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摘要：最近，癌症疫苗的个性化定制受到了广泛关注。尽管最近研究了针对各种肿瘤的众多疫苗技术，但治疗性癌症疫苗（CVs）的表现仍然不佳。尽管通常在临床前数据中显示出积极的结果，但临床试验尚未产生令人满意的数据。这种失望的主要原因是识别肿瘤特异性抗原的挑战，这些抗原应该仅由肿瘤细胞过度表达，而不是健康细胞。在恶性肿瘤免疫疗法中使用的大多数肿瘤抗原是非突变的并且过度表达的自身抗原，它们主要激活具有次优T细胞结合位点的T细胞，使它们无法有效促进抗肿瘤反应。创建能够激活效应T细胞和记忆T细胞以特异性响应肿瘤抗原的强大治疗性CVs是CVs的主要目标之一。在将白细胞介素（IL）和肿瘤浸润性淋巴细胞（TILs）通过移植传递到自体癌症患者后，目标肿瘤退缩表明T细胞对肿瘤退缩至关重要。迄今为止发现的肿瘤抗原可以分为三组：肿瘤特异性分化抗原、肿瘤特异性共享抗原和组织特异性独特抗原。在组织宿主对癌症、病毒性疾病和自身免疫性疾病的免疫反应中，CD4+ T细胞至关重要。端粒酶是通用癌症抗原的一个原型，因为它在大多数肿瘤中表达，并在致癌变化中发挥固有的实际作用。这些理想特性促使研究使用癌症抗原、端粒酶的催化亚基、人类端粒酶逆转录酶（hTERT）作为普遍适用的免疫学靶标的可能性。不同免疫疗法制剂的早期临床测试已证实，在个体中引发针对hTERT的特异性免疫反应是安全的，这可能会影响临床结果。基础免疫学测试已证明hTERT具有免疫原性。本章描述了近年来在癌症免疫疗法疫苗方法的发展中针对的肿瘤抗原，以及可能存在的新型肿瘤抗原类别，如非传统抗原、HERVs和杂合肽。 1.引言 疫苗在预防细菌和病毒性疾病方面取得了成功。自从200多年前第一种疫苗的创建以来，它们通过预防20世纪一些最严重的疾病，挽救了全球数亿人的生命。疫苗通过向个体暴露由细菌（例如，白喉、破伤风和结核）和病毒（例如，麻疹、脊髓灰质炎和小痘）引起的疾病威胁的弱化版本来工作。这使得他们的免疫系统能够根据它们的独特标记，或“抗原”，识别这些威胁，并对抗它们。在个体感染细菌或病毒之前给予这些疫苗通常最有效。癌症是全球死亡的主要原因。然而，由于几个原因，癌症的情况更为复杂，这使得开发治疗或预防癌症的免疫疗法更具挑战性。具体来说，癌细胞比细菌和病毒更接近我们的正常健康细胞，我们的免疫系统将其识别为外来物。此外，每个人的肿瘤在某种程度上是独特的，并包含独特的抗原。因此，需要更先进的方法来开发有效的CVs。目前，每年有超过800万患者死于恶性肿瘤，预计在未来20年内，这一数字将从目前的1400万增加到2200万。结直肠癌、肺癌、前列腺癌和乳腺癌是西方世界最常见的恶性肿瘤类型，使其成为死亡的主要原因之一。随着人口和医疗实践的变化，预计胰腺、肝脏和甲状腺恶性肿瘤将急剧上升。一个多世纪以来，人们一直在研究CVs，但与针对传染病的疫苗的巨大影响相比，它们提供了更多的希望而不是实际的好处。鉴于肿瘤对免疫系统在难以识别的水平上的影响，癌症免疫疗法主要集中于疾病治疗，这比传染病疫苗要克服的障碍要大得多，后者更强调疾病预防。 2.癌症的普遍性 癌症是全球死亡的主要原因。目前，每年有超过800万患者死于恶性肿瘤，预计在未来20年内，从现有的1400万例增加到2200万例。结直肠癌、肺癌、前列腺癌和乳腺癌是西方世界最常见的癌症类型。在美国，肺癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌和结直肠癌（CRC）的致死率最高，也是最常被诊断的恶性肿瘤。人类恶性肿瘤的分子特征揭示了个体肿瘤的复杂性和不同个体之间肿瘤的多样性。因此，更个性化的治疗方法可能会提高治疗效果。治疗方法正逐渐从基于组织转向关注特定肿瘤的突变谱。例如，曲妥珠单抗（抗Her2抗体），以前专门用于治疗乳腺癌，现在也被应用于治疗其他Her2细胞表面表达升高的癌症。 3.肿瘤抗原 癌症免疫疗法的发展集中在识别肿瘤抗原上，这些抗原在主要组织相容性复合体（MHC）分子存在的情况下产生，并有可能触发针对肿瘤的CTL反应。这种反应可能会影响肿瘤细胞的破坏和恶性肿瘤的复发。早期的癌症免疫疗法针对广泛的抗原以防止逃逸变异的出现。这些方法在涉及不同肿瘤类型的众多临床试验中进行了评估，如辐射自体肿瘤细胞、自体肿瘤裂解物、整个肿瘤衍生的mRNA和异体肿瘤细胞系。然而，这些方法面临挑战，包括需要大量的肿瘤组织、收集和处理的复杂性，以及满足良好生产规范（GMP）等监管标准的问题。其中一个主要障碍是整个肿瘤细胞中非肿瘤自身抗原的丰富性，这减少了肿瘤特异性抗原的数量并促进了免疫耐受。为了应对这些挑战，已经开发了治疗性癌症疫苗，通常关注一个或几个癌症抗原。肿瘤抗原分为两类：肿瘤特异性抗原（TSAs）和肿瘤相关抗原（TAAs）。TSAs被认为在癌症疫苗中更有效，因为它们是癌症细胞独有的，并且源于肿瘤特异性的遗传突变或病毒抗原。 4.识别癌症抗原的历史 自19世纪90年代以来，就有报道称首次尝试使用细菌提取物来促进抗肿瘤免疫。根据一项研究，热杀死的粘质沙雷菌和化脓性链球菌被用于患有无法治愈的软组织肉瘤的个体。在治疗时，超过50%的病例中肿瘤已完全退缩，导致五年以上生存率。还发现了温度水平与治疗效果之间的良好相关性。广泛认为抗癌免疫反应是Coley毒素有效性的原因。尽管当代免疫疗法报告了无与伦比的反应率，但其他研究并未显示出类似的有效性，特别是在接受Coley毒素治疗的癌症患者中。Coley毒素可能在癌症患者中失败，因为其有效性依赖于非特异性免疫激活。长期以来一直存在争议，即宿主免疫细胞是否能够区分肿瘤细胞和健康细胞。1953年，Foley提出，通过植入免疫接种可以阻止由甲基胆蒽诱导的肉瘤的生长。“免疫耐受”的概念遭到了怀疑。20世纪70年代后，多项研究表明，化学致癌作用为每只小鼠产生了各种癌症抗原，这些抗原不能转移到另一只小鼠中产生免疫力，即使那只小鼠具有相同的遗传背景并使用了相同的化学致癌作用程序。自从Ikeda等人发现化学产生的肉瘤引起的细胞毒性T细胞反应比自然产生的要大得多且更持久。他们的发现可能表明，在临床环境中使用癌症免疫疗法是具有挑战性的。之后，自20世纪80年代以来，在小鼠模型中由宿主T细胞识别的“癌症抗原”是基于独特的获得性遗传变化，或“新抗原”。也被认为是“癌症抗原”的有癌症-睾丸抗原P1A（小鼠）和MAGE（人类）。除了睾丸外，它们在恶性肿瘤的变异性中被陈述，而不是在标准的成熟组织中。因此，癌症-睾丸抗原发展成为一个流行的免疫疗法靶标。然后，识别癌症抗原的方法稳步改进，特别是基因测序技术，它发展迅速。除了已经识别的来自酪氨酸酶的三种肽之外，发现的五种新抗原来自体细胞突变，为针对新抗原的T细胞在调节黑色素瘤中确立了领导作用。由于下一代测序已在医疗治疗和研究中被商业采用，新抗原现在已成为免疫疗法的中心。 5.人类肿瘤抗原 5.1.肿瘤抗原的鉴定 癌症患者的血液或肿瘤已被用于分离抗肿瘤CTL克隆。表达克隆是一种常用技术，涉及通过转导肿瘤cDNA库分离肽编码基因，并评估转导细胞刺激CTL克隆的能力，以识别这些CTL识别的肽。然后可以通过转染其片段来定义发现的基因编码抗原肽的区域，评估具有适当HLA结合模式的候选肽，以确定它们是否能使靶细胞对CTL裂解敏感。使用这种方法已成功鉴定了许多抗原肽。为了鉴定TAAic肽，“反向免疫学”技术涉及选择具有足够结合HLA的蛋白质内的肽，例如由突变的癌基因产生的蛋白质，该蛋白质要么优先过度表达，要么由肿瘤表达，现在被广泛使用。发展和体外测试潜在肽的HLA结合。最佳结合肽被加载到抗原细胞上，并用于体外刺激T淋巴细胞，以产生识别肽脉冲靶细胞的克隆或CTL线。这种方法的局限性在于肿瘤可能无法有效处理已鉴定的肽。因此，确认表达CTL编码肽的基因的肿瘤细胞至关重要。还应检查细胞或基因的常规转染体，或者通过siRNA或shRNA沉默基因表达的细胞。从肿瘤细胞表面免疫纯化MHC I类分子并释放抗原肽是寻找抗原的第三种技术。这种技术在确定或验证经过翻译后修饰的肽的重要性方面非常有效，例如依赖糖基化的天冬酰胺脱酰胺作用、丝氨酸/苏氨酸磷酸化和肽剪接，尽管必须通过质谱直接识别洗脱的肽序列。使用这些不同的技术，已经发现了被抗肿瘤CTL识别的大量抗原肽。根据亲本基因的表达模式，这些抗原可以很容易地分类（图3.1）。肿瘤细胞用来提升自己的抗原肽的一致更新列表。 图 3.1 CD8 T细胞能够识别的主要肿瘤抗原类别。 6.T细胞可以识别的肿瘤抗体类别 T细胞有时识别的“肿瘤抗原”并不一定是在肿瘤特异性方式下产生的。过度表达在癌细胞中的抗原和仅在癌细胞中表达而不在健康细胞中表达的抗原是其中之一，如图3.1所示，肿瘤抗原的一些特征在表3.1中指定。 6.1.高肿瘤特异性抗原 由于它们的肿瘤特异性表达模式，由点突变、病毒蛋白和癌胚基因产生的三类抗原可以诱导针对肿瘤的T细胞反应（图3.2）。健康细胞（底部面板）和癌细胞（上部面板）被显示产生抗原肽。只有病毒感染的细胞表达病毒抗原。突变可能导致能够与HLA I类分子结合的改变肽，而野生肽则无法（左）。改变可能会改变与HLA I类分子结合的肽，导致循环CTL将改变的肽识别为非自身。全基因组去甲基化导致恶性肿瘤中癌胚基因的表达。由癌胚基因产生的MAGE型抗原不在胚系或正常健康细胞表面表达，因为胚系细胞不包含HLA I类分子。在各种组织中差异表达的基因负责编码分化抗原。因此，某些肿瘤类型和匹配的健康组织表达它们。由于增强的转录或基因扩增，某些基因在恶性肿瘤中过度表达。结果肽在一些或所有健康器官中表达水平低，但在某些恶性肿瘤中大量表达。 6.1.1.病毒抗原 据估计，病毒负责20%的癌症病例，病毒产生的遗传变异可能作为肿瘤抗原肽。一些病毒被认为参与致癌作用。免疫系统识别与人类乳头瘤病毒（HPV）和头颈部恶性肿瘤相关的Epstein-Barr病毒和人类T细胞白血病病毒作为与致癌相关的癌症排斥抗原。其中，宫颈癌显示出HPV病毒抗原E6和E7的高表达，可以作为细胞毒性T细胞的靶标。迄今为止，很少有临床试验检查了与病毒相关的抗原疫苗治疗的有效性和可行性。 6.1.2 由突变基因产生的抗原 大量从恶性肿瘤个体的血液中或肿瘤中获得的CTL已被用于鉴定由广泛表达基因的突变产生的抗原。肽序列中经常添加一个氨基酸，以允许其与MHC I类分子结合或产生CTL可以识别的新抗原因子（图3.2）。突变引起的移码有时可以创建一个新的抗原肽。致癌突变导致一些突变抗原肽。已经证明CDK4基因突变可以改变CDK4与其p16/INK4a抑制剂的结合方式，鼓励细胞无限制地分裂。 图 3.2 细胞毒性T细胞可以检测到的肿瘤抗原。根据亲本基因的表达方式，肿瘤抗原被分类。 CTNNB1基因的变化稳定了β-catenin，增强了其与Lef-Tcf转录因子的相互作用，并产生了一个抗原肽。在黑色素瘤发展中涉及的基因可能因此而持续转激活。已经证明，CTL检测到的CASP8基因突变降低了细胞对凋亡的敏感性。然而，伴随这些变化的抗原肽通常是特定于发现它们的恶性肿瘤的乘客突变。预计具有高突变率的微卫星不稳定性(MSI)+结直肠癌、黑色素瘤、肺癌和其他肿瘤将包含更多的突变抗原，并且更具免疫原性。值得注意的是，一些患者的抗肿瘤CTL反应主要集中于突变表位。令人惊讶的是，只分离出少量能识别来自P53、KRAS或NRAS等在癌症中经常突变的基因的肽的CD8 T细胞。可能，相关的肽不是非常免疫原性，因为这些CTL的绝大多数是通过反向免疫学而不是通过肿瘤培养与淋巴细胞混合发现的。也发现了来自染色体易位如ETV6-AML1和BCR-ABL的肽。 6.1.3.癌胚基因 癌胚基因是肿瘤特异性抗原（TSA）的一个重要额外来源，如图3.2所示。这些基因中包括MAGE基因，它们由位于X染色体的三个区域（称为MAGEA、MAGEC和MAGEB）中的功能性基因组成。在X染色体上发现的其他癌胚基因组包括BAGE、SSX、LAGE/NY-ESO1和GAGE。癌胚基因在多种癌症类型中存在，除了滋养层和胚系细胞外。这些基因由于其启动子区域的去甲基化，表现出肿瘤特异性表达模式，这一过程在进展性恶性肿瘤和男性生殖细胞中全基因组范围内观察到。滋养层和男性生殖细胞缺乏MHC I类分子，阻止了抗原呈现给T细胞。由癌胚基因产生的抗原肽衍生的MAGE型抗原似乎特异于肿瘤，使它们成为免疫治疗的潜在靶标，而不会对皮肤患者产生不良影响。然而，重要的是要注意，最近的发现表明MAGE-A12在脑细胞中的表达较低。某些异常转录本，无论是在健康组织中低水平表达还是沉默但在肿瘤中上调，已被识别为产生抗原肽。这些转录本与癌症相关基因不同。此外，还发现了来自在睾丸和急性髓系白血病中表达的具有抗凋亡和促增殖特性的cyclin-A1蛋白的肽。 6.2.低肿瘤特异性抗原 这类抗原包括分化抗原和在恶性肿瘤中过度表达的基因产生的抗原（图3.2）。 6.2.1.组织分化抗原 分化抗原专门在肿瘤细胞和由于组织分化的特殊特征而产生的正常组织细胞中表达。对这些抗原的一项研究表明，“肿瘤抗原”使黑色素瘤个体中的细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）能够在正常黑色素细胞和肿瘤细胞之间进行区分。Gp100、MART-1/Melan A、酪氨酸酶等组织分化抗原在黑色素瘤患者的肿瘤细胞和黑色素细胞中表达。它们是专门在健康黑色素细胞的黑色素体中表达的酶，在恶性黑色素瘤细胞中过度表达，以允许区分表达水平。在对临床试验的综合审查中，使用Melan-A/MART-1、gp100和酪氨酸酶等黑色素细胞分化抗原的免疫治疗在转移性黑色素瘤个体中显示出2.5%的反应率。此外，使用与系统性和眼部自身免疫性相关的黑色素细胞分化抗原的副作用也有记录。因此，作为免疫治疗靶标，组织分化抗原已失去了部分相关性。 6.2.2.过度表达抗原 检测肿瘤抗原，这些抗原只需要少量HLA-肽复合物就能在细胞表面被检测到，应该是抗肿瘤免疫反应的第一步。阈值应该帮助T淋巴细胞识别与健康细胞相比在肿瘤细胞中过度表达的蛋白质产生的肽，从而产生肿瘤特异性。这些肿瘤抗原被称为“过度表达抗原”，因为它们在癌细胞中大量表达，主要有助于肿瘤细胞的发展和存在。例如，一些癌症类型过度表达了CEA、WT-1和Her-2/neu。一个重要的问题是，过度表达的抗原缺乏足够的抗原性和特异性用于临床应用。要被T细胞特别识别，健康组织和恶性组织之间的表达水平必须有显著差异。许多上皮性癌症，如卵巢和乳腺癌变，过度表达了编码生长因子受体的Her-2/neu癌基因。几项关于过度表达抗原的临床研究表明效果最小且有一些负面后果。 6.3.癌-睾丸抗原 只有正常的睾丸、正常的胎盘和癌组织表达癌-睾丸抗原，这些抗原被所有癌症类型的个体共享。HLA I类分子在性腺组织中不表达，这阻止了它们被识别为细胞毒性T细胞的目标；因此，它不能引发肿瘤特异性免疫反应。在1990年代，发现了最初的癌-睾丸抗原MAGEA1。已经发现了许多癌-睾丸抗原，如MAGE、XAGE1和NY-ESO-1，由于它们具有高度的肿瘤抗原性，可能被用作潜在的免疫治疗靶点。NY-ESO-1和MAGE，这两个睾丸癌抗原一直是临床试验的焦点，被发现作为CV治疗的效果只是边缘性的。需要注意的是，少数睾丸癌抗原在胚胎期的正常或健康组织中表达，一些成人组织中也有，而且，同源家族的某些分子存在于健康组织中，尽管它们中的大多数具有更高的抗原性，可能被认为是CVs有希望的靶点。 6.4.新抗原 在癌变的多步骤过程中，体细胞基因积累，涉及与细胞增殖、发育和生存相关的基因的重要突变（称为“驱动基因突变”），以及由基因组不稳定性引起的大量并发突变，这些不稳定性与黑色素瘤风险因素如紫外线和烟草使用有关（称为“乘客突变”）。新抗原是每个个体独有的非自身蛋白，源于癌症特异性基因变化，在健康组织中不存在。由于在胸腺成熟期间没有发展出免疫耐受，T细胞可以对新抗原产生强烈的免疫反应。这种反应是特定于肿瘤的，不会在健康细胞中发生，使新抗原成为各种癌症免疫治疗的有希望的靶点。 6.5.癌胎儿抗原 典型的胎儿抗原在成熟过程中被关闭，但在改造细胞中重新开启，包括胎蛋白和癌胎儿抗原。在体外、小鼠模型和临床研究中，这些抗原已显示出免疫原性，并作为靶点具有一定的用途。2008年，国家癌症研究所举办了一个研讨会，对当时发现的抗原进行评级和分类，发布了最优先的抗原和最有实验证据的肿瘤排斥证据。大多数抗原是非突变抗原，传统的，它们根据先前建立的标准进行分组，如它们的肿瘤特异性、免疫原性、致癌性、过表达的发生率和在恶性干细胞中的表达。上述肿瘤特异性抗原类别并非肿瘤特异性。P53肿瘤抑制基因和RAS癌基因都有广泛的突变。人们认为这些突变不太可能导致免疫原性、处理和呈现MHC限制性表位在足够相互的MHC I类分子或MHC II类分子中，并且在临床研究中通过免疫疗法估计和识别将是有问题的，几乎是不可能的。针对这些个人特定变化的高度有益的T细胞已经开始被认识。然而，可以预测肽表位将如何被翻译、呈现和结合的测序技术和算法已经改进。寻找可靶向的、患者特定的突变是困难的，这延迟了治疗。然而，许多研究人员正在集中研究策略，以更快地找到这样的肿瘤特异性靶点。 6.6.表位扩散 限制自身免疫和建立非常精确的记忆和效应细胞反应是针对特定肿瘤抗原的结果。这样的技术可能在生物学上产生相反的影响。这可能会增加对疫苗治疗有抵抗力的肿瘤细胞的数量，因为它们缺乏目标肿瘤抗原。然而，抗药性肿瘤表达额外抗原并随后增加与肿瘤相反的免疫反应的能力，即，对疫苗中不存在的抗原产生免疫反应，可能是一种好处。表位扩散就是这种现象的术语。表位扩散，也称为决定因素扩散，是一种免疫反应从一个抗原转移到同一组织中产生的另一个抗原的过程。自身免疫疾病研究和癌症免疫治疗研究都观察到了这种自发现象。肿瘤排斥的一个重要事件可能是由于T细胞攻击和破坏肿瘤细胞，导致肿瘤抗原从肿瘤细胞中释放出来，帮助针对各种抗原的后续T细胞浪潮。为了提供针对可能导致肿瘤排斥的未识别的、患者特定的突变抗原的免疫接种，针对共同抗原的免疫疗法可能是有用的。许多临床试验已经描绘了临床结果和对疫苗目标抗原的免疫反应之间没有联系。这可能与抗原的分布和对未测量的肿瘤抗原的免疫反应的出现有关。含有TAA的疫苗的关键作用可能是将表位转移到TSA，这反过来更热烈和有效地刺激T淋巴细胞，以诱导肿瘤排斥。 6.7.糖脂和糖蛋白作为抗原 恶性细胞膜上的碳水化合物被糖基转移酶和糖苷酶改变，与健康细胞上典型的分子不同。肿瘤细胞碳水化合物结构主要在数量上而非质量上发生变化。这句话表明，与正常细胞相比，肿瘤细胞显示出较少的碳水化合物结构。尽管如此，肿瘤细胞的细胞表面碳水化合物可能具有多种结构，允许免疫方法将它们识别为肿瘤相关抗原（TAAs）。含有碳水化合物的抗原在识别发育和分化过程中的细胞中可能至关重要。确定与肿瘤相关的碳水化合物抗原（TACAs）主要有两种方法。第一种方法涉及系统分析碳水化合物的化学成分和结构；如果发现了这样的结构，就会导致形成针对异常成分的抗体（Abs）。另一种方法使用专门针对肿瘤特异性碳水化合物抗原的单克隆抗体。使用这种方法，在多种人类恶性肿瘤中发现了几个糖脂抗原。 7.利用肿瘤抗原的生物标志物 除了作为潜在的治疗靶点，肿瘤特异性抗原还可用于恶性肿瘤的识别和分类。肿瘤抗原通常在血液中被检测到，因为它们通常被肿瘤分泌到血流中。此外，在化疗或放疗破坏肿瘤细胞后，通常会释放出更多的肿瘤抗原，这些抗原通常位于细胞内结构或细胞器中。因此，它们可以帮助评估治疗反应和治疗后复发的风险。由于技术进步，现在可以轻松获得基于蛋白质的生物标志物，如肿瘤抗原。例如，组织分化抗原和前列腺特异性抗原（PSA）经常用作前列腺癌（PC）的预后和诊断标志物。除了PSA，其他肿瘤抗原如乳腺癌的Survivin、肝细胞癌（HCC）的MAGE以及卵巢癌的TP53和NY-ESO-1也可以作为诊断标志物。然而，除了PSA，这些标志物由于特异性和敏感性有限，并不常用，临床上也不广泛可用。 8.人类肿瘤抗原的处理 当蛋白酶体分解细胞蛋白时，会创建可以被CTL检测到的肽。有四种不同类型的蛋白酶体，包括常规蛋白酶体和免疫蛋白酶体。TAP转运蛋白然后将蛋白酶体分解后剩余的肽转移到内质网腔中。由TAP、分子伴侣钙网蛋白、氧化还原酶ERp57和tapasin（Tpn）组成的肽负载复合物可以在将它们装载到HLA I类分子（CRT）之前进一步修剪具有延伸N末端的肽。分泌途径然后将肽/HLA复合物运输到细胞膜。 8.1.MHC I类呈递途径 蛋白酶体，一个大型胞质复合物，降解细胞蛋白以产生CTL识别的抗原肽，主要负责此过程（图3.3）。与抗原处理相关的转运蛋白（TAP）将从蛋白酶体降解中释放的肽转移到内质网腔（ER）（图3.3）。一旦进入氨基肽酶，如ERAP1和ERAP2，可以进一步修剪肽。由TAP、Tpn、ERp57和钙网蛋白组成的复合物有助于具有正确序列和大小的肽与MHC I类分子结合。稳定的MHC/肽I类复合物将留在ER，而移动到细胞膜（图3.3）。正常细胞膜上显示的大多数MHC/肽复合物不会被T细胞识别，因为耐受性。然而，在这些情况下，肿瘤细胞或被病毒攻击的细胞具有从病毒相关蛋白中形成的新型肽库，可以对这些肽发展出免疫反应。免疫系统能够识别细胞蛋白含量的微小变化，因为CTL能够识别具有仅有10个MHC/肽复合物的细胞。 图3.3 T-淋巴细胞 CD8+ 处理肿瘤抗原。 8.2.蛋白酶体 蛋白酶体20S是大型的，具有桶状结构，由4个堆叠的七聚体环组成，定义了一个酶降解室。20S蛋白酶体的两个内环由亚类（α1-α7）组成，两个外环由亚类（β1-β7）组成，其中三个（β1、β2和β5）在脊椎动物的蛋白酶体中具有催化作用。蛋白酶体26S是在蛋白酶体20S与19S调节复合物结合时形成的，负责降解泛素化蛋白。蛋白酶体对产生抗原肽的必要性最初的迹象之一是发现泛素化对展示抗原卵清蛋白（OVA）模型是必需的。后来，使用特定的细胞通透性蛋白酶体阻断剂与蛋白酶体催化亚型的羟基团结合，无论是不可逆的还是可逆的，都证实了蛋白酶体在产生抗原肽和将肽一般交付给MHC I类分子中的作用。据信，每个催化亚单位的N末端苏氨酸位点的羟基团执行启动肽键断裂的亲核攻击，这是根据突变研究和结合抑制剂的蛋白酶体晶体结构研究。这种亲核攻击糖苷键导致发展出一个仍然通过酯连接与蛋白酶体连接的肽片段。在催化区立即被水分子分解后，释放的肽随后返回到细胞质。 与蛋白酶体相关的三种重要的催化活性类型是肽基-谷氨酰胺肽键水解（PGPH）、类糜蛋白酶作用和类胰蛋白酶作用，它们分别在酸性、疏水性和碱性残基后断裂。对酵母蛋白酶体突变体的研究表明，类似半胱天冬酶的活性与β1亚类有关，而类糜蛋白酶和类胰蛋白酶作用分别与β2和β5亚类有关。然而，还有其他因素在起作用，因为一些蛋白酶体亚基在它们的特异性上表现出重叠，并且靠近切割位点的序列也会影响切割的强度。根据蛋白酶体破坏肽段的效率，MHC类I分子将在细胞膜上展示不同类型的肽段。已经发现蛋白酶体有可能将来自母蛋白的远距离肽片段结合起来形成抗原肽。肽段拼接是由于蛋白酶体催化室内的蛋白质降解而发生的。肽段通过转肽酶作用拼接，其中催化室内的肽片段的N-末端以亲核攻击攻击酰基-酶中间体。这一过程导致亲核肽的N-末端与从酰基-酶中间体释放的肽的C-末端之间形成了一个新的肽键。已经鉴定出五种拼接的抗原肽，其中三种由与母蛋白序列相反的片段组成。通过检查由gp100制成的拼接肽，其中包含RSYVPLAH片段连接到其C-末端的单个精氨酸（R），我们可以展示出防御性的亲核肽需要至少三个氨基酸的大小来完成拼接过程（RSYVPLAH R）。在拼接的RSYVPLAH R肽中，蛋白酶体必须进一步修剪延长的C-末端以创建最终的抗原肽。一项新研究表明，亲核肽将被安排在催化区域的一个单独空间内，与底物受体位点分开。这允许肽底物的C末端区域从蛋白水解切割点。肽拼接过程可以通过亲核肽在指定口袋内的安排而得到促进和加速。 8.3.标准蛋白酶体和免疫蛋白酶体 为了生成免疫蛋白酶体，LMP-7(5i)、MECL-1(2i)和LMP-2(1i)，三个额外的催化亚基，被纳入免疫细胞中的蛋白酶体，取代了1、2和5亚基。细胞因子的作用增强了免疫蛋白酶体在疏水性和碱性残基后断裂的倾向，提高了细胞产生MHC类I分子所需的肽段的能力，这些肽段通常需要这些残基在它们的C末端。对缺乏2（5i或1i）或3个免疫亚类的老鼠的研究，无法展示MHC类I的几个表位，支持了这一理论。产生免疫蛋白酶体的细胞与产生常规蛋白酶体的细胞相比，具有不同的肽段库，这一事实可能显著影响癌症治疗策略的发展。在第一种情况下，肾细胞癌为CTL提供了来自常见蛋白RU1的肽段，而不是自体EBV转化的B细胞。这一点通过观察EBV转化的B细胞与肿瘤细胞相比，有大量的免疫蛋白酶体，这些细胞无法合成抗原肽，得到了阐明。随后，发现包括Melan-A/MART126-35、HLA-A2限制性肽段、酪氨酸酶369-377和gp100209-217在内的几个额外的肽段，被常规蛋白酶体而不是免疫蛋白酶体消化。在体外消化的长肽前体表明，一种类型的蛋白酶体未能处理抗原肽往往是由于内部断裂导致肽段丢失。有趣的是，对蛋白酶体处理的拼接肽的分析表明，一个肽主要由免疫蛋白酶体产生，而三个拼接肽主要由标准蛋白酶体产生。成功的肽拼接需要每种蛋白酶体都能产生所涉及的肽片段。8.4.中间蛋白酶体 发现少数组织拥有一些但不是全部的蛋白酶体免疫亚基，这表明存在由常规和免疫亚基融合组成的蛋白酶体（中间型）。通过识别其天然结构中的蛋白酶体，并利用针对蛋白酶体催化亚基的一组特殊的抗体，已经显示存在具有1（β5i）或2（β5i β1i）免疫亚基的中间蛋白酶体。根据依赖于前体亚类特性的蛋白酶体组装原则，没有其他形式的中间蛋白酶体。 8.5.产生抗原肽的额外蛋白酶 尽管大多数抗原肽被认为是由蛋白酶体产生的，但也有一些是由细胞质蛋白酶如胰岛素降解酶或TPPII降解的。最近的研究表明，蛋白酶体需要对PRAME肽的N末端进行切割，而thimet寡肽酶和nardilysin需要按顺序对C末端进行切割。已经提出，蛋白酶体辅助的MHC类I肽的羧基末端的修饰是由血管紧张素转换酶（ACE）促进的。在免疫治疗的背景下，通过蛋白酶体独立机制产生的抗原肽可能成为有吸引力的目标，因为这些抗原中的一些可能被肿瘤持续表达，尽管它们处于环境之中。 8.6.人类肿瘤抗原中心耐受 癌症患者的血液中显示CTL针对分化抗原或由癌-生殖系基因产生的抗原，这表明对这些抗原的先天免疫耐受要么不存在，要么不充分。值得注意的是，免疫或中间型蛋白酶体通常比常规蛋白酶体更有效地产生由MAGE基因编码的抗原肽。相比之下，免疫或中间型蛋白酶体不产生变异抗原，这些抗原通常由常规蛋白酶体产生。尽管胸腺上皮细胞的确切蛋白酶体组成尚不清楚，但假设其主要由免疫蛋白酶体组成。在癌症患者的肿瘤或血液中识别免疫蛋白酶体依赖性肽段的T淋巴细胞的缺乏可能反映了它们对分化抗原的有效中心耐受：胸腺选择不会放过针对免疫蛋白酶体依赖性分化肽段的T淋巴细胞。对于由癌-生殖系基因编码的抗原，情况更为复杂。如前所述，通常使用免疫或中间型蛋白酶体来处理这些抗原，这表明对这些抗原缺乏中心耐受。中心耐受的缺乏以前归因于这些基因在胸腺中不表达。然而，研究表明，髓质胸腺上皮细胞（mTEC），提供负选择的抗原，表达了多种癌-生殖系基因，但浓度较低。因此，预测mTEC中这些基因表达的减少会导致部分耐受，并有助于仅选择高亲和力T细胞的负选择。那些逃脱胸腺负选择的低亲和力T细胞将是癌症患者血液中发现的抗肿瘤T淋巴细胞的来源。这一观点得到了使用敲除小鼠癌-生殖系基因P1A的研究的支持。这些小鼠被认为具有非选择性的抗P1A T细胞库，包括T细胞。出乎意料的是，尽管在mTEC中可观察到P1A的表达，P1A-KO小鼠的抗P1A T细胞数量仅略有增加，它们的库与野生小鼠的区别很小。这表明野生型小鼠对这种抗原只有最小的耐受性。对抗原P1A的中心耐受性的明显缺乏可能是由于mTEC无法降解P1A肽段。因此，应该确定胸腺上皮细胞中表达的特定蛋白酶体类型，以更好地识别对癌-生殖系基因缺乏中心耐受性，并能够精确指出外周T细胞应具有相对较强亲和力的抗原，以及中心耐受性有限的抗原。 9.端粒酶作为通用肿瘤抗原 人类端粒酶逆转录酶（hTERT），端粒酶的催化亚基，被提出作为共同肿瘤抗原的原型。MDM2、CYP 1B1和Survivin是先前已确定的其他经典肿瘤抗原。人类端粒由重复的DNA序列组成，是非编码区域，位于染色体末端，核苷酸序列为TTAGGG。端粒酶全酶通过酶促保护端粒DNA来维持染色体稳定性，否则端粒DNA会随着多次细胞分裂而逐渐丢失，特别是在癌细胞中。端粒酶及其相关蛋白，如hTERT的生物学特性，如前所述，已被广泛研究。大多数人类细胞不具有端粒酶活性，并且经历有限次数的分裂，导致端粒缩短。相比之下，大多数人类癌症表现出hTERT表达，具有显著的端粒酶活性，并维持端粒长度。端粒酶复合体的限速成分hTERT，在端粒酶活性和其表达水平之间显示出强烈的相关性。通过使复制潜力无限化，肿瘤细胞中hTERT的表达已与肿瘤生长相关，并显著促进了肿瘤转化。例如，研究表明，人类中称为hTERT的遗传元素之一，可以使健康人的成纤维细胞和上皮细胞发展成肿瘤细胞。此外，在hTERT阳性肿瘤细胞中抑制端粒酶活性会导致端粒长度逐渐减少，并最终导致凋亡。 9.1.使用hTERT在临床试验中的免疫疗法 对癌症患者进行hTERT疫苗的临床评估，源于将hTERT作为TAA的转化和基础免疫学研究的结果。已有几项涉及近200名患者的报告试验（表3.2），结果已在其他地方进行了详细检查。在一项临床研究中，检查了19名转移性、HLA-A2阳性乳腺癌患者。他们接受了多达八次皮下（SC）注射的hTERT I540肽和GM-CSF。在治疗前后采集的外周血样本在体外分析，发现68%的患者显示出免疫反应。超过4%的CD8+肿瘤浸润性淋巴细胞（TILs）在免疫后但免疫前对I540 hTERT特异。TILs诱导的临床迹象包括肿瘤部位的疼痛和瘙痒，而病理迹象包括肿瘤微环境（TME）的显著变化，如坏死、水肿和组织细胞浸润。此外，观察到外周血hTERT特异性CD8+ T细胞可以被激活、增殖、分泌IFN-γ并消除肿瘤。一项探索性里程碑分析揭示了这些患者的总体生存（OS）与对hTERT的特定CD8+ T细胞免疫反应之间的相关性。 只有少数几种疫苗成分经过了彻底的研究，例如装载有hTERT抗原的B细胞或树突状细胞（DCs）、额外的佐剂、其他肽、与细胞因子结合的肽等。由于hTERT几乎在所有肿瘤中都有表达，包括乳腺癌、胰腺癌、肺癌和前列腺恶性肿瘤在内的多种肿瘤类型都已进行了研究。尽管这些研究中个体的客观反应率较低，但他们通常拥有较大的晚期肿瘤，并且之前已经拒绝过治疗。尽管在制备和试验设计上有所变化，且大多数患者处于晚期，但在这些初步试验中观察到了几个一致的结果。针对hTERT的免疫疗法已经显示出可以不造成伤害地引发免疫反应，能够影响临床结果，并且能够调节肿瘤微环境（TME）的变化。 9.2.使用疫苗阻断hTERT可能产生的副作用 尽管hTERT疫苗并未与患者中的重大不良事件（AEs）相关联，但目前尚无可用的长期安全信息。目前尚不清楚更强烈的hTERT免疫反应是否对表达hTERT的正常细胞产生负面影响。虽然大多数重要器官中缺乏端粒酶活性，但在造血干细胞（HSCs）、上皮细胞、受刺激的性腺细胞、淋巴细胞和基底角质细胞中检测到了HTERT mRNA的表达。临床前研究表明，CD34+刺激的T淋巴细胞在体外不会被hTERT特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）溶解。同样，在暴露于hTERT特异性CTLs后，用患者造血祖细胞恢复的免疫缺陷动物也未显示出对健康骨髓细胞的CTL介导的毒性。然而，遗传突变在hTERT或相关基因中的个体可能会因长期端粒酶不足而经历显著的临床效应。这些观察对于规划和进行针对hTERT的临床试验至关重要。 9.3.第二代hTERT疫苗接种 正在使用几种策略增强hTERT疫苗在体内引发的免疫反应。一种方法使用全长hTERT重组构建物而不是单个肽，以同时针对多个CD4和CD8表位。在一项治疗试验中，患有前列腺恶性肿瘤的患者接受了转染表达HTERT mRNA的自体DCs。该治疗在这项研究中被良好耐受。免疫后，检测到了具有hTERT特异性的CD8+和CD4+ T细胞。这些细胞与循环微转移灶的分子清除和前列腺特异性抗原的倍增时间增加相关。此外，95%患者的外周血显示hTERT特异性CD8+ T细胞增加。携带全长hTERT的病毒载体和直接注射编码全长HTERT的质粒DNA是另外两种选择。这两种选择都将避免与生产装载抗原的DCs相关的复杂制造和医疗问题。 最终目标是开发能够引发与病毒引发的特异性免疫反应一样强大和稳健的制剂。通过免疫接种针对各种肿瘤抗原所实现的T细胞反应频率仍然显著低于已知能够对抗病毒感染的T细胞反应。这一观察可能由肿瘤进展期间激活的几个已确立的免疫逃逸机制来解释，这些机制涉及宿主衍生因素和肿瘤起源因素（如GF、IL-10和PD-L1），它们抑制细胞免疫（例如，骨髓源性抑制细胞（MDSCs）、PD-1、调节性T细胞（TReg）和CTLA-4）。随着对这些过程的分子和细胞基础的更好理解，临床上针对这些机制已成为推进最新癌症免疫疗法的关键重点。 9.4.hTERT疫苗的未来方向和影响 总体来看，显然有效的hTERT特异性免疫疗法策略必须最大化免疫反应的诱导，并避免宿主和肿瘤所提出的免疫抵抗；然而，使用这种肿瘤的共同抗原来预防黑色素瘤，而不是疫苗，可能最终是一种具有最大科学潜力的方法。由于超过85%的患者恶性肿瘤过表达hTERT，合理地看待患者接受针对hTERT和其他常见肿瘤抗原的疫苗接种，作为一种阻止癌症生长或复发的方式，是有意义的。这一策略最终将在没有癌症诊断的健康人和轻微残留疾病存在的情况下（例如，在辅助治疗后）评估hTERT疫苗。这可能包括那些有遗传条件如BRCA1或BRCA2突变，使他们处于发展癌症的高遗传风险的人。 需要强调的是，尽管已确认产生了特定的免疫反应，但对于大多数患者来说，治疗性癌症免疫疗法一直是一个实验性的失败。治疗性癌症免疫疗法在许多III期临床研究中并未超过对照组的临床终点，如总生存期（OS）。然而，肿瘤负担和之前的免疫毒性治疗可能会严重影响患者的免疫能力，以至于尝试使用治疗性疫苗可能在所有但最孤立的案例中都是无效的。因此，一旦证明了安全性，研究人员正在积极地将创新的疫苗技术从转移性癌症转移到接受辅助治疗后有最小残留疾病的个体。也有理由认为，癌症免疫疗法的初始人体试验应该在辅助或其他低残留疾病环境中进行，这在伦理和科学上都是合理的。现在可能是时候用hTERT疫苗来测试这个想法了；然而，这还没有完成。hTERT疫苗要成功，必须克服长期免疫记忆的发展和特定毒性谱的创建这两个障碍。然而，目前有资源和机会在晚期癌症患者大量疾病的情况下评估端粒酶疫苗。 10.癌症疫苗的未来影响 10.1.癌症疫苗的前景 最近关于抗肿瘤T细胞的过继传递或使用T细胞激活抗体的研究显示了癌症疫苗技术的效力。许多接受这些药物治疗的患者取得了显著的临床结果，其中一些个体甚至在治疗开始后多年似乎没有疾病。然而，正如已经提到的，这两种治疗常常导致强烈的自身免疫不良反应的出现，这些反应必须得到管理。尽管对这些治疗的反应显示出相当的潜力，但许多患者继续对过继转移和刺激抗体疗法产生抵抗。治疗性癌症疫苗（CVs）旨在刺激已经在癌症个体的肿瘤或血液中发现的抗肿瘤CTL。此外，疫苗的目标T细胞经历了胸腺选择，这应该减少对健康器官释放的自身抗原产生不利免疫反应的风险。这两个因素共同使得疫苗特别有效地激活抗疫苗T细胞。总的来说，这些因素使得疫苗看起来更安全、更易于控制。更具体地说，在混合肿瘤淋巴细胞培养中发现的抗原肽，或者当来自癌症个体的T细胞在体外被肿瘤的自体细胞诱导时，应该是无害的，因为它们常常针对的是已经显示出先前冲动反应的抗原，通常没有任何明显的不良反应。然而，由于不一定清楚免疫系统是否能够成功攻击这些抗原，因此正确评估使用逆向疫苗方法发现的抗原的安全性非常重要，这种方法包括体外用脉冲DCs对癌症个体的T细胞进行初始。 即使在少数对含有MAGE-1或MAGE-3的肽、全长蛋白或病毒疫苗有反应的个体中，也没有观察到癌症患者的队列中出现不良反应。与抗疫苗T细胞相反，对免疫疗法有反应的个体在接种疫苗后其转移灶中抗肿瘤T细胞的存在显著增加。这一发现表明，少数抗疫苗CTL有可能启动或重新激活针对与免疫疗法无关的肿瘤抗原的T细胞。 10.2.疫苗的挑战：免疫抑制和肿瘤逃逸 大多数患有黑色素瘤的个体似乎对其肿瘤产生了自发的T细胞反应，这一点现在已经很好地理解了。虽然肿瘤部位存在TIL通常与良好的预后相关，但在许多情况下，这些TIL被肿瘤生长所压倒，并在肿瘤部位保持不活跃和被激活，这很可能解释了为什么到目前为止，癌症患者接种疫苗只导致了5-10%的临床反应。 有几个因素可能导致抗肿瘤淋巴细胞无法消除肿瘤。其中之一是T细胞先前在肿瘤上识别的抗原的丢失。这种抗原丢失的后果是由于影响抗原肽、HLA分子中的任何蛋白质以及处理MHC类I的机器的遗传缺陷。一个极端的例子是TAP转运体的减少，也称为tapasin，它在各种癌症类型中发现，影响抗原肽的处理和呈递。由淋巴细胞或NK细胞产生的细胞因子，如IFN，也可以改变肿瘤肽的谱系。IFN减少了正常蛋白酶体合成或降解的肽的呈递，同时通过上调HLA类I重链、TAP2、Tapasin、TAP1或2m的表达增强某些抗原肽的呈递。 确实，例如，免疫蛋白酶体并不处理来自黑色素瘤分化抗原的肽；相反，它们被常规蛋白酶体消化。因此，可能发生以下一系列事件：抗癌淋巴细胞在T细胞肿瘤浸润的初始阶段攻击肿瘤细胞。这些T细胞检测抗原的能力很可能是由于恶性肿瘤中标准或中间蛋白酶体的稳态表达。这些T细胞分泌INF，改变了附近肿瘤细胞的蛋白酶体组成。因此，肿瘤细胞开始表达依赖于免疫蛋白酶体的抗原，这些抗原可能被额外的抗癌T细胞识别，而不是依赖于标准蛋白酶体的抗原，这是免疫反应最初建立的。通过减少对抗癌T细胞出现肽的基因表达，肿瘤可能在整个途径中定期逃避免疫反应，这是在抗肿瘤CTL的选择压力下进行的。此外，IFN在肿瘤部位刺激的细胞产生的免疫调节物质的产生降低了免疫反应，并阻碍了抗肿瘤CTL的活动。 一种免疫调节物质是色氨酸2,3-双加氧酶（IDO）酶，它分解色氨酸并产生代谢产物，这些代谢产物限制了T细胞的增殖和活性，同时增强了肿瘤的生存和移动能力。另一个例子是程序性死亡配体1（PD-L1），它与其T细胞受体PD-1一起作用，减少T细胞的粘附、细胞因子和增殖，由肿瘤细胞释放，这也由干扰素触发。在这种情况下，通过使用细胞疫苗（CVs）和同时中和抗PD-L1或抗PD-1抗体来逆转局部免疫抑制，可能有助于维持抗癌T细胞反应的效力。通过延长携带肿瘤动物的寿命和增强抗原特异性免疫反应，PD-1抑制提高了在临床前结直肠癌和黑色素瘤模型中释放GM-CSF的肿瘤细胞疫苗的效率。当PD-1抑制和4-1BB刺激在不同的小鼠黑色素瘤模型中使用时，用表达多巴色素异构酶抗原的重组人腺病毒进行的免疫接种显著改善，肿瘤完全消失。最后，另一项研究发现，将表达GM-CSF的肿瘤细胞免疫疗法与PD-1和CTLA-4抑制抗体结合使用，有效地增强了动物卵巢和结肠癌（CC）模型中的肿瘤排斥反应。肿瘤特异性CTL的增殖、功能和肿瘤浸润因此增加。相反，抑制性Tregs的数量减少并在肿瘤部位被阻断。这些发现展示了组合疗法如何提高癌症疫苗的效率。 10.3.肿瘤疫苗的前景 开发更有效的免疫治疗性疫苗目前的障碍在于肿瘤逃避和免疫抑制的挑战。癌症免疫疗法应该旨在激活针对广泛抗原的T细胞，以最小化抗原变异逃逸的风险。此外，应该优先考虑针对具有高肿瘤特异性和普遍表达的抗原的疫苗。考虑到中间蛋白酶在大多数癌症中普遍存在，并且在暴露于炎症环境中的肿瘤中免疫蛋白酶起着至关重要的作用，由免疫蛋白酶和中间蛋白酶处理的肿瘤抗原似乎是这种情况下最有希望的方法。还必须考虑即使在抗原处理机制（如ERAP、tapasin和TAP）受损时仍能表达的相关靶标作为抗原。针对ER的蛋白质的信号序列是TAP独立抗原肽的主要来源，这些肽在被信号肽酶和肽酶切割后在ER中释放。在缺乏MHC类I处理机制的细胞中特别产生的抗原属于一类被称为与受损肽处理相关的T细胞表位的抗原。与受损肽处理抗原相关的T细胞表位由于这些肽与通过TAP运输的肽相比被排除在ER腔外，因此不会出现在TAP阳性细胞的表面。尽管母蛋白在胸腺细胞中有效表达，但野生型小鼠的胸腺上皮细胞无法消化与受损肽处理肽相关的T细胞表位，这与在TAP敲除动物中观察到的情况不同。因此，在野生型动物中不应发生识别这种TEIPP抗原的T细胞的负选择，与受损肽处理相关的T细胞表位的T细胞预计将比其他经过负选择的抗肿瘤T细胞表现出更大的亲和力。为了绕过肿瘤逃逸机制，现在可以识别在缺乏MHC类I处理机制组件或TAP的情况下传递的新肿瘤抗原。 CVs的分布方法也将显著影响其效果。理想情况下，疫苗应该引发强大的CTL反应。基于肽或蛋白质的疫苗在这方面并不理想。相反，基于产生所需抗原的病毒载体的疫苗具有高度的免疫原性，因为它们刺激适应性和先天免疫系统。具体来说，基于病毒的疫苗有效地感染DC，这对于启动抗肿瘤CTL至关重要。重组病毒载体已被证明可以诱导与抗癌效果相关的非常强大的CTL反应。然而，为了减轻某些载体在单次注射后由载体特异性中和抗体引起的不良反应，通常需要使用异源原始增强方法，其中增强和原始使用不同的载体。最后，逆转局部免疫抑制对于癌症免疫疗法的发展至关重要。抗癌疫苗可能对肿瘤表现出最小免疫抑制的个体最有效。研究已经广泛集中在开发有效的免疫调节酶抑制剂，如精氨酸酶、色氨酸2,3-双加氧酶（TDO）和IDO。还可以针对包括可溶性物质如白介素-10（IL-10）、半乳糖凝集素和转化生长因子-β（TGF-β）在内的各种其他免疫抑制因子，以及在肿瘤部位存在的MDSCs、TRegs和耐受性DCs等抑制性细胞。当采用T细胞转移癌症免疫疗法和检查点阻断抑制剂与针对这些免疫抑制元素的新药物结合时，未来的治疗方法显示出巨大的希望。 11.结论 疫苗在预防病毒性和细菌性疾病方面的有效性已经得到证实。自从200多年前第一个疫苗被开发以来，它通过避免20世纪一些最严重的疾病，帮助挽救了数亿人的生命。尽管临床前数据常常显示出有希望的结果，但临床试验尚未产生足够的数据。这些挫折的主要原因在于难以识别肿瘤特异性抗原，这些抗原应该相对于健康细胞被肿瘤细胞过度表达。大多数用于癌症免疫疗法的肿瘤抗原是非突变的自身抗原和过度表达的自身抗原，它们主要刺激T细胞，但T细胞结合位点不足，阻碍了它们有效地触发抗肿瘤反应。通过将IL和浸润肿瘤的淋巴细胞转移到患有自体癌症的人中，实现了客观的肿瘤缩小，这表明T细胞对肿瘤缩小至关重要。到目前为止，已经确定了三种类型的肿瘤抗原：组织特异性抗原、肿瘤特异性共享抗原和肿瘤特异性分化抗原。CD4+ T细胞对于规划宿主对癌症、感染性和自身免疫性疾病的反应至关重要。由于端粒酶在绝大多数癌症中表达，并在恶性转化中发挥着重要的实际功能，因此它是全面癌症抗原的模板。鉴于这些有利特征，已经探索了使用端粒酶催化亚型hTERT作为广泛适用的免疫学靶标的可能性。不同免疫疗法制剂的初步临床试验表明，在个体中诱导针对hTERT的免疫反应是可行的，这可能会影响临床结果。通过基础免疫学测试已经证明hTERT具有免疫原性。 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

点击蓝字 关注我们 编者按：近日，法国索邦大学Cordeliers研究中心Jean-Charles Nault教授研究团队在Gut杂志发表了一项最新临床研究成果，揭示了循环肿瘤DNA（ctDNA）在肝细胞癌（HCC）患者中的动态变化及其临床意义。该项研究为HCC的临床管理带来了新的视角和工具，ctDNA监测有望在未来成为HCC诊断和治疗的重要辅助手段。 文章发表封图 （ doi: 10.1136/gutjnl-2024-331956） 本研究通过深入分析来自173名HCC患者的772份血浆样本，以及56份作为对照的来自非HCC慢性肝病患者的血浆样本，旨在评估ctDNA作为一种有前景的非侵入性生物标志物在HCC患者中的动态变化及临床应用价值。 研究人员分别在三个时间点收集患者的血浆样本：诊断或治疗时（n=502）、局部区域治疗后24小时（n=154）以及随访期间（n=116）。此外，还收集了232份相应的肿瘤组织样本用于对比分析。 研究采用了先进的测序技术和数字PCR技术，对所有样本进行了游离DNA（cfDNA）浓度检测以及TERT启动子、CTNNB1、TP53、PIK3CA和NFE2L2等基因的突变分析。这些技术的结合使用，为研究者提供了高精度、高敏感度的检测结果。 结果显示，在活跃的HCC患者中，ctDNA的突变率高达40.2%，远高于非活跃的HCC患者的14.6%和无HCC对照组的1.8%（P<0.001）。进一步分析发现，TERT启动子的突变率最高，达到27.5%，其次是TP53（21.3%）和CTNNB1（13.1%），而PIK3CA和NFE2L2的突变率相对较低。值得注意的是，ctDNA中的突变大多与对应的肿瘤组织中的突变一致。 此外，研究还发现ctDNA的突变率随着肿瘤分期的进展而增加（P<0.001）。在103名接受经皮消融治疗的患者中，治疗前ctDNA中突变的存在和数量与更高的死亡风险（P=0.001）和复发率（P<0.001）显著相关。 有趣的是，局部区域治疗后24小时，cfDNA浓度和可检测的突变均有所增加。在53名接受系统治疗的患者中，基线时ctDNA的突变率为60.4%，且在接受atezolizumab-bevacizumab治疗的患者中，ctDNA中突变的持续存在与影像学上的疾病进展显著相关（63.6% vs 36.4%，P=0.019）。 Jean-Charles Nault教授表示，该项研究不仅证实了ctDNA作为HCC非侵入性生物标志物的潜力，还揭示了其在HCC监测、治疗反应评估和预后判断中的重要作用。通过对ctDNA的动态监测，医生可以更早地发现肿瘤复发或疾病进展的迹象，从而及时调整治疗方案。此外，ctDNA的检测结果还可以为个体化治疗提供指导，使治疗更加精准有效。 综上所述，本研究为HCC的临床管理带来了新的视角和工具，有望在未来成为HCC诊断和治疗的重要辅助手段。 原文链接：Campani C, Imbeaud S, Couchy G, et al. Circulating tumour DNA in patients with hepatocellular carcinoma across tumour stages and treatments. Gut Published Online First: 25 July 2024. doi: 10.1136/gutjnl-2024-331956 （来源：《国际肝病》编辑部） 声 明 凡署名原创的文章版权属《肿瘤瞭望》所有，欢迎分享、转载。本文仅供医疗卫生专业人士了解最新医药资讯参考使用，不代表本平台观点。该等信息不能以任何方式取代专业的医疗指导，也不应被视为诊疗建议，如果该信息被用于资讯以外的目的，本站及作者不承担相关责任。

摘要：多发性骨髓瘤（MM）是一种以骨髓中浆细胞积累为特征的血液系统癌症。尽管治疗取得了进展，但大多数患者中的MM仍然无法治愈。与MM相关的免疫失调促进了疾病的进展，这促使研究者探索免疫疗法来对抗这种疾病。免疫疗法研究的一个领域是设计骨髓瘤疫苗疗法，以逆转与肿瘤相关的免疫抑制，并引发针对肿瘤的特异性免疫反应，有效地针对MM细胞。本文回顾了MM的疫苗免疫疗法，按抗原类型和递送方法对研究结果进行分类。抗原包括特异性抗原（Id）、肿瘤相关抗原（TAA）、肿瘤特异性抗原（TSA）和整个肿瘤裂解物。到目前为止，骨髓瘤疫苗在临床上显示出有限的疗效。然而，进一步的研究至关重要，以优化各个方面，包括抗原和患者选择、疫苗的时机和顺序，以及与新兴MM治疗的合理组合。 1.引言 多发性骨髓瘤（MM）是一种血液系统恶性肿瘤，其特征是克隆性浆细胞在骨髓（BM）中积累，并分泌单克隆免疫球蛋白，导致被称为CRAB（高钙血症、肾功能不全、贫血和骨病变）的特征性症状。尽管出现了许多新的治疗方法显著改善了治疗效果，但MM在很大程度上仍然无法治愈，对于大多数晚期患者来说，这种疾病仍然是致命的。越来越多的研究关注于利用宿主免疫系统针对MM细胞的免疫疗法。由于抗原呈递无效和效应细胞功能障碍，MM与免疫失调相关，创造了一个促进疾病进展的免疫抑制环境。研究的一个领域是设计骨髓瘤疫苗疗法。癌症疫苗接种是一种旨在激活免疫系统以识别和对抗癌细胞的治疗性方法。这些疫苗可以作为预防措施，称为预防性疫苗，或者作为已经诊断出癌症的个体的治疗选择，称为治疗性疫苗。任何癌症疫苗所针对的抗原的选择对其临床效果至关重要。肿瘤抗原被分为两大类：肿瘤相关抗原（TAAs）和肿瘤特异性抗原（TSAs）。TAAs是自身抗原，它们在肿瘤细胞中要么优先表达，要么异常表达，但也可能在正常细胞中以某种水平存在。TSAs，也称为新抗原，包括仅由癌细胞编码的抗原，并且是肿瘤特异性的，能引发高亲和力T细胞反应。疫苗被分为共享和个性化疫苗。共享抗原是公共抗原，可以由相对常见的人类白细胞抗原（HLA）等位基因在患者中呈递。这些疫苗是现成的免疫疗法的有希望的候选者。另一方面，个性化癌症疫苗由于高通量基因测序、质谱（MS）和生物信息学的进步而最近获得了更多的关注，这些技术使得能够识别HLA结合肽和预测独特的个性化新抗原。此外，癌症疫苗可以通过各种平台递送，如肽疫苗、RNA疫苗、DNA疫苗、病毒疫苗和抗原呈递细胞（APC）/树突细胞（DC）疫苗。如今，大多数正在临床研究中的疫苗涉及递送肿瘤抗原与佐剂或其他共刺激因子的组合。佐剂是癌症疫苗的重要组成部分，因为它们通过激活先天免疫途径来增强免疫反应。各种佐剂，如Toll样受体（TLR）激动剂和细胞因子被用来提高癌症疫苗的效果。有关癌症疫苗的更详细信息，请参考文献3-7。本文旨在回顾针对MM的疫苗免疫疗法的主要发现，根据抗原类型及其递送方式（无论是肽、蛋白质、DNA或DC基础疫苗）进行分类。讨论的肿瘤抗原包括特异性抗原（Id）、TAA、TSA和整个肿瘤裂解物。在MM中，恶性浆细胞分泌含有称为Id的肿瘤特异性抗原决定簇的单克隆免疫球蛋白（副蛋白）。Id是通过B细胞成熟和体细胞超突变期间的基因重排形成的。尽管Id抗原是TSA的一个子集，但由于研究针对骨髓瘤Id抗原的疫苗的历史意义，本综述中包括了对这些抗原的专门部分。 2.特异性疫苗 2.1.基于Id蛋白/肽或DNA的疫苗 Id疫苗的最初研究之一可以追溯到1995年Kwak等人的一项研究，他们用接受者血浆中的骨髓瘤免疫球蛋白免疫了一个健康的兄弟姐妹BM供体。检测到淋巴增殖反应，恢复了对骨髓瘤Id具有独特特异性的接受者CD4+ T细胞系，这证明了用Id免疫可能代表一种增强特异性抗肿瘤效应的新策略。后来，更多的研究调查了Id疫苗作为治疗策略的潜力。一组I-III期MM患者接受了用明矾作为佐剂的自体血清M组分的重复免疫。虽然在三名患者中成功，但引起的免疫反应幅度适中且短暂。随后的研究引入了免疫原性载体蛋白，如钥孔帽螺血蓝蛋白（KLH）或丝状噬菌体，单独或与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、白细胞介素（IL）-2、IL-12等佐剂一起使用，以增强Id蛋白的抗肿瘤免疫。尽管这些策略能够引起肿瘤特异性免疫反应，但临床反应适中。例如，在Osterborg等人的研究中，Id疫苗与GM-CSF一起用于五名II期MM患者。所有患者都发展了Id特异性T细胞免疫，但只有一名个体的M组分浓度显著降低。Massaia等人用KLH和低剂量的佐剂细胞因子GM-CSF或IL-2对接受高剂量化疗（HDT）后最小残留病（MRD）的患者进行了疫苗接种。在75%的患者中记录了特异性T细胞反应，但没有减少肿瘤负担。另一项研究探讨了在HDT和外周血祖细胞输注后的第一个缓解期使用与KLH结合的特异性蛋白和低剂量GM-CSF作为维持治疗。回顾性病例匹配分析显示，疫苗组和用干扰素（IFN）-α和/或地塞米松作为维持治疗的对照组之间的生存和无进展生存（PFS）持续时间相似。 在非随机的I期临床试验中，更多的努力被投入到研究基于Id DNA的疫苗，该疫苗编码患者特异性的单链可变片段，或将Id与破伤风毒素的片段C（FrC）链接。14名患者接受了至少在自体干细胞移植（ASCT）/高剂量治疗（HDT）后6个月开始的疫苗接种。在为期52周的研究期间，10名患者（71%）的血清副蛋白无法检测到、减少或保持稳定，而11名患者（79%）维持了持续的完全反应（CR）/部分反应（PR）。此外，对于13名患者，中位无进展生存期（TTP）为38.0个月。然而，由于之前的ASCT/HDT，很难区分疫苗效果和延迟治疗反应，因为在疫苗接种开始后，7名、6名和1名患者已经分别达到了CR、PR和稳定病状（SD）。在Qazilbash等人最近发表的一项研究中，采用了另一种Id疫苗接种策略。在这项随机的2期试验中，采用了初免和增强策略，通过收集已经用患者特异性Id-KLH在体内初免的T淋巴细胞，然后使用CD3/CD28磁珠在体外激活这些T细胞，并在HDT和自体造血干细胞移植（AHCT）后重新注入这些细胞，并随后增强剂量的指定疫苗。尽管疫苗引发了持续至+180天的强烈免疫反应，但与仅接种KLH的对照组相比，接种Id-KLH的组别在临床上没有益处。表1显示了使用Id蛋白/肽或基于DNA的Id疫苗的试验总结。 2.2.基于DC的Id疫苗 专业的APCs，DCs，在启动和调节先天和适应性免疫反应中发挥着关键作用。通过利用它们增强宿主效应器和记忆CD8 T细胞反应的能力，这些反应对于抗肿瘤免疫至关重要，DC疫苗已成为癌症免疫疗法的主要策略之一。DC疫苗首次在MM的Id抗原背景下进行了测试。历史上，基于Id的DC疫苗在MM试验中已经测试了十多年，但没有明确的临床益处。已经提出了几种优化方法，用于生成、给药途径和疫苗接种的时间。原始方法涉及从通过白细胞分离术收集的外周血液中分离DCs，随后进行密度梯度离心。随后，添加细胞因子，即GM-CSF和IL-4，成为培养要么粘附的单核外周血细胞，CD34+或CD14+细胞的标准实践。在Id脉冲后提出了各种成熟方案以增强有效性，包括单独暴露于肿瘤坏死因子α（TNF-α），TNF-α和IL1-B，CD40配体或TNF-α、IL-6、IL-1和前列腺素E2的组合。研究了不同的疫苗接种途径，包括皮下、皮内、静脉内和淋巴结内。在I/II期试验中，Curti等人比较了通过顺序皮下和静脉内途径的Id脉冲DCs。每位患者都作为自己的对照，接受顺序皮下和静脉内给药。结果表明，皮下给药诱导了更强的T细胞反应，表明其在引发免疫反应方面比静脉输注重建。此外，疫苗在不同的患者群体中进行了测试，包括晚期骨髓瘤患者，化疗后的患者，未经预处理的个体，在ASCT后肿瘤负担较低的患者和冒烟型骨髓瘤（SMM）。如上所述，尽管付出了巨大努力，基于Id的DC疫苗并未产生令人满意的临床结果。Wen等人在1998年进行的一项研究是对DC基础Id疫苗针对MM的首批试验之一，涉及一名43岁的晚期难治性骨髓瘤患者。通过一系列密度梯度离心从单核细胞中分离出DCs。尽管临床反应有限，但这项研究通过产生Id特异性免疫反应，证实了体外生成的骨髓瘤DCs的功能能力。后来，通过对DC生成的一些优化，通过培养粘附的单核细胞与GM-CSF和IL-4等细胞因子。在1999年，两名晚期难治性MM患者接受了用Id抗原和KLH装载的自体DC疫苗，并以GM-CSF作为佐剂。结果表明，两名患者都发展了Id特异性T细胞增殖反应，其特征是产生干扰素γ（IFN-g）。然而，在这两名病例中没有临床益处。尽管如此，考虑到这些患者患有晚期疾病，预计疫苗可能不会对这一特定群体产生最佳效果。因此，对免疫系统受损较小或肿瘤负担较低的患者群体进行了额外的试验，预期这可能会增强疫苗的效果。六名早期/早期复发的骨髓瘤患者接种了自体DCs（静脉内）准备如前述研究并装载Id抗原和KLH。然而，只有3名患者的Id血清水平稳定期，2名患者在疫苗接种后疾病进展。在另一项研究中，在26名预期肿瘤负担较低的患者中，在HDT和外周血祖细胞移植（PBPCT）后测试了基于DC的Id疫苗。值得注意的是，只有四名患者发展了Id特异性增殖性T细胞反应。这些免疫反应者中有三名在疫苗接种时处于CR状态。在移植后平均随访30个月，共有17名患者存活。这些发现表明，较低的肿瘤负担可能导致更好的免疫反应。然而，由于缺乏对照组进行比较，将这些结果完全归因于疫苗是具有挑战性的。还在未经治疗的I期患者中进行了基于DC的Id疫苗接种的调查。在这项试验中，九名患者接受了用Id和KLH脉冲的自体单核细胞衍生的DCs。疫苗在56%的患者中导致了T细胞增殖。与其他研究一样，临床反应适中，三名患者的M蛋白略有减少。 为了增强基于DC的Id疫苗的效力，对DC生成进行了优化。在早期的基于DC的疫苗接种研究中，未成熟的DCs被脉冲抗原。然而，未成熟的DCs激活T细胞的能力次优。因此，引入了在成熟诱导细胞因子存在下暴露于抗原的DCs。这首先在5名在HDT后稳定部分缓解的患者中进行了测试。此外，有人建议将给药途径从静脉内改为皮下，以克服与静脉内疫苗接种相关的潜在限制，例如DCs可能在肺、肝和脾等器官中的积累。即使对DC生成进行了修改，并将给药途径转移到皮下，临床效益仍然不明显。此外，将临床反应仅归因于DC疫苗仍然具有挑战性，特别是考虑到化疗/自体HCT后四个月开始的时机。 尽管探索了DC生成、给药途径、疫苗接种时机以及添加免疫原性载体蛋白/佐剂的优化，但未观察到显著结果。Bendandi等人假设缺乏临床意义可能是由于从MM患者获得的DC在数量和质量上的缺陷。因此，他们进行了一项试点研究，其中4名MM患者接受了异体树突细胞（alloDC）随后是Id-KLH。疫苗仅诱导了可检测的抗KLH效应T细胞和B细胞反应，而没有诱导针对肿瘤特异性Id的T细胞增殖。从临床角度来看，结果并不令人印象深刻，一名患者在停止疫苗接种后出现SD，而其中3名患者在研究随访期间进展。表2显示了在MM中使用基于DC的Id疫苗的试验总结。 3.肿瘤相关抗原 3.1.基于肽的TAA疫苗 尽管Id疫苗能诱导可检测的免疫反应，但未能显示出临床效力。这可能归因于高水平循环Id蛋白对T细胞的抑制作用，导致耐受性，以及Id蛋白本身是一个弱抗原的事实。作为Id疫苗的替代品，开发了具有TAA的疫苗。在临床、临床前和体外环境中研究了多种TAA在MM中的作用，如Mucin-1（MUC1）、透明质酸介导的运动受体（RHAMM）、B细胞淋巴瘤2（BCL-2）家族、Wilms肿瘤1（WT1）、X盒结合蛋白1（XBP1）、syndecan-1（CD138）、CS1（SLAM7）、癌症睾丸抗原（CTA）、Dickkopf-1（DKK1）、甲基丙二酸半醛脱氢酶（MMSA-1）、热休克蛋白（HSP）、端粒酶逆转录酶（hTERT）和Survivin。表3显示了在MM中使用TAA作为抗原的试验总结。 糖蛋白MUC1存在于包括MM在内的各种癌症中。ImMucin，一种21肽合成长肽疫苗，在15名骨髓瘤患者的I/II期研究中进行了测试。ImMucin诱导了显著的T细胞反应，并增加了针对MUC1的抗体滴度。然而，临床效力次优，中位PFS为17.5 ± 3.9个月。 RHAMM衍生的肽R3在I/II期研究中作为另一种潜在的血液学恶性肿瘤的免疫原性抗原进行了调查，包括MM。在10名HLA-A2阳性患者中进行的300 mg疫苗的初步研究，包括4名MM患者，显示出积极的临床和免疫学反应。在接受300 mg疫苗的MM患者中，3/4显示出特异性CD8+ T细胞增加，2/4显示出克隆标记减少。然而，有限的样本量需要谨慎得出明确结论。 BCL-2家族蛋白在1期试验中作为MM的另一个靶标抗原进行了研究。复发的MM患者接受了与montanide ISA-51作为佐剂混合的Bcl-2、Bcl-XL和Mcl-1肽的疫苗接种，以及bortezomib。由于肽HLA限制，患者根据他们的HLA-A阳性性接受肽，即HLA-A1、HLA-A2和/或HLA-A3。在7名患者中，3名显示出与基线（疫苗接种前）相比的疫苗诱导的肽抗原特异性T细胞反应。然而，小样本量阻碍了对临床效力的结论性评估。与儿童肾肿瘤Wilms肿瘤相关的WT1基因，作为癌基因和某些正常细胞过程的关键组成部分，发挥着双重作用。它在造血恶性肿瘤和实体癌中高度表达，包括骨髓瘤，其表达随着疾病进展而增加。研究已经鉴定了WT1中的各种表位，可以以人类HLA限制的方式引发WT1特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应。因此，基于WT1肽的免疫疗法可能是恶性疾病患者的一个选项。在Tsuboi等人的案例研究中，一名57岁的耐化疗MM患者每周接受HLA-A*2402限制的9肽WT1肽和montanide ISA51作为佐剂的皮内疫苗接种。疫苗接种后，骨髓癌细胞减少了60%，尿液M蛋白水平从3.6降至0.6 g/天。此外，C-X-C趋化因子受体类型（CXCR）4阳性细胞有显著变化，表明WT1特异性CTLs有效地迁移到肿瘤部位。 为了应对单一抗原肽疫苗的局限性，包括潜在的抗原逃逸和目标抗原的下调，还研究了多肽疫苗。PVX-410是一种基于肽的疫苗，由来自XBP1、CD138和CS1三个不同抗原的4个9肽组成。在一项研究中，22名中度至高风险HLA-A2阳性的SMM患者接受了PVX-410皮下注射和佐剂poly-ICLC，有或没有lenalidomide。PVX-410一致地产生了特定、持久的免疫反应，特别是与lenalidomide一起使用时。然而，总体临床反应仍然适中。单独使用时，所有患者的最佳反应为SD，其中5/12在12个月内进展。在联合治疗组中，一名患者实现了PR，四名患者有最小反应或SD。 DKK1、MMSA-1和HSP作为TAA被研究，它们有潜力作为针对MM的疫苗疗法。DKK1，一个Wingless相关整合位点（Wnt）/β-连环蛋白信号抑制剂，能诱导肽特异性CTLs，这些CTLs能识别并溶解表达HLA-A0201的骨髓瘤细胞。MMSA-1是一种在MM细胞中特异表达的膜蛋白。当与DKK1结合在疫苗中时，它以HLA-A0201限制性方式增强CTL反应，改善存活，并在临床前模型中减轻骨破坏。肿瘤细胞衍生的HSPs，如gp96，已被作为小鼠骨髓瘤的TAA进行研究。来自已建立的小鼠骨髓瘤细胞系的混合HSPs，显示出作为现成疫苗的潜力，有效治疗具有大骨髓瘤肿瘤负担的小鼠，HSP与抗B7H1或抗-IL-10单克隆抗体结合使用。然而，需要进一步的研究来确认它们在临床环境中的效力。 此外，最初在黑色素瘤患者中发现的CTA抗原，由于在正常组织上的有限表达，成为免疫疗法的靶点。Andrade等人的研究表明，骨髓瘤细胞上表达超过六个CTA抗原具有预后价值，与MM患者的较短总生存期（OS）相关。像NY-ESO-1、LAGE-1、MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3和MAGE-C1（CT-7）这样的突出CTA抗原已显示出刺激T细胞反应的潜力，使它们成为癌症免疫疗法的候选者。在CTA抗原中，MAGE-A3已在临床环境中进行了测试。在一个案例研究中，一个健康的捐赠者，即患者的同卵双胞胎，用MAGE-A3蛋白和AS02B作为佐剂进行免疫。在同种异体外周血干细胞移植后，将 primed捐赠细胞转移到患者体内。随后，患者接受了额外的MAGE-A3免疫接种，以及第二次外周骨髓单个核细胞输血。MAGE-A3免疫接种耐受性良好，并在两个双胞胎中产生了强大的MAGE-A3特异性抗体、CTLs和T辅助细胞反应。有趣的是，CTL反应针对一个以前未知的HLA-A*6801结合MAGE-A3肽，该肽在最后一次免疫接种后在患者体内保持可检测超过一年。检测到多个T辅助细胞反应，主要反应针对HLA-DR11限制的MAGE-A3表位。令人鼓舞的是，患者在第二次移植后2.5年仍处于缓解状态。这个案例研究表明，这种个性化的免疫治疗方法对MAGE-A3阳性MM患者具有潜在的疗效。在另一项II期研究中，评估了使用MAGE-A3多肽疫苗结合Poly-ICLC和GM-CSF在体内初次免疫，然后体外扩增的自体T细胞的安全性和效力，在27名骨髓瘤患者中。疫苗包括两个HLA-A2限制的类I表位和一个多类II表位。结果显示，在8名可评估的HLA-A2+患者中有7名检测到MAGE-A3特异性CD8 T细胞。此外，在25名患者中有19名产生了能产生细胞因子的疫苗特异性T细胞。2年OS为74%，2年无事件生存期（EFS）为56%。Cohen等人进行了类似的研究，其中13名MM受试者在接受ASCT前后以及早期SCT后疫苗初次自体淋巴细胞输注，接受了重组MAGE-A3和AS15免疫刺激剂。组合免疫疗法在所有受试者中产生了高滴度的体液免疫和持久且强大的抗原特异性CD4+ T细胞反应。然而，中位PFS为27个月，中位OS未达到，表明与标准护理没有差异。 在临床前环境中测试的其他CTA已被建议作为MM的可能免疫疗法靶点。自发的NY-ESO-1抗体和特异性CD8+ T细胞已在NY-ESO-1阳性MM病例中体内检测到。在临床前模型中，研究了一种名为NACH的复杂疫苗，该疫苗基于NY-ESO-1-alum-CpG ODN-HH2。NACH疫苗中使用的Alum-CpG ODN-HH2组合佐剂是一种新型免疫佐剂。疫苗在小鼠MM的预防和治疗模型中显示出有希望的抗肿瘤效果和免疫原性。NACH疫苗抑制了肿瘤生长，在小鼠中显著延长了存活时间。在治疗模型中，接受NACH疫苗的10只肿瘤小鼠中有7只存活至第90天，而对照组的所有小鼠在40天内死亡。LAG-1a是另一个在MM患者中经常表达的CTA抗原，与NY-ESO-1共享高mRNA序列相似性。In silico分析确定了在LAG-1a和NY-ESO-1中存在的七个肽段，这些肽段被不同肿瘤的T淋巴细胞识别。因此，假设针对NY-ESO-1的疫苗可能对表达LAG-1a但不表达NY-ESO-1的肿瘤的MM患者有益。MAGE-C1、SPAN-Xb和SP-17是其他能够引发CTL反应的CTA抗原，使它们成为基于疫苗的免疫疗法MM的靶点。 与Id疫苗类似，基于肽的肿瘤-TAA疫苗的实际应用到临床实践中尚未发生。Rapoport A.P等人的研究比较了54名MM患者中称为hTERT的端粒酶复合体的限速催化亚单位和抗凋亡蛋白Survivin作为目标抗原疫苗与肺炎球菌结合疫苗的免疫原性。HLA-A2阳性的患者（包括任何A2等位基因）被分配到A组，他们接受了hTERT/Survivin疫苗。研究表明，尽管这种多肽肿瘤抗原疫苗的免疫反应频率高于报道的Id疫苗，但TAA仍未达到微生物疫苗所诱导的水平。这表明，为了获得显著的长期临床益处，可能需要对癌症疫苗产生更大规模的免疫反应。 3.2.基于DC的TAA疫苗 使用与肿瘤相关抗原(TAA)相关的基于树突状细胞(DC)的疫苗也被视为替代Id抗原的选择。对12名至少接受了诱导化疗和造血细胞移植/自体造血干细胞移植(HCT/ASCT)后获得最小部分缓解(PR)的II期或III期骨髓瘤患者进行了疫苗接种。通过电穿孔法用MAGE3、Survivin和BCMA装载粘附的CD14+细胞生成DCs，并与或不与KLH一起脉冲。值得注意的是，所有患者都产生了强烈的抗KLH T细胞反应，这表明在高剂量美法仑治疗后免疫恢复，并且在两名患者的迟发型超敏反应活检中检测到了疫苗特异性T细胞。在最后一次随访时，12名患者中有10名在第一次接种后平均25个月（范围9-53个月）仍然存活。在这些患者中，5名病情稳定(SD)，5名病情进展。在另一项研究中，进行了DC的mRNA电穿孔，使用装载有CT7、MAGE-A3和WT1的朗格汉斯DC。这些从CD34+造血前体细胞衍生的朗格汉斯型DC被认为是体外对肿瘤抗原的CTLs更具潜力的刺激因子，与单核细胞衍生的DC相比。患者被随机分配在ASCT后100天内接受疫苗或被放置在没有疫苗的对照组。虽然该研究没有足够的能力来评估临床疗效，但治疗反应倾向于接受疫苗的组。在最近发表的一项研究中，Locke及其同事设计了一种针对抗凋亡蛋白Survivin的基于DC的疫苗，在1期临床试验中。通过腺病毒载体工程化DCs以表达包含两个突变的全长Survivin版本(Ad-S)，这些突变中和了野生型Survivin的抗凋亡功能。13名新诊断的MM患者，他们没有通过诱导治疗获得CR，接种疫苗的时间是在干细胞收集前7到30天，以及在ASCT后20到34天。疫苗与ASCT联合使用耐受性良好，仅观察到轻微的不良反应。值得注意的是，85%的患者表现出针对Survivin的T细胞反应或抗体反应。7名患者在第+90天表现出增强的临床反应，所有这些都与Survivin特异性免疫反应相关。令人印象深刻的是，在平均4.2年的随访后，这7名患者中有6名保持无病状态。估计的四年无病生存(PFS)为71%，超过了IFM 2009试验的历史数据，该数据大约为4.1年时PFS为50%，针对这类患者群体。Survivin已成为MM中一个显著的TAA。在8项正在进行的MM试验中，有两项专注于开发针对Survivin的疫苗。其中一种疫苗名为TXSVN，它使用了一种减毒的活沙门氏菌株，经过遗传改良以产生Survivin。第二种疫苗是一种基于肽的配方，称为SVN53-67/M57-KLH，源自Survivin蛋白(表4)。 4.肿瘤特异性抗原 4.1.基于肽的TSA疫苗 尽管某些关于TAA的研究显示出希望，但由于每个临床试验中患者数量有限，总体评估具有挑战性。需要对更大的队列进行进一步研究，以得出关于基于TAA的免疫疗法疗效的确定性结论。此外，由于它们作为非突变的自身抗原的地位，一般来说TAA可能表现出低免疫原性，这归因于中枢T细胞耐受的影响。因此，TSA，也称为新抗原，似乎是疫苗免疫疗法的另一种靶标抗原。癌细胞中的体细胞突变可以产生新的蛋白质序列，这些序列可以被APCs作为新抗原呈现给宿主免疫系统。肿瘤新抗原是免疫疗法的极好靶标，因为它们在癌症组织中特异性表达。通过下一代测序，在184名MM患者中识别出的新抗原景观，揭示了在复发患者中的NRAS、KRAS和干扰素调节因子4(IRF4)基因中共享的新抗原，以及在新诊断患者中的KRAS，支持在具有此类突变的MM患者中使用基于新抗原的疫苗的可能性。在MAPK途径中的扰动，特别是KRAS、NRAS和BRAF中的突变，在相当一部分MM病例中观察到，RAS突变在多达70%的复发/难治性病例中被检测到。这些与MAPK激活相关的突变，可能会影响预后，有助于从前期状况向骨髓瘤的转变，以及从髓内到髓外疾病的转变，随着疾病的进展，其患病率越来越高。针对共享的新抗原，如与RAS突变相关的新抗原，正在临床试验中探索，例如我们小组正在进行的研究，使用TG01癌症疫苗在高风险SMM或MM患者中(表4)，在≥1线治疗后有可测量疾病。TG01由7种合成肽组成，模仿RAS蛋白的突变形式，在胰腺癌患者中显示出有希望的结果。TG01研究的主要终点是安全性，关键的次要终点包括对疫苗的免疫反应、总体反应率、OS和PFS。 另一种基于新抗原的疫苗是PGV-001。PGV-001是一种个性化的基因疫苗，针对基于患者HLA分型的多达10个预测的个人肿瘤新抗原。在辅助治疗环境中测试了PGV-001，包括3名接受了ASCT的MM患者在内的13名多种癌症类型的患者。疫苗肽在27周的过程中与聚肌胞（poly-ICLC）和破伤风辅助肽一起给药。一名患者失去了随访，但在剩下的12名患者中，平均随访了925天，其中四名没有疾病证据，四名接受了后续的治疗线，四名已经去世。值得注意的是，只有两名去世的患者有记录的恶性肿瘤复发。这篇摘要中没有描述患者的详细信息以及他们中哪些是MM患者。免疫监测免疫原性正在进行中。然而，初步分析表明诱导了针对新抗原的CD4和CD8 T细胞扩增。 如前所述，TSA由于缺乏胸腺选择和中枢耐受，可以激活高亲和力T细胞。尽管对Id有显著的关注，但由于其在骨髓瘤中的丰富性，显示出有限的临床疗效，对骨髓瘤中除了Id之外的其他新抗原的研究仍然有限。进一步的研究对于评估它们作为骨髓瘤疫苗治疗中的靶标抗原的潜力至关重要。 5.整个肿瘤抗原 5.1.基于DC的疫苗 单一抗原特异性疫苗容易受到因抗原表达下调而导致的免疫逃逸的影响。或者，也探索了整个细胞靶标作为一种策略，该策略寻求建立多克隆免疫反应。这样的疫苗可能包括广泛的抗原，包括新抗原。这在骨髓瘤中特别相关，因为存在大量的肿瘤突变负担。对664名新诊断的骨髓瘤患者的研究发现，每个患者的平均体细胞和错义突变负荷分别为405.84和63.90个突变。突变和新抗原负担之间存在正相关。此外，高剂量美法仑治疗，这是ASCT前的标准治疗，与高突变负担相关，并且可能在骨髓瘤患者的复发时有更多的新抗原。 Rosenblatt等人通过化学融合患者衍生的骨髓瘤细胞与自体DCs开发了一种肿瘤疫苗。这种疫苗的优势在于可能在DC介导的共刺激的背景下呈现多样化的骨髓瘤相关抗原。融合细胞是通过将DCs和骨髓瘤细胞与聚乙二醇共培养而创建的。在17名患者中测试了DC融合疫苗，其中大多数患有晚期疾病。疫苗接种耐受性良好，并在大多数评估的患者中导致与患者自己的骨髓瘤细胞反应的淋巴细胞扩增，以及记录的体液反应。晚期疾病的患者经历了疾病稳定，三名患者在12、25和41个月时分别显示持续的SD。在当前研究中，调节性T细胞水平在疫苗接种期间保持稳定。同一疫苗在ASCT后的患者中进一步测试，假设自体移植为融合疫苗提供了一个最佳环境，因为肿瘤细胞减少和调节性T细胞耗竭导致的免疫环境增强。该研究取得了有希望的结果，47%的患者实现了CR/近CR（nCR）作为最佳反应，78%的患者至少实现了VGPR。值得注意的是，近35%的CR发生在移植后超过100天，在接种疫苗后。尽管可能会观察到化疗的延迟效应，但在没有维持治疗的情况下，大量的晚期反应可能暗示了疫苗介导的效应。基于这些结果，该团队被鼓励检查融合疫苗与来那度胺作为自体HCT后维持治疗的联合疗效。然而，与来那度胺一起的DC/MM融合疫苗接种并没有在移植后1年显著增加CR率，但与循环MM反应性淋巴细胞的显著增加相关，这表明了肿瘤特异性免疫。该团队进行了另一项临床试验，涉及接受自体移植的MM患者，他们在接受DC/骨髓瘤融合细胞疫苗后接受了抗程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）抗体（Pidilizumab）的联合治疗，目的是克服肿瘤细胞逃避宿主免疫的免疫抑制环境。这项试验涉及22名患者，并表明这种组合可以诱导抗肿瘤免疫反应，并且在一部分患者中，在移植后完全根除可测量的疾病。移植后，调节性T细胞水平显著下降，并在整个免疫治疗期间保持低水平。六名患者达到了VGPR的最佳反应，六名患者达到了nCR/CR。从移植起的中位PFS为19个月，随访正在进行中（表4）。其他整个细胞裂解物，如GVAX和DCOne疫苗，作为现货疫苗进行了测试，具有多样化的抗原库。MM-GVAX是一种疫苗，其中两个已建立的异质性骨髓瘤细胞系，H929和U266，与K562细胞系（GVAX®）一起给药，该细胞系被改造为过表达GM-CSF。H929表现出t(4;14)，并且NRAS突变，U266涉及BRAF和TP53途径的几个突变。注册的患者血清/尿液免疫固定阳性，并维持了至少4个月的nCR。在2021年的出版物中，15名患者中有8名（53.3%）加深了治疗反应并实现了真正的CR。中位OS为7.8年。MM-GVAX触发了克隆T细胞扩增和细胞因子反应，在所有患者中持续了长达7年。这项试验正在进行中（表4）。 DCOne是另一种现成的肿瘤疫苗，它源自人类急性髓系白血病（AML）细胞系，可以分化为完全功能的DCs的表型，并内源性地表达肿瘤相关抗原（TAA）。这些抗原与HLA分子以及对T细胞激活至关重要的各种共刺激分子一起呈现。尽管最初作为AML的癌症疫苗进行工程化，DCOne表达的肿瘤抗原也存在于包括MM在内的多种血液系统恶性肿瘤中。使用DCOne疫苗治疗MM导致激活的CD8+ T细胞扩增，这些细胞表达干扰素-γ和穿孔素。此外，将患者的肿瘤细胞与外周血单个核细胞和DCOne共培养，诱导了针对自体MM细胞的细胞毒性T淋巴细胞介导的杀伤，突出了DCOne在骨髓瘤治疗中的潜力。表5显示了使用整个肿瘤抗原治疗MM的试验总结。 6.结论和未来展望 尽管进行了广泛的研究，肿瘤疫苗尚未纳入骨髓瘤治疗。多年来，主要的研究重点是Id疫苗，这些疫苗偶尔产生免疫反应，但临床效果有限。随后的调查在临床试验中探索了不同的抗原靶标。然而，在早期试验中对各种抗原进行广泛测试，并限制了患者群体，这在建立明确结论方面带来了挑战。此外，即使在同一类型的抗原研究之间进行直接比较，也会因患者特征（如年龄、细胞遗传学/风险因素）的差异以及疫苗接种时的疾病阶段而受到阻碍。此外，许多疫苗研究是在化疗构成标准治疗的时期进行的，更多关注使用疫苗单独来根除肿瘤。然而，将疫苗接种与新建立的治疗方法（如IMiDs、蛋白酶体抑制剂和新一代免疫疗法，如嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞和双特异性抗体）结合起来，尚未得到解决。 总的来说，疫苗的复杂性以及骨髓瘤作为疾病的复杂性，为将疫苗整合到骨髓瘤治疗策略中带来了挑战。疫苗治疗是复杂的，需要彻底的实验。这包括选择肿瘤抗原、制定疫苗、确定传递工具，决定给药途径和频率、确定疫苗接种的时间，以及考虑骨髓瘤肿瘤微环境的复杂性（图1）。优化所有这些因素可能是提高临床效果的必要条件。 图1：疫苗设计考虑因素。MM（多发性骨髓瘤）骨髓微环境由包括MDSCs（髓系来源的抑制细胞）、TAM（肿瘤相关巨噬细胞）和Tregs（调节性T细胞）在内的免疫抑制元素组成。MDSCs通过IL-10刺激TAM和Tregs。MDSCs还通过IL-10抑制CTLs（细胞毒性T淋巴细胞）。Tregs通过直接的细胞间相互作用以及通过分泌抑制性细胞因子，如TGF-b和IL-10，来抑制CTL和DC（树突状细胞）的功能。此外，MM细胞分泌包括IL-6、TGF-b和IL-10在内的多种细胞因子，这些因子抑制DCs、CTLs并刺激Tregs。多发性骨髓瘤患者表达多种免疫检查点受体，包括PD-1、CTLA-4、TIM-4、LAG-3、TIGIT。末端T细胞耗竭与CD4+和CD8+ T细胞亚群失去细胞毒性相关，这些细胞亚群产生IFN-g，这是肿瘤免疫的关键细胞因子。MM，多发性骨髓瘤；MGUS，未定意义的单克隆丙种球蛋白病；SMM，隐匿性MM；BM，骨髓；DC，树突状细胞；BMSC，骨髓基质细胞；CTL，细胞毒性T淋巴细胞；MDSCs，髓系来源的抑制细胞；TAM，肿瘤相关巨噬细胞；Treg，调节性T细胞；PD-1，程序性细胞死亡蛋白1；CTLA-4，细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4；TIM-3，T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3；LAG-3，淋巴细胞激活基因3；TIGIT，T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域；白细胞介素（IL）-10；TGF-b1，转化生长因子-b1；TAA，肿瘤相关抗原；TSA，肿瘤特异性抗原。部分图表使用了/改编自Servier Medical Art（Servier；https://smart.servier.com/）提供的图片，该图片在Creative Commons Attribution 4.0 Unported License（https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/）下授权使用。 6.1.抗原选择 理想情况下，靶标抗原必须具有免疫原性，在肿瘤中高度表达，在正常组织中低表达或不存在，并且具有肿瘤特异性，以避免脱靶效应。包括Id、TAA和TSA在内的几种抗原已在骨髓瘤研究中进行了探索。尽管努力增强它们的免疫原性，特别是通过将疫苗接种与免疫原和佐剂结合，但临床效果并不显著。对Id以外的TSA的研究仍然有限。预测TSA作为靶标既耗时又昂贵，需要先进的方法来预测能够引发新抗原特异性T细胞反应的新抗原。此外，准确的HLA分型对于可靠地预测免疫原性抗原和提高治疗效果至关重要，这为疫苗开发增加了另一层复杂性。这是由于人类HLA等位基因的多态性，涵盖了超过24,000个独特的基因复合体。尽管使用表达多种抗原的特定于患者的疫苗（如整个肿瘤裂解物）有很强的理论基础，但可能存在随着时间推移重新建立肿瘤耐受性，促进疾病进展的潜在担忧。这可能部分解释了整个肿瘤裂解物疫苗在骨髓瘤临床环境中采用的延迟。肠道微生物群抗原具有固有的强烈免疫原性属性，但在骨髓瘤研究中仍然是一个未被探索的领域。TAA和微生物抗原之间存在高度相似的抗原表位，表明可能存在强大的交叉反应性CD8+ T细胞反应。具体来说，由特定微生物抗原诱导的T细胞记忆可能转化为抗癌症T细胞记忆，对癌症生长进行长期控制。例如，在MAGE-A10和巨细胞病毒之间观察到的分子模拟。这一发现为探索骨髓瘤相关TAA和微生物抗原之间的交叉反应性开辟了途径，为提高骨髓瘤疫苗治疗的效果提供了新的见解。 6.2.疫苗传递平台 基于肽的疫苗接种已成为引发抗肿瘤T细胞反应的有希望的方法。然而，其有效性仍然有限，即使肽与强大的佐剂共传递时也是如此。这可能归因于DC的功能失调，DC在影响抗肿瘤免疫的质量和数量中起着重要作用。因此，通过基于DC的肽方法传递肿瘤抗原正被认识到作为一种潜在的癌症免疫治疗策略。 自从DC在骨髓瘤治疗中的使用开始以来，许多研究都集中在优化DC生成上，特别是使用 idiotype 作为抗原来源。一些研究表明，来源于CD34+造血前体细胞（HPC）的朗格汉斯型DCs在刺激CTL方面比单核细胞来源的DCs更为有效。然而，它们在骨髓瘤研究中的临床应用仍然有限。此外，对来源于骨髓瘤患者的DCs的体外生成也进行了巨大关注。Shinde等人从MM和健康供体样本中生成了DCs。尽管MM-DCs和健康供体衍生的DCs都显示出成熟的表型，但MM-DCs表现出较低的迁移能力和细胞因子分泌，使它们在诱导抗MM反应方面效果较差。此外，正在探索通过各种方法增强向DCs传递抗原的努力。这些包括用抗原肽库脉冲DCs，并采用基因编辑技术，如电穿孔、脂质纳米颗粒或病毒载体来改善抗原呈递。COVID-19大流行导致mRNA疫苗的显著进展，为它们在抗肿瘤治疗中的应用提供了机会。这些疫苗提供了强大的细胞和体液免疫，超越了传统的病原体或基于蛋白的疫苗。此外，mRNA疫苗提供了诸如快速开发、安全性、较少的副作用和灵活性等优势，从而促进了个性化疫苗策略的实施，特别是在TSA的背景下。mRNA疫苗用于抗原传递代表了一种新颖的方法，值得研究其在骨髓瘤治疗中的潜力。 6.3.给药途径和接种的最佳时间 给药途径和接种的最佳持续时间仍然是正在进行的辩论主题，临床试验中的比较不足。在骨髓瘤中被忽视的另一个因素是肿瘤疫苗接种的时机。在大量已发表的临床研究中，疫苗在系统性抗癌治疗后不久被给予。这个时机带来了挑战，因为自然免疫可能在疫苗接种时被化疗抑制。一个在许多试验中探索的建议方法是在ASCT后接种疫苗的潜在益处，特别是在达到深度反应状态时。在这个阶段的细胞免疫部分的植入提供了形成抗肿瘤免疫的机会。然而，这种方法的挑战包括延迟的免疫重建，T细胞数量至少需要3个月才能恢复正常，导致对疫苗治疗的反应次优。为了解决这个问题，一些研究已经研究了ASCT前疫苗接种，然后在淋巴耗尽环境中早期进行疫苗启动的T细胞转移。然后进行移植后增强疫苗接种以扩大疫苗特异性T细胞。尽管做出了这些努力，但这种策略并没有产生有利的临床结果。然而，这些研究是有限的，需要更多的调查才能得出任何结论性结果。另一种潜在的方法是针对疾病早期阶段的患者，特别是那些具有未定意义的单克隆丙种球蛋白病（MGUS）或SMM的患者。然而，实施这一策略将需要治疗大量患者并进行长期随访以建立临床效益。到目前为止，缺乏支持这一假设的结论性研究。目前有三项正在进行的试验正在研究SMM患者的疫苗，包括我们的针对RAS突变的TG-01研究、PVX-410（来自XBP1、CD138和CS1的多肽癌症疫苗）和由个人的血液和骨髓制成的个性化癌症疫苗（表4）。 6.4.疫苗外源性因素 疫苗外源性因素，包括肿瘤微环境和骨髓瘤中宿主免疫反应的功能障碍，强调了引发有效免疫反应的复杂性。骨髓瘤肿瘤微环境由免疫抑制细胞群组成，包括髓系来源的抑制细胞、调节性T细胞和肿瘤相关巨噬细胞。此外，不充分的抗原呈递、对自然杀伤（NK）细胞溶解的抵抗力、T细胞耗竭和/或衰老，与ASCT后较差的结果相关，并特征化为多次复发疾病。骨髓瘤衍生的细胞因子，如转化生长因子（TGF）-b、IL-6和IL-10，有助于免疫功能障碍。此外，由于与年龄相关的免疫系统变化导致的T细胞无反应性，疫苗的有效性随着年龄的增长而降低。这对于平均诊断年龄为70岁的骨髓瘤来说尤其重要。另一个在骨髓瘤患者中很少研究的外源性因素是肠道微生物群对肿瘤疫苗效力的潜在影响。Radojevic等人通过分析14名健康供体的粪便微生物群组成以及单核细胞衍生的DCs的表型和产生的细胞因子，报告了肠道微生物群组成与DCs的免疫原性之间的相关性。Calcinotto等人的另一项研究表明，Prevotella heparinolytica促进了定居在肠道并迁移到转基因Vk*MYC小鼠骨髓的Th17细胞的分化，在那里它们有利于MM的进展。这个主题是复杂的，因为许多因素可能影响肠道微生物群，包括通常给予骨髓瘤患者的抗生素治疗。 6.5.疫苗与新一代疗法的结合 需要注意的是，大多数肿瘤疫苗单独使用并不能直接消除肿瘤病灶，但肿瘤疫苗在消除微小残留病（MRD）方面具有潜在的前景。因此，需要进一步的试验来定义疫苗在新的药理疗法时代的角色，如免疫检查点抑制剂（ICI）、抗体药物偶联物、双特异性抗体和CAR-T细胞。这些治疗的持久反应不频繁，但与疫苗结合的策略可以增强反应或消除MRD。例如，疫苗与ICI的结合似乎是一种合理的途径，但在缺乏明确改善疗效信号的情况下，安全性问题已成为ICI在MM临床应用的主要障碍。在双特异性抗体构建之前进行疫苗接种，可以通过创建抗原经验丰富的T细胞池来增强治疗效力。疫苗还可以促进嵌合抗原受体T细胞的扩增和效力。此外，值得注意的是，尽管双特异性抗体和CAR-T目前在MM免疫疗法领域占据主导地位，但癌症疫苗提供了独特的优势。与主要针对细胞表面肿瘤特异性抗原的CAR-T细胞或双特异性抗体不同，癌症疫苗有潜力针对细胞内抗原。这种能力提供了解决更广泛肿瘤抗原的机会。 6.6.结论 总之，尽管迄今为止针对MM的疫苗接种尚未取得令人印象深刻的临床结果，但有必要进一步研究，重点关注选择合适的抗原、患者群体、优化疫苗的时机和序列，以及确定合理的组合。这些元素与其他针对肿瘤微环境免疫抑制活性的免疫干预措施相结合，可能会带来更大的益处，并实现改善和持久的临床反应。 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。