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基因疗法、眼科基因治疗、基因编辑、AAV工艺质控，点击图片查询议程，合作热线：王晨 180 1628 87692月4日，国家药监局药品审评中心（CDE）突破性治疗申请公示信息显示，强生的AAV5-hRKp.RPGR眼内注射溶液拟纳入突破性疗法，该药是基于腺相关病毒载体（AVV）的基因治疗药物，适用于治疗确诊为RPGR致病性变异相关X连锁型视网膜色素变性的患者。在眼科AVV基因疗法的黄金赛道上，国内已有超20家企业在布局，其中不少在研新药已经进入临床试验阶段，将为遗传性眼病的治疗带来新希望。眼科基因疗法临床需求较大AAV5-hRKp.RPGR眼内注射溶液旨在将RPGR基因的功能拷贝递送至视网膜下空间，改善和维持视觉功能。2020年，AAV5-hRKp.RPGR眼内注射溶液Ⅰ/Ⅱ期试验6个月数据公布：中期数据显示，低剂量和中等剂量的耐受性良好，并表明视力有显著改善。资料显示，2019年，强生与MeiraGTx签署合作开发遗传性眼病基因疗法，包括AAV5-hRKp.RPGR眼内注射溶液及另两款治疗全色盲的基因治疗药物。2023年底，MeiraGTx宣布，强生以高达4.15亿美元收购了该药的研发权益。MeiraGTx将获得1.3亿美元的预付款和近期里程碑付款、该药在美国和欧盟首次商业销售，以及制造技术转让后获得的高达2.85亿美元额外资金。2017年12月，全球首个眼科基因疗法Luxturna在美国获批上市，掀起了眼科基因疗法的热潮。相对其他器官而言，眼睛体积较小，只需要低剂量的药物就可以达到治疗效果，而且具有免疫豁免、系统风险低等优势，成为各方药企率先布局的一大领域。目前眼科基因治疗的适应症主要是与单个基因突变相关的遗传性视网膜疾病，包括视网膜色素变性、无脉络膜症、Leber遗传性视神经病变（LHON）、Leber先天性黑蒙（LCA）、Stargardt病、色盲症（ACHM）、X连锁视网膜劈裂症（XLRS）和年龄相关性黄斑变性（AMD）等。因这些疾病严重影响患者的独立生活和日常活动能力，临床医疗需求大。遗传性眼病的很多基因突变已经被精准识别，为基因疗法的开发提供了众多靶点选择，针对眼部的基因治疗研究一直处于前沿。眼科AVV基因治疗是AAV基因治疗的黄金赛道，占据AAV基因治疗临床试验四分之一。腺相关病毒由于其较低的免疫原性和位点特异性整合能力，被认为具有较好的安全性，是最有潜力的基因传递系统之一，这也使得AVV基因治疗领域的发展势头日益强劲。国内众多创新药企杀入赛道在眼科AVV基因治疗上，国内已有纽福斯生物、朗信生物、嘉因生物、天泽云泰、康弘药业、中因科技、辉大基因、安龙生物、金唯科、本导基因、九天生物、方拓生物、鼎新基因、凌意生物、极目生物、星眸生物、目镜生物、纽伦捷生物、领诺医药、埃微路新、南京贝思奥、瑞风生物、因诺惟康等众多创新药企积极布局，其中不少在研药物已经进入临床试验。纽福斯生物是中国首家专注于眼科疾病的基因治疗公司。2021年3月，纽福斯生物研发的中国首个临床阶段的眼科体内AAV基因治疗药物NR082（研发代码NFS-01）获国家药监局批准开展药物注册临床试验，用于ND4线粒体基因突变引起的Leber遗传性视神经病变。NR082是国内首个获得临床试验许可的眼科体内AAV基因治疗药物，并已于2020年9月获得美国FDA孤儿药认定，并于2022年获批在美国开展临床试验。2022年7月，该药又被国家药监局纳入突破性治疗品种，上市进入“快车道”。2023年2月22日，纽福斯生物宣布，NR082用于治疗ND4突变引起的Leber遗传性视神经病变Ⅲ期临床试验在中国完成全部患者入组给药。除了该药外，纽福斯生物还有针对视神经损伤、血管性视网膜病变等多种眼科疾病的十余个在研项目。2022年1月，朗信生物旗下公司朗昇生物提交的LX101注射液临床试验获国家药监局受理，用于治疗先天性黑蒙症，是国内首个递交该适应症临床试验的基因疗法，并于2022年4月19日获批临床试验。LX101是朗信生物自主研发的一款以rAAV为载体的基因疗法，在此前的研究者发起的临床研究中，LX101表现出良好的安全性，且已在多位患者中见到视力提高的疗效。2022年4月19日，朗昇生物又宣布，LX101的临床试验申请获CDE批准，用于治疗RPE65双等位基因突变相关的遗传性视网膜变性患者。2023年1月19日，嘉因生物宣布，美国食品药品监督管理局（FDA）已批准其新型基因疗法EXG102-031注射液的新药临床试验申请，用于治疗湿性年龄相关的黄斑变性。同年3月，该药的上述适应症在国内的临床试验申请获国家药监局受理。EXG102-031注射液只需要一针注射，就可在体内长期表达并有效治疗视网膜中异常血管形成和血液渗漏。中因科技的ZVS101e注射液是其与北京大学第三医院合作研发的基因替代治疗药物，也是国内外首个进入临床阶段的BCD（特殊类型的视网膜色素变性）基因治疗药物。该药物将适用于所有携带CYP4V2基因突变的BCD患者。2021年5月，该药针对BCD疾病适应症的临床试验启动，是全球首个针对BCD疾病展开临床试验的基因治疗。ZVS101e治疗BCD的Ⅰ/Ⅱ期注册性多中心临床研究，已经于2023年2月20日完成了首例患者入组。九天生物的眼科AAV基因治疗药物SKG0106眼内注射溶液的临床试验申请也于2023年10月获国家药监局批准，用于治疗新生血管性年龄相关性黄斑变性。SKG0106已于2023年6月获FDA批准开展治疗新生血管性年龄相关性黄斑变性全球Ⅰ/Ⅱa期临床试验，项目的全球临床试验已经启动。除了上述企业外，其他企业新药的研发也在不断推进，近年来越来越多的眼科基因疗法获批临床试验。于患者而言，基因治疗将为眼科疾病的治疗带来新希望。朗信生物朗信生物成立于2020年，是一家致力于基因治疗创新药研发制造及商业化的初创企业。公司核心团队有来自全球知名大学及实验室的科学家、专业人士、及全球顶尖生物医药公司高级管理人员。与国内知名医院的临床医学科学家密切合作，公司目前关注遗传性疾病的基因治疗领域，已有多个管线产品研发及工业化技术开发基础。2021年起，公司已有超过5000平米场地投入运营，在上海浦东张江设立了研发和临床研究中心；位于苏州生物医药产业园的中试和生产基地已建成国际领先的无血清悬浮培养工艺生产平台。朗信生物以眼部疾病产品作为基因治疗突破点，构建安全、精准的基因替代和基因编辑技术，实现基因治疗的临床应用，已建立多系统疾病基因治疗的研发团队和平台生产技术。并与国内外知名医院的临床医学科学家密切合作，提升创新能级，以更高效率开发基因治疗产品，最终应用于临床。目前用于遗传性视网膜变性及年龄相关性黄斑变性的产品已经进入到了临床阶段。此外公司涉及的基因治疗的眼科候选产品有：VEGF、PROM1、CRX、RS1、GNAT1、GsdmdC细胞焦亡等。LX101注射液是朗信生物自主研发的一款以rAAV为载体的基因疗法。产品通过对RPE65基因编码序列优化设计，高效表达人源RPE65蛋白，补偿因该基因突变导致的蛋白功能缺失，眼内给药后可有效治疗RPE65双等位基因突变相关的遗传性视网膜变性（IRD）患者。在此前进行的研究者发起的临床研究中，LX101表现出良好的安全性，且已在多位患者中见到视力提高的疗效。LX101为国内第一个获得临床试验批件的遗传性视网膜变性基因治疗产品。中因科技北京中因科技有限公司是一家专业从事遗传性眼病临床基因诊断和基因治疗药物研发的国家高新技术企业，是国内率先进行眼科基因治疗药物研发的企业。公司建立的遗传性眼病临床基因诊断平台以及基因治疗药物研发平台，致力于为遗传性眼病患者提供精准基因检测和基因治疗的全程“一站式”服务，并且通过持之以恒的努力，致力于成为国际眼科基因治疗药物的领先企业。公司创始团队从事遗传性眼病基因研究20余年，建立从靶标筛选、基础研究、动物实验、干细胞验证和AAV病毒生产完整的基因治疗药物开发体系。公司同时具有基因替代治疗和基因编辑治疗两个平台，基于中国遗传性视网膜变性的常见致病基因和突变热点，结合基因的发病机制，分别开发基因替代治疗或基因编辑治疗药物，目前正在开展的基因替代治疗项目2项，基因编辑治疗项目4项，其中两项动物实验已经完成，开展小样本临床试验。中因科技研发管线ZVS101e 注射液是中因科技自主研发的CYP4V2基因替代治疗药物，含表达人CYP4V2蛋白的重组AAV血清型8（rAAV8）载体（rAAV8-hCYP4V2）。ZVS101e所含治疗载体对视网膜细胞有特殊嗜性，注射入患者视网膜下腔后，可高效感染视网膜的RPE细胞，并在RPE细胞中特异性表达CYP4V2蛋白，弥补由于基因突变导致的蛋白功能缺失，从而对BCD患者的视网膜功能恢复起到有效治疗作用。该替代治疗药物将适用于所有携带CYP4V2基因突变的BCD患者。结晶样视网膜变性（BCD）是一种遗传性视网膜退行性疾病，典型改变为黄白色闪光结晶样物质沉积于视网膜，伴有视网膜色素上皮细胞和脉络膜毛细血管层萎缩，CYP4V2已被鉴定为BCD的致病基因。绝大多数BCD患者20～40岁发病，双眼受累，早期可能无症状，随着疾病进展，出现视力下降、视野缩小、夜盲症和色觉障碍等症状，患者通常在50～60岁时由于严重的视力下降和视野缩小成为法定盲人。基于临床特征和基因检测鉴定CYP4V2中的双等位基因致病变异，BCD可被确诊，然而仍缺乏有效的临床治疗手段。（基因替代治疗）ZVS203e注射液是由北京中因科技有限公司自主研发的，用于治疗视网膜色素变性（RP）的基因编辑治疗产品。设计基因编辑治疗药物ZVS203e主要是将RHO基因中的突变位点修复，使其恢复表达正常的RHO基因产物，进而恢复视网膜细胞正常功能，最终达到恢复患者视力的目的。目前此项目正处于临床前研发阶段，结果显示良好的安全性及显著有效性。纽福斯纽福斯成立于2016年，是李斌教授团队于华中科技大学同济医学院附属同济医院自2008年起十几年来对眼科基因治疗技术探索和积累的成果。作为一名眼科医生和视网膜疾病专家，李教授带领团队成功完成了从实验室到临床应用的转化研究，通过一系列国内和国际多中心临床试验证实了腺相关病毒 （AAV） 载体技术在眼科基因治疗的应用价值。公司首个候选药物NFS-01旨在治疗莱伯氏遗传性视神经病变 (LHON) 。该疾病是一种可导致严重视力损伤的退行性疾病，迄今为止尚无有效的治疗方法。2011年，团队应用该候选药物开始了全球首个LHON基因治疗探索性临床研究，参与临床试验的9例患者已持续随访8年，至今无严重不良反应且其中5例患者视力显著提高。此结果为全球基因治疗最长随访记录，发表于 《自然》 子刊、 《柳叶刀》 子刊及眼科领域顶级杂志 《眼科学》 , 充分证明了基因治疗技术临床应用的长期安全性与有效性。在首项研究取得可喜成果后，李教授团队于2017-2018年间进行了一项更为全面的临床研究，研究入组受试者达159例 （其中包括来自阿根廷的10例），这也是目前全球整个基因治疗领域样本量最大的临床试验。同样，十二个月随访结果显示NFS-01疗效显著，且未发现严重不良反应。NR082于2020年9月获得美国FDA孤儿药资格认定，于2021年3月成为国内首个获得1/2/3期无缝临床试验许可的眼科体内基因治疗药物，已在今年6月完成首例患者入组给药。NFS-01的作用原理2011年，团队应用候选药物NFS-01开始了全球首个LHON基因治疗探索性临床研究，参与临床试验的9例患者已持续随访8年，至今无严重不良反应且其中5例患者视力显著提高。NFS-01以重组腺相关病毒(rAAV)作为载体，将正常的ND4基因递送至患者受损的视神经节细胞，修复线粒体生物呼吸链，使视神经节细胞恢复活力与视功能，从而治疗G11778A (ND4) 位点突变所引起的LHON疾病。纽福斯研发管线Leber遗传性视神经病变（LHON）：该疾病是一种母系遗传的线粒体疾病，多发于14-21岁的青年男性，患者表现为双目视力受损至失明。这一疾病由德国眼科医生 Theodor Leber于1871年首先发现，目前全球患者约60万人，其中中国10万人。LHON是线粒体DNA突变所导致的疾病，位于线粒体基因组上的第11778、第14484和第3460位点为该病的3个原发位点，90％以上的LHON病人中能够发现G11778A (ND4基因）、G3460A（ND1基因)、T14484C（ND6基因） 三个位点突变中的一个，尤以G11778A最多，占50％～80％。由于该突变使线粒体生物呼吸链受损，造成ATP缺乏，使患者视神经节细胞产生氧化应激，导致细胞凋亡。目前临床上尚无针对Leber遗传性视神经病变的有效疗法或治愈手段。纽福斯目前正在开发两款针对LHON的候选药物 - NFS-01（NR082, rAAV-ND4) 和 NFS-02（rAAV-ND1), 分别治疗G11778A (ND4) 位点突变和G3460A(ND1) 位点突变所引起的LHON疾病。作用机制为采用基因治疗策略，以重组腺相关病毒作为载体，将正确的基因通过玻璃体腔注射递送至患者受损的视神经节细胞，修复线粒体生物呼吸链，使视神经节细胞恢复活力与视功能。公司核心产品NR082眼用注射液，以病毒作为载体，将正确的基因递送至受损的视神经节细胞，提高甚至恢复患者的视力。目前，该药物已被美国FDA和欧洲药品管理局授予“孤儿药”（用于预防、治疗、诊断罕见病的药品）称号，是首个获得中美两国许可的中国基因治疗新药。目前在中国已经完成一期、二期临床试验，正在开展三期。在美国，正在进行一期、二期临床试验的准备工作。康弘药业康弘药业在ASGCT2022年会上公布了公司研发的眼科基因治疗产品AAV-KH902的临床前数据。AAV-KH902在临床前研究中显示出较好的数据。角膜新生血管(CoNV)已被确定为角膜移植排斥反应的主要危险因素之一，康弘药业的AAV-anti-VEGF(AAV-KH902)目的在于提高高风险角膜移植大鼠模型的角膜移植存活率。数据显示：与对照组(N=6)相比，AAV-KH902治疗组(N=6)的角膜新生血管（CoNV）、角膜移植物混浊、移植物厚度显著降低。治疗后2个月，AAV-KH902治疗组移植存活率较PBS注射组显著提高33.3%。此外，两组眼压（IOP）均在正常范围内。在基质内注射2周后，角膜内发现微量CD11b+细胞，表明AAV-KH902的治疗没有引起IOP异常和炎症。2022年5月6日，国家药品监督管理局药品审评中心受理康弘药业提交的KH631临床试验申请。KH631眼用注射液是通过腺相关病毒（AAV）递送目标基因用于治疗新生血管性（湿性）年龄相关性黄斑变性（nAMD）的，是具有自主知识产权的1类生物新药。目前康弘药业拥有眼科基因工程药物KH902和KH906，康柏西普（项目名：KH902，商品名：朗沐）2013 年 12 月获得CFDA批准上市，2014年4月上市销售，至2016年已销售破8亿。安龙生物北京安龙生物医药有限公司，简称安龙生物，专注于生命科学领域对新药研发的突破性进展，包括基因治疗，基因编辑，DNA及RNA等其它遗传物质做为新药研发的方向，获得泰格医药等投资机构6000万资金支持。安龙生物产品在病毒、DNA基因治疗的稳定性和携带性上均表现出较强优势，基于AAV对组织的特异性侵染、AAV载体对眼科疾病的基因治疗等代表性研究成果已发表在Nature Microbiology, Plos ONE等国际期刊，在研项目包括老年黄斑变性(AMD)基因药物和针对血友病A型的基因治疗项目。老年相关湿性黄斑病变（wet-AMD）已成为继青光眼、白内障之后全球第三大致盲因素，全球患病人数不断攀升，而目前针对wet-AMD的治疗，主要是抗血管内皮细胞生长因子（VEGF）疗法。虽然已经有成熟的疗法上市，但是抗VEGF疗法仍有自身局限，长期频繁的玻璃体内注射，让患者体验不佳，严重降低了患者依从性，也增加疾病进展的风险。安龙生物的AnLong001是一种AAV基因治疗模式，采用了目前最先进的脉络膜上腔注射方式。AAV载体使得AnLong001以视网膜为生物反应器，持续稳定表达抗VEGF分子，在患者中最大限度地减少症状的发生，而脉络膜上腔注射也能够显著降低炎症等副作用发生率。目前，AnLong001已进入毒理实验阶段。从当前进展来看，该款产品能够抑制视网膜变性、损害以及新生血管形成，同时，在动物实验中未见明显的病理改变。九天生物九天生物是一家创新基因及细胞治疗公司，致力于研究、开发和生产具有突破性的基因和细胞疗法。九天生物成立于2019年，自主研发建立了完整的腺相关病毒(AAV)基因治疗技术平台，拥有先进的衣壳发现和病毒载体构建技术、分析和工艺开发实力、以及全球领先的临床级AAV载体大规模GMP生产能力。九天生物（Skyline Therapeutics）近日宣布其在研的AAV眼科基因治疗药物SKG0106眼内注射溶液的临床试验申请（IND）获国家药监局批准，开展治疗新生血管性年龄相关性黄斑变性（nAMD）的新药临床试验。SKG0106已于今年6月获美国FDA批准开展治疗新生血管性年龄相关性黄斑变性（nAMD）全球I/IIa期临床试验，项目的全球临床试验已经启动。SKG0106眼内注射溶液是一款创新眼科基因治疗药物，由新型重组腺相关病毒（rAAV）衣壳携带编码独特设计的抗血管內皮生长因子（VEGF）蛋白的转基因序列，通过单次玻璃体腔注射，在眼内高效转导视网膜细胞后持续表达具有抗新生血管生长功能的蛋白，从而抑制眼内新生血管增生、阻断血管渗漏和视网膜水肿，有效治疗nAMD，实现长久获益。目镜生物上海目镜生物医药科技有限公司是一家专注于基因工程化定向进化技术开发新型AAV外壳用于眼科疾病基因治疗技术和产品研发的创新公司。目镜公司致力于探索、研发基因治疗新技术、新疗法。通过Shuffling-insertion Mediated AI Retargeting Technology（SMART）AAV衣壳筛选平台，为寻找更优的用于治疗包括视网膜、耳、血液、肺、肝脏、胰脏、肌肉以及大脑等脏器的遗传性或慢性疾病AAV基因治疗载体奠定了基础。依托该平台，团队陆续发现了一批器官特异靶向、渗透性好、免疫原性低的候选AAV衣壳，未来将会有更多的新衣壳实现成果转化。星眸生物合肥星眸生物科技有限公司成立于2019年8月，位于安徽省合肥市高新区，是中国科大先研院孵化的创新企业，是一家基于前沿基因编辑技术开发、专注基因疗法领域的生物技术公司。星眸生物深耕眼科基因治疗多年，科研成果卓著。创始人团队为生命科学相关领域的资深研究员、教授、博士，拥有多年深耕眼科、基因编辑、基因治疗的研发和管理经验，相关研究工作荣登 Nature、Cell、Science Advances、Nature Communications 等顶级学术期刊。星眸生物聚焦基于AAV载体的眼科基因治疗药物研发，同时精进TRED (Targeted-RecA Enhanced homologyDirected repair，基于CRISCR/Cas9/MS2-RecA 的创新型基因编辑方法）和BE（Base Editing,碱基编辑）基因编辑技术用以布局公司中长期发展规划。 核心技术平台包括：AAV 双/多抗平台、AAV 病毒衣壳筛选技术平台、基因编辑技术平台--TRED技术和 BE技术。星眸生物基因治疗I类创新药“XMVA09注射液”是首个兼具实现双特异性靶点与玻璃体腔内注射衣壳的基因治疗药物，适应症为湿性年龄相关性黄斑变性（wAMD），已实现体内体外药效显著优于美国头部产品RGX-314。目前XMVA09的新药临床试验(IND)申请已获得国家药品监督管理局(NMPA)批准，下阶段将正式开展I/II期临床研究。辉大基因辉大生物科技有限公司成立于2018年，致力于通过创新的CRISPR基因编辑技术研发单基因罕见疾病和威胁人类健康的慢性病的基因替代和基因编辑等基因治疗药物。目前辉大基因拥有三大研发平台：基因编辑平台、递送载体平台、动物模型平台。辉大基因研发管线HG-004通过递送正确的RPE65基因，治疗由于RPE65基因突变导致的先天性黑蒙2型疾病（LCA2）。HG004是由辉大团队自主研发的基因治疗药物，使用重组腺相关病毒AAV9型载体递送正常RPE65基因到视网膜，从而恢复、治疗及预防成人及儿童的RPE65突变相关Leber先天性黑矇。HG004是国内自主研发的首个同时获得美国FDA授予的孤儿药及儿科罕见病药物双认证的AAV眼科基因疗法药物，该药物的使用同一临床主方案的国际多中心临床研究申请已获中国及美国IND批准。鼎新基因鼎新生物从AAV病毒设计的底层进行了最精细化的改造，打造rAAV文库高通量筛选迭代技术平台，提高组织嗜性、转染效率、表达持续性和安全性。该AAV病毒载体平台能够持续输送工程化改造的血清型，满足不同候选分子精准递送要求，并能免疫逃逸实现再次给药要求。鼎新基因一直将治疗场景设立于耳科和眼科领域，聚焦的眼科耳科适应症是治疗靶点成熟的眼科慢性病和先天性耳聋。公司AAV基因治疗以眼科及耳科作为切入口，建立了成型的AAV基因治疗研发和技术体系，已基本完成了第一个眼科慢性病、第一个先天性耳聋研发管线的临床前候选分子确认，进入了国内相关产品研发的头部阵列，正在扩展新型AAV的临床转化并扩大治疗领域。2023年11月18日(美国东部时间)，上海鼎新基因科技有限公司(下称“鼎新基因”)与复旦大学附属眼耳鼻喉科医院舒易来、李华伟课题组合作研发的RRG-OTOF双载体AAV被美国食品和药品监督管理局（FDA）授予治疗OTOF介导的听力损失（OTOF-mediated hearing loss）的罕见儿科疾病认定（RPDD）。RRG-OTOF是一种基于腺相关病毒 (AAV) 双载体的基因疗法，通过将编码otoferlin的基因传递到耳蜗的内毛细胞来治疗OTOF介导听力损失患者。耳蜗内一次性给药 RRG-OTOF，AAV双载体进入到相同的细胞可长期持续表达完整的功能性otoferlin蛋白，以使听觉功能恢复。凌意生物凌意生物成立于2021年2月，是全球领先的单基因遗传病创新药物开发公司。公司拥有国际一流的基因疗法发现、研究开发及产业化团队，致力于FIC基因治疗管线的研发和产业化。公司致力于源头创新，聚焦代谢、中枢神经系统、眼科等临床急需的疾病领域，从遗传病动物模型等关键技术入手，以最高的质量标准为患者提供一次性解决方案。凌意生物LY-M001注射液是中国首个自主研发，针对I型或III型戈谢病的AAV基因治疗药物。该产品使用重组腺相关病毒rAAV为载体，通过单次静脉输注给药后即可表达患者所需的葡萄糖脑苷脂酶。凌意生物开发了拥有完全自主知识产权的改良型葡萄糖脑苷脂酶基因治疗载体，可在体内长期稳定表达并降解有害糖脂代谢物，从而达到长期治疗戈谢病的目标。由浙江大学医学院附属第一医院黄河院长牵头发起的IIT临床研究项目也已正式启动，目前已完成两例受试者给药。初步的IIT数据显示：LY-M001在有效性和安全性方面均有良好表现，无任何不良事件发生。瑞风生物瑞风生物是中国头部的基因编辑药物创新企业，以基因编辑技术为核心驱动，致力于革新性药物的诞生。瑞风生物是国际上早期应用基因编辑探索遗传疾病治疗的高水平团队，并持续在血液科、眼科等疾病方向积累了开创性成果，在包括基因编辑工具创新、成药策略发现、新型动物模型构建、多层次药效和安全性评估等层面具备了高水平的技术积累，拥有体内和体外两大创新药物方向。瑞风生物的使命是基于革新性的基因技术，为严重疾病患者提供可及性和治愈性药物。目前在遗传病、复杂疾病和肿瘤领域等皆有管线布局，其中β-地中海贫血基因编辑疗法已经取得全球先进水平的临床进展。RM-001是瑞风生物自主研发的β-地中海贫血基因编辑药物。利用CRISPR基因编辑技术改造患者自体造血干细胞，激活人体内天然胎儿血红蛋白（HbF）合成，使红细胞恢复正常生理功能并摆脱输血，达到单次给药根治β-地贫的目的。RM-001采取直接靶向γ-珠蛋白基因（HBG1/2）启动子的编辑策略，不会影响造血干细胞及其分化功能细胞其它功能基因的表达，更加安全。RM-001是瑞风生物的先导管线产品，基于靶向HBG基因的更具安全性的编辑策略开发而成。该款产品于2022年11月获得国家药品监督管理局（NMPA）批准在中国开展注册临床研究。这是国内首款获得临床试验许可治疗地贫的新靶点基因编辑药物。RM-001细胞注射液I期临床研究是一项多中心、开放标签临床研究，旨在评估一次给药、单剂量的RM-001在β-地贫患者中的安全性和有效性，入组了12例年龄6岁-35岁受试者，涵盖了儿童、青少年和成人患者。金唯科金唯科是一家致力于眼科疾病、神经肌肉疾病、遗传代谢疾病等的AAV基因治疗新药研发公司。金唯科研发管线2020年4月金唯科开始运营3000平米的AAV新药研发平台，包括GMP级AAV制备车间、质粒制备车间、质量研究平台和成药研发平台，实现了从AAV药物设计、成药性研究、中试生产到质量研究的完善AAV基因治疗技术链。公司自主研发了可放大的、成本可控的AAV规模化制备及层析纯化工艺，在研的多条关于眼科和全身给药的产品管线均得到了良好的推进。其中，治疗湿性老年性黄斑变性(wAMD)的JWK001和治疗X连锁青少年视网膜劈裂症(XLRS)的JWK002作为龙头管线，进展最快，将先后申报IND。nAMD是一种严重影响视力甚至会导致失明的不可逆眼科疾病，是世界范围内不可逆失明和视力损害的主要原因之一。目前nAMD已成为继青光眼、白内障之后全球第三大致盲因素，全球患病人数不断攀升，我国也有数百万的患者等待治疗。该病的发病机理为患者视网膜黄斑区形成异常新生血管，同时可能引起视网膜水肿、出血、渗出和瘢痕形成等不良症状，进而严重影响患者视力。目前nAMD治疗的一线药物是抗血管内皮细胞生长因子（VEGF）的生物制剂，但现有的抗VEGF疗法需要长期且频繁地进行眼内玻璃体腔注射，多次注射不仅耗时耗力还会增加眼内炎症等不良反应的风险。JWK001注射液是金唯科自研的首个采用“两质粒包装系统”的AAV基因治疗新药，通过其自主研发的特色技术大幅提升AAV包装效率并降低生产成本。该产品通过视网膜下给药将抗VEGF蛋白表达框的AAV递送至眼部细胞中，持续高效表达抗VEGF蛋白的同时避免反复玻璃体腔注射对眼组织的伤害、患者依从性差等治疗风险，同时其特色的多靶点基因表达框也提升了药物疗效。这些优势共同使得该产品可实现一次治疗，终身有效的目的。因诺惟康北京因诺惟康医药科技有限公司（Innovec Biotherapeutics）是一家从事基因治疗技术和产品研发的公司。因诺惟康目前有诸多基因治疗的产品管线储备，大部分集中于眼科和神经科领域，公司生物医药技术包括新型病毒载体的设计和开发、基因编辑药物开发，临床级病毒载体的生产和应用，研究遗传疾病的自然发生过程、特征及突变基因，建立遗传疾病相关的动物模型。公司主要项目处于临床前的研究阶段。南京贝思奥南京贝思奥生物科技有限公司成立于2020年，公司致力于研发基于重组病毒载体和非病毒载体的基因治疗药物。主要通过基因重组治疗眼科疾病、神经系统疾病、恶性肿瘤、罕见病等疾病。埃微路新成都埃微路新生物技术有限公司成立于2020年5月，主要的目的是采用定向进化技术来改造AAV以提高其在临床试验中对不同组织器官的转导效率，并能够避免在运送基因的过程中被人体中和抗体中和。因此这将是一个具有巨大商业潜力的基因治疗载体平台，依据主要采用的技术命名为AAVolution（AAV+evolution），即AAV载体的定向进化。与此同时，结合研发团队自身的背景和现在AAV的市场应用，将主要关注的基因治疗靶向的疾病前期设定为心脏和视网膜相关疾病。领诺医药领诺医药位于上海张江药谷，IN-2004（AAV基因治疗，眼科）/LIN-2004（AAV基因治疗，半乳糖脑苷脂酶 Galactocerebrosidase /GALC)）为领诺医药的两款正在开发中的候选产品。IN-2004（AAV基因治疗）/LIN-2004（AAV基因治疗）为两款正在开发中的候选产品。领诺医药眼病基因治疗产品纽伦捷生物纽伦捷生物于2021年12月在园区成立，是一家旨在利用其具有自主知识产权的细胞转分化技术、遗传替代技术开发新型基因治疗药物的生物科技公司。纽伦捷生物由多位神经生物学家、眼科专家、基因治疗专家和生物制药行业的资深人士共同创立，致力于将新兴的细胞转分化技术转化为针对未被满足临床需求的解决方案。目前，围绕细胞转分化技术，纽伦捷生物已搭建了包括转分化因子筛选、病毒及非病毒载体设计、体内外药效学方法开发等关键技术的新型基因治疗药物研发平台，并已经申请了多项关键专利。纽伦捷生物产品管线聚焦于神经系统疾病，重点面向致盲性眼病以及难以治疗的神经系统肿瘤开发具有自主知识产权的原创基因治疗药物。天泽云泰上海天泽云泰生物医药有限公司，2020年3月注册成立于中国上海，致力于将前沿的基因及细胞治疗技术，转化为临床可及的治疗方法，以期望造福更多患者。公司拥有一支由业内顶尖的学术专家和经验丰富的研发人员组成的团队，覆盖了药物开发从概念到上市的每一环节；拥有具有自主知识产权的一系列核心技术平台，包括ViVec® AAV载体筛选平台、ViLNP® 脂质纳米粒技术平台、ViCas® CRISPR基因编辑技术平台和ViHiYi® AAV高产技术平台，专注于开发创新的细胞和基因疗法，为中国乃至全世界患有遗传性疾病、神经退行性疾病、肿瘤的病人提供解决方案。天泽云泰致力于将前沿的基因及细胞治疗技术，转化为治疗代谢及血液病、中枢神经系统疾病、眼科及视网膜疾病、肿瘤等的创新疗法。（管线截图来自于官网）目前进入临床的是针对血友病B和结晶样视网膜色素病变治疗的两款创新产品：VGB-R04注射液通过静脉注射实现肝脏特异性FIX基因替代和酶分泌，纠正血液FIX活性达到生理水平，治疗血友病B。VGB-R04在静脉注射后，通过AAV衣壳蛋白介导的肝脏细胞转导，将表达盒递送至细胞核。VGB-R04表达盒以游离DNA的形式存在，在肝脏细胞中表达凝血因子Ⅸ高活性天然变体（hFIX Padua）蛋白。肝脏表达并分泌入血的hFIX Padua蛋白替代缺失的先天性凝血因子IX发挥作用，从而纠正血友病B患者的凝血障碍，以期采用基因替代疗法从根本治愈该单基因遗传病，达到一次给药、长期有效的目的。FIX-Padua 是一种天然存在的具有高度活性的 FIX 变体 (R338L)，其活性约为普通野生型FIX 的8 倍，意味着可以在更低的表达水平完成正常凝血功能，这样就降低了病毒载体的给药剂量，提高了病毒载体给药的安全性和药效。血友病B为凝血因子IX基因缺陷导致的X连锁隐形遗传性出血性疾病，以身体负重关节、软组织及粘膜等身体部位损伤后过量出血或自发性出血为其典型临床特征。绝大部分患者为男性，男性发病率为1/25,000。目前主要的治疗方法为注射血浆或凝血因子等替代疗法，无法根治。（VGB-R04作用机制图示）VGR-R01眼用注射液是针对CYP4V2基因突变导致的BCD患者的基因治疗产品。CYP4V2蛋白为P450酶家族成员，在视网膜色素上皮细胞（RPE）中高度表达，具有脂肪酸羟化酶活性，与脂肪代谢相关。VGR-R01的作用原理是一种基因替代疗法。VGR-R01通过视网膜下腔注射给药后，AAV衣壳蛋白介导RPE细胞的转导，将VGR-R01基因表达盒递送至细胞核。VGR-R01表达盒以游离DNA的形式存在，在RPE细胞表达CYP4V2蛋白，以重建细胞的脂肪酸羟化酶活性。VGR-R01通过纠正患者视网膜内的脂肪酸代谢障碍，以期达到预防或改善RPE细胞、感光细胞及脉络膜的结构和/或功能损伤，并实现纠正视力损伤、保护残存视功能、或延缓视力恶化的临床效果。结晶样视网膜变性 (BCD)又称Bietti结晶样视网膜病变，是一种常染色体隐性遗传的进展性视网膜变性疾病。BCD致病基因是位于4q35的CYP4V2，编码一种与脂肪代谢相关的蛋白酶。在世界范围内BCD均有分布，但在中国、日本和韩国人群中更为普遍。大多数BCD患者于20-40岁发病，出现夜盲和视力下降等症状，在50-60岁发展为法定盲人。基于临床特征和基因检测鉴定CYP4V2中的双等位基因致病变异，BCD可被确诊，然而仍缺乏有效的临床治疗手段。（VGR-R01作用机制图示）极目生物极目生物是一家总部位于中国、专注于眼科创新疗法的生物技术公司，拥有覆盖从早期发现阶段到商业化阶段的一系列突破性眼科治疗技术产品组合。公司的愿景是，通过在中国、亚洲乃至全球提供创新疗法，解决眼科疾病领域未满足的临床需求，惠及广大眼科患者群体。极目生物在生命科学领域专业投资方的支持下创立，并由一支拥有丰富的全球眼科产品研发和商业化经验的行业精英团队管理。极目生物用于治疗青光眼的基因疗法ARVN601正在临床前开发中，ARVN601是基于microRNA (微小核糖核酸)的神经保护基因治疗。自2010年世界青光眼协会共识会议召开以来，视神经保护作为一种预防和推迟青光眼视神经退化性改变的非降眼压相关的疗法，已被认为是青光眼治疗的重要潜在策略。然而，目前尚无任何视神经保护疗法获批专门用于青光眼的临床治疗。2021年，极目生物与香港大学签署合作备忘录，与香港大学眼科学系系主任及临床教授梁啟信教授（Prof. Christopher Leung）展开研究合作，共同发现和开发针对青光眼的新型神经保护疗法（ARVN601）。此次项目有三个主要研究目标 ：①调节线粒体活性作为应对青光眼的神经保护策略；②开发基于microRNA (微小核糖核酸)的基因疗法以促进视神经再生；③研究细胞代谢重程序设计对于视网膜神经节细胞（RGC, Retinal Ganglion Cell）的保护和再生的作用。这一开创性合作，标志着全球青光眼新型疗法的研发进入了新的篇章。青光眼，是由于视神经病变导致的一种不可逆的神经退行性疾病，其典型的病理表现为视网膜神经节细胞进行性丢失，在全球不可逆性致盲性眼病中发病率占首位。据估计，2020年全球约有7600万青光眼患者，预计2040年将超过1亿，中国是青光眼患者最多的国家，2020年我国青光眼患病人数达到2100万，致盲人数可达567万。而随着老龄化进程的加快，我国青光眼的患病率逐年增加。极目生物早期科学研究助理副总裁丁锦东博士（Dr. Jindong Ding）表示：“青光眼的治疗目前依旧存在巨大的未被满足的需求，这背后反应的是我们对于疾病机理依旧缺乏了解，治疗手段依旧需要完善。新型神经保护疗法是对该领域治疗方案的全新的探索，意义深远。同时，这一过程也将面临非常大的挑战，这表明极目生物在科学创新方面勇于接受挑战，承担风险的勇气和决心。希望在不久的将来我们就能够把这一疗法推进到临床阶段。”新型神经保护疗法ARVN601不仅聚焦了目前青光眼治疗领域，仅通过降低眼压无法满足部分病人得到有效治疗的这一未被满足的临床需求，更是启动了无论在技术平台、靶点、机理等方面都具有独创性的研究探索。一直以来极目生物致力于填补眼科疾病疗法空白，助力患者和大众更有效地应对眼健康挑战。来源：新京报、佰傲谷BioValley、药融圈、医享客基因疗法、眼科基因治疗、基因编辑、AAV工艺质控，点击图片查询议程，合作热线：王晨 180 1628 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9月29日，据CDE官网显示，BioBAY园内企业朗信生物在研的LX102注射液“临床研究申请获得受理（受理号：CXSL2200492）。这是朗信生物申报的第2款产品，其首发产品LX101在今年4月已获批临床，用于治疗RPE65双等位基因突变相关的遗传性视网膜变性（IRD），也是国内首个获批开展Leber先天性黑蒙症（LCA）基因疗法临床试验的药物。目前，尚未有公开资料披露这款“LX102注射液”详细信息。但根据朗信生物目前所关注的遗传性疾病的基因治疗领域（眼科、罕见病、单基因遗传疾病）推测可能是一款针对眼科的AAV基因治疗药物。据悉，朗信生物分别在VEGF、PROM1、CRX、RS1、GNAT1、GsdmdC细胞焦亡等靶点开展了眼科基因治疗药物研发活动。其首款进入临床的产品LX101通过腺相关病毒2（AAV2）携带正常RPE65基因，能特异识别并转染病变的视网膜色素上皮细胞，并在细胞内持续表达患者缺少的RPE65蛋白，恢复正常视循环，达到提升视功能的治疗目的。先天性黑蒙症（LCA）是一类因影响视网膜功能的几个重要基因的功能丧失突变引起的遗传性视网膜疾病，主要为常染色体隐性遗传。大多数LCA患者在婴儿期或儿童期就开始出现严重的视力障碍，并且由于进行性视网膜变性，一般在30-40岁时会彻底失明。先天性黑蒙症患病率约为1/30,000~1/81,000，占遗传性视网膜疾病（HRD）的5%，可见LCA是非常罕见的疾病。近年来，研究人员发现数十种与LCA相关的致病基因，主要包括GUCY2D、RPE65、CRX、AIPL1、RPGRIP1和CRB1，其功能涉及视网膜光电信号的传导，维生素A在视网膜的代谢，光感受器细胞的分化和形态发育，蛋白的转运和分布等。LCA的这些分子亚型中，RPE65和CEP290这两种亚型在临床试验中的安全性和有效性，已有明确证据。而由GUCY2D突变引起的LCA的相关研究在2021年发表在iScience杂志上的文章中得到了初步验证，药物疗效令人鼓舞。▲图片来源：iScience尽管有了可用的靶点，但是基因药物的开发何其难。直到2017年12月10日，美国FDA才批准了Spark的AAV基因疗法Luxturna，通过腺相关病毒（AAV）载体，将正确的RPE65基因递送到视网膜细胞，用于治疗先天性黑蒙症Ⅱ型。但目前能够进行基因治疗的、由RPE65突变引起的LCAⅡ型只占所有LCA的6%左右，可以说LCA II型是罕见病中的罕见病。加之AAV基因疗法在面对Leber先天性黑蒙10型（LCA10）时颇有为难，因为CEP290基因的编码序列长达7.5kb，远超腺相关病毒（AAV）载体的装载能力极限（4.7kb），因此无法通过AAV递送正确编码的CEP290基因的方式来治疗。而Editas所开发的用于治疗LCA10的全球首个体内编辑基因疗法AGN-151587（EDIT-101）在2020年3月已完成1/2期临床首例患者给药，但其2021年公布的早期临床结果仅证实了安全性，在疾病改善方面并不理想。由于免疫豁免的存在，基因治疗核心的载体递送问题在眼病的治疗上得到规避，为眼病的基因治疗打开了绿色通道。多种致病基因在眼病中被确认，已经定义的眼科遗传病近580种，眼病致病基因近400个，眼病似乎是基因治疗大展宏图的入场券。但囿于递送挑战、经济成本的种种限制，大部分患者仍难以从中受益。希望随着生物技术的发展和人们对病症更加深入的了解，基因疗法能够早日突破当前挑战，惠及更多患者。推荐阅读研发动态丨信迈医疗：荣登国际心血管顶级专业期刊《JCTR》！中国学者首发RDN治疗高血压临床方案研发动态 | 纽福斯：NR082中国3期临床试验完成首例患者入组研发动态 | 勤浩医药ERK1/2抑制剂GH55临床试验申请获批

基因疗法在药理学、药代动力学和毒理学研究中，选择合适的生物分析技术检测目的基因表达及相关生物学活性非常重要。本文重点介绍国内外领先地基因治疗机构，如Biogen，Sarepta therapeutics，MeiraGTx，ATGC，Spark therapeutics，Regenxbio，CRISPR therapeutics，Editas medicine，bluebird bio，杭州嘉因生物、中国食品药品检定研究院等，在不同研究模型上采用Digital Western Blot技术分析内源性转基因目的蛋白质表达。2017年美国FDA首次批准了视网膜Voretigene Neparvovec基因疗法（Luxturna, Spark Therapeutics），用于治疗RPE65.1双等位基因突变引起的罕见眼科疾病，称为Leber先天性黑蒙，这个具有里程碑意义的决定为疾病基因疗法打开了大门。基因治疗需系统地开展非临床研究来评估安全性风险，验证有效性机制，以支持临床试验研究。在体内和体外模型中研究基因治疗产品与治疗靶点的相关作用机制和效应，选择生物相关性模型来检测目的基因表达和生物学活性非常重要。Western Blot作为经典的蛋白质表达定量检测技术，特别适合细胞和组织内蛋白表达检测，已被FDA批准用于肌营养不良症基因治疗标志物检测。但鉴于传统Western Blot操作步骤多、时间长、重复性差和定量不准等劣势。行业内也推荐Digital Western Blot (Digital WB或称为Simple Western）技术替代传统Western Blot技术，这是一种基于毛细管技术的自动化免疫学检测技术，自动化程度更高，重复性更好，灵敏度更高和具有较宽动态范围适合表征蛋白质表达变化。Digital WB已广泛用于各种基因治疗项目中蛋白质表达分析。案例1：美国AGTC公司利用Digital WB检测非人灵长类动物模型（NHP）体内转基因目的蛋白表达水平干性年龄相关性黄斑变性（Dry age-related macular degeneration, dAMD）约占AMD病例的80%~90%，主要有玻璃体疣和视网膜色素上皮异常改变，疾病进展相对缓慢。dAMD致病机制尚未明确，可能与炎症、细胞退化与萎缩、氧化应激、脂质代谢障碍等多种因素相关，其治疗方案极其有限。目前临床阶段研发药物主要以靶向补体系统、氧化应激和炎症反应相关机制为主。近年研究发现，编码关键补体调节因子CFH（The Complement factor H）和CFI (The Complement factor I）的基因遗传突变与干性AMD的发生和发展密切相关，这些蛋白质天然调节补体系统以维持平衡。CFH编码蛋白质H因子是补体旁路激活途径中起重要作用的负调控因子，可调控降低炎症反应减缓dAMD发展。美国AGTC公司采用新颖设计，将编码CFH的20个短重复序列缩减为18个，这个新型CFH变异体称为tCFH，已在小鼠模型上完成概念验证，并在体外实验中证明了其具有与野生型CFH相同生物活性。在非人类灵长类动物（NHP）上进一步研究体内活性，采用Digital WB检测NHP模型上RPE和视网膜的CFH和tCFH表达水平，采用AAV载体携带变异体基因可在体内实验中实现缩短补体因子表达，本项目已在准备IND申报中。案例2：英国MeiraGTx公司AAV基因治疗RetGC-GUCY2D项目Leber先天性黑蒙可由多种不同突变基因导致包括RPE65、CEP29、GUCY2D和CRX等。其中Leber先天性黑蒙1型由GUCY2D基因突变导致，可导致严重视力损害或失明。GUCY2D基因正常拷贝编码了一种鸟苷酸环化酶（RetGC），其是感光器生理学中关键酶之一，视网膜中光敏杆状细胞和视锥细胞使用该酶将光转换为电化学信号。英国MeiraGTx公司研究人员利用CRISPR/CAS9 技术生成 RetGC 敲除 (RetGC KO) 视网膜类器官，iPSC衍生视网膜类器官分化后，将RetGC KO 视网膜类器官与同一细胞系的野生型类器官进行对比研究。总共设计了四种 AAV 载体来测试RetGC 蛋白在光感受器中的恢复情况，所有载体采用AAV7递送。CMV 和视紫红质激酶 (RK) 两个启动子，并评估了WoodChuck肝炎病毒翻译后调控元件 (WPRE) 影响。采用Digital WB检测6组类器官中RetGC蛋白表达水平。实验结果揭示，与非转导样本组比，所有载体设计均以不同效率产生RetGC蛋白。加入WPRE似乎显示出效力降低趋势，通过其他量化指标验证了这个趋势。Digital WB相比传统Western Blot，只需要几十分之一样本量就可实现类器官等珍贵样本中蛋白质定量检测，而且重复性更高和速度更快，非常适合眼部疾病类器官模型的转基因目的蛋白及相关通路蛋白表达分析。美国Spark therapeutics公司发表了AAV载体基因治疗庞贝病（PD）临床前小鼠和非人灵长类动物（NHP）最新研究成果(Nature Communication, 2021），采用Digital WB检测血浆中hGAA转基因蛋白表达。全自动Digital WB技术是基因治疗蛋白质表达定量的重要工具Jess全自动数字化蛋白质表达定量分析系统 (Digital WB) 是Bio-Techne集团旗下蛋白质分析品牌ProteinSimple所有。系统利用毛细管电泳免疫学分析技术，可从微量样品中自动吸取、分离、捕获蛋白质，并通过化学发光或荧光检测目的蛋白含量。Digital WB自动化程度高，重复性好，灵敏度高和具有较宽动态检测范围，这些特点满足基因治疗项目不同阶段的目的蛋白定量需求。针对基因治疗应用的技术优势1.Digital WB技术适合眼科、肌肉和神经退行性疾病等基因治疗体外和体内各种模型中转基因目的蛋白表达定量分析，用于细胞系、类器官模型、小鼠动物模型和非人灵长类动物模型的关键蛋白质分析。适合于基因治疗研发的不同阶段对转基因目的蛋白及相关信号通路蛋白检测需求。2.Digital WB样本量需求是传统Western Blot几十分之一，只需要3 μL样本量就可实现多重蛋白质表达检测，特别适合微量珍贵样本蛋白质分析。3.Digital WB精准定量检测，传统Western Blot只能满足样本半定量需求，重复性比较差。基因治疗某些目的蛋白表达与临床治疗效果相关联，可作为替代生物标志物，建立量效关系。要求目的蛋白分析检测标准需要提高，要求技术需要经过严格验证，Digital WB可满足这些需求。4.符合基因治疗产业对自动化标准化和效率的需求，面对行业激烈竞争，需要提升研发效率。Digital WB实现了全自动化和标准化，软件符合FDA 21 CFR Part 11合规性需求。系统3个小时完成一批次蛋白质分析，比传统Western Blot快4倍，大大提高了实验效率，同时减少人力成本。扫描下方二维码，获取更多关于相关资料参考文献：1.MacLaren, R.E. A 2020 vision of ocular gene therapy. Gene Ther 28, 217–219 (2021).2.基因治疗产品非临床研究与评价技术指导原则（试行）3.Thilo M. Buck and Jan Wijnholds. Recombinant Adeno-Associated Viral Vectors (rAAV)-Vector Elements in Ocular Gene Therapy Clinical Trials and Transgene Expression and Bioactivity Assays. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 4197.4.Annemieke Aartsma-Rus, Jennifer Morgan, et at. Report of a TREAT-NMD/World Duchenne Organisation Meeting on Dystrophin Quantification Methodology. Journal of Neuromuscular Diseases. 6 (2019) 147–1595.Arifa Naeem, etc. RetGC-GUCY2D retinal organoid disease model for AAV gene therapy development.  MeiraGTx LTd6.https://agtc.com/programs/