SRC x EGFR

点击蓝字 关注我们 汪年松教授 撰稿|上海交通大学医学院附属第六人民医院 汪年松 全球有超过5亿人患有慢性肾脏病（CKD），并且面临肾衰竭、心血管事件和死亡的高风险，2型糖尿病是许多国家最常见的CKD病因。多年来，肾素-血管紧张素系统（RAS）抑制剂是唯一被证明可以减缓糖尿病肾病（DKD）进展的治疗方法。自2019年以来，大型随机试验证明了新疗法的益处。钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂（SGLT2i）、非奈利酮、司美格鲁肽已被证明可以保护肾脏并降低不良心血管事件风险。本文对2024年有关糖尿病肾病临床和基础研究的最新进展进行综述。 一、糖尿病肾病的治疗进展 美国糖尿病协会（ADA）发布的2025年版《糖尿病医学诊疗标准》提出降低白蛋白尿的综合干预措施，即优化血糖管理，优化血压管理（目标为<130/80 mmHg，1 mmHg=0.133 kPa），使用ACEI或ARB治疗且应使用至最大耐受剂量，戒烟，减肥，饮食模式改变（减少盐摄入和/或蛋白质摄入），使用SGLT2i、非甾体类盐皮质激素受体拮抗剂（ns-MRAs）或胰高糖素样肽-1受体激动剂（GLP-1RA）治疗。  1.SGLT2i  为了进一步研究2型糖尿病的持续时间对SGLT2i卡格列净对心血管（CV）和肾脏结果的影响，对卡格列净心血管评估研究（CANVAS）项目和卡格列净对糖尿病肾病患者肾脏和心血管结果影响的评估（CREDENCE）试验的数据进行分析[1]，结果显示早期使用卡格列净治疗可预防白蛋白尿进展并促进白蛋白尿消退，无论糖尿病持续时间如何，使用卡格列净治疗可为2型糖尿病患者带来有意义且一致的心肾益处。  EMPA-KIDNEY试验评估了恩格列净对6609例CKD患者的影响，显示恩格列净可降低基于肾脏疾病进展或心血管死亡的主要综合心肾结局风险，其中约三分之二的参与者患有非糖尿病原发性肾病，二次分析评估了原发性肾病对恩格列净治疗效果的影响[2]。结果显示恩格列净可使肾脏疾病进展的相对风险降低29%[风险比0.71（95%CI 0.62~0.81）]，在这些主要原发性肾脏疾病类别之间以及不同亚型肾小球疾病之间的相对影响大致相似。  为评估2型糖尿病和透析前5期CKD患者使用SGLT2i的长期结果，进行了一项基于台湾省全民健康保险研究数据库（NHIRD）的研究[3]，结果显示，与不使用SGLT2i相比，使用SGLT2i的患者透析风险[风险比（HR）0.34；95%CI 0.27~0.43]，心力衰竭入院风险（HR 0.80；95%CI 0.73~0.86），急性心肌梗死（HR 0.61；95%CI 0.52~0.73），糖尿病酮症酸中毒（HR 0.78；95%CI 0.71~0.85）和急性肾损伤（HR 0.80；95%CI 0.70~0.90）均较低，但全因死亡风险没有差异（HR 1.11；95%CI 0.99~1.24）。  2.非甾体类盐皮质激素受体拮抗剂  非甾体盐皮质激素受体拮抗剂finerenone已在三项针对心血管-肾脏-代谢综合征患者的前瞻性随机临床试验（FIDELIO-DKD、FIGARO-DKD 和FINEARTS-HF）中进行研究。预先设定的参与者层级汇总分析[4]显示在18991例患者中，非奈利酮降低了全因死亡率（HR 0.91; 95%CI 0.84~0.99；P=0.027）、心衰住院风险（HR 0.83; 95%CI 0.75~0.92；P<0.001）和复合肾脏结局风险（HR 0.80; 95%CI0.72~0.90；P<0.001）。尽管心血管病死率的降低未达到统计学显著性，但非奈利酮显著改善了死亡、心血管事件和肾脏结局的风险。  3.GLP-1RA FLOW研究关注GLP-1RA司美格鲁肽治疗CKD合并2型糖尿病患者的肾脏保护作用，将CKD合并2型糖尿病患者随机分配接受每周1.0 mg剂量的皮下司美格鲁肽或安慰剂[5]。主要结局是重大肾脏疾病事件，包括肾衰竭发作[透析、移植或eGFR <15 ml/（min·1.73 m2）]、eGFR较基线至少下降50%或因肾脏相关或心血管原因死亡。在接受随机分组的3533例参与者中，中位随访时间为3.4年，司美格鲁肽组发生主要结果事件的风险比安慰剂组低24%（HR 0.76；95%CI 0.66~0.88；P=0.0003）。主要结果的肾脏特异性成分和心血管原因死亡的综合结果相似。次要性结果分析显示，司美格鲁肽组肾功能进展更慢、主要心血管事件及全因死亡风险降低。2025版ADA指南指出，对于2型糖尿病合并CKD的患者，应使用已证明对该人群有益的GLP-1RA来降低心血管风险和延缓肾病进展。  4.联合用药  GLP-1RA和SGLT2i可独立降低CV和肾脏事件风险，但两者联合使用的效果尚不明确。GLP-1RA与SGLT2i联合治疗的队列研究报告[6]，与GLP-1RA相比，联合用药可使主要不良心血管事件风险降低30%（HR 0.70，95%CI 0.49~0.99），严重肾脏事件风险降低57%（HR 0.43，95%CI 0.23~0.80）。与SGLT2i相比，联合用药可使主要不良心血管事件风险降低29%（HR 0.71，95%CI 0.52~0.98），而严重肾脏事件的置信区间较宽（HR 0.67，95%CI 0.32~1.41）。提示GLP-1RA与SGLT2i联合用药可降低重大不良心血管事件和严重肾脏事件的风险。而将FLOW试验中患有2型糖尿病和CKD的参与者按基线SGLT2i使用情况分层，并随机分配到司美格鲁肽组/安慰剂组[7]。司美格鲁肽在减少肾脏结局方面的益处在基线是否使用SGLT2i的患者中均一致，司美格鲁肽仍展现出显著的肾脏和心血管保护作用。 SGLT2i（CANVAS和CREDENCE）、ns-MRA（FIDELIO-DKD和FIGARO-DKD）和8项GLP-1RA的大规模随机结果试验的数据分析显示[8]，对于患有2型糖尿病且白蛋白尿至少中度增加的患者，预计SGLT2i、GLP-1RA和非甾体MRA联合治疗将显著提高心血管、肾脏和总体生存率。提示对于心肾高风险的2型糖尿病患者应考虑优先接受RAS抑制剂、SGLT2i、ns-MRA、GLP-1RA药物的联合治疗。 二、糖尿病肾病基础研究进展 1.GLP-1受体信号通过抑制晚期糖基化终产物受体诱发的炎症来改善糖尿病肾病[9] 使用抗糖尿病治疗药物利拉鲁肽激活GLP-1受体通路，可下调肾脏RAGE，减少骨髓髓系祖细胞的扩增，促进M2样巨噬细胞极化，并减少糖尿病小鼠肾脏损伤的标志物。单细胞转录组学显示，利拉鲁肽在肾脏内皮细胞、近端小管细胞、足细胞和巨噬细胞中诱导了明显的转录变化，这些变化主要由涉及营养物质运输和利用、氧化还原感应和炎症消退的途径所主导。确定了GLP-1疗法在糖尿病肾脏疾病中一种新的葡萄糖非依赖性肾脏保护作用，并为探索由药物GLP-1R激动引起的细胞特异性肾脏转录反应提供了宝贵的资源。  2.足细胞OTUD5通过去泛素化TAK1并减少足细胞炎症和损伤来缓解糖尿病肾病[10]  足细胞损伤在糖尿病肾病发展中起着至关重要的作用，对高浓度葡萄糖和棕榈酸（HG/PA）条件处理的足细胞进行了RNA测序（RNA-seq）分析，发现卵巢肿瘤去泛素化酶5（OTUD5）表达显著降低，质谱和免疫共沉淀实验鉴定炎症调节蛋白TAK1为足细胞中OTUD5的底物。OTUD5 通过其活性位点C224在K158位点去泛素化K63连接的TAK1，阻止TAK1磷酸化并减少足细胞中的下游炎症反应。OTUD5-TAK1轴参与糖尿病肾病足细胞炎症和损伤，有望成为糖尿病肾病的治疗靶点。  3.LncRNA evf-2通过hnRNPU触发的不同机制诱导细胞周期重新进入和炎症，加剧糖尿病肾病中的足细胞损伤[11]  lncRNA EVF-2在糖尿病肾病患者的足细胞中上调，RNA纯化-质谱 （ChIRP-MS）分析鉴定出了evf-2的主要结合蛋白hnRNPU，lncRNA evf-2与hnRNPU结合，可能通过转录激活、可变剪接或 RNA 稳定性和翻译调控等途径导致细胞周期相关基因和炎症因子表达增加，阐明足细胞重新进入细胞周期的分子机制将有助于确定延缓足细胞损伤的新途径并发现新的治疗靶点。  4.核受体辅激活因子3缺乏会损害足细胞自噬，从而加重糖尿病肾病[12] 糖尿病肾病患者和小鼠肾脏中核受体辅激活因子3（NCOA3）的表达降低，足细胞特异性NCOA3敲除增强了糖尿病引起的白蛋白尿、肾小球和足细胞损伤。过表达NCOA3可减轻糖尿病肾病小鼠的肾脏损伤，Src家族成员Fyn被确定为介导足细胞自噬过程的NCOA3的靶标，NCOA3以核受体PPAR-γ依赖的方式调节Fyn的转录。这些发现揭示了NCOA3在维持足细胞生理功能方面的重要作用，表明NCOA3是防止足细胞损伤的靶点。  5.RBBP6介导的雌激素相关受体α（ERRα）降解导致糖尿病肾病中肾小管细胞的线粒体损伤[13]  线粒体功能障碍越来越多地被认为是糖尿病肾病发病机制中的关键因素，而ERRα的调节起着至关重要的作用。在受糖尿病肾病影响的近端肾小管细胞（PTC）中，ERRα明显下调，E3泛素连接酶视网膜母细胞瘤结合蛋白6（RBBP6）直接与ERRα相互作用，促进其在K100残基处的K48连接多泛素化，从而导致ERRα降解及线粒体损伤，调节RBBP6-ERRα相互作用可能是保护线粒体功能和减缓糖尿病肾病进展的一种策略。  6.足细胞特异性KLF6启动近端小管CaMK1D信号传导以减轻糖尿病肾病[14]  足细胞特异性KLF6会触发分泌型ApoJ的释放，从而激活邻近PTC中的钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶1D（CaMK1D）信号传导。CaMK1D在 PT的第一节段（靠近足细胞）中富集，对于减弱糖尿病条件下的线粒体裂变和恢复线粒体功能至关重要，通过增强ApoJ-CaMK1D靶向足细胞-PT 信号传导可能是减缓糖尿病肾病进展的关键治疗策略。  7.肾脏Angptl4是进行性糖尿病肾病中的关键纤维化分子[15]  血管生成素样4（ANGPTL4）是一种参与脂蛋白代谢的关键蛋白质，足细胞和小管Angpl4是关键的纤维化分子，它们的缺失可通过代谢重编程防止糖尿病肾病和纤维化，而代谢重编程是由DPP-4-整合素β1信号和TGFβ信号抑制所驱动的。针对Angptl4的肾脏特异性反义寡核苷酸可以特异性抑制肾脏中的Angptl4基因表达并保护糖尿病肾脏免受蛋白尿和纤维化的影响，为糖尿病肾病治疗提供了新的策略。 糖尿病肾病临床和基础研究进展已取得重大进步，越来越多的研究显示四大支柱治疗药物RAS抑制剂、SGLT2i、非奈利酮、司美格鲁肽为糖尿病肾病患者带来更多临床益处。尽管如此，许多患者仍会有进行性肾功能丧失，并出现肾衰竭和死亡，糖尿病肾病药物的联合应用在改善心肾结局中展现出一定的优势，联合用药有待进一步关注和研究。此外，蛋白激酶C抑制剂、晚期糖基化终产物抑制剂、选择性内皮素A受体拮抗剂、转化生长因子-β抑制剂和Rho激酶抑制剂等新兴治疗方法仍在探索之中。糖尿病肾病发病机制复杂，炎症、表观遗传改变、线粒体功能障碍、代谢重编程、自噬、铁死亡等细胞死亡失调均参与糖尿病肾病发生发展，挖掘糖尿病肾病重要的病理生理机制是开发靶向治疗药物的基础，多组学研究帮助确定了更多糖尿病肾病通路的关键分子特征，推动糖尿病肾病发病机制的深入理解及生物标志物的开发与应用。 TBN是喜鹊医药自主研究开发的1类创新化学药物，可通过清除自由基上调AMPK/NRF2信号通路来保护肾脏细胞；抑制mTOR，激活自噬，清除损伤的肾脏细胞；以及促进线粒体生物合成、抑制钙通道和抑制炎性反应等多种作用机理，改善肾脏功能，延缓疾病进展。 TBN用于糖尿病肾病治疗在中国已完成IIa期与IIb期2项独立的2期临床试验，分别由北京同仁医院内分泌科主任杨金奎教授与上海市第六人民医院肾脏风湿科主任汪年松教授担任领衔研究者，累计入组患者296例。2期临床试验结果显示，TBN在轻-中度糖尿病肾病患者中，均能明显降低尿蛋白、维持肾功能、降低血糖，且试验中未发生与药物肯定相关的严重不良反应，未见需要特别关注的不良事件。有望成为继肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS) 抑制剂、钠-葡萄糖协同转运蛋白２(SGLT2) 抑制剂和盐皮质激素受体拮抗剂(MRA) 药物后的新一代治疗DKD“全球新”创新药物。 参考文献 [1]Tobe SW, Mavrakanas TA, Bajaj HS, et al. Impact of Canagliflozin on Kidney and Cardiovascular Outcomes by Type 2 Diabetes Duration: A Pooled Analysis of the CANVAS Program and CREDENCE Trials. Diabetes Care. 2024;47(3):501-507.  [2]EMPA-KIDNEY Collaborative Group. Impact of primary kidney disease on the effects of empagliflozin in patients with chronic kidney disease: secondary analyses of the EMPA-KIDNEY trial. Lancet Diabetes Endocrinol. 2024;12(1):51-60.  [3]Yen FS, Hwu CM, Liu JS, Wu YL, Chong K, Hsu CC. Sodium-Glucose Cotransporter-2 Inhibitors and the Risk for Dialysis and Cardiovascular Disease in Patients With Stage 5 Chronic Kidney Disease. Ann Intern Med. 2024 Jun;177(6):693-700.  [4]Vaduganathan M, Filippatos G, Claggett BL, et al. Finerenone in heart failure and chronic kidney disease with type 2 diabetes: FINE-HEART pooled analysis of cardiovascular, kidney and mortality outcomes [published correction appears in Nat Med. 2024 Dec;30(12):3778. doi: 10.1038/s41591-024-03372-1]. Nat Med. 2024;30(12):3758-3764. [5]Perkovic V, Tuttle KR, Rossing P, et al. Effects of Semaglutide on Chronic Kidney Disease in Patients with Type 2 Diabetes. N Engl J Med. 2024;391(2):109-121.  [6]Simms-Williams N, Treves N, Yin H, et al. Effect of combination treatment with glucagon-like peptide-1 receptor agonists and sodium-glucose cotransporter-2 inhibitors on incidence of cardiovascular and serious renal events: population based cohort study [published correction appears in BMJ. 2024 May 16;385:q1094.  [7]Mann JFE, Rossing P, Bakris G, et al. Effects of semaglutide with and without concomitant SGLT2 inhibitor use in participants with type 2 diabetes and chronic kidney disease in the FLOW trial. Nat Med. 2024;30(10):2849-2856.  [8]Neuen BL, Heerspink HJL, Vart P, et al. Estimated Lifetime Cardiovascular, Kidney, and Mortality Benefits of Combination Treatment With SGLT2 Inhibitors, GLP-1 Receptor Agonists, and Nonsteroidal MRA Compared With Conventional Care in Patients With Type 2 Diabetes and Albuminuria. Circulation. 2024;149(6):450-462.  [9]Sourris KC, Ding Y, Maxwell SS, et al. Glucagon-like peptide-1 receptor signaling modifies the extent of diabetic kidney disease through dampening the receptor for advanced glycation end products-induced inflammation. Kidney Int. 2024;105(1):132-149.  [10]Zhao Y, Fan S, Zhu H, et al. Podocyte OTUD5 alleviates diabetic kidney disease through deubiquitinating TAK1 and reducing podocyte inflammation and injury. Nat Commun. 2024;15(1):5441. Published 2024 Jun 27.  [11]Zhang C, Zhao H, Yan Y, et al. LncRNA evf-2 Exacerbates Podocyte Injury in Diabetic Nephropathy by Inducing Cell Cycle Re-entry and Inflammation Through Distinct Mechanisms Triggered by hnRNPU. Adv Sci (Weinh). 2024;11(47):e2406532.  [12]Xie Y, Yuan Q, Cao X, et al. Deficiency of Nuclear Receptor Coactivator 3 Aggravates Diabetic Kidney Disease by Impairing Podocyte Autophagy. Adv Sci (Weinh). 2024;11(19):e2308378.  [13]Hu H, Hu J, Chen Z, et al. RBBP6-Mediated ERRα Degradation Contributes to Mitochondrial Injury in Renal Tubular Cells in Diabetic Kidney Disease. Adv Sci (Weinh). 2024;11(46):e2405153.  [14]Gujarati NA, Frimpong BO, Zaidi M, et al. Podocyte-specific KLF6 primes proximal tubule CaMK1D signaling to attenuate diabetic kidney disease. Nat Commun. 2024;15(1):8038.  [15]Srivastava SP, Zhou H, Shenoi R, et al. Renal Angptl4 is a key fibrogenic molecule in progressive diabetic kidney disease. Sci Adv. 2024;10(49):eadn6068.

第一性原理计算解决50年悬而未决难题：半导体中铜为何扩散更快？ Ab initio及第一性原理入门参考书介绍 《海贼王》告诉你，做科研为什么不能闭门造车…… 985博导亲测：用DeepSeek写国自然本子，3天完成30天工作量 来自公众号：石头的网络药理学 本文以传播知识为目的，如有侵权请后台联系我们，我们将在第一时间删除。 研究背景 妊娠高血压（PHI）是妊娠期常见并发症，严重威胁母婴健康。传统中药泽泻（Alisma orientale, AO）在中医中用于治疗水肿和高血压，但其具体作用机制及安全性尚未明确。本研究通过整合网络药理学、网络毒理学、分子对接和分子动力学模拟，系统解析泽泻治疗PHI的潜在机制及其肝肾毒性。研究方法 化合物筛选与靶点预测 数据来源：TCMSP、TCM-ID、TOXNET等数据库筛选泽泻活性成分（OB ≥ 30，DL ≥ 0.18）和毒性成分。 靶点预测：PharmMapper和SwissTargetPrediction预测化合物靶点；GeneCards、OMIM等数据库获取PHI及肝肾损伤相关靶点。 交集靶点：通过Venn图筛选泽泻治疗PHI的潜在靶点（78个）及毒性靶点（肝117个，肾111个）。 网络构建与分析 PPI网络：STRING数据库构建蛋白质相互作用网络，Cytoscape筛选核心靶点（如IGF1、AKT1、EGFR等）。 富集分析：Metascape进行GO和KEGG通路分析，揭示泽泻通过PI3K-AKT、MAPK通路治疗PHI，毒性成分通过脂质代谢和动脉粥样硬化通路引发肝肾损伤。 分子对接与动力学模拟 分子对接：SwissDock验证核心化合物（如泽泻醇B 23-乙酸酯）与靶点（如IGF1）的结合亲和力（结合能 < -7 kcal/mol）。 动力学模拟：Discovery Studio分析复合物稳定性（RMSD、RMSF、氢键变化），验证结合模式可靠性。结果 AO 化合物、PIH、肝肾损伤的靶点预测 从 TCMSP、TCM-ID、TCM@Taiwan 和 BATMAN 数据库中获得了 77 种 AO 化合物（图 3A）（详细信息列于补充表 S1）。根据筛选标准 OB ≥ 30 和 DL ≥ 0.18，从 TCMSP 数据库中获得了 10 种合格的活性化合物，包括谷甾醇 （MOL000359）、Alisol B （MOL000830）、Alisol B 单乙酸酯 （MOL000831）、醋酸阿利索 B 23 （MOL000832）、16β-甲氧基阿利索 B 单乙酸酯 （MOL000849）、阿利索 B （MOL000853）、阿利索 C （MOL000854）、阿利索 C 单乙酸酯 （MOL000856）、1-单油酸甘油酸酯 （MOL002464） 和醋酸阿利索 B （MOL000862）。其他数据库来源的生物活性化合物有 19 种，包括 13Β，17Β-环氧合醇 A、24-脱乙酰烯醇 O、25-脱水烯醇 F、Alismol、Alisol B 23-乙酸酯、Alisol E 23-乙酸酯、Alisol E 24-乙酸酯、Alizexol A、Neoalisol、Oriediterpenol、Oriediterpenoside 等 8 种未正式命名的化合物。从 TOXNET 和 CTD 数据库中检索到的 10 种毒性化合物是胆碱 （MOL000394）、大黄素 （MOL000472）、5-羟甲基糠醛 （HMF， MOL000748）、1 h-吲哚-3-羧酸 （MOL000823）、蔗糖 （MOL000842）、烟酰胺 （NCA， MOL000857）、硬脂酸 （MOL000860）、Healip （MOL000861）、2-呋喃醛和 2-呋喃羧酸（详细信息见表 1，化学结构见图 2）。 在筛选和去除重复项后，我们确定了 138 个与 29 种治疗性化合物相关的潜在靶点和 160 个与 10 种 AO 毒性化合物相关的靶点。此外，从 GeneCards 、 DisGeNET 和 OMIM 数据库中检索到 1136 个 PIH 推定靶点、 2188 个药物性肝损伤靶点和 2094 个药物性肾损伤靶点。Venn 获得了 AO 和 PIH 治疗化合物之间重叠的 78 个靶点，而 AO 毒性化合物与肝肾损伤之间重叠的靶点分别为 117 个和 111 个靶点（详细靶点见表 2）。 PPI 网络分析 将 AO 治疗 PIH 的 78 个靶点纳入 STRING 数据库以构建 PPI 网络。在 Cytoscape 软件中直观显示蛋白质-蛋白质相互作用的 78 个节点和 771 个边缘，拓扑分析包括度中心性 （DC） 和综合评分，并进一步采用最大团中心性 （MCC） 算法筛选核心靶点。前 10 个靶标是 AKT1、BCL2L1、CASP3、EGFR、ESR1、HSP90AA1、IGF1、MAPK1、MAPK8 和 SRC（图 3）。此外，去除断开节点后，有毒化合物诱导的肝损伤的 PPI 网络包括 116 个节点和 1176 个边缘，前 10 个靶点为 CASP3、EGF、EGFR、ESR1、HSP90AA1、IL1B、MYC、PPARG、TNF 和 TP53（图 5A、B）。有毒化合物诱导的肾损伤的 PPI 网络包括 109 个淋巴结和 1130 个边缘，前 10 个靶点为 CASP3、EGF、EGFR、FOS、HSP90AA1、MMP9、MYC、PTGS2、TNF 和 TP53（补充图 S1A、B）。 GO 和 KEGG 通路富集分析 从 Metascape 数据库中共获得 1022 个生物过程、50 个细胞化合物和 93 个分子功能项，显著富集 151 条 KEGG 通路 （p < 0.01，q < 0.05 ），展示了 AO 治疗 PIH 的多通路特征。前 10 个生物过程包括对激素的反应、激酶活性的调节、酶联受体蛋白信号通路、细胞对激素刺激的反应、MAPK 级联细胞对脂质反应的调节、细胞对氮化合物的反应、蛋白质磷酸化的正调节、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶和细胞迁移的正调节（图 4A-C）。 前 10 个显著富集的 KEGG 通路包括癌症通路、MAPK 信号通路、PI3K-Akt 信号通路、癌症蛋白多糖、前列腺癌、脂质和动脉粥样硬化、Ras 信号通路、内分泌抵抗、化学致癌-受体激活和活性氧。根据通路的富集率及其与疾病的相关性，PI3K-Akt 信号通路最为重要。我们在 KEGG mapper 数据库中进一步对 PI3K-Akt 通路的详细靶标进行了着色，其中治疗靶标为红色，AO 靶标但未治疗 PIH 的靶标为蓝色，PIH 的其他靶标为黄色（ 图 4D）。此外，共有 1262 个生物过程、55 个细胞化合物和 117 个分子功能和 168 个 KEGG 通路项目显著富集 （p < 0.01，q < 0.05），脂质和动脉粥样硬化通路与 AO 诱导的肝损伤显著相关（图 5C-E）。 共富集 1260BP、52 CC、115 个 MF 项目和 161 个 KEGG 通路 （p < 0.01，q < 0.05 ），脂质和动脉粥样硬化通路也与 AO 诱导的肾损伤显著相关 （补充图 S1C，E）。 草药-化合物-靶点-途径-疾病网络分析 在确定了先前分析的核心靶点和前 10 条通路后，Cytoscape 3.9.1 构建了“草药-化合物-靶点-通路-疾病”（H-C-T-P-D） 网络，揭示了 AO 治疗 PIH 的复杂分子机制和多化合物、多靶点和多通路特征（图 4E，F）。该网络的主要活性化合物是 Alisol B 23-Acetate、Alisol E 24-Acetate 和 alisol C。深绿色菱形代表草药 （AO），浅绿色六边形代表 AO 的治疗化合物，红色和橙色圆圈代表基于度值的靶点，蓝色 V 图标代表所涉及的途径，黄色矩形代表疾病 （PIH）。同样，“H-C-T-P-D”网络用于说明 AO 毒性化合物诱导肝损伤（图 5F）和肾损伤（补充图 S1F）的机制，其中绿色菱形、浅绿色六边形、红色圆圈、蓝色 Vicon 和黄色矩形代表草药、AO 的毒性化合物、靶点、途径和疾病（AO 诱导的肝肾毒性）。主要毒性化合物是大黄素 （MOL000472）。 分子对接 补充表 S2 分别显示了前 10 种治疗性化合物和大黄素与其核心靶标的结合亲和力。结果表明，活性化合物与所有靶标均具有良好的结合活性。结合亲和力< -5.0 kcal/mol 表明小分子配体与受体蛋白具有良好的结合活性，结合亲和力< -7.0 kcal/mol 表明结合活性更强。其中，我们发现所有化合物与 IGF1 以及大黄素与 TNF 和 PPARG 的结合亲和力< -7.0 kcal/mol，表明 IGF1 可能是介导对 PIH 治疗效果的重要靶点，PPARG 和 TNF 可能是 AO 诱导肝损伤的主要靶点。图 6A 是配体-蛋白质复合物的结合亲和热图，图 6B-D 显示了 Alisol B 单乙酸酯和 IGF1 之间分子对接的细节（最低的结合亲和力）;分子间作用力包括烷基键、π-烷基键、常规氢键和碳氢键。图 7 显示了大黄素与 PPARG 和 TNF 结合的结果。 分子动力学模拟 分子动力学模拟是分析配体-蛋白质复合物对接后构象变化和稳定性的重要技术。为探究 Alisol B 单乙酸酯与 IGF1 的结合稳定性，计算了 RMSD、RMSF 曲线、能量交替趋势和氢键热图。图 8 显示，在 50 ps 之后，所有分子和能级的轨迹都趋于稳定。RMSD、RMSF 曲线和氢键热图表现出良好的稳定性。 讨论与意义 创新性 首次系统整合网络药理学与毒理学，揭示泽泻治疗PHI的“多成分-多靶点-多通路”机制。 明确大黄素为关键毒性成分，为临床安全用药提供依据。 局限性 数据库筛选可能遗漏部分成分；需实验验证靶点功能及体内毒性。 未考虑药物代谢动力学（如吸收、分布）对疗效的影响。 临床启示 优化泽泻提取工艺，提高三萜类含量并降低大黄素等毒性成分。 开发靶向PI3K-AKT/MAPK通路的天然药物，减少传统中药的副作用。结论 泽泻通过三萜类成分调控IGF1、AKT1等靶点，经PI3K-AKT/MAPK通路改善PHI；大黄素等成分可能通过PPARG/TNF介导脂代谢异常引发肝肾毒性。研究为泽泻的临床合理应用及毒性控制提供了理论依据。

关注小药说药，一起成长！ 前言 TYRO3、AXL（也称为UFO）和MERTK组成了TAM受体酪氨酸激酶（RTK）家族。TAM受体信号异常与一系列疾病有关，包括癌症、纤维化和病毒感染。实验证据表明，TAM受体在促进凋亡细胞的吞噬作用、防止高反应性免疫反应以及调节血管完整性和血管通透性方面发挥着关键作用。此外，TAM受体也被称为磷脂酰丝氨酸病毒进入增强受体（PVEER），因为它们能够与病毒包膜上存在的磷脂酰丝氨酸（PtdSer）相互作用，促进病毒进入。 在癌症中，TAM受体激活促进细胞增殖和转移，参与上皮-间充质转化（EMT），维持干细胞表型、免疫调节、血管生成以及对传统和靶向治疗的抵抗。与许多RTK不同，TAM受体很少发生突变，受体活性的失调主要是由于其微环境的基因扩增或激活，使其成为理想的治疗靶点，而没有产生突变驱动的耐药性的风险。大多数TAM受体抑制剂，包括小分子和生物制剂，主要开发用于靶向或破坏AXL信号通路。临床上，AXL抑制剂正在各种肿瘤适应症进行多项临床试验，展现出极具潜力的应用前景。 TAM受体家族的结构和信号通路 与许多其他跨膜RTK类似，TAM受体具有一个细胞外结构域，该结构域由两个免疫球蛋白结构域组成，这两个结构域对配体结合至关重要，随后是两个重复的III型纤连蛋白。细胞内激酶结构域在三种受体之间高度保守，它们都具有该RTKs家族特有的KWIAIES序列。 TAM受体主要与两种配体相互作用，即生长停滞特异性蛋白6（GAS6）和维生素K依赖性蛋白S1（PROS1）。AXL受体和GAS6之间1:1相互作用导致AXL和GAS6的同源二聚体形成，进而导致细胞内催化结构域的激活。TAM受体催化结构域的自身磷酸化促进与磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）的p85亚基、SRC家族成员和生长因子受体结合蛋白2（GRB2）的结合，导致MEK–ERK信号的激活。 TAM受体的生理功能 TAM受体在各种细胞过程中具有重要的生理作用，如胎儿发育和成人组织稳态。它们作为免疫反应的负调节因子发挥作用，并促进凋亡细胞的吞噬清除。TAM受体信号传导对于保存血管完整性同样至关重要。此外，TAM受体的异常激活会导致免疫、血管系统和男性生殖系统的异常。 免疫反应功能 免疫系统中TAM受体的表达定位于活化的树突状细胞、巨噬细胞、髓系抑制细胞和自然杀伤细胞，所有这些都是先天免疫反应的重要调节因子。TAM受体及其配体在调节免疫反应的大小和强度以及维持先天和适应性免疫途径的复杂稳态方面发挥着重要作用。 此外，病毒可以通过与GAS6或PROS1的结合进入宿主细胞。在受体-配体结合和激活后，TAM受体通过与干扰素-α/β受体-STAT通路相互作用来抑制免疫反应。该途径导致SOCS1和SOCS3介导的Toll样受体（TLR）信号传导的抑制和炎症反应的抑制，帮助病毒逃避免疫监测。 凋亡细胞的吞噬清除 TAM受体有助于吞噬作用和清除各种细胞类型中的细胞碎片，以维持组织稳态，从而避免过度和致病性炎症反应。例如，视网膜中光感受器外段的消除通常由表达MERTK的吞噬性视网膜色素上皮进行。缺乏MERTK的视网膜色素上皮细胞无法清除有毒碎片，由此产生的过度活跃的炎症反应导致光感受器死亡、视网膜变性，最终导致失明。 维持血管功能 由于GAS6和PROS1对内皮细胞和血小板的生长和维持至关重要，TAM受体信号传导与维持血管完整性和通透性有关。有报道指出，AXL通过与VEGFA的相互作用以及通过PI3K和AKT的信号传导来促进血管生长。AXL的缺失会导致体外和体内血管形成受损，而抑制MERTK或TYRO3只会产生轻微效果。 癌症中的TAM受体信号 已有充分的研究证明，癌症生长和发展过程中TAM受体信号异常，这些异常激活的TAM受体可在缺氧和营养缺乏期间驱动转移，促进治疗耐药性，并促进癌细胞存活。 AXL 多项研究表明，在不同组织学来源的癌症中，AXL的表达失调，GAS6–AXL信号传导与各种促肿瘤功能相关。例如，在缺氧条件下，癌细胞分泌缺氧诱导型转录因子1和2（HIF1和HIF2），以激活AXL并促进低氧适应。 AXL促进上皮-间质转化，这是一种关键的癌症转移起始事件，可促进肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。内源性AXL信号传导正向调节EMT所需的转录因子，包括TWIST、ZEB1、ZEB2和SLUG，还促进N-钙粘蛋白的表达和E-钙粘蛋白下调以促进EMT。此外，AXL可以促进其他关键致癌途径的激活，如MET、SRC和Ras刺激的致癌途径，以促进EMT。 此外，AXL表达升高通常与血液学肿瘤和实体瘤的治疗耐药性有关。具体而言，AXL信号被认为通过激活AKT和ERK信号通路介导对EGFR抑制剂西妥昔单抗和放疗的耐药性，并通过调节c-ABL的活性来减少肿瘤细胞凋亡。此外，在对各种酪氨酸激酶抑制剂具有耐药性的癌症中经常观察到AXL信号的上调。 MERTK 与在癌症中普遍表达的AXL不同，MERTK表达升高与血液学癌症特别相关。MERTK在血液学癌症中的表达对于逃避先天免疫监测很重要，从而促进恶性肿瘤的生长和增殖，如急性淋巴细胞白血病和急性髓细胞白血病（AML）。30%的儿童B细胞急性淋巴细胞白血病出现MERTK异常表达。 在胶质母细胞瘤中，抑制MERTK导致CD206+抗炎M2样巨噬细胞减少。尽管单独的这种作用不足以延长生存期，但在胶质母细胞瘤动物模型中，MERTK抑制与放疗的结合导致肿瘤生长显著减少，M2样巨噬细胞向M1样巨噬细胞极化转变，并增强促炎免疫反应。 TYRO3 TYRO3在多种恶性肿瘤中表达升高，如鳞状细胞癌、肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、神经鞘瘤和多发性骨髓瘤，但其功能作用和临床相关性尚不清楚。TYRO3在调节骨稳态方面显示出其独特的生物活性。TYRO3调节破骨细胞的分化和功能，破骨细胞在正常骨重塑中负责骨吸收。然而，异常的TYRO3信号传导会使病理状况恶化，包括骨质疏松症和骨转移的发展。这些发现表明，TYRO3可能是恢复骨动力学和防止癌症骨转移的一个有前途的治疗靶点。 非癌症疾病中的TAM受体 除了癌症之外，异常的TAM受体信号传导通常是纤维化、自身免疫性疾病和病毒感染等疾病的重要原因。 纤维化 组织纤维化的特征是慢性炎症和组织损伤的导致的细胞外基质（ECM）和基质元素的广泛积累。TAM受体家族在纤维化疾病的组织重塑过程中起着关键作用。在肝硬化中，AXL信号传导被激活以诱导SLUG的转录，SLUG是EMT的关键调节因子。此外，AXL与TGF-β相互作用，以SMAD3依赖的方式促进α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、胶原和基质金属蛋白酶（MMPs）的沉积。 自身免疫性疾病 自身免疫性疾病的病理学多种多样且极其复杂。然而，大多数临床表现与异常免疫复合物和自身抗体的产生有关。自身免疫性疾病会促进慢性炎症反应，导致正常组织的破坏。TAM受体在免疫调节中的一个重要作用是清除凋亡细胞，这主要由MERTK信号驱动。在许多自身免疫性疾病中发现MERTK信号传导的丧失，包括系统性红斑狼疮和多发性硬化症。 髓磷脂是中枢神经系统的关键组成部分，其破坏是多发性硬化症的标志。MERTK在调节小胶质细胞和巨噬细胞的髓鞘吞噬作用中发挥重要作用，小胶质细胞是参与多发性硬化症病理的关键免疫细胞。小胶质细胞活化和随后的髓鞘再形成需要MERTK。考虑到这些发现，激活MERTK是多发性硬化症的一种很有前途的治疗途径，有可能减轻髓鞘吞噬作用，增强碎片清除率，减少神经炎症。 病毒进入 在整个进化过程中，病毒已经获得了躲避先天免疫反应以成功进入宿主的能力。它们的逃避机制之一是病毒粒子能够包裹在包括宿主细胞质膜的脂质双层中，导致病毒吞噬和释放。这些包膜病毒使用PVEER，包括AXL、MER和TYRO3，进入人类宿主细胞。暴露于PtdSer的包膜病毒可能会在Gla结构域上与GAS6或PROS1形成复合物，从而使它们能够利用所有三种TAM受体进入细胞。 除此机制外，凋亡模拟是包膜病毒以“免疫沉默”方式进入宿主细胞的另一种策略。表达PtdSer的病毒与表达TAM受体的宿主细胞对接，促进内吞吞噬。对接后，病毒还可以通过促进TAM受体介导的TLR信号传导抑制来抑制炎症反应，使其能够逃避免疫监测。 严重急性呼吸综合征冠状病毒2型（SARS-CoV-2）通过与血管紧张素转换酶2（ACE2）结合进入宿主细胞。有研究发现，当ACE2水平较低时，GAS6–AXL受体复合物的存在可以增强SARS-CoV-2的感染。因此，破坏GAS6–AXL–PtdSer复合物可能是减轻SARS-CoV-2感染严重程度的一种潜在治疗方法。 TAM受体抑制剂药物的开发 TAM受体抑制剂在癌症和非癌症疾病的临床前和临床研究中显示出有希望的结果。强有力的证据表明，TAM受体抑制剂与标准护理治疗相结合，可以促进抗肿瘤免疫反应，减少炎症，改善对癌症治疗的反应。随着对TAM受体信号传导的日益了解和新药物的开发，TAM受体抑制剂代表了一种治疗广泛疾病的有前景的方法。 小分子抑制剂 大多数TAM受体抑制剂是化小分子，旨在干扰位于细胞内激酶结构域上的ATP结合部分。针对TAM受体的多种小分子正在临床前和临床开发中。 Bemcentinib（BGB324）是一种处于临床阶段的AXL抑制剂，其与MERTK和TYRO3相比对AXL具有50倍至100倍的选择性。在卵巢癌、胶质母细胞瘤、间皮瘤、胰腺癌、乳腺癌和肺癌的临床前模型中验证了Bemcentinib的疗效。Bemcentinib目前是临床开发中最领先的AXL抑制剂之一，在NSCLC、TNBC和黑色素瘤（NCT03184571、NCT02872259、NCT03184558）中有多个I/II期临床研究。 RXDX-106是一种泛TAM抑制剂，具有缓慢的解离速率以提高其效力。RXDX-106对小鼠模型中显示出增强的抗肿瘤作用。然而，2018年3月开始的RXDX-106的1期研究（NCT03454243）于2019年被申办方终止。 MRX-2843是一种MERTK抑制剂，其也以高效力抑制FLT3。与前几代化合物相比，MRX-2843显示出改善的口服生物利用度、增强的溶解度、药物代谢和药代动力学特性。在动物模型中，它表现出强大的抗癌活性，并降低了T细胞上PD-1的表达，导致免疫介导的治疗活性。目前其正在进行多项临床试验，以研究在复发/难治性转移性实体瘤（NCT03510104）、多种亚型急性白血病（NCT04872478、NCT04946890）以及与EGFR抑制剂奥西替尼联合治疗NSCLC（NCT04762199）中的疗效。 Sitravatinib（MGCD516）抑制TAM受体家族的所有成员。该分子在肾细胞癌、NSCLC、肉瘤和乳腺癌的临床前模型中显示出强大的抗肿瘤功效。Sitravatinib 症在30多项针对各种实体瘤类型的临床试验中进行评估，包括与抗PD-1抗体和化疗的联合治疗（NCT04921358，NCT05461794）。 ONO-7475是AXL和MERTK的抑制剂。在表达AXL、EGFR突变的NSCLC的临床前模型中，ONO-7475治疗使细胞对EGFR酪氨酸激酶抑制剂敏感，导致肿瘤消退和肿瘤生长延迟。然而，在ONO-7475治疗急性白血病患者的临床试验中，招募被终止（NCT03176277）。 生物药 近年来，TAM受体靶向疗法，包括生物制品和其他新型治疗策略，取得了重大进展，为治疗各种癌症类型提供了有前景的分子。 Batiraxcept（AVB-S6-500）是一种工程化的超高亲和力sAXL诱饵受体。与野生型AXL受体相比，其对GAS6的结合亲和力提高了320倍。batiraxcept在卵巢癌、AML、乳腺癌、肾癌和胰腺癌的临床前模型中显示出显著的抗肿瘤活性。在一项Ib期临床试验中，batiraxcept与紫杉醇联合用药的患者显示出34.8%的总有效率，有两例完全缓解（NCT03639246）。然而，batiraxcept与紫杉醇联合的III期研究结果并未显示出治疗效果的显著改善（NCT4729608）。目前，该分子正在其他癌症类型中进行探索，包括肾透明细胞癌（NCT04300140）和胰腺癌（NCT04983407）。 Tilvestamab是一种完全人源化的AXL阻断抗体，主要结合AXL受体，与MERTK或TYRO3仅显示微弱结合。在功能上，Tilvestamab阻断GAS6与AXL的结合，并在AML、NSCLC、胰腺癌和肾癌模型中表现出抗肿瘤活性。Tilvestamab正在一项I期临床试验中测试对复发性、对铂耐药的高级别浆液性卵巢癌的疗效（NCT04893551）。 Enapotamab vedotin（HuMax-AXL-ADC）是一种抗体偶联药物，包括与auristatin E偶联的抗AXL抗体，用于靶向消除表达AXL的癌细胞。2020年其完成了一项I/II期剂量递增试验（NCT02988817），用于评估HuMax AXL ADC在实体瘤患者中的安全性和抗肿瘤活性。不幸的是，由于缺乏足够的临床疗效，该方案被终止。 Mecbotamab vedotin（CAB-AXL-ADC）是另一种靶向表达AXL的肿瘤细胞的抗体偶联药物。其正在进行三项II期临床研究，评估CAB-AXL-ADC作为单一疗法或与PD-1抑制剂联合治疗NSCLC、卵巢癌和其他实体瘤的安全性和有效性（NCT04681131、NCT03425279、NCT04918186）。 小结 近年来，我们在理解TAM受体在正常组织稳态和疾病状态中的作用方面取得了重大进展。令人信服的临床前研究已经促进开发出针对TAM受体家族的治疗药物，包括AXL和MERTK特异性抑制剂。这些分子中的许多正在临床研究中显示出有希望的结果。在接下来的几年中，期待这些分子的临床获得成功，能够早日造福疾病患者。 参考文献： 1. Therapeutic targeting of the functionally elusive TAM receptor family. Nat Rev Drug Discov. 2023 Dec 13. 公众号内回复“ADC”或扫描下方图片中的二维码免费下载《抗体偶联药物：从基础到临床》的PDF格式电子书！ 公众号已建立“小药说药专业交流群”微信行业交流群以及读者交流群，扫描下方小编二维码加入，入行业群请主动告知姓名、工作单位和职务。