GZMK

点击蓝字 关注我们 肝癌是全球第6位较常见的恶性肿瘤，也是导致人类死亡的第3位恶性肿瘤死因1。2022年登上Science的一项研究2首次在人类中发现KIR+CD8+ T细胞抑制致病性T细胞，为癌症靶向治疗提供了思路。 2025年2月10日，西湖大学/上海市免疫治疗创新研究院董晨院士、中国解放军总医院卢实春教授、深圳湾实验室张雷研究员联袂开展科研合作，在Cancer Cell杂志在线发表了题为“Contrasting cytotoxic and regulatory T cell responses underlying distinct clinical outcomes to anti-PD-1 plus lenvati-nib therapy in cancer”的研究论文3（IF=48.8），揭示了在接受抗PD-1联合仑伐替尼治疗的癌症患者中与临床预后相关的T细胞应答及耐药机制。该杂志还同期刊发了题为“Circulating T cells fuel anti-PD-1 and lenvatinib efficacy“的相关专家评论4。 免疫检查点阻断（ICB）疗法，尤其是靶向CD8+ T细胞上表达的程序性细胞死亡受体1（PD-1），是多种癌症的高效免疫疗法。然而，大多数患者未能从中获益。在抗PD-1单药疗法无效的癌症患者中，与其他疗法联合使用可能会改善疗效。值得注意的是，在肝细胞癌（HCC）和胆道癌等癌症中，将ICB与抗血管生成疗法相结合可提高疗效。抗PD-1联合仑伐替尼（一种靶向血管内皮生长因子[VEGF]受体的多靶点酪氨酸激酶抑制剂）可将HCC患者的缓解率从抗PD-1单药的17%升至45%。尽管如此，这种疗效和耐药性背后的免疫学机制仍然难以捉摸，限制了其进一步发展。 将ICB和联合疗法作为新辅助治疗，为通过时间序列样本观察肿瘤微环境（TME）中免疫细胞动态提供了契机。CD8+ T细胞作为PD-1阻断的主要靶点，在多种癌症类型中展现出良好应答特征，包括局部克隆扩增和循环T细胞募集。在HCC患者中，治疗前肿瘤内CD8+ T细胞的存在与HCC患者对ICB及抗PD-1联合仑伐替尼治疗的应答相关。然而在TME中，抗原持续暴露会导致T细胞耗竭，表现为效应功能逐步丧失。单细胞测序技术已在多种癌症中鉴定出具有不同耗竭程度的CD8+ T细胞亚群，包括终末耗竭T（tTex）细胞、TCF7+祖细胞样耗竭T（Tpex）细胞、GZMK+效应/效应记忆T（Teff/Tem）细胞以及CXCL13+ Tpex细胞等。这些亚群对抗PD-(L)1治疗呈现差异化应答，其中TCF7+ Tpex细胞在小鼠肿瘤模型和多种癌症中被证实对ICB应答至关重要，但在TCF7+ Tpex细胞丰度较低的癌症中（如HCC），仍需进一步探索T细胞应答机制。 尽管在多种癌症中已鉴定出可识别肿瘤相关抗原的T细胞，但在ICB治疗过程中追踪其动态变化仍具挑战。乙型肝炎病毒（HBV）作为病毒性肝癌的主要诱因，其基因组可整合至肝细胞，这使得HBV+肝癌肿瘤中的HBV特异性T细胞成为研究肿瘤特异性T细胞的理想模型。虽然已在HBV+ HCC肿瘤中发现细胞毒性HBV特异性T细胞，但其是否可被ICB激活尚不清楚。 调节性T（Treg）细胞能维持免疫稳态并预防自身免疫。CD4+ Treg细胞可抑制参与肿瘤控制的免疫细胞，与免疫治疗的耐药性相关。Treg细胞浸润在多种癌症中被广泛报道，且在接受抗PD-(L)1及其联合治疗的无应答患者中观察到Treg细胞积累。小鼠模型表明，清除Treg细胞可增强抗肿瘤免疫并与ICB产生协同效应，靶向其抑制功能可改善抗PD-1治疗效果。然而，ICB治疗过程中Treg细胞在不同癌症中的积累机制仍需深入研究。 近期研究发现，在自身免疫性疾病和感染患者中存在KIR+CD8+ Treg细胞亚群。这类细胞以表达抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIRs）为特征，可抑制致病性CD4+ T细胞。尽管在癌症患者外周血中也检测到高表达KIRs的CD8+ T细胞，但其在TME中的特征谱系、起源、分化及对ICB治疗的应答仍亟待阐明。 本研究为解析免疫治疗应答与耐药机制，对接受新辅助抗PD-1联合仑伐替尼治疗的HBV+ HCC患者进行T细胞动态分析，并采用HBV-Dextramer-barcode单细胞测序技术对HBV特异性CD8+ T细胞进行深度表征。通过系统比较接受联合治疗或抗PD-1单药治疗的HCC患者T细胞特征，鉴定了与联合治疗应答和耐药相关的特异性T细胞亚群。 CD8+T细胞在抗PD-1联合仑伐替尼治疗肝癌过程中的作用机制 研究发现，肿瘤浸润的GZMK+CD8+ Teff/Tem细胞对联合治疗呈现良好应答，该细胞群包括Tpex细胞以及此前未被充分认识的富集HBV特异性循环效应记忆T（cTem）细胞。进一步的整合分析表明，cTem细胞与联合治疗的应答特异性相关，而Tpex细胞则对联合治疗和抗PD-1单药治疗均有帮助。值得注意的是，KIR+CD8+ T细胞亚群和FOXP3+ CD4+调节性T细胞在联合治疗后的无应答者中特异性富集。 本研究阐明了与癌症免疫治疗中临床获益和耐药相关的T细胞亚群，发现一群富集HBV特异性的cTem细胞在联合治疗后的浸润是其相比于抗PD-1单药疗效提升的关键因素。此外，本研究发现的cTem细胞很可能广泛存在于不同癌症中。本研究刻画了KIR+CD8+ T细胞在TME中的特征，首次揭示了其与免疫治疗耐药的相关性，暗示了这群细胞在TME中发挥免疫抑制功能。这些发现加深了我们对免疫应答和耐药机制的理解，鉴定了一系列具有极大前景的潜在治疗性靶点和生物学标志物，为体外扩增肿瘤特异性T细胞贡献了新方法，更为后续开发新的靶向疗法、过继细胞疗法及其他联合疗法提供了宝贵的思路。 声明：本文由“肿瘤界”整理与汇编，欢迎分享转载，如需使用本文内容，请务必注明出处。 参考文献： 1. 缪伟刚, 周金意, 韩仁强. 全球肝癌流行数据解析 [J] . 中华流行病学杂志, 2024, 45(6) : 865-869.  2. Li J, et al. KIR+CD8+ T cells suppress pathogenic T cells and are active in autoimmune diseases and COVID-19. Science. 2022 Apr 15;376(6590):eabi9591. 3. Guo X, et al. Contrasting cytotoxic and regulatory T cell responses underlying distinct clinical outcomes to anti-PD-1 plus lenvatinib therapy in cancer. Cancer Cell. 2025 Feb 10;43(2):248-268.e9. 4. Matulich PJ,  et al. Circulating T cells fuel anti-PD-1 and lenvatinib efficacy. Cancer Cell. 2025 Feb 10;43(2):173-175.  编辑：lagertha 审核：松月

撰文 | 周叶斌 即使采用强化的多模式治疗，50%至60%的高危神经母细胞瘤 (HR-NB) 患者的肿瘤反应不佳或会遇到复发。而复发或难治性 (r/r) HR-NB的预后不佳，长期无病生存率不超过10-15%。因此目前仍需探索新的治疗方案，例如CAR-T治疗。 此前，NCT03373097这项I/II期临床试验的中期分析显示，靶向GD2的第三代 (CD28-4.1BB) CAR-T，GD2-CART01这种自体CAR-T疗法可能是 r/r HR-NB患者的潜在选择。尤其值得注意的是，在那项研究中，输注时疾病负担较低的患者在用GD2-CAR T细胞治疗时疗效显著，3年无事件生存率接近 60%。但实现低肿瘤负担可能需要使用HD化疗或间碘苄胍 （MIBG）疗法，而对于无法采集自体干细胞的患者，则不能使用这些疗法。此外，一部分患者由于严重的淋巴细胞减少而无法获得自体CAR-T细胞。 近日，来自意大利的研究团队在 Nature Medicine 上发表了题为 Donor-derived GD2-specific CAR T cells in relapsed or refractory neuroblastoma 的论文，在NCT03373097 自体CAR-T治疗神经母细胞瘤的基础上，探索用同种异体GD2-CAR T细胞（ALLO_GD2-CART01）治疗r/r HR-NB。在5例患者中观察到2例完全缓解，一例维持缓解，显示出初步希望，也意味着ALLO_GD2-CART01 对 r/r HR-NB 儿童的安全性和有效性值得在前瞻性试验中进一步研究。 2022年2月到2024年1月，研究人员用ALLO_GD2-CART01治疗了5名r/r HR-NB患者。所有患者的肿瘤都对超过3线的治疗不再有应答，包括两人接受过自体GD2-CART01治疗。使用ALLO_GD2-CART01治疗的原因包括已经没有其它治疗选择，潜在的治愈可能以及过往自体CAR-T治疗失败。值得注意的是5位患者都成功接受了ALLO_GD2-CART01治疗，没有患者中途退出。 附图. 5位患者的治疗流程 已为所有五名患者成功生产ALLO_GD2-CART01，所用生产工艺与自体GD2 CAR-TAUTO_GD2-CART01相同。ALLO_GD2-CART01 生产结束时的中位T细胞数为3.85 × 10^9（范围2.4 – 4.76 × 10^9），中位转导效率和细胞存活率分别为 70.1%（范围 62.8–76.5%）和 94.4%（范围 88.5–96.7%）。 生产出来的ALLO_GD2-CART01特点是CD4或CD8中央记忆CAR阳性T细胞占主导，与AUTO_GD2-CART01药物产品相比，幼稚CD4 CAR阳性T细胞和幼稚和终末分化效应记忆CAR阳性CD8 T细胞百分比较低。 ALLO_GD2-CART01在患者 1中于HSCT（干细胞移植）后第 62 天输注，在患者3中于第72天输注，在患者4中于第 73 天输注，在患者 5 中于HSCT后2.5年输注，而患者 2 则在HSCT前89天接受了从 HLA 相合兄弟姐妹产生的基因工程 T 细胞（该患者接受异基因 HSCT 是为了治疗 ALLO_GD2-CART01 后出现的长期严重的血细胞减少症）。在四名患者中观察到对ALLO_GD2-CART01的反应，其中患者2和4中获得2次CR（尽管输注前观察到大量进展），患者5中1次维持CR，患者 3中1 次部分反应（PR），两个软组织病变缩小，MIBG 骨骼评分降低 50% 以上。 附图. 部分患者治疗效果 在患者4中，鉴于获得的结果、良好的安全性和疾病特有的非常高的风险，研究人员决定在第一次输注后的第8周输注第二剂 ALLO_GD2-CART01（3 × 10^6  CAR阳性细胞/kg），考虑到患者仍然处于细胞减少症，无需先前进行淋巴细胞清除。患者2最初接受自体CAR-T治疗，观察到的最佳反应为 SD，反应持续时间为 6 个月，而在接受ALLO_GD2-CART01 后，最终获得CR。 患者3接受AUTO_GD2-CART01后获得的最佳反应是 PR，持续时间为 15 个月。在此期间，患者还接受了放射治疗。在随后的复发后，她又接受了两次AUTO_GD2-CART01输注，但证明具有抗药性。然后研究人员决定继续进行 ALLO_GD2-CART01 输注，获得了新的PR。 尽管取得了这些成果，但前四名患者的病情随后复发或进展。特别是患者1在接受 ALLO_GD2-CART01 治疗 6 个月后病情进展，出现新的肝病变。患者2在HSCT后4个月观察到两个新的骨斑，但直到输注后 24 个月进行的最后一次评估时，尽管没有任何其他治疗，骨斑仍未进展。患者3在输注ALLO_GD2-CART01 3 个月后观察到病情进展。患者4在输注3.5个月后观察到疾病在中枢神经系统中大规模扩散。患者5在接受 ALLO_GD2-CART01 治疗6个月后仍保持持续CR。 在安全性方面，所有患者中均观察到与自体产品常见的毒性反映。特别是在所有儿童中均观察到≥3 级血液学毒性，第2，4，5位患者经历了长时间（>4 周）的中性粒细胞减少症。所有患者均出现了细胞因子释放综合征（CRS），并与血清细胞因子（包括 CXCL9 和 CXCL10）的增加有关，这些细胞因子的水平又与患者随访期间和 CAR T 细胞体内扩增时干扰素增加相关。在同样与使用过自体CAR-T治疗2、3号患者中，参考CRS分级和IL-6 细胞因子升高水平，均是接受ALLO_GD2-CART01治疗时CRS的严重程度更高，这表明来自同种异体的CAR-T细胞活化更强。 为了进一步了解ALLO_GD2-CART01的生物学特性，研究人员将RNA-seq分析获得的五个药物产品的转录组谱与在随访扩增高峰期从患者中收集和分离出的CAR-T细胞进行比较。在所有分析的基因中，有 2,725 个基因表达存在差异，其中 1,204 个基因在随访中上调。 附图. 药物产品与随访时采集的CAR-T细胞基因表达差异 在与药物产品相比，随访样本中上调差异表达最高的基因中观察到多个与T细胞活化和迁移相关的基因，包括CASZ1、GZMK 、WHAMM和RAP1GAP2（参与肌动蛋白细胞骨架的组织和膜运输，与CAR-T细胞粘附于靶细胞和突触形成有关）、ATG2A和TP53INP1（参与自噬，对CAR-T细胞在压力下的存活和功能至关重要）VCAM1 （参与细胞粘附、迁移，对CAR-T细胞运输和肿瘤浸润很重要）、FGR（一种免疫反应的酪氨酸激酶，对CAR-T细胞活化和信号传导很重要）和LYST （调节溶酶体的大小和功能，对CAR-T细胞的功能和细胞毒性很重要）。 总之，这项研究显示在异质性患者群体中使用 ALLO_GD2-CART01是可行的，具有可接受的毒性特征和治疗这些多次复发的 HR-NB 患者的疗效证据。考虑到这五名患者所表现出的可行性和安全性，ALLO_GD2-CART01 可能为传统的 AUTO_GD2-CART01 提供替代方案。 尽管这项研究存在局限性，特别是样本量很小，只有五名患者接受了治疗。此外，既往治疗的高度异质性使得结果难以推广。但在所述晚期疾病患者病例系列中，该方法表现出令人鼓舞的安全性和抗肿瘤活性，值得在正式的 I/II 期临床试验中对ALLO_GD2-CART01进行进一步的前瞻性研究。 撰文 制作 排版 | 车洁   校对 | uu 延伸阅读 GD2 CAR-T治疗髓母细胞瘤最新进展 神经母细胞瘤的免疫新疗法：PC-CAR T疗法 *本文由深圳市拾玉儿童公益基金会“儿童肿瘤前沿”团队编译或约稿，文中图表均源引自文献原文。本文著作权归文章作者所有，欢迎个人转发分享，未经允许禁止转载，作者拥有所有法定权利，违者必究。如需转载，请留言或联系shiyu@curekids.cn。本文旨在分享儿童肿瘤科研前沿成果，不是治疗方案推荐。如需获得疾病治疗方案指导，请前往正规医院就诊。 ▼滑动查看更多▼ 原文摘要（Abstract） Allogeneic chimeric antigen receptor (CAR) T cells targeting disialoganglioside-GD2 (ALLO_GD2-CART01) could be a therapeutic option for patients with relapsed or refractory, high-risk neuroblastoma (r/r HR-NB) whose tumors did not respond to autologous GD2-CART01 or who have profound lymphopenia. We present a case series of five children with HR-NB refractory to more than three different lines of therapy who received ALLO_GD2-CART01 in a hospital exemption setting. Four of them had previously received allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. All patients experienced grade 2 or 3 cytokine release syndrome and one grade 2 neurotoxicity. Moderate acute graft-versus-host-disease occurred in four patients. ALLO_GD2-CART01 persisted for >6 weeks. Post-treatment, two complete responses were achieved and one maintained; in addition, one partial response and one stable disease were observed. Comparing the transcriptomic profiles obtained by RNA sequencing analyses of drug products with patient-matched, peripheral blood ALLO_GD2-CART01 collected at expansion, we found upregulation of genes associated with T cell activation and migration. In addition, after infusion, transcriptomic signaling analysis showed enrichment of genes involved in response to decreased oxygen levels, humoral immune response, cell polarization and immune-synapse formation. In comparison to autologous CAR T cells, ALLO_GD2-CAR T cells were characterized by pathways associated with T cell proliferation, immune-synapse formation and cell chemotaxis. The safety and efficacy of ALLO_GD2-CART01 in children with r/r HR-NB deserve further investigation in a prospective trial. DOI: https://doi-org.libproxy1.nus.edu.sg/10.1038/s41591-024-03449-x 👇点击此处，直达原文

编辑丨王多鱼 排版丨水成文 抗 PD-1 联合仑伐替尼（lenvatinib，一种多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂）治疗在多种肿瘤中均显示出临床疗效，但潜在的免疫学机制尚不清楚。 2025 年 1 月 30 日，董晨院士、深圳湾实验室张雷研究员及中国解放军总医院卢实春教授在 Cancer Cell 期刊发表了题为：Contrasting cytotoxic and regulatory T cell responses underlying distinct clinical outcomes to anti-PD-1 plus lenvatinib therapy in cancer 的研究论文。 该研究揭示了在接受抗 PD-1 联合仑伐替尼治疗的癌症患者中与临床预后相关的 T 细胞响应及耐药机制。 在这项最新研究中，研究团队通过单细胞转录组学和 T 细胞受体（scTCR）克隆型分析，对肝细胞癌（HCC）患者在接受抗 PD-1 联合仑伐替尼治疗前后的 T 细胞进行了比较。 该研究发现，对抗 PD-1 联合仑伐替尼治疗有良好反应的肿瘤浸润性 GZMK+ CD8+ 效应/效应记忆 T（Teff/Tem）细胞，包含祖细胞耗竭 T（Tpex）细胞，还有之前未被重视的富含乙型肝炎病毒（HBV）特异性的循环效应记忆 T（cTem）细胞。 进一步的综合分析表明，cTem 细胞与联合治疗的响应性具有特定关联，而 Tpex 细胞则对联合治疗和抗 PD-1 单药治疗的响应均有贡献。 值得注意的是，该研究还发现，在联合治疗后，肿瘤中未被充分研究的 KIR+ CD8+ T 细胞亚群以及 FOXP3+ CD4+ 调节性 T 细胞在对治疗无响应者中显著富集。 该研究的核心发现： 祖细胞耗竭 T（Tpex）细胞对于抗 PD-1单药治疗和联合治疗均有响应； 循环CD8+ 效应记忆 T（cTem）细胞亚群对联合治疗有特异性响应； HBV 特异性 CD8+ T 细胞在 cTem 细胞中富集； KIR+ CD8+ 和 FOXP3+ CD4+ T 细胞在对治疗无响应的肿瘤中富集。 总的来说，该研究阐明了与肿瘤免疫治疗的临床获益和耐药相关的 T 细胞亚群。 值得一提的是，Cancer Cell 期刊同期发表了题为：Circulating T cells fuel anti-PD-1 and lenvatinib efficacy（循环T细胞促进了抗PD-1+伦伐替尼的疗效）的评论文章，指出董晨团队的这项研究通过分析了接受抗 PD-1 和伦伐替尼联合治疗的肝细胞癌患者，确定了对治疗效果至关重要的循环 CD8+ T细胞亚群，这一发现有望增强当前的免疫治疗。 论文链接： https://www-cell-com.libproxy1.nus.edu.sg/cancer-cell/abstract/S1535-6108(24)00478-1 设置星标，不错过精彩推文 开放转载 欢迎转发到朋友圈和微信群  微信加群  为促进前沿研究的传播和交流，我们组建了多个专业交流群，长按下方二维码，即可添加小编微信进群，由于申请人数较多，添加微信时请备注：学校/专业/姓名，如果是PI/教授，还请注明。 点在看，传递你的品味