IRF2

前言肿瘤是一个复杂的生态系统，其中癌症细胞和多种宿主细胞之间的相互作用影响疾病的进展和治疗反应。在肿瘤进展过程中，癌症细胞采用多种途径来逃避免疫攻击，例如下调抗原提呈机制或诱导抑制性免疫检查点分子，而免疫压力在肿瘤的发展和转移扩散过程中促进克隆进化。同时，癌症细胞劫持免疫细胞，如中性粒细胞、巨噬细胞和调节性T细胞（Treg），以协调免疫抑制性肿瘤微环境（TME）。这反过来促进免疫逃逸，促进血管和细胞外基质的重塑，并支持癌症进展和治疗抵抗。异常免疫反应被广泛认为是癌症的标志，并为癌症治疗提供了有吸引力的靶点。因此，我们有必要深入了解癌症细胞的内在特征，包括遗传变异、信号通路调节和代谢改变，它们在协调免疫景观的组成和功能状态方面发挥关键作用，并影响免疫调节策略的治疗效益。遗传改变癌基因、抑癌基因或DNA损伤修复基因中的特定癌症细胞固有遗传改变有助于调节癌症免疫状况。癌基因癌症细胞中不同的致癌基因通过不同的机制调节免疫行为，这些机制因癌症类型、癌症分期和癌症部位而异。例如，KRAS突变通过IL-8诱导的炎症、IL-6介导的巨噬细胞和Treg细胞浸润、GM-CSF诱导的Gr1+CD11b+髓系细胞的扩增、IL-10和TGF-β介导的CD4+CD25−T细胞向Treg细胞的转化、以及抑制干扰素调节因子2（IRF2）和随后产生的CXCL3，从而导致CD8+T细胞抑制，髓系衍生抑制细胞（MDSCs）的迁移增强。MYC通过增强CD47和PD-L1表达来抑制抗肿瘤免疫，从而削弱巨噬细胞和T细胞的募集。此外通过分泌IL-1β，阻断细胞毒性T细胞、NK细胞和树突状细胞的浸润，并增强支持肿瘤的巨噬细胞和中性粒细胞的浸润。KRAS突变和MYC还通过与MYC相互作用的锌指蛋白1（MIZ1）产生协同作用，介导IFN-β的抑制以及CCL9和IL-23的分泌，增强PD-L1+巨噬细胞浸润，抑制B细胞、T细胞和NK淋巴细胞驱动免疫逃避。此外，突变的表皮生长因子受体（EGFR）通过降低PD-L1表达来驱动免疫逃逸，通过IRF1介导的CXCL10下调阻碍CD8+T细胞募集，并通过CD73依赖性腺苷生成或JNK–JUN介导的CCL2上调促进Treg细胞浸润。人表皮生长因子受体2（HER2）扩增导致主要组织相容性复合物I类（MHC-I）的下调和TANK结合激酶1（TBK1）的磷酸化，其抑制下游cGAS–STING信号传导和IFNβ产生，导致免疫逃避。抑癌基因抑癌基因通过不同的环境依赖机制调节免疫。例如，研究发现Trp53的缺失通过WNT配体介导的巨噬细胞极化和IL-1β的产生驱动免疫抑制，导致中性粒细胞的全身聚集，从而CD8+T细胞的抑制和CXCL17、CCL3、CCL11、CXCL5和M-CSF介导的巨噬细胞和Treg细胞的募集。TP53的突变与PD-L1表达相关，并通过CXCL2分泌调节免疫抑制中性粒细胞的募集，通过NF-κB介导的IL-8调节慢性炎症，并且结合TBK1抑制下游cGAS–STING–IRF3信号传导和IFN-β1的产生，其减少T细胞和NK细胞浸润并增强巨噬细胞极化。相反，TP53的功能增益突变与新抗原表达，以及IFN-γ和CXCL9表达相关，这支持抗肿瘤免疫。在KRAS突变肿瘤中，丝氨酸/苏氨酸激酶11（STK11）的失活通过粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、IL-6和CXCL7的表达刺激免疫抑制中性粒细胞的积聚。此外，KRAS和STK11突变肿瘤中PD-L1的表达会导致对免疫检查点阻断（ICB）的抵抗。最后，PTEN丢失通过CCL2和VEGF的分泌减少CD8+T细胞浸润，并激活PI3K信号增强PD-L1的表达，以及NF-κB介导的CCL20、CXCL1、IL-6和IL-23分泌增强Treg细胞和髓系细胞浸润，并通过IL-1β和M-CSF驱动局部MDSC扩增。DNA损伤修复机制的遗传改变癌症细胞中的错配修复（MMR）缺陷会导致突变、新抗原和细胞中DNA的积累，从而触发cGAS–STING依赖性的T细胞浸润，免疫检查点分子如PD-1、PDL1、CTLA-4和LAG-3在浸润免疫细胞上的表达增强。在BRCA1突变的肿瘤中，双链DNA积聚在细胞中，并引发与CD8+T细胞浸润相关的cGAS–STING介导的炎症反应。cGAS–STING还促进免疫抑制性髓系细胞、巨噬细胞、Treg细胞和耗竭的PD1+T细胞的募集，以及VEGF的上调。DNA传感基因和下游介质（如IFN-β或CCL5）的遗传缺失或表观遗传沉默可介导BRCA1突变肿瘤的免疫逃逸，以及PD-L1的表达增强。相反，BRCA2突变肿瘤显示cGAS–STING介导的各种T细胞群的富集。表观遗传修饰除了遗传改变外，表观遗传改变也是癌症细胞的一个共同特征，在核结构和基因转录中起着至关重要的作用。癌症表观基因组会发生各种变化，包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑和非编码RNA的失调。越来越多的证据表明，癌症细胞中发生的表观遗传变化也会影响与免疫系统的串扰。DNA甲基化由于超级增强子（SE）的形成，炎症基因的DNA去甲基化导致CXC趋化因子配体（CXCL）介导的中性粒细胞募集，而总体低甲基化与PD-L1、IL-6和VEGF的表达增强相关。而DNA（超）甲基化可降低编码PD-L1的基因CD274和编码MHC-I的HLA基因的表达，而编码cGAS–STING的基因通过启动子甲基化的转录抑制增强MHC-I表达和T细胞识别。异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）或IDH2的突变通过将α-酮戊二酸转化为（R）-2-羟基戊二酸（2HG）来诱导全局超甲基化。而编码PD-L1、CXCL9和CXCL10免疫相关基因的转录抑制会损害IDH突变肿瘤中CD8+T细胞的浸润，G-CSF的转录激活会增强非抑制性中性粒细胞和前中性粒细胞的浸润。组蛋白甲基化组蛋白H3在Lys27发生三甲基化（H3K27me3），在DNA低甲基化的背景下，抑制编码MHC-I、CXCL9和CXCL10的基因，并减少CD8+T细胞浸润。癌症细胞中的多梳抑制复合物2（PRC2）活性介导H3K27me3，抑制G-CSF和IL-6的表达并诱导性一氧化氮合成酶阳性（iNOS+）巨噬细胞、中性粒细胞和T细胞的招募。ARID1A是SWI/SNF复合物的DNA结合亚基, ARID1A的遗传突变会抑制IFN-γ诱导基因转录和CXCL9、CXCL10和CXCL11的表达，从而抑制T细胞浸润。组蛋白乙酰化组蛋白乙酰化通过组蛋白乙酰转移酶1（HAT1）调节免疫应答，HAT1介导CD274和组蛋白去乙酰化酶（HDACs）的表达，HDACs抑制编码PD-L1和PD-L2的基因的表达，以及CCL5、CXCL9和CXCL10的表达，从而损害T细胞浸润。细胞内信号通路癌症细胞的一个关键特征是异常信号传导，这是由编码或非编码DNA区域的遗传或表观遗传改变以及生长因子和代谢等外部信号驱动的。WNT–β-catenin通路激活的癌症细胞内固有WNT–β-catenin信号与免疫排斥相关，但其潜在机制仍不明确。WNT–β-catenin通过诱导ATF3表达阻断CD103+树突状细胞的募集和T细胞启动，并抑制CCL4或CCL5分泌。TGF-β通路淋巴细胞抗原LY6K和LY6E在癌症细胞中的过表达激活TGF-β信号转导和SMAD2/3磷酸化，导致NK细胞活性降低和Treg细胞浸润增强。αVβ6整合素的上调通过激活TGF-β和SMAD2/3磷酸化来调节SOX4的表达，SOX4抑制多种I型干扰素诱导基因和编码MHC-I的基因，同时增强PD-L1表达，这会损害细胞毒性T细胞介导的免疫。此外，癌症细胞衍生的TGF-β介导CD4+T细胞向Treg细胞的转化。而SMAD4的敲除会导致肿瘤细胞中TGF-β信号的失活，这增强了CCL9的表达和未成熟髓系细胞的募集。NF-κB信号通路PD-L1的表达受癌症细胞内NF-κB信号转导的转录调控，其途径是通过MUC1-c与CD274启动子上的NF-κB亚基p65的直接结合，或通过TGF-β介导的MRTFA的表达。MUC1-C和p65还驱动ZEB1转录，这导致编码CCL2、IFN-γ、GM-CSF和TLR9的基因受到抑制，CD8+T细胞浸润受损。相反，免疫疗法和化疗诱导的NF-κB和p300–CBP的活化增强了MHC-I抗原呈递和CD8+T细胞识别。HIF信号通路缺氧诱导的缺氧诱导因子1α（HIF1α）信号通路通过增强CD274的表达和抑制编码CCL2和CCL5的基因来驱动免疫逃避，这会损害NK细胞和CD8+T细胞的浸润，而HIF2α诱导CXCL1的表达并促进肿瘤的中性粒细胞募集。代谢改变在肿瘤的发生和进展过程中，癌症细胞及其TME不断暴露在恶劣的条件和压力下。为了生存和维持生长，需要细胞适应和代谢重编程。癌症代谢重编程与免疫抑制和逃避有关。肿瘤细胞消耗大量葡萄糖，这与T细胞浸润不良有关。高葡萄糖消耗导致乳酸的产生并分泌到肿瘤微环境中，乳酸在肿瘤微环境中以免疫抑制的方式起作用，降低NK细胞的细胞溶解活性，并增强PD-1表达和Treg细胞的免疫抑制能力。此外，乳酸增加了肿瘤和脾脏中MDSC的频率，并在肿瘤相关巨噬细胞中诱导“M2样”极化。此外，癌症细胞中谷氨酰胺的消耗降低CD8+T细胞的活化和浸润，并通过增加G-CSF的分泌增强MDSC的募集。小结近年来，关于癌症细胞-免疫细胞串扰的研究大幅增长。跨越式发展的技术进步，包括单细胞多组学技术，基于人工智能的系统生物学方法以及体内体细胞基因编辑策略，有望加速这些研究的深入，并最终形成针对个体患者的新型免疫干预策略。展望未来，个性化免疫干预策略将需要综合多组学肿瘤表征、免疫分析、液体活检样本的动态监测以评估基于血液的生物标志物、计算数据分析和转化，以及临床相关体外和体内模型的机制研究。有关癌症细胞内在和癌症细胞外部特征的知识体系将共同决定局部和系统免疫状况，以指导临床决策，并为针对患者个性化新型治疗方法开辟道路。参考文献：1.Mechanisms driving the immunoregulatory function of cancer cells. Nat Rev Cancer.2023 Jan 30.封面图来源：pixabay版权声明/免责声明本文为授权转载文章。本文仅作信息交流之目的，不提供任何商用、医用、投资用建议。文中图片、视频、字体、音乐等素材或为药时代购买的授权正版作品，或来自微信公共图片库，或取自公司官网/网络，部分素材根据CC0协议使用，版权归拥有者，药时代尽力注明来源。如有任何问题，请与我们联系。衷心感谢!药时代官方网站:www.drugtimes.cn联系方式:电话:13651980212微信:27674131邮箱:contact@drugtimes.cn股价大涨270%！涨的是所有GLP-1“弯道超车”的机会3个月减重近30斤，股价翻倍，Viking已被礼来看中？14.6亿美元！诺和诺德又有新交易点击这里，欣赏更多精彩内容！

导读：免疫检查点阻断（ICB）为治疗胃癌（G.C.）提供了新的机会。了解免疫检查点的上游调控对于进一步提高ICB治疗的疗效至关重要。6月26日，北京大学肿瘤医院季加孚教授团队在《Signal Transduction and Targeted Therapy》上发表题为“TRIM28 promotes the escape of gastric cancer cells from immune surveillance by increasing PD-L1 abundance”的研究论文，研究表明TBK1抑制剂与CTLA4免疫检查点阻断联合使用对G.C.具有协同作用，为G.C.治疗提供了一种新的策略。https://www-nature-com.libproxy1.nus.edu.sg/articles/s41392-023-01450-3研究背景 01 尽管胃癌（G.C.）的发病率和相关死亡率继续下降，但 2020 年全球有 1，089，103 人被诊断患有胃癌;约有768，793人死亡，使其成为当年癌症相关死亡的第三大原因。这些病例中约有44%（478，508例）来自中国。识别免疫检查点（I.C.）和开发I.C.抑制剂（ICI）已经彻底改变了癌症治疗。阻断PD-1 / PD-L1通路的免疫疗法最近已被用于G.C.治疗。帕博利珠单抗（Keytruda）是一种人源化抗体，已被批准用于表达PD-L1的复发性局部晚期或转移性胃或胃食管交界处（GEJ）腺癌患者的免疫治疗。越来越多的证据表明，PD-L1是确定免疫治疗疗效的重要生物标志物。因此，了解调控PD-L1在G.C.细胞中表达和/或稳定性的分子机制将为改善免疫疗法的临床反应提供分子证据。研究进展 02 为了找到调节G.C中PD-L1表达的基因，我们在N9胃癌细胞系中进行了基于全基因组CRISPR-Cas87的筛选。细胞感染含有向导RNA（gRNA）的慢病毒，并用嘌呤霉素进行选择。根据PD-L1表达对转导细胞进行分选，并进行深度测序分析。随后，我们使用MAGeCK算法通过计算每个基因的β评分对负或正调节PD-L1表达的基因进行评分。在我们的结果中，作为PD-L1表达的已知调节因子的基因，如CD274，IRF2，STAT3和IRF1，被负性选择，确认了我们筛选系统的效率和精度。此外，TRIM28位于调节PD-L300稳定性的1个正向选择基因的顶部。为了验证这一观察结果，我们进行了CRISPR-Cas1介导的TRIM9敲除，结果表明TRIM28的缺失显著降低了G.C.细胞中PD-L28的表达。接下来，我们研究了TRIM28和PD-L1表达之间的相关性。首先，我们检测了TRIM28在多个G.C.细胞系中的基本表达水平。我们调节了不同G.C.细胞系中的TRIM28表达。结果表明，TRIM28过表达显著提高了SGC-7901和MGC-803细胞中PD-L1蛋白水平，而TRIM28去除降低了AGS和BGC-823细胞中PD-L1表达，表明TRIM28正向调节G.C.细胞中PD-L1的表达。据报道，PD-L1很容易经历翻译后修饰;因此，我们进一步研究了TRIM28是否直接调节PD-L1蛋白稳定性。结果表明，TRIM28的耗竭显著缩短了PD-L1的半衰期，表明TRIM28稳定了G.C.细胞中的PD-L1蛋白。有趣的是，我们观察到TRIM28还可以上调PD-L1 mRNA水平，表明TRIM28可能对PD-L1的mRNA和蛋白质水平都有调节作用。研究结论 03 研究中，我们在N87胃癌细胞系中进行了基于FACS的全基因组CRISPR-Cas9筛选。使用MAGeCK分析并比较了PD-L1低亚群和高PD-L1亚群之间的sgRNA丰度。我们的筛选确定TRIM28，也称为TIF1β和KAP1，是PD-L1的顶级假定调节因子之一。我们进行了几项生化分析，以阐明TRIM28对G.C.细胞中PD-L1稳定性和表达的影响。为了研究TRIM28耗竭或过表达对G.C.细胞中全局基因表达的影响，进行了RNA-seq。利用综合生物信息学分析，小鼠模型和临床观察，我们试图揭示TRIM28介导的PD-L1上调对肿瘤生长和抗肿瘤免疫的影响。总之，我们的研究不仅揭示了一种调节PD-L1表达和稳定性的新机制，而且还强调了使用TBK1抑制剂与CTLA4免疫检查点阻断联合治疗G.C.的潜在策略。参考资料：https://www-nature-com.libproxy1.nus.edu.sg/articles/s41392-023-01450-3

RAS信号在驱动正常细胞的生理增殖中起着至关重要的作用，然而这一信号通路的失调通常发生在肿瘤形成过程中。KRAS是实肿瘤中变化最频繁的致癌蛋白，但由于突变体中缺乏药理学上的靶向部分，KRAS很长时间以来一直被认为是不可成药的。然而，多年来药物设计的进步使得对KRAS突变选择性抑制剂的开发取得了许多突破。2021年，随着Amgen 的KRASG12C抑制剂sotorasib被批准用于特定的NSCLC患者亚群，数十年的研究终于取得了一些临床成功。本文就RAS通路、突变类型， 以及KRAS靶向治疗策略的进展做一个简要介绍。RAS 信号通路Ras-RAF-MEK-ERK丝裂原活化激酶信号通路(MAPK)被大多数生长因子、细胞因子、整合素和趋化因子受体激活。典型的信号通路模式具有一个受体酪氨酸激酶(RTK)连接到RAS-RAF-MEK-ERK进行级联。RAS家族KRAS、NRAS和HRAS分别在GTP-on和GDP-off状态之间循环，参与RAS-鸟嘌呤核苷酸交换因子(RAS-GEF)和RAS-GTP酶激活蛋白(RAS-GAP)的作用。携带GTP的RAS可以与下游效应蛋白中的RAS结合域相互作用，包括RAF家族的ARAF、BRAF和RAF1。活性RAS将RAF蛋白招募到细胞膜上，在那里与膜脂相互作用，二聚化后被激活。活性RAF激酶磷酸化并激活MEK进而磷酸化激活ERK1/2。然后，ERK1/2可以磷酸化多种胞浆和核蛋白，例如激酶(如RSK、MSK和MNK)、转录因子和细胞骨架蛋白(图1)。图1. RAS信号通路和针对该通路的治疗方法在癌症中的作用RAS基因突变RAS-RAF-MEK-ERK通路的突变，包括各种RTK、SHP2、NF1、RAS、RAF或MEK1/MEK2，可导致该通路的异常激活和肿瘤的发生。RAS突变或扩增是人类癌症中最常见：NRAS突变出现在黑色素瘤和许多血液恶性肿瘤中；HRAS突变主要发生在膀胱癌、甲状腺癌、宫颈癌和头颈癌。KRAS发生突变的频率最高，特别是在实体肿瘤中。~17%的实体瘤有KRAS突变，包括~90%的胰腺癌，~50%的结肠癌和~25%的肺腺癌。KRAS突变在非小细胞肺癌中占主导地位，约占此类肿瘤中所有RAS突变的78%(图2)。图2. KRAS、NRAS和HRAS突变在不同肿瘤类型中的发生率几乎所有与癌症相关的RAS突变都会影响密码子12、13或61，并导致RAS-GTP/RAS-GDP比值显著增加和RAS效应器的结构性激活。KRAS的glycine 12(G12)上的突变是最常见的，其次是glycine 13(G13)。glycine 12(G12)最常见突变是G12C、G12V或G12D，分别占NSCLC中KRAS突变的40%、19%和15%。KRAS G12C突变并不是非小细胞肺癌独有的，在CRC (3%)和PDAC (1%)中也较少发生。与EGFR和ALK突变不同，KRAS突变，特别是KRASG12C和KRASG12V，与吸烟密切相关。KRAS成药性的三大挑战几十年来对KRAS和其他RAS亚型进行药物治疗的难度主要来自三个关键生化特征构成的挑战：RAS蛋白的对GTP的皮摩尔亲和力；细胞内高浓度的GTP(~500 nM)；RAS蛋白中缺乏深的或可药理作用的小分子结合口袋。因此，要克服RAS对GTP的皮摩尔亲和力，就需要具有超强结合能力的小分子抑制剂。此外，KRAS蛋白的GTP结合位点在特定的KRAS突变体之间存在差异，如G12C、G12D、G12V、G13D和Q61H突变体，这进一步使KRAS抑制剂的设计复杂化。KRASG12C的突破2013年，K.Shokat实验室在KRAS靶向方面实现了重大突破。利用一种独特的基于二硫键片段的化学库方法，他们筛选了480种与半胱氨酸攻击亲核试剂偶联的化合物，并最终鉴定了与KRASG12C-GDP共价和选择性结合的化合物。X射线结晶学显示，该化合物与KRASG12C-GDP中由于半胱氨酸突变而扩大的switch 2口袋结合，并将亲核弹头偶联到半胱氨酸。因此，这种类型的抑制剂是KRASG12C特异性的，它们不会影响正常细胞中的RAS信号，毒性风险很低。大量药物化学的研究导致了ARS-853、ARS1620以及临床上KRASG12C抑制剂的开发，包括sotorasib和adagrasib。这些化合物的抑制使得相当大比例的细胞KRASG12C至少暂时处于GDP结合状态。KRASG12C抑制剂的临床进展在I/II期CodeBreaK 100临床研究中, 22名接受sotorasib治疗的晚期KRASG12C突变实肿瘤患者的初步数据表明， 6名NSCLC 患者中有1名患者有部分反应(PR)。后续I期129名患者数据显示，59名晚期非小细胞肺癌患者的ORR为32.2%，DCR为88.1%，中位PFS为6.3个月；42名CRC患者的ORR为7.1%，DCR为73.8%，中位PFS为4.0个月。黑色素瘤、胰腺癌、子宫内膜癌或阑尾癌患者也有反应。CodeBreaK 100的II期部分包括124名晚期KRASG12C突变非小细胞肺癌患者，其ORR为37.1%，中位反应时间(DoR)为11.1个月，中位PFS为6.8个月，中位OS为12.5个月。这些令人印象深刻的结果导致了2021年FDA加速批准Sotorasib用于KRASG12C突变非小细胞肺癌患者。一项包括CodeBreaK 100 I期和II期的174名非小细胞肺癌患者的最新分析显示，1年OS为50.8%，2年OS为30.3%。此外，来自CodeBreaK 100的PDAC队列的数据显示，在经过大量预处理的患者群体(n=38)中，ORR为21.1%，DCR为84.2%。然而，在CRC队列(n=62)中没有看到类似的成功，ORR仅为9.7%。在III期CodeBreaK 200试验中，sotorasib目前正在与多西紫杉醇进行比较，用于晚期KRASG12C突变NSCLC的二线或更晚线的治疗，主要终点为PFS。一线试验也在进行中(NCT04933695)，许多试验也正在测试sotorasib与其他药物联合实验 (表1)。表1.临床和临床前的KRAS抑制剂Adagrasib是第二个进入临床测试的KRASG12C抑制剂。根据I/II  期KRYSTAL-1试验的数据，获得了FDA突破性疗法认定。在2021年欧洲医学肿瘤学会(ESMO)上公布的试验数据显示，有96%的DCR：45%的PR，51% STD。在KRYSTAL-1的I/Ib期部分，16名KRASG12C突变非小细胞肺癌患者接受adagrasib治疗，中位PFS为11.1个月，中位DoR为16.4个月。在 KRYSTAL-1 II 期的 116 名NSCLC 患者数据显示 ORR 为 42.9%，DCR 为 79.5%，中位 DoR 为 8.5 个月，中位 PFS 为 6.5 个月，中位 OS 为 12.6 个月 ，1 年 OS 预估为 50.8%。此外，在既往接受治疗的脑转移患者亚组(n=33)中，颅内ORR为33.3%。在KRYSTAL-1的另一个II期队列中，10名KRASG12C突变的PDAC患者和17名KRASG12C突变的non-CRC胃肠道肿瘤患者的ORR分别为50%和35%，两组的DCR均为100%；在45名KRASG12C突变的CRC患者中，adagrasib单独治疗的ORR为22%，DCR为87%，中位DoR为4.2个月，中位PFS为5.6个月；在另外28名接受adagrasib和西妥昔单抗联合治疗的患者中，ORR为43%，DCR为100%。Adagrasib的许多临床试验依然正在进行中。处于I/II期试验的其他KRASG12C靶向药物还包括GDC-6036、        JDQ443、LY3537982、D-1553、JNJ-74699157、BI 1823911、JAB-21822和MK-1084。一些KRASG12C或其他KRAS突变的抑制剂也正在临床前开发中，不在一一细细介绍。克服KRASG12C抑制剂耐药性的策略无疑KRASG12C抑制剂的开发为KRAS突变患者带来更好、更安全的解决方案。然而，KRASG12C抑制剂至少作为单一药物使患者长期受益的可能性是有限的。目前已经报道了对这些突变特异性药物的几种主要的获得性耐药机制。此外，诱导免疫抑制的TME也与这些药物的耐药性有关。目前正在开发几种策略来限制适应性耐药性和延长对KRASG12C抑制剂的反应。垂直组合虽然适应性耐药通常涉及几个RTK和RTK配体的上调，但一个或多个RTK-配体组合可以在单个肿瘤中占据主导地位。在NSCLC和CRC中，KRASG12C抑制导致激活上游EGFR或其他ERBB家族成员的聚集，这有助于逃避单一KRASG12C抑制剂的治疗。因此，KRASG12C和EGFR的联合抑制目前正在几个临床试验中进行研究。在CodeBreaK 101(NCT04185883)中，sotorasib与EGFR/HER2酪氨酸激酶抑制剂afatinib或EGFR单抗panitumumab联合使用。来自CodeBreaK101的sotorasib–afatinib组合的数据于2021年底公布，显示出可控的安全性。在两个剂量队列中观察到疗效信号，ORR分别为20.0%和34.8%，DCR分别为70.0%和73.9%。Adagrasib正在与EGFR抗体西妥昔单抗联合进行KRYSTAL-1 (NCT03785249)和 KRYSTAL-10 （NCT04793958）实验。GDC-6036正在与西妥昔单抗以及EGFR酪氨酸激酶抑制剂erlotinib也正在进行联合测试(NCT04449874)。通过SOS1间接靶向RAS构成了这一信号通路的另一种垂直抑制形式。SOS1及其类似物SOS2是关键的RAS-GEF。因此，SOS1/2抑制为抑制RAS突变体的活性提供了一种不同的策略，这些突变体至少保留了一些通过固有的或GAP刺激的GTP酶活性进行GTP水解的能力。BI-3406是一种口服小分子抑制剂，它选择性地结合在SOS1的活性部位，并破坏其与RAS-GDP的相互作用。鉴于SOS1抑制剂影响KRAS相互作用，它们可能在许多KRAS突变中都是活跃的，包括G12C、G12V、G12S、G12A和G12D，但G12R不能与SOS1的催化域结合。在临床前研究中，BI-3406抑制了一系列KRAS突变的NSCLC、PDAC和CRC细胞系的细胞增殖。BI 1701963是一种类似于BI-3406的小分子，也会损害KRAS-SOS1结合。该药物已作为单一疗法(NCT04111458)以及与adagrasib (KRYSTAL-14；NCT04975256)和BI 1823911(NCT04973163)联合使用进入临床试验。另一种SOS1抑制剂BAY-293与KRASG12C抑制剂ARS-853联合使用时，已被证明对KRASG12C突变细胞株具有活性。BAY-293对其他KRAS突变的NSCLC和PDAC细胞株也显示出细胞毒性，并与MEK、CDK4/6、拓扑异构酶I或EGFR抑制剂具有协同作用。水平组合抑制mTOR已被开发为对KRAS或MEK抑制剂适应性耐药的替代策略。在PDAC的几个临床前模型中，对KRAS或MEK抑制的耐药可能是通过整合素连接激酶(ILK)介导的mTORC2组成部分Rictor的磷酸化以及随后mTORC2介导的AKT的磷酸化而产生的旁路信号。因此，联合抑制KRASG12C或MEK和mTORC1/2可协同抑制ERK和AKT的激活，导致持久抑制PDAC肿瘤的生长和转移。在CodeBreak 101中，mTOR抑制剂everolimus正在与sotorasib联合进行评估(NCT04185883)。细胞周期抑制为与KRAS抑制剂的协同作用提供了另一种潜在的水平组合策略。CDK4/6抑制剂，如palbociclib、riociclib和abemaciclib，对某些癌症，特别是雌激素受体阳性的乳腺癌具有有效的治疗作用。D- type 细胞周期蛋白是RAS-MAPK和PI3K-AKT信号通路的一个交汇点。此外，体外和体内的临床前研究表明，在NSCLC和PDAC模型中，CDK4/6和KRASG12C共同抑制具有协同作用。CodeBreak 101正在将sotorasib和palbociclib组合在患者身上测试这一概念(NCT04185883)。有丝分裂检查点激酶WEE1是另一个重要的细胞周期调节因子，也是癌症治疗的靶点。多激酶抑制剂索拉非尼在KRASG12V突变细胞系中活性较差，高通量筛选发现WEE1是索拉非尼反应的潜在调节剂，可作为药理靶点。鉴于这些相互作用，已经在KRASG12C抑制剂获得性耐药模型中评估了WEE1的作用，证实了WEE1 抑制剂adavosertib和VIC-1911在体外和体内对sotorasib耐药NSCLC细胞的协同活性。与免疫治疗相结合的策略突变的KRAS像其他驱动癌基因一样，除了改变癌细胞本身的行为外，还对TME中其他细胞产生影响。KRAS具有多种免疫调节作用(图3)。激活KRAS可增加中性粒细胞趋化因子CXCL1、CXCL2和CXCL5的产生；通过上调细胞间黏附分子1(ICAM 1)的表达促进促炎性M1巨噬细胞的募集。相反，KRAS和MYC的共同激活通过CCL9和IL-23的释放增加抗炎性M2巨噬细胞的募集；通过分泌TGF-β和IL-10诱导Treg细胞分化；通过依赖GM-CSF和IRF2/CXCL3的机制促进肿瘤对MDSC的侵袭。图3. KRAS的免疫调节作用示意图由于突变的KRAS具有直接和间接免疫调节作用的各种机制，特别是当它们与细胞毒T细胞活性有关时，将KRAS抑制剂与ICIs结合是一个合理的策略。在用sotorasib治疗KRASG12C突变肿瘤的小鼠模型中，TME内出现了促炎变化，与ICIs联合治疗导致了肿瘤细胞的协同杀伤。此外，用sotorasib和PD-1抗体的组合治愈的小鼠在再次攻击时可以排斥同基因的KRASG12C和KRASG12D细胞，这表明有足够的免疫记忆细胞对共同的抗原做出反应。将KRASG12C抑制剂与ICIs相结合的方法已经在几个临床试验中对KRASG12C实体瘤患者进行评估，包括ICIs与sotorasib联合的CodeBreaK 100(NCT03600883)、CodeBreaK 101(NCT04185883)；ICIs与adagrasib联合的 Krystore-1(NCT03785249)和Krystore-7(NCT04613596)；ICIs与GDC-6036联合的GO42144(NCT04449874)；ICIs与JDQ443联合的KontRASt-01(NCT04699188)。小编小结自从三十多年前在肺癌中发现KRAS突变以来，针对KRAS的药物取得了长足的进步，随着KRASG12C抑制剂sotorasib的批准，人们终于在看似“不可成药”的KRAS靶点上取得了一些突破和成功。由于RAS途径的复杂性以及 KRAS靶向治疗的耐药性，后续依然具有广阔的药物开发空间。目前大量的抑制剂、联合疗法以及新的替代靶向方法正在进行临床前和临床研究，我们期待后续更多的突破……参考文献1.The current state of the art and  future trends in RAS- targeted  cancer therapies.2.RAS: striking at the core of the oncogenic circuitry.3.Targeting the MAPK pathway in RAS mutant cancers.4.RAS isoforms and mutations in cancer at a glance.