同样展示了良好的检测性能：在40份阳性样本中，系统正确检测出了39份，阳性符合率为97.5%；在607份阴性样本中，系统正确判断了603份，阴性符合率达到99.3%。尽管阳性符合率略低于甲型流感，但仍处于非常高的水平，说明该系统对乙型流感的检测同样具有高度的准确性。在呼吸道合胞病毒（RSV）的检测方面，cobas® Respiratory 4-flex的表现尤为突出：所有104份被对比方法判定为阳性的样本均被该系统正确检出，阳性符合率为100%；而在555份阴性样本中，系统也正确识别出了551份，阴性符合率为99.3%。这进一步证明了该系统在检测RSV时的高度灵敏度和特异性。临床评估（等效性评估）在临床研究中，所有样本均使用cobas® 6800/8800系统上的候选检测方法进行了测试，随后随机选择的子集样本又在cobas® 5800系统上进行了测试。将每个系统的检测结果与相应的对照检测方法进行了评估，并直接比较了两种系统之间的阳性百分比一致率（PPA）和阴性百分比一致率（NPA）。两种仪器系统之间的结果是等效的。三个关键问题好，和之前一样，最后我用三个关键问题把这份审评报告的相关内容串联起来。第一个问题，cobas® Respiratory 4-flex在非临床性能评估中，具体的分析灵敏度是如何确定的？分析灵敏度（Limit of Detection, LoD）是通过分析一系列稀释的样本确定的，这些样本混合了培养的不同病毒（如RSV、流感A、流感B和灭活SARS-CoV-2），并在鼻咽基质中进行稀释。研究使用了至少五个浓度水平的样本，每个浓度水平进行多次测试，以确保结果的可靠性和重复性。测试在三个不同的试剂批次、多次运行、不同操作员和仪器上进行，以确保结果的广泛适用性。最终，确定每个病毒的LoD是其95%阳性结果的最高稀释浓度。第二个问题，在临床性能评估中，前瞻性样本和回顾性样本的测试方法和结果有何不同？前瞻性样本是在2023-2024年呼吸道病毒季节收集的新鲜和冷冻鼻咽拭子样本，这些样本在收集后直接进行测试，以评估cobas® Respiratory 4-flex的最新性能。回顾性样本则是在2014-2022年间收集的冷冻鼻咽拭子样本，这些样本在收集后保存一段时间，再进行测试以评估其在不同时间点的性能。前瞻性样本更能反映当前季节的病毒流行情况，而回顾性样本则提供了历史数据，有助于评估长期稳定性和可靠性。第三个问题，cobas® Respiratory 4-flex在处理高浓度样本时是否存在交叉污染的风险？根据注册资料中的交叉污染评估，cobas® Respiratory 4-flex在处理高浓度样本时的交叉污染率为0%。研究通过对480个阴性模拟临床基质样本和430个高浓度SARS-CoV-2样本进行测试，结果显示所有阴性样本均未出现阳性结果，表明设备在高浓度样本处理过程中能够有效避免交叉污染。声明：本微信注明来源的稿件均为转载，仅用于分享，不代表平台立场，如涉及版权等问题，请尽快联系我们，我们第一时间更正。

临床研究诊断试剂

2025-05-13

·生物探索

Nature | 告别“挨针”？鼻腔疫苗：呼吸道感染的终极防御新策略！

引言疫苗是我们对抗传染病的强大武器。从爱德华·詹纳（Edward Jenner）发现天花疫苗至今，疫苗家族不断壮大，拯救了无数生命。席卷全球的新冠疫情，更是让基于mRNA技术的注射型疫苗大放异彩，以前所未有的速度问世，并卓有成效地控制了由SARS-CoV-2引起的疾病的严重程度。然而，当我们为注射疫苗的成就欢呼时，也逐渐认识到它的局限性。这些“明星”疫苗虽然能有效诱导全身性免疫（systemic immunity），产生大量能在血液中中和病毒的血清IgG抗体，但这更多是防止病毒进入体内深处造成严重损害。对于像新冠病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒（RSV）这类主要通过呼吸道入侵的病原体，注射疫苗在它们入侵的“第一线战场”——呼吸道黏膜表面，防御能力却相对有限。这意味着，即使接种了注射疫苗，我们仍有可能被感染，并可能将病毒传播给他人。那么，有没有一种疫苗，能够直接武装我们的呼吸道黏膜，在病原体敲门之前，就在门口构筑起一道坚实的防线呢？这就是鼻腔疫苗（Nasal vaccines）！这项充满前景的策略，瞄准呼吸道感染的源头，旨在通过鼻内给药，不仅诱导全身免疫，更能激发强大的黏膜免疫（mucosal immunity），特别是分泌型IgA（secretory IgA, SIgA）。SIgA就像是驻守在呼吸道表面的“守卫”，能够直接阻断病原体入侵，从而有望从根本上减少感染，甚至阻止传播，同时减轻疾病严重程度。开发鼻腔疫苗并非易事，它需要我们深入理解鼻腔复杂的解剖、生理和免疫特性，甚至要考虑鼻腔与中枢神经系统（CNS）的潜在关联。这不仅是免疫学的挑战，更是微生物学、生物材料学、生物工程学和化学等多学科交叉融合的前沿领域。5月7日《Nature》“Nasal vaccines for respiratory infections”。第一道防线：身体的“空气过滤与预警系统”——呼吸道黏膜和NALT要理解鼻腔疫苗为何重要，首先要认识我们的呼吸道黏膜（respiratory mucosa）以及隐藏其中的特殊免疫组织。想想看，我们每天呼吸空气，空气中充斥着各种微生物、灰尘和异物。呼吸道黏膜就像是身体的第一道“空气过滤系统”。这层黏膜表面覆盖着纤毛上皮细胞（ciliated epithelial cells），这些细胞上的纤毛会不断摆动，将吸入的颗粒物向外推送，比如鼻腔中的纤毛会将东西推向咽喉，最终被吞咽或咳出。同时，黏膜上还有杯状细胞（goblet cells）分泌黏液（mucus），这些黏液能捕捉吸入的病原体和颗粒。纤毛的运动结合黏液的捕捉，构成了黏膜纤毛清除系统（mucociliary clearance），这是鼻腔物理屏障的重要组成部分，旨在最大限度地减少病原体进入身体。然而，这层物理屏障并不是密不透风的。病原体总有机会突破。此时，黏膜下的免疫系统就需要发挥作用了。在鼻腔和咽喉区域，存在一种被称为鼻咽相关淋巴组织（nasopharyngeal-associated lymphoid tissue, NALT）的关键免疫组织。这就像是部署在“前线”的“军事基地”。对于人类来说，NALT主要由不成对的鼻咽扁桃体（即腺样体）和成对的腭扁桃体（俗称扁桃体，它们共同构成了Waldeyer's环）组成。这些组织内部结构复杂，包含了启动和调节抗原特异性免疫反应所需的各种细胞，包括抗原提呈细胞（antigen-presenting cells, APCs）如树突状细胞（dendritic cells）和巨噬细胞，以及B细胞和T细胞。值得一提的是，人类的腺样体中观察到活跃的生发中心（germinal centre）形成，这是产生高亲和力抗体（包括IgA）的关键场所。病原体或疫苗抗原可以通过多种途径被NALT捕获。NALT的黏膜上皮层中存在一种特殊的微褶细胞（microfold cells, M cells），它们能捕获腔道内的抗原，并迅速将其转运到下方的APCs。此外，位于鼻腔黏膜的呼吸道上皮层也含有呼吸道M细胞，它们提供了另一个抗原摄取位点。更有意思的是，黏膜下的树突状细胞可以将树突伸入鼻腔腔道，直接捕获鼻内给药的抗原。被捕获的抗原随后被APCs处理，并将免疫原性肽段呈现在细胞表面，激活NALT内部的T细胞，包括辅助性T细胞（T helper cells, TH细胞，如TH1、TH2和滤泡辅助性T细胞TFH）和B细胞。在TH细胞（特别是TH2细胞）产生的细胞因子（如TGFβ1和IL-5）的诱导下，B细胞会发生IgA类别转换，分化成IgA+B细胞。这些NALT来源的IgA+B细胞具有独特的“归巢”特性。它们表达特定的趋化因子受体，比如CCR10，使得它们能够迁移到表达相应配体CCL28的黏膜效应位点，如鼻甲和腺体组织。这种有针对性的迁移构成了“共同黏膜免疫系统”（common mucosal immune system）的概念基础——在一个黏膜部位（如鼻腔）诱导的免疫反应，可以在其他远端黏膜部位（如肺部、肠道甚至生殖道）产生保护作用。一项研究就通过过继转移淋巴B细胞，证明了共同黏膜免疫系统的存在，这些细胞可以迁移到远端和不同的黏膜组织。迁移到鼻黏膜后，IgA+B细胞进一步分化为浆细胞（plasma cells），开始产生多聚体IgA（polymeric IgA）。多聚体IgA随后结合上皮细胞基底膜上的多聚体免疫球蛋白受体（polymeric immunoglobulin receptor, pIgR），形成复合物被转运穿过上皮细胞，最终以分泌型IgA（secretory IgA, SIgA）的形式释放到黏膜腔道中。SIgA是黏膜免疫的“明星分子”。它拥有多个抗原结合位点，能够像“网”一样捕捉病原体，并阻止它们附着于黏膜表面，从而从源头阻断感染。新冠疫情期间的研究再次强调了SIgA的重要性。一项研究发现，感染SARS-CoV-2的个体，其病毒脱落持续时间与分泌型IgA抗体反应延迟有关，这表明SIgA在阻止病毒脱落和传播中的关键作用。另一项研究则通过工程化改造SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合域（RBD）特异性的单克隆IgG抗体，使其转变为二聚体或分泌型IgA1抗体，结果发现工程化的二聚体和SIgA1抗体对包括Omicron BA.1、BA.2和BA.4/5在内的多种变异株表现出更高的中和活性。因此，开发能够有效诱导局部抗原特异性SIgA的鼻腔疫苗，以阻断病原体的初始入侵，是一个极具吸引力的策略。除了NALT，鼻腔黏膜的呼吸道上皮层也提供了抗原采样途径。一项研究发现，鼻甲骨内衬的单层上皮细胞含有呼吸道M细胞，这为鼻内给药的抗原提供了替代性的摄取点。此外，树突状细胞也能通过伸展树突直接捕获鼻内给药的抗原，并将抗原转运至局部淋巴结（如颈淋巴结），启动抗原特异性免疫反应。这些都使得鼻腔成为一个高效的抗原采样场所，有利于诱导黏膜抗原特异性免疫反应，使其成为疫苗递送的逻辑目标。为什么注射疫苗不够？鼻腔疫苗的独特优势对比注射疫苗和鼻腔疫苗，我们可以清晰地看到后者在应对呼吸道感染方面的独特优势。首先，从使用者体验上，鼻腔疫苗具有显著的实用优势。它们通常通过喷雾或滴剂给药，避免了注射带来的疼痛和焦虑，尤其对于儿童和害怕针头的人群来说，这极大地提高了疫苗接种的依从性。其次，许多鼻腔疫苗可以进行自我给药，这对于大规模疫苗接种，特别是在紧急情况下快速扩大覆盖范围，具有巨大潜力。想象一下，在流感季节或疫情爆发时，人们可以在家中便捷地进行疫苗接种。更重要的是，从免疫学角度看，鼻腔疫苗提供了注射疫苗难以比拟的全面保护。注射疫苗主要诱导全身性免疫（例如血清IgG），能够减轻疾病的严重程度，但往往难以在呼吸道黏膜表面产生足够的免疫反应。而鼻腔疫苗则不同，它不仅能诱导全身性免疫（产生血清IgG），更能有效启动局部黏膜免疫（产生分泌型IgA）。 SIgA像前文所述，能够直接在病原体入侵的“城墙”上布防，阻止它们进入身体。此外，鼻腔疫苗还能诱导CD4+和CD8+组织驻留记忆T细胞（T resident memory, TRM cells）在呼吸道组织中形成。肺部的TRM细胞能够提供长期免疫力，并在小鼠模型中被证明可以保护动物免受致死性病毒感染。令人振奋的是，呼吸道CD8+ TRM细胞甚至在没有病毒特异性抗体存在的情况下，也能减少病毒的感染和传播。这就像是驻守在“城墙”内部的“特种部队”，一旦敌人突破防线，它们能迅速响应，限制病毒的扩散。一项使用小鼠流感模型的研究就展示了鼻腔疫苗诱导交叉反应性免疫的潜力。研究发现，通过鼻腔而非全身免疫接种重组流感神经氨酸酶蛋白，可以诱导组织驻留的IgA产生细胞产生交叉反应性IgA抗体，从而提供针对异源和同源病毒感染的保护。这种交叉保护能力在病毒不断变异的今天显得尤为重要。真实世界的数据也支持鼻腔疫苗的有效性。美国食品药品监督管理局（FDA）目前批准的唯一一款鼻内疫苗是FluMist四价减毒活流感疫苗。一项2003年的人体临床试验显示，FluMist在预防三种不同亚型流感病毒感染方面，提供了比注射型三价灭活疫苗更广泛的保护。尽管FluMist目前仅被批准用于2至49岁健康个体，且不适用于免疫功能低下或孕妇，但其便捷性（无需处方，可在医疗机构外接种）已被证明。另一款鼻内减毒活流感疫苗（AstraZeneca，2018/19配方）在人体研究中也显示，能在黏膜和血液中分别诱导IgA和IgG反应。该研究还发现，鼻内免疫接种后8小时内出现黏膜IL-33相关TH2型免疫反应，7天后出现差异化的CD8+ T细胞和循环TFH细胞反应，这些反应被认为是鼻腔疫苗诱导保护的潜在相关性指标。总之，由于大多数呼吸道感染始于黏膜表面，能够同时诱导局部黏膜免疫和全身免疫的鼻腔疫苗，被认为是诱导针对感染的广泛保护的合理手段。挑战与机遇：如何让疫苗顺利穿过“鼻腔迷宫”？尽管前景光明，但开发成功的鼻腔疫苗并非易事。鼻腔独特的生理环境给疫苗递送带来了诸多挑战，就像是试图穿过一个充满障碍的“迷宫”。首先，鼻腔分泌物会迅速稀释疫苗抗原。其次，黏膜纤毛清除系统会不断将抗原向后推送并清除，这极大地限制了抗原在鼻腔停留的时间，可能影响抗原与免疫细胞的结合和 uptake（摄取）。此外，鼻腔分泌物中含有蛋白酶和氨肽酶，可能会降解疫苗抗原。同时，人类鼻腔给药液体的体积非常有限，大约只有200微升，这要求疫苗制剂必须高度浓缩且有效。这些物理和生理特性，都必须在鼻腔疫苗的设计中充分考虑。为了克服这些挑战，研究人员整合了免疫学与其他学科的知识和技术，创造出了一系列新颖的递送系统（delivery systems），包括复制型和非复制型疫苗载体。微小力量，巨大潜力：递送系统的创新疫苗递送系统是鼻腔疫苗成功的关键之一。它们就像是“快递小哥”，负责将疫苗抗原安全、高效地送达免疫细胞所在的“目的地”。复制型递送系统复制型递送系统使用能够进行有限复制的病毒或细菌作为载体，比如重组腺病毒、流感病毒、副流感病毒和疱疹病毒等。这些载体进入体内后会持续表达疫苗抗原，并在一定程度上模拟自然感染，从而诱导强烈的免疫反应，包括局部细胞毒性T细胞反应，且通常无需额外佐剂（adjuvant）。例如，一项在血清阴性健康成人中进行的I期临床试验显示，使用副流感病毒5型（PIV5）作为载体、编码RSV F蛋白的鼻腔疫苗（BLB201）是安全的，且免疫原性良好，诱导了鼻腔和血清RSV F特异性抗体反应以及抗原特异性CD4+和CD8+T细胞。此外，一些细菌载体如乳酸杆菌（Lactobacillus）、沙门氏菌（Salmonella）和李斯特菌（Listeria）也被用于研究。乳酸杆菌作为一种非致病且相对安全的载体，在针对鼠疫耶尔森氏菌、结核分枝杆菌和SARS-CoV-2的鼻腔疫苗研究中显示出潜力。非复制型和生物相容性递送系统为了解决复制型递送系统可能带来的安全问题（如病毒回变、潜在的复制风险等），研究人员也开发了非复制型病毒载体以及基于生物材料和纳米材料的非复制型递送系统。非复制型病毒载体通常是经过改造的病毒，虽然保留了感染细胞并表达抗原的能力，但不能在体内进行复制。腺病毒载体由于其固有的感染能力，可以快速表达疫苗抗原并刺激先天性和适应性免疫，被认为是一个有前景的疫苗平台。基于生物材料和纳米材料的递送系统则更加多样化，它们通常由天然或合成的高分子聚合物或其他化合物构成，可以通过控制粒径、表面性质等特性来优化抗原递送。这些纳米材料可以携带抗原，并赋予其在鼻腔特殊环境中更强的稳定性和靶向性。其中一个非常有前景的系统是阳离子胆固醇化普鲁兰多糖纳米凝胶（cationic cholesteryl group pullulan nanogel, cCHP）。最初的CHP纳米凝胶是由普鲁兰多糖（一种葡萄糖基多糖）和胆固醇基团组成的，可以形成直径约40纳米的球形疏水聚集体。蛋白质抗原很容易被包裹在纳米材料内部，并以折叠的天然活性形式释放出来，这种独特的特性被称为“人工伴侣活性”（artificial chaperone activity）。为了增强其与带负电的鼻腔上皮的结合效率，研究人员在CHP纳米凝胶中引入了阳离子氨基，从而创建了cCHP。cCHP纳米凝胶作为鼻腔疫苗递送系统显示出巨大潜力，目前已有多种针对呼吸道感染的cCHP基疫苗正在开发中。例如，肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）表面蛋白A（PspA）是一种非常有吸引力的疫苗抗原，因为它能诱导对不同血清型的交叉反应性免疫。针对所有肺炎链球菌血清型，研究人员开发了含有PspA的cCHP纳米凝胶（cCHP-PspA），并在小鼠和非人灵长类动物中进行了测试。在小鼠中，鼻内接种cCHP-PspA不仅诱导了鼻腔灌洗液和血清中特异性的SIgA和IgG抗体，还显著减少了鼻腔和肺部细菌数量，提供了针对致命性肺炎链球菌呼吸道攻击的保护。cCHP-PspA鼻腔疫苗在恒河猴中的测试也显示，能诱导高滴度的PspA特异性血清IgG和黏膜IgA抗体，并提供针对不同血清型肺炎链球菌气管内攻击的保护。这些临床前研究证实了cCHP-PspA鼻腔疫苗作为未来人体临床试验候选者的潜力。cCHP系统还被用于靶向非分型流感嗜血杆菌（nontypeable Haemophilus influenzae, NTHi），它是引起中耳炎、鼻窦炎和肺炎的常见病原体。由于P6蛋白在90%的NTHi菌株中保守，研究人员将其整合到cCHP纳米凝胶中（cCHP-P6）。小鼠研究显示，cCHP-P6能有效诱导鼻腔或中耳液中P6特异性IgA抗体，并抑制NTHi生物膜形成。这表明cCHP-P6纳米凝胶鼻腔疫苗有望预防NTHi引起的感染。cCHP递送策略也被应用于呼吸道病毒感染，例如RSV。RSV是导致儿童和老年人呼吸道感染的主要原因。一项研究使用RSV小疏水蛋白（SHe）的胞外域作为抗原，并将其与载体蛋白PspA连接（SHe-PspA），再用cCHP纳米凝胶制备疫苗（cCHP-[SHe-PspA]）。在小鼠和棉鼠（人类RSV感染的首选模型）中进行鼻内免疫接种，结果显示诱导了SHe特异性的黏膜IgA和血清IgG抗体。在棉鼠中，这些抗体有效控制了呼吸道黏膜和肺部的病毒感染。这项研究证明了cCHP也适用于亚单位鼻腔疫苗，可以对抗其他呼吸道病毒感染。一个显而易见的未来策略是开发二价cCHP-[SHe-PspA]鼻腔疫苗，同时诱导针对RSV和肺炎链球菌的免疫力。除了cCHP，脂质体（Liposomes）也是一种有前景的生物相容性递送载体。脂质体是由磷脂和胆固醇组成的脂质双层形成的小囊泡，能够包裹抗原。其两亲性（amphiphilic）性质使其能够包封多种抗原。脂质体的物理化学性质（如脂质组成、结构和大小）可以根据疫苗抗原的特性进行调整，以最大化免疫原性。由于用于制备脂质体的磷脂来源于食物（如蛋黄和大豆），这种递送系统被认为是相对安全的，除非对这些食物过敏。阳离子脂质体和经表面修饰（如粘膜粘附性聚合物）的脂质体被开发出来，以增强疫苗在鼻腔的粘附性和持久性。例如，使用钴卟啉-磷脂（CoPoP）脂质体鼻内递送重组流感血凝素三聚体，能有效诱导血凝素特异性免疫反应。CoPoP脂质体目前也正在进行COVID-19疫苗的临床试验。壳聚糖（Chitosan）是另一种适用于黏膜递送的良好生物材料，具有良好的生物降解性和低毒性。壳聚糖还具有黏膜粘附性，并能松开上皮细胞紧密连接，从而促进抗原摄取。这种递送系统在小鼠鼻内免疫接种后，能诱导平衡的抗原特异性TH1和TH2介导的抗体反应。然而，壳聚糖的溶解性差是其在实际应用中的一个潜在缺点，需要酸性条件下的溶解，随后可能发生水解。研究人员正在研究壳聚糖的化学修饰（如增加亲水性、连接配体靶向特定细胞）以提高其适用性。基于壳聚糖的鼻腔疫苗候选者，使用白喉抗原和诺如病毒样颗粒，被证明是耐受性好且具有免疫原性的，能够诱导抗原特异性IgG和IgA反应。SpyCage是一种能够自组装的60个亚单位的蛋白质支架，可以共价连接重组蛋白质抗原。一项概念验证研究显示，使用包被SARS-CoV-2刺突蛋白RBD的SpyCage，并与来自大肠杆菌热不稳定肠毒素的黏膜佐剂LTA1（一种缺乏颅神经毒性的变体）共同给药，在叙利亚仓鼠模型中显示出高免疫原性，并增强了鼻腔和肺部的病毒清除。这些创新性的递送系统是克服鼻腔生理障碍、实现疫苗抗原有效递送的关键，也为开发安全有效的鼻腔疫苗奠定了基础。后疫情时代的冲刺：新冠鼻腔疫苗正在路上当前的肌肉注射型COVID-19疫苗在预防后续感染或限制传播方面效果有限，再次凸显了靶向呼吸道免疫系统的重要性。毕竟，SARS-CoV-2的感染始于呼吸道。开发第二代COVID-19疫苗，直接作用于呼吸道，显得尤为必要。一项在血清阴性成人中进行的SARS-CoV-2鼻内疫苗人体挑战研究显示，与早期黏膜IgA和CD8+T细胞反应相关的免疫反应，与病毒载量控制密切相关。这进一步支持了鼻腔疫苗在减少感染和传播中的作用。基于病毒载体的鼻腔疫苗在临床前研究中显示出令人鼓舞的结果。将禽副粘病毒3型（APMV3）载体表达SARS-CoV-2 S蛋白的疫苗鼻内单次给药仓鼠，诱导了针对原始毒株以及Alpha和Beta变异株的S特异性IgG和IgA抗体，并具有中和活性。这些仓鼠没有出现肺部炎症或呼吸道病毒复制。类似地，使用减毒副流感病毒3型（B/HPIV3）表达预融合稳定SARS-CoV-2 S蛋白的疫苗（B/HPIV3/S-6P）在非人灵长类动物中进行了评估。结果显示诱导了S特异性气道黏膜IgA和IgG以及血清抗体，对Alpha、Beta和Delta变异株具有中和活性，但对Omicron亚系活性较低。攻击后，鼻内免疫的猕猴呼吸道和肺组织中检测不到病毒。另一项研究中使用活的、复制型嵌合B/HPIV3病毒载体表达预融合稳定S蛋白，鼻内单次免疫仓鼠，诱导了病毒特异性IgG和IgA，对SARS-CoV-2原始毒株、B.1.1.7和B.1.351变异株具有中和活性，攻击后仓鼠鼻腔和肺部检测不到病毒。牛津大学/阿斯利康的腺病毒载体COVID-19疫苗ChAdOx1 nCoV-19（即Covishield），虽然是批准用于注射的疫苗，但随后的研究探索了其鼻内给药的效果。先前研究显示，肌肉注射ChAdOx1 nCoV-19/AZD1222能保护恒河猴免受肺炎，但不能减少上呼吸道病毒脱落。然而，后续对猕猴和仓鼠进行的鼻内免疫显示，攻击后呼吸道病毒检测量减少。值得注意的是，基于ChAd鼻内疫苗不仅诱导广泛反应性IgG和IgA，还能诱导呼吸道中的病毒特异性记忆CD8+T细胞。一项在健康成人中进行的ChAdOx1 nCoV-19鼻内接种I期临床试验显示，作为单次加强接种，ChAdOx1 nCoV-19具有可接受的耐受性。然而，仅少数参与者观察到可检测的黏膜抗体，全身抗体反应微弱。这可能与用于该鼻腔疫苗的ChAdOx1载体来源于猿猴腺病毒血清型，对人呼吸道上皮细胞感染效率不高，导致SARS-CoV-2抗原表达水平较低有关。为了进一步探讨腺病毒载体COVID-19鼻腔疫苗的适用性，一项独立研究比较了复制缺陷型腺病毒和单周期复制型腺病毒载体疫苗表达SARS-CoV-2 S蛋白的效果。结果显示，单周期复制型制剂产生的S特异性抗体水平更高。单次鼻内或肌肉注射单周期复制型腺病毒疫苗，均能降低SARS-CoV-2病毒载量和肺损伤。不过，重复接种载体基疫苗是否会导致抗载体免疫反应，从而降低未来病毒载体的感染效率和疫苗抗原递送，仍有待确定。尽管如此，这些研究总体支持了病毒载体鼻腔疫苗用于抗SARS-CoV-2的可行性，显示出高免疫原性和保护性。然而，病毒载体鼻内递送在人体的安全性和免疫原性仍需进一步研究。另一项研究则进一步强调了鼻腔疫苗策略的重要性，开发了一种完全减毒的复制型SARS-CoV-2疫苗候选者SCPD9-AFCS作为鼻腔疫苗，并将其与注射型单价mRNA疫苗BNT162b2在预防SARS-CoV-2 B.1和Omicron BA.5变异株传播方面进行了比较。结果显示，SCPD9-AFCS在预防病毒传播方面优于注射型mRNA疫苗，进一步突出了鼻腔疫苗在这一方面的优势。考虑到许多人已经接种了注射型mRNA疫苗，一种“首程注射，后续鼻喷”（prime-and-spike, P&S）策略被提出，即在现有注射诱导的全身性保护性免疫基础上，通过鼻内加强接种预融合稳定（Hexapro）的三聚体重组SARS-CoV-2 S蛋白，以激发黏膜免疫。在实验性啮齿动物中，P&S策略诱导了强大的黏膜细胞和体液免疫反应，包括组织驻留记忆CD8+ T细胞以及IgA和IgG抗体。疫苗诱导的免疫力在接种后数月仍能保护小鼠免受病毒攻击，显示了疫苗的持久性。对免疫仓鼠的保护研究进一步证实了P&S策略的有效性，包括阻断病毒传播。一项非人灵长类动物研究进一步证实了用二价Ad26基SARS-CoV-2疫苗候选者进行气管内加强接种的有效性，能够诱导黏膜体液免疫反应（具中和活性）和细胞免疫，为应对SARS-CoV-2 BQ.1.1攻击提供了接近完全的保护。这项研究提示，保护性疗效与黏膜体液和细胞免疫反应相关，并支持开发能够阻断呼吸道病毒入侵呼吸道黏膜的黏膜疫苗的可行性。作为P&S策略广泛相关性和持久性的证据，一项在非人灵长类动物中进行的异源XBB.1.16攻击研究，比较了鼻内接种WA1-BA.5二价猿猴腺病毒载体疫苗加强针，或注射WA1和BA.5或XBB.1.16 S蛋白二价mRNA加强针五个月后的保护效果。鼻内接种诱导了持久的气道IgG和IgA反应，上呼吸道和下呼吸道病毒复制极少。相比之下，注射mRNA疫苗仅限于下呼吸道的全身性B细胞介导保护。这项研究进一步支持了鼻腔疫苗在预防SARS-CoV-2感染方面的广泛有效性。与鼻腔疫苗能够诱导强大黏膜免疫以预防SARS-CoV-2入侵和传播的预期一致，大量鼻腔疫苗候选者正在进行研究。根据世界卫生组织COVID-19疫苗追踪器的数据（截至2023年3月30日），有19种靶向呼吸道的疫苗候选者正在不同临床评估阶段，包括16种鼻内型、1种气溶胶型和2种吸入型。其中大多数是复制型或减毒病毒载体。例如，靶向SARS-CoV-2 S蛋白RBD的复制型流感病毒载体鼻腔疫苗，以及纽卡斯尔病病毒和腺病毒载体鼻腔疫苗（表达S蛋白）正在进行II/III期临床试验。非复制型载体疫苗包括PIV5基腺病毒载体疫苗（表达武汉原始株WA1的S蛋白），正在健康成人和年轻人中进行I期临床试验以评估安全性、反应原性和免疫原性。一款表达S蛋白的RSV载体减毒活疫苗MV-014-212也正在进行I期临床试验。此外，一款减毒活SARS-CoV-2鼻腔疫苗COVI-VAC也正在健康成人中进行临床研究。除了病毒载体疫苗，基于重组蛋白（亚单位）的鼻腔疫苗也在积极开发中。一项近期研究显示，鼻内接种SARS-CoV-2 RBD亚单位疫苗与马司托拉肽-7（mastoparan-7，一种激活肥大细胞的寡肽）佐剂结合，能优先诱导多功能中央记忆T细胞（TCM cells）。鼻内诱导的TCM细胞反应具有T细胞固有特性，并在转移到幼稚宿主后得以维持，在肺部抗原攻击时促进增强的记忆召回。与同种抗原和佐剂的注射疫苗相比，鼻腔疫苗诱导的抗体对多种变异株具有广泛的中和活性。因此，鼻腔疫苗在仓鼠攻击模型中提供了临床疾病保护和更少的肺部组织病理学。这项研究为鼻腔疫苗的有效性提供了支持性证据，并强调了T细胞免疫在抗体反应之外的关键重要性。虽然疫苗领域历来关注体液免疫（抗体）作为保护性免疫的信息参数，但SARS-CoV-2感染的经验再次强调了T细胞介导免疫对于诱导针对病原体的记忆和保护性免疫的关键重要性。T细胞免疫已被证明即使在没有中和抗体的情况下也能控制病毒感染。显然，T细胞的贡献是疫苗开发中需要评估的重要反应。许多国家也为COVID-19鼻内免疫做出了新贡献。古巴的CIGB-669，这是一款含有SARS-CoV-2 S蛋白RBD和乙肝病毒核衣壳抗原的重组蛋白亚单位候选疫苗，已进入临床试验阶段，评估其单独鼻内给药或与肌肉注射联合给药的安全性及免疫原性。另一个正在评估的COVID-19亚单位鼻腔疫苗候选者是ACM-001，它包含包裹在CPG佐剂中的SARS-CoV-2 S蛋白，并封装在通过人工细胞膜技术形成的自组装纳米尺度囊泡中。这些全球努力已取得初步成果，至少四个国家（中国、印度、伊朗和俄罗斯）已授予鼻腔疫苗紧急使用许可。中国批准了两种黏膜疫苗：一种是吸入型腺病毒载体疫苗（表达S蛋白），另一种是减毒活流感载体鼻腔喷雾疫苗（基于RBD）。印度批准了一款复制缺陷型猿猴腺病毒载体疫苗（编码预融合稳定S蛋白）作为成人鼻腔疫苗。伊朗批准了一款重组S蛋白基鼻腔疫苗，与水包油佐剂系统RAS-O结合，已被证明安全有效并能诱导保护性免疫。俄罗斯也据报道批准了一款异源重组腺病毒rAd26和rAd5联合疫苗的鼻腔使用。面向未来的探索：鼻腔mRNA疫苗的可能性鉴于mRNA疫苗在COVID-19大流行期间的巨大成功，在未来的大流行准备中，黏膜递送mRNA疫苗是值得考虑的方向。然而，mRNA在鼻腔分泌物的酶作用下易降解，并且难以穿过黏膜屏障被清除，这为其鼻内递送带来了挑战。创新的mRNA鼻腔递送系统正在开发中，旨在保护mRNA并促进其跨黏膜递送。一种基于阳离子聚乙烯亚胺-环糊精的鼻腔疫苗递送载体，通过其生物相容性，并能暂时打开紧密连接，促进mRNA跨鼻腔上皮递送。使用阳离子环糊精-聚乙烯亚胺2k偶联物与编码HIV gp120的阴离子mRNA复合，进行鼻腔mRNA疫苗接种的测试显示，诱导了强大的黏膜和全身性TH1、TH2和TH17免疫反应。类似策略也考虑了使用阳离子脂质体制剂进行鼻腔递送。整合了生物工程、黏膜免疫学和疫苗学的专业知识，正在研发新的递送载体，用于靶向呼吸道病原体的鼻腔免疫，尽管mRNA在鼻腔恶劣环境中维持稳定性存在障碍。例如，一种可吸入的、可生物降解的聚胺-聚酯共聚物复合物已被研究用于递送编码SARS-CoV-2 S蛋白的mRNA到肺部。鼻内给药这些复合物，导致mRNA在肺部（包括上皮细胞和APCs）中高效转染，从而在小鼠中诱导了细胞和体液保护性免疫，对抗致命病毒攻击。另一项研究评估了鼻腔mRNA封装脂质纳米颗粒（mRNA-LNP）疫苗对抗SARS-CoV-2在叙利亚黄金仓鼠中的免疫原性和保护性疗效。鼻腔mRNA-LNP疫苗诱导了S特异性中和IgG和IgA抗体，降低了呼吸道病毒载量，减轻了肺部病理，并预防了SARS-CoV-2攻击后的体重减轻。总而言之，基于鼻腔mRNA疫苗在人类中诱导保护性免疫的潜力，我们有理由保持乐观。鼻腔疫苗的未来之路正如该综述和其他研究所讨论的，越来越多的证据表明，鼻腔疫苗是安全的，能够预防病原体入侵，并在黏膜表面和全身性位点抑制严重疾病。目前获批上市和临床使用的鼻腔疫苗数量有限。如前所述，FluMist四价减毒活流感疫苗是目前美国FDA批准的唯一一款用于2至49岁健康个体的鼻腔疫苗。然而，即使通过降低病毒毒力制造出减毒疫苗，对于免疫系统尚未成熟的婴儿或存在免疫衰老的老年人，减毒活疫苗的鼻内给药可能引起不良反应，因此通常不被批准使用。鼻腔疫苗的安全性在其开发过程中必须得到充分考虑。例如，含有完整病原体的疫苗可能存在回变（reversion）风险。基于重组蛋白的亚单位疫苗似乎比活疫苗更安全，但纯化的重组蛋白（亚单位）抗原通常诱导的免疫反应较弱，通常需要与佐剂（免疫刺激剂）共同给药。目前注射疫苗中已使用多种佐剂（如铝盐、AS04、MF59、AS01B和CPG 1018），其他候选佐剂（如微生物衍生物、颗粒佐剂）也在临床试验中，这些候选佐剂可能被用于鼻腔亚单位疫苗制剂。鼻腔疫苗开发的一个主要顾虑是鼻腔与中枢神经系统（CNS）的接近性。鼻腔上方的筛板紧邻嗅球（olfactory bulb），嗅球由连接大脑的特殊神经元组成。通过鼻腔给药的抗原，可能通过上皮细胞或邻近嗅球运输到大脑，从而对神经功能产生不良影响。小鼠和大鼠常用于疫苗开发，其鼻腔表面近50%被嗅觉上皮覆盖。相比之下，人类鼻腔内衬主要由呼吸道上皮覆盖（约90%），嗅觉上皮仅占剩余的10%。尽管人类嗅觉上皮面积相对较小，但其与CNS的接近性仍需在开发安全的鼻腔疫苗时加以考虑。此外，鼻腔疫苗不应影响支持嗅觉神经元的嗅觉上皮中的支持细胞（sustentacular cells），因为研究显示这些细胞在病原体感染期间会吸引髓系细胞，导致嗅觉上皮炎症并产生促炎细胞因子。以一个历史风险为例，一种灭活鼻内流感疫苗与经过基因解毒的大肠杆菌热不稳定肠毒素突变体作为佐剂联合使用，曾被批准上市。然而，上市后监测发现该疫苗与面神经麻痹（Bell's palsy）病例相关，最终导致该疫苗停用。此外，含有AS03佐剂的灭活流感疫苗Pandemrix，在儿童、青少年和成人中增加了患发作性睡病（narcolepsy）的风险。霍乱毒素结构与热不稳定肠毒素相似，曾作为黏膜佐剂进行实验性研究。在小鼠模型中，鼻内给药天然霍乱毒素可以通过嗅球运输到中枢神经系统，并在中枢神经系统引起神经损伤。因此，在开发鼻腔疫苗的同时，必须验证疫苗抗原和/或佐剂不会通过嗅觉上皮运输到中枢神经系统。候选鼻腔疫苗在启动临床试验前，必须仔细评估其所有成分的安全性，确保对中枢神经系统无不良影响。总而言之，鼻腔疫苗开发需要考虑几个关键问题：努力开发安全稳定的mRNA和亚单位疫苗制剂及递送系统；基于感染前后的免疫组谱数据，明确对抗目标病原体所需的免疫类型（体液免疫、细胞免疫、组织驻留记忆和/或循环记忆，单独或组合）；创建最佳的鼻腔疫苗制剂和递送载体，以及适当佐剂的益处；确保整体鼻腔疫苗的安全性。尽管面临挑战，但鼻腔疫苗凭借其独特的优势——直接在前线构建免疫屏障，减少感染和传播，以及其便捷的给药方式——正日益成为应对呼吸道感染，特别是为未来大流行做准备的重要方向。随着科学研究的深入和技术的进步，我们有理由相信，未来的呼吸道感染防御，或许将不再仅仅依赖“挨针”，而更多地来自于我们鼻子里的这道希望之光。参考文献Kiyono H, Ernst PB. Nasal vaccines for respiratory infections. Nature. 2025 May;641(8062):321-330. doi: 10.1038/s41586-025-08910-6. Epub 2025 May 7. PMID: 40335714.声明：本文仅用于分享，不代表平台立场，如涉及版权等问题，请尽快联系我们，我们第一时间更正，谢谢！往期热文：Cell | RNA剪接因子的'叛变'：从致癌突变到免疫新疗法，颠覆白血病治疗视野Nature Methods | 从生命快照到实时电影：4D组学如何彻底颠覆我们对生物过程的认知？Nature | 从NGG到任意PAM：揭秘AI驱动的Cas9变体设计Cell | 意想不到！细胞力学成细菌“同伙”？揭秘牵引力如何引导入侵热点Nature | 脑海里的“寒风”真的会冷！新研究揭示：大脑如何通过情境记忆调控全身代谢Nature Medicine | 刷新认知！体内巨细胞病毒，竟是抗癌“隐形队友”？揭秘CMV与免疫疗法生存奇迹！

疫苗信使RNA

2025-02-03

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流感佐剂疫苗的研究进展

关注小药说药，一起成长！前言流感是一种由甲型和乙型流感病毒引起的急性高度传染性呼吸道疾病。每年流感流行都是由几种不同的季节性流感病毒（即A/H1N1, A/H3N2, B/Yamagata, and B/Victoria）引起的。流感给人类的健康带来了沉重负担：世界卫生组织（WHO）估计，每年流感导致全球300万至500万例严重疾病，其中29万至65万人死亡。目前，各种疫苗和抗病毒药物被用于预防和治疗流感。然而，目前的流感疫苗对感染的有效性可能并不理想。其中一个原因是，目前的季节性流感疫苗是在下一个流感季节开始前几个月生产的，因此，疫苗株的抗原性可能与下一个季节流行的优势株的抗原性不完全匹配。此外，老年人通常表现出较低的免疫反应和疫苗对感染的有效性。流感疫苗的免疫原性可以通过添加佐剂来提高。理想的佐剂可以提高疫苗的效力，并具有很好的安全性。最近，一种含有水包油佐剂MF59的流感疫苗FLUAD在美国和其他国家获得了65岁及以上人群的许可。新佐剂流感疫苗可能代表了未来应对流感大流行的未来方向。目前已获批的流感疫苗目前，有三种获得批准的季节性流感疫苗可供人类使用：灭活疫苗、减毒活疫苗和重组血凝素疫苗。这些疫苗由三种或四种不同类型的流感病毒组成，世界卫生组织每年对其进行更新，以反映最新的流行毒株。目前的流感疫苗通常是三价或四价的，含有两种甲型流感毒株（即A/H1N1和A/H3N2）和一种或两种预计在下一个季节传播的乙型流感病毒。已经开发出各种类型的流感疫苗，批准的疫苗如下表所示。灭活疫苗流感灭活疫苗有三种：全病毒颗粒疫苗、裂解病毒疫苗和亚单位疫苗。20世纪40年代开发的灭活全病毒颗粒疫苗由缺乏传染性但保持病毒颗粒形状的病毒颗粒组成，包括病毒基因组RNA和所有病毒结构蛋白。灭活的全病毒颗粒疫苗可有效诱导体液和细胞免疫反应。全病毒颗粒灭活疫苗保留了进入靶细胞的能力但不增殖，然而由于病毒颗粒的脂质成分，人们担心其热原性和不良反应。因此，这种疫苗被裂解病毒疫苗取代，裂解病毒疫苗是通过用乙醚或洗涤剂处理纯化的病毒以去除病毒包膜制备的。亚单位疫苗主要包括HA和神经氨酸酶蛋白。裂解和亚单位疫苗可诱导先前感染过流感病毒的人产生免疫力；然而，它们不能在从未感染过的婴儿中诱导足够的免疫力。这是因为裂解疫苗失去了大部分病毒单链RNA，并且由于缺乏对先天免疫受体的信号传导而降低了免疫原性。减毒活疫苗减毒流感活疫苗（LAIV）是基于低温下在胚胎鸡蛋中连续传代产生的冷适应、温度敏感和减毒变体。例如，FluMist®是一种减毒流感活疫苗，用于2至49岁的健康人群。病毒具有来自循环病毒的表面糖蛋白，而其内部基因来自冷适应的主供体病毒。因此，在鼻内接种这些疫苗后，它们的复制仅限于上呼吸道，那里的温度低于正常体温。与自然感染类似，减毒活疫苗在上呼吸道诱导粘膜IgA反应和交叉反应性T细胞反应。病毒复制过程中产生的双链病毒RNA被内体先天免疫受体TLR3和视黄酸诱导基因（RIG-I）识别，导致干扰素介导的抗病毒反应和促炎细胞因子反应的诱导。重组HA疫苗重组HA疫苗含有通过使用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中产生的纯化HA。Flublok®四价疫苗是一种重组流感疫苗，分别于2017年和2020年在美国和欧盟批准用于18岁及以上人群。自2020-2021年流感季节以来，该疫苗已在美国和欧盟某些国家上市。接种Flublok®疫苗的人患流感的概率比接种普通灭活流感疫苗的人低30%，这很可能是因为重组HA疫苗含有三倍量的HA蛋白。在Flublok®生产过程中，不需要种子病毒和鸡胚，因此重组疫苗的生产速度比基于鸡胚或细胞的疫苗更快。有效性流感病毒由于抗原漂移而不断变化，很难预测下一季流行的病毒。如果疫苗株和流行株的抗原性不匹配，则流感疫苗对感染的有效性降低。世界卫生组织通过考虑世界各地的流行情况来选择疫苗株；然而，在一些情况下，抗原性不匹配，导致疫苗对感染的有效性不理想。高剂量疫苗（如Fluzone高剂量）和含佐剂的疫苗（如FLUAD®）已被开发为更有效的疫苗。这些疫苗显示出良好前景，具有比传统疫苗更高的保护率。用于流感疫苗的佐剂提高疫苗抗感染效力的最有效策略之一是添加佐剂。就流感疫苗而言，佐剂可有效增强免疫原性，并减少保护所需的病毒抗原量和所需的疫苗接种次数。此外，佐剂可以扩大对抗原变体的反应性，并有效对抗疫苗株和循环病毒之间的抗原错配。许多佐剂已被批准用于流感疫苗，包括铝佐剂、MF59、AS03、AF03和病毒体。铝佐剂铝佐剂，包括氢氧化铝、磷酸铝和硫酸铝钾，是最常见的佐剂，自20世纪30年代以来一直用于疫苗。在含有铝佐剂的百白破疫苗被成功证明能在人类中引发保护性免疫后，人们也开发了一种与铝佐剂联合的流感疫苗；然而，它没有表现出足够的免疫反应。直到MF59的开发，流感疫苗佐剂的研究才取得重大进展。 MF59 MF59由角鲨烯水包油乳液组成，用两种表面活性剂（聚山梨醇酯80和山梨醇三油酸酯）乳化。MF59诱导Th1和Th2型免疫反应以及一些特定细胞因子/趋化因子的释放，如IFN-γ、CCL2、CCL3、IL-8和IL-5。MF59被用于季节性流感疫苗FLUAD，甚至在老年人中也能增强免疫反应。FLUAD于1997年在意大利首次获得批准，随后于2015年在美国和欧洲获得批准，用于65岁及以上人群。此外，FLUAD四价流感疫苗也已被批准用于该老年人群，并在美国2020-2021年季节上市。与未添加佐剂的疫苗相比，MF59佐剂季节性流感疫苗在老年人和儿童中引发更强的免疫反应。 AS03 AS03是一种由角鲨烯、DL-α-生育酚和聚山梨醇酯80组成的佐剂，用作甲型H1N1 pdm09和H5N1禽流感病毒的疫苗。AS03触发短暂的NF-κB依赖性先天免疫反应，导致在注射部位和引流淋巴结产生细胞因子和趋化因子，包括CCL2、CCL3、IL-6、CSF3和CXCL1，从而诱导免疫细胞迁移。AS03佐剂A（H1N1）pdm09疫苗在老年人中比非佐剂疫苗诱导更高的抗体反应。 AF03 AF03是一种水包油佐剂，用于甲型H1N1流感病毒裂解疫苗Humenza，但从未上市。尽管AF03已被报道在动物模型中增强体液和细胞免疫反应，但其机制仍在很大程度上不清楚。病毒体病毒体表面有流感抗原，模仿病毒，可以被认为是一种病毒样颗粒（VLP）。通过模仿病毒，病毒体可以将抗原带入抗原呈递细胞，并在淋巴系统中运输。Inflexal® V是一种三价病毒体疫苗，含有来自世界卫生组织推荐的疫苗株的HA和NA。1997年在瑞士获得批准后，它被引入了世界各地，但现在已经不复存在。它在健康和免疫功能受损的老年人、成年人和儿童中诱导强烈的免疫反应，类似于自然病毒感染。与佐剂疫苗相关的不良反应流感疫苗需要足够有效；然而，也必须考虑副作用。在大流行性H1N1流感疫苗中提出了关于水包油佐剂AS03的安全性问题。报告了该疫苗的局部和全身不良反应，尽管影响并不严重。在一些国家，AS03佐剂疫苗与儿童发作性睡病发病率增加有关。然而，最近的研究表明，发作性睡病的诱因可能是大流行性H1N1流感病毒的病毒蛋白，而不是佐剂AS03。1型嗜睡症是由下丘脑视网膜神经元的自身免疫破坏引起的。由于下视蛋白和病毒抗原肽之间的分子模拟，识别下视蛋白肽的局部CD4+T细胞反应可能受到流感病毒抗原的刺激，导致靶向下视蛋白神经元的交叉反应性自身免疫反应。 MF59和铝佐剂在H5N1禽流感病毒重组裂解疫苗中的抗体反应已在临床试验中进行了评估。与铝佐剂相比，MF59增加了对病毒的中和抗体反应。未观察到疫苗接种引起的严重不良反应。铝佐剂组和MF59佐剂组之间的全身反应（如发烧、不适和头痛）没有差异。流感疫苗佐剂的新进展皂苷尽管铝佐剂在疫苗中使用已有很长时间，但这种佐剂诱导体液免疫，而不是细胞免疫。基于皂苷的佐剂已存在于兽医用疫苗中，可诱导体液和细胞免疫。Quil A及其衍生物QS-21已被评估用于人类流感疫苗佐剂，但使用这些佐剂的疫苗与不使用的疫苗在诱导免疫方面没有明显的优势。 2013年H7N9禽流感病毒出现后，来自Novavax的研究人员宣布，他们的H7N9疫苗临床试验成功。他们在H7N9 VLP疫苗中添加了基于皂苷的ISCOMATRIX佐剂，尽管H7病毒被认为具有较低的免疫原性，但添加皂素佐剂比铝佐剂或无佐剂诱导的免疫原率更高。 Matrix M是另一种基于皂苷的佐剂，已在1期临床试验中作为病毒体H5N1流感疫苗的佐剂进行了评估。用于季节性流感的Matrix M佐剂四价纳米颗粒疫苗也在3期随机对照试验中进行了评估。与获得许可的四价灭活流感疫苗相比，该疫苗在65岁以上的老年人中引发了更高的体液和细胞免疫。与单独的疫苗相比，Matrix M仅需要更少的抗原来诱导免疫反应。 TLR激动剂 Poly I:C是一种合成的TLR3激动剂，具有类似dsRNA的结构。Poly I:C12U已被测试用于鼻流感疫苗的佐剂，据报道显示出高粘膜免疫原性。此外，Rintatolimod与季节性流感疫苗联合使用可诱导针对其他亚型流感的交叉反应性IgA。PIKA也是一种稳定的dsRNA，在动物研究中，通过皮下注射和鼻内免疫，已被证明在H1、H3和H5亚型流感病毒的疫苗中作为佐剂是有效的。吡喃葡萄糖基脂质A（GLA）是TLR4配体，也被应用于为佐剂。在2期研究中评估了GLA佐剂H5N1流感病毒疫苗与铝佐剂疫苗的HI抗体滴度，结果显示：用GLA佐剂免疫的人群比用铝佐剂免疫的人群具有更高的HI抗体滴度，并且需要更少的抗原。鞭毛蛋白是细菌鞭毛的主要成分，也是TLR5配体，已被检测应用于佐剂。在1/2期试验中，由大肠杆菌表达的融合鼠伤寒沙门氏菌2型鞭毛蛋白（STF2）和H1HA球形结构域的重组蛋白在健康成年人和老年人中诱导了高HI抗体滴度。在过去的十年里，许多研究都集中在通用流感疫苗的开发上，重点是开发针对流感病毒蛋白保守区的疫苗策略。对诱导异源毒株交叉保护的通用流感佐剂疫苗也在研究中。在最近的一份报告中，TLR7激动剂DSP-0546LP显示在小鼠中诱导Th1偏向性免疫，如IFN-γ和IgG2c抗体的产生，并增强对其它H1N1和H3N2亚型病毒的交叉保护。机制主要来源于ADCC作用，而不是交叉中和抗体。ADCC诱导的交叉保护免疫不仅由TLR7诱导，还可以由TLR9诱导。因此，TLR激动剂作为佐剂有望诱导高反应原性和交叉免疫反应。小结随着我们对先天免疫发展的不断深入理解，各种新佐剂正在被开发作为流感疫苗的佐剂。佐剂有助于提高疫苗对感染的有效性。不仅增强免疫反应，而且扩大了对抗原变体的反应范围。因此，佐剂疫苗似乎更适合对抗经常发生抗原漂移的流感病毒。佐剂的添加还可以节省诱导足够免疫力所需的抗原的剂量，这将允许在流感大流行期间快速分发疫苗。因此，对佐剂的进一步研究将使我们更深入地了解其功能，并有助于开发更安全、更具免疫原性的佐剂流感疫苗。参考文献： 1. Advances in Adjuvanted Influenza Vaccines. Vaccines (Basel).2023 Aug 21;11(8):1391. 公众号内回复“肿瘤免疫”或扫描下方图片中的二维码免费下载《小药说药肿瘤免疫全集》的PDF格式电子书！公众号已建立“小药说药专业交流群”微信行业交流群以及读者交流群，扫描下方小编二维码加入，入行业群请主动告知姓名、工作单位和职务。

疫苗

100 项与 Influenza virus vaccine live intranasal (quadrivalent)(MedImmune LLC) 相关的药物交易

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外链

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-	-	J07BB03	-

研发状态

批准上市

10 条最早获批的记录,

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适应症	国家/地区	公司	日期
流感病毒感染	欧盟	AstraZeneca AB	2013-12-04
流感病毒感染	冰岛	AstraZeneca AB	2013-12-04
流感病毒感染	列支敦士登	AstraZeneca AB	2013-12-04
流感病毒感染	挪威	AstraZeneca AB	2013-12-04
甲型流感病毒感染	美国	MedImmune LLC	2003-06-17
乙型流感病毒感染	美国	MedImmune LLC	2003-06-17

未上市

10 条进展最快的记录,

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适应症	最高研发状态	国家/地区	公司	日期
流感样症状	临床3期	日本	AstraZeneca PLC	2014-10-01
慢性病	临床3期	美国	MedImmune LLC	2009-08-01
水痘	临床3期	-	MedImmune LLC	2000-12-01
麻疹	临床3期	-	MedImmune LLC	2000-12-01
腮腺炎	临床3期	-	MedImmune LLC	2000-12-01
风疹	临床3期	-	MedImmune LLC	2000-12-01
HIV感染	临床2期	美国	MedImmune LLC	2013-07-01

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临床结果

适应症

分期

评价

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研究	分期	人群特征	评价人数	分组	结果	评价	发布日期


ASCO2019	N/A	-	540	Flu vaccination (Patients on ICI)	遞餘餘獵蓋網艱獵餘膚(糧積壓鹽廠淵觸憲觸觸) = 窪餘築醖繭膚夢積廠醖鑰觸蓋製淵糧醖築獵遞 (廠鏇鏇築膚襯窪網艱獵 )	-	2019-05-26
				Flu vaccination (Patients on non-ICI modalities)	遞餘餘獵蓋網艱獵餘膚(糧積壓鹽廠淵觸憲觸觸) = 醖鹽餘艱構餘顧網夢廠鑰觸蓋製淵糧醖築獵遞 (廠鏇鏇築膚襯窪網艱獵 )
NCT03028974 (CTgov)	临床4期	流感病毒感染	77	FluMist® (Group A: 2-4 yo LAIV4 (Return))	廠衊顧築鬱齋鬱築壓鬱 = 築鏇範夢鑰鬱願膚顧構鹹鹽醖願鬱齋鹹鹽鹽範 (鹹繭積襯糧範齋艱齋壓, 憲糧鏇廠製鬱壓齋糧遞 ~ 鹽蓋餘餘鬱襯築築願願) 更多	-	2018-12-14
				Fluzone® (Group E: 6 - 23 Mos Old IIV4 (Single Yr))	積淵衊鬱鑰襯鏇製鏇鏇 = 網簾獵繭淵襯鏇窪簾齋艱網鹹觸築願齋網構顧 (窪糧鬱製顧選繭醖廠齋, 遞醖構簾獵壓憲鹹顧顧 ~ 醖鹹選簾蓋衊壓艱範齋) 更多
NCT03143101 (FluMist, CTgov)	临床4期	流感病毒感染	200	FluMist trivalent (FluMist Trivalent (2015-2016))	範選觸鹹構構壓鏇餘繭 = 顧鹹鹽淵選鏇壓壓繭淵願顧積遞壓網壓糧廠襯 (衊鹽製蓋壓壓範範窪齋, 壓壓膚齋選醖觸構襯鬱 ~ 憲艱簾衊壓構壓簾壓選) 更多	-	2018-12-11
				FluMist Quadrivalent (FluMist Quadrivalent (2015-2016))	範選觸鹹構構壓鏇餘繭 = 鏇範遞獵襯觸積製鹽餘願顧積遞壓網壓糧廠襯 (衊鹽製蓋壓壓範範窪齋, 廠鹽範廠築膚簾淵襯醖 ~ 膚衊觸艱餘醖觸顧鬱範) 更多
NCT02474901 (QLAIV, CTgov)	临床2期	HIV感染 \| 流感病毒感染	101	Quadrivalent Live Attenuated Influenza Vaccine (QLAIV, HIV-infected)	夢積鹹繭網獵觸積簾鬱 = 鹹鬱積憲構顧襯廠淵網鹽鑰淵願獵構糧觸鏇鏇 (糧觸鹹夢廠壓襯艱繭顧, 觸顧憲積簾網鹹淵鬱獵 ~ 積衊獵觸積壓鏇積憲鑰) 更多	-	2017-10-16
				Quadrivalent Live Attenuated Influenza Vaccine (QLAIV, HIV-uninfected)	夢積鹹繭網獵觸積簾鬱 = 簾簾壓繭範壓醖蓋鑰繭鹽鑰淵願獵構糧觸鏇鏇 (糧觸鹹夢廠壓襯艱繭顧, 淵壓積積廠簾鹽製製獵 ~ 網衊願遞築鹽膚鹹遞積) 更多
NCT01933048 (SNIF, CTgov)	临床4期	流感病毒感染	1,077	FluMist (Healthcare Worker Administration)	夢膚憲顧艱淵範壓築網(鹽鹽製範簾夢鹽憲壓鹹) = 鹽簾築廠鏇鹽醖艱夢膚鏇繭觸獵顧獵簾遞簾遞 (鬱廠夢鑰憲衊艱蓋壓齋, 餘鏇窪遞範夢膚艱蓋築 ~ 網鹹鏇窪餘窪簾選鹽構) 更多	-	2017-09-12
				FluMist (Self-Administration)	夢膚憲顧艱淵範壓築網(鹽鹽製範簾夢鹽憲壓鹹) = 醖製築範製衊窪獵窪獵鏇繭觸獵顧獵簾遞簾遞 (鬱廠夢鑰憲衊艱蓋壓齋, 夢窪夢窪鏇廠鏇鏇製壓 ~ 築淵夢範夢簾築鑰鑰簾) 更多
NCT03028987 (CTgov)	临床4期	流感病毒感染	10	FluMist® (LAIV Randomized)	膚遞衊淵簾鬱願襯糧蓋 = 顧餘鏇齋齋醖網鬱獵衊醖齋壓遞簾衊壓選築顧 (鬱製鑰糧壓觸製築獵糧, 觸鹹選醖齋壓網廠製膚 ~ 選窪衊選獵衊願糧餘襯) 更多	-	2017-09-12
				Fluzone® (IIV4 Randomized)	膚遞衊淵簾鬱願襯糧蓋 = 蓋鹹鬱觸簾築鑰繭範獵醖齋壓遞簾衊壓選築顧 (鬱製鑰糧壓觸製築獵糧, 鹽遞窪鏇淵顧築艱網壓 ~ 選襯簾衊鬱構憲夢淵製) 更多
NCT02141581 (CTgov)	临床4期	流感病毒感染	86	Fluzone	衊選蓋窪遞襯範鹽築憲 = 憲齋廠鑰鏇鑰夢積簾鬱構鏇鏇窪醖鹹築夢鏇憲 (窪顧繭齋壓鏇構糧蓋齋, 構選鏇鑰積願鹹顧廠築 ~ 構觸觸壓遞鬱築憲築獵) 更多	-	2017-05-11
NCT03023709 (CTgov)	临床4期	流感病毒感染	3	Fluzone® (Pilot Phase)	廠鏇鬱醖網繭選鹽憲憲 = 窪積醖鹽製鹹壓鑰積齋鬱廠觸鹹餘鏇繭窪觸網 (艱網遞顧艱鑰蓋製醖鏇, 艱糧壓鏇獵鹹淵襯鹹顧 ~ 壓夢齋淵願構艱構簾餘)	-	2017-05-10
				FluMist® (Study Phase)	廠鏇鬱醖網繭選鹽憲憲 = 齋餘遞積鏇齋積壓簾夢鬱廠觸鹹餘鏇繭窪觸網 (艱網遞顧艱鑰蓋製醖鏇, 網夢餘築鹽衊獵襯遞憲 ~ 簾壓醖鹽醖衊艱築膚淵)
NCT02133781 (CTgov)	临床4期	流感病毒感染	51	Fluzone+FluMist (Age 8-17 Years (Identical Twins ))	蓋選觸廠衊觸艱艱淵願 = 鑰網糧夢鏇觸選構選壓願網遞憲憲構範願餘餘 (積餘鹽願淵獵醖餘廠築, 衊艱淵製觸憲簾鑰蓋夢 ~ 築簾繭簾觸廠範築衊觸) 更多	-	2017-03-10
				Fluzone (Age 18-30 Years (Non-twins))	蓋選觸廠衊觸艱艱淵願 = 鑰糧艱衊廠齋衊鏇鏇壓願網遞憲憲構範願餘餘 (積餘鹽願淵獵醖餘廠築, 鏇膚範齋鏇積蓋遞壓齋 ~ 餘齋選夢積餘鹹鹽憲積) 更多
NCT03023683 (CTgov)	临床4期	流感病毒感染	18	FluMist® (Group A: 2-8 yo Healthy Non-twins)	網淵積鹽齋鹽範糧觸淵 = 鹹築鏇壓顧鹹選憲網窪艱簾糧鑰壓夢觸願夢選 (鑰願艱膚廠顧壓遞選製, 網醖艱繭構觸蓋選範襯 ~ 顧製顧觸觸鹽選構簾鏇) 更多	-	2017-03-09
				FluMist® (Group B: 18-49 yo Healthy Non-twins)	網淵積鹽齋鹽範糧觸淵 = 淵製餘網蓋選餘憲鏇壓艱簾糧鑰壓夢觸願夢選 (鑰願艱膚廠顧壓遞選製, 夢選繭繭廠範窪製網淵 ~ 餘鑰糧積壓顧壓襯醖構) 更多