HCST

摘要:免疫细胞疗法作为一种革命性的治疗方式，显著改变了癌症治疗。它是一种专业的免疫疗法，利用活的免疫细胞作为治疗癌症的生物制剂。与传统药物不同，细胞疗法被认为是“活药”，这些产品目前是定制的，需要先进的制造技术。尽管嵌合抗原受体（CAR）-T细胞疗法在治疗血液恶性肿瘤方面受到了行业的极大关注，但其在治疗实体瘤方面的有效性常常受限，导致替代性免疫细胞疗法的出现。肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）疗法、细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞疗法、树突状细胞（DC）疫苗以及DC/CIK细胞疗法旨在利用人体的自然防御机制来靶向和消除癌细胞，通常具有较少的副作用或风险。另一方面，如嵌合抗原受体-T（CAR-T）细胞、T细胞受体（TCR）-T、嵌合抗原受体-自然杀伤（CAR-NK）或CAR-巨噬细胞（CAR-M）等细胞疗法通常使用自体干细胞、同种异体或异种细胞，或基因修饰细胞，这需要更高水平的操纵，被认为是高风险的。这些高风险细胞疗法通常在肿瘤靶向和信号传导方面具有特殊特性，触发新的抗肿瘤免疫反应。最近，在抗肿瘤机制、细胞疗法产品设计和技术革新方面取得了显著进展。随着技术的快速整合和高度创新的格局，关键的未来发展方向已经出现。为了满足癌症治疗中细胞疗法技术进步的需求，我们在本研究中全面系统地调查了免疫细胞疗法的技术革新和临床进展。基于免疫细胞疗法的治疗机制和方法学特点，我们分析了这些疗法的主要技术优势和临床转化风险。我们还分析和预测了应用前景，为相关企业提供了必要的信息，以便他们做出关于研发方向选择的明智决策。 1.介绍 癌症是一种利用多种逃逸机制来逃避抗癌免疫的全身性疾病，并且显著改变了整个免疫系统的功能和组成。抗癌疗法的发展跨越了一百年，其在消除癌细胞的同时，对健康组织的损害最小化，效果和特异性不断提高。为了实现这一目标，免疫细胞疗法在现有方法中脱颖而出，成为改变游戏规则的解决方案。2017年，美国食品药品监督管理局（FDA）批准了两种嵌合抗原受体-T（CAR-T）细胞疗法，即Kite Pharma公司的axicabtagene ciloleucel（Yescarta）和诺华公司的tisagenlecleucel（Kymriah），用于治疗淋巴瘤。这些批准标志着加速抗癌治疗发展的一个重大里程碑。 免疫细胞疗法的基本概念是通过向患者提供具有所需功能的细胞来增强免疫反应，以对抗癌症。它不仅重新激活了现有的免疫反应，还推动了新的免疫反应参与到抗癌努力中。免疫细胞疗法的反应通常涉及多种免疫细胞类型的激活和协作，包括抗原呈递细胞，如树突状细胞（DCs）和巨噬细胞，T淋巴细胞（T细胞）以及自然杀伤（NK）细胞。一个肿瘤负担的免疫系统不仅在免疫细胞数量上失衡，而且在调节抗癌免疫反应的分子和信号通路上也表现出功能异常。因此，精确地施用适当的治疗策略是必要的，以防止免疫细胞疗法的次优效果。 根据不同的癌症类型及其机制，免疫过程的各个领域为治疗干预提供了途径。方法包括，例如，提取和扩增具有预先癌症识别能力的免疫细胞（例如，肿瘤浸润免疫细胞），外部分化有效细胞类型[例如，细胞因子诱导的杀手（CIK）细胞] ，以及基因修饰细胞以实现特定识别和肿瘤细胞消除[例如，T细胞受体（TCR）工程，嵌合抗原受体（CAR）] 。在这篇综述中，我们将讨论最新的免疫细胞疗法，总结应用于使各种类别的疗法得以实现和优化的策略，并提供未来的展望。 2.用低风险免疫细胞疗法治疗癌症 低风险免疫细胞疗法旨在利用患者的自身免疫细胞来消除癌细胞。需要注意的是，“低风险”强调了细胞疗法领域内某些疗法相对更安全、副作用更少，这些疗法属于再生医学或先进治疗药物产品（ATMPs）。低风险免疫细胞疗法包括四种关键技术：肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）疗法、CIK细胞疗法、树突状细胞（DC）疫苗和DC/CIK细胞疗法。为了更全面地理解这些方法，深入研究支持每种细胞疗法的基本机制和临床进展至关重要。 2.1.TIL细胞疗法 TIL是自然存在于实体肿瘤微环境（TME）中的单核细胞，包括肿瘤内肿瘤浸润淋巴细胞（iTILs）和基质肿瘤浸润淋巴细胞（sTILs）。sTILs主要是效应记忆T细胞，与iTILs相比更容易被检测到。作为一群已经接触过肿瘤组织的异质性淋巴细胞，TIL被“预训练”来攻击癌细胞，同时保留健康细胞。在小鼠肿瘤模型中，这些异质性细胞显示出治疗晚期癌症的潜力，第一种人类TIL疗法导致转移性黑色素瘤显著退化。实体瘤缺乏理想的肿瘤标记，使得针对肿瘤相关抗原（TAAs）的靶向变得具有挑战性。TIL作为具有多样受体的多克隆细胞，为实体瘤提供了独特的治疗选择。与基因修饰的免疫细胞相比，TIL在克服治疗实体瘤的异质性方面表现出优越性，尤其是像黑色素瘤这样高度异质性的肿瘤。此外，它们具有注射后迁移至TME的关键趋化因子受体，与CAR-T细胞相比，它们的低非靶向毒性归因于T细胞成熟过程中的负选择。 TIL可以从切除的肿瘤组织中分离出来。鉴于TIL在原始TME中的稀缺性，可用于扩增的TIL数量有限，以及阻碍TIL抗肿瘤细胞毒性的额外因素（例如，Treg、肿瘤相关巨噬细胞、髓源性抑制细胞和各种免疫抑制分子）。TIL的生产和扩增是TIL疗法成功的关键步骤。TIL体外扩增涉及快速扩增协议（REP）。在REP前期，TIL用高剂量白细胞介素（IL）-2进行初步扩增。有些方法涉及选择肿瘤特异性TIL进行进一步扩增，而其他方法则扩增大量TIL以保持疗效。在REP阶段，同时给予高剂量IL-2和抗CD3，并使用辐照的同种异体外周血单核细胞（PBMCs）作为饲养细胞，直到获得足够数量的细胞。然后，经过质量控制的扩增细胞产品准备好后，就可以进行淋巴细胞耗竭后的患者给药。 自Rosenberg等人在1988年成功将TIL疗法应用于转移性黑色素瘤患者以来，一系列临床试验相继出现。1996年，TIL疗法首次在涉及113名患者的临床研究中用于治疗非小细胞肺癌（NSCLC）。结果显示，TIL结合IL-2是NSCLC的有效治疗，与II期或IIIa期NSCLC相比，IIIb期NSCLC有选择性益处。在初步成功后，TIL疗法的后续发展旨在提高治疗其他肿瘤类型的疗效，包括皮肤、肾脏和胃癌。这些发展中的具体方法旨在阐明TIL细胞类型的组成及其与临床结果的相关性。例如，成功生成肿瘤浸润B淋巴细胞（TIBs）已被发现可以预测转移性肾细胞癌（mRCC）患者的改善临床结果。另一项关于TIL治疗胃癌的研究揭示了TIL的组织学亚群与不同的生存时间相关。目前，TIL疗法的临床转化仍处于初步阶段，缺乏长期临床观察。然而，初步成功表明有机会开发有前途的治疗性TIL，具有更高效的分离和扩增方法，以及与其他抗肿瘤疗法的潜在替代组合。 2.2.CIK细胞疗法 CIK细胞是具有混合T细胞和NK细胞样表型的异质性免疫效应细胞。它们是通过将人的外周血单核细胞(PBMC)或脐带血单核细胞与干扰素γ(IFN-γ)、抗CD3抗体、重组人IL-1和IL-2一起体外孵育生成的。CIK细胞独特地表现出不依赖主要组织相容性复合体(MHC)的肿瘤靶向，减少异体反应，并能够攻击各种类型的肿瘤[3]。在体外培养过程中，CIK细胞分泌各种细胞因子，激活巨噬细胞、NK细胞和CD8+ T细胞的细胞毒性活性，从而直接抑制肿瘤细胞的生长并促进间接杀伤效应。CIK细胞诱导凋亡基因和抗肿瘤基因的表达，进行细胞毒性活性并促进肿瘤细胞凋亡。它们的肿瘤杀伤效应主要是通过通过粘附分子淋巴细胞功能相关抗原-1/同源配体细胞间粘附分子-1(LFA-1/cam-1)与肿瘤细胞上的抗原结合的机制。这促进了MHC-I或MHC-II分子的表达，导致增强的呈递、激活、识别和直接杀死肿瘤细胞。 活化的CIK细胞分泌各种细胞因子，包括IL-2、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和其他细胞因子，不仅直接增强细胞毒性效应和抑制肿瘤细胞，而且还通过调节免疫系统间接杀死肿瘤细胞。IFN-γ主要由CIK细胞产生，增强NK细胞、巨噬细胞和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的活性。它还可以促进肿瘤细胞上MHC-I分子的表达，导致CTL杀伤增加。最近的研究表明，CIK细胞分泌的IFN-γ可以促进慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞上ICAM-1的表达，对细胞毒性效应细胞的凋亡诱导产生积极影响。肿瘤细胞的凋亡基因也可以被CIK细胞激活，因为这些细胞表达FasL，一种属于TNF超家族的Fas配体，它诱导肿瘤细胞凋亡。Verneris提出，某些肿瘤细胞(如黑色素瘤和卵巢癌)通过FasL诱导淋巴细胞凋亡来逃避免疫清除，但它们对CIK细胞敏感。这是因为，在CIK细胞的诱导过程中，Fas敏感或活化的T细胞通过IFN-γ等细胞因子的作用或激活诱导的细胞死亡机制被选择性地消除。结合CIK细胞中抗凋亡基因的高水平表达，这些因素使CIK细胞能够耐受表达FasL的肿瘤细胞诱导的凋亡。 尽管存在复发和无反应的担忧，CIK细胞的异质性使它们能够靶向并杀死各种肿瘤细胞。自1991年引入CIK细胞疗法以来，已有5000多名患有不同肿瘤类型的患者，包括肺癌、乳腺癌、脑癌和结直肠癌，参与了CIK细胞疗法。CIK细胞(或CIK细胞与DCs结合)的临床试验已超过80项，全球范围内。CIK细胞的治疗潜力超出了它们与NKG2D的相互作用，包括抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)轴。与其他免疫疗法、常规化疗或放疗一起，CIK疗法表明了协同的抗肿瘤效应，不断发展并是治疗癌症的有希望的途径。虽然临床前景是有希望的，但一些公开讨论是必要的。比较CIK细胞与其他免疫细胞输注后的毒性效应，最小化额外的支持性护理，确定与其他免疫疗法相比的优势，了解与CIK细胞在癌症微环境中的串扰的关键决定因素，并在多个中心推广这种方法需要探索。 2.3.DC疫苗 操纵患者的自体DCs对肿瘤组织进行"疫苗接种"是一种有前景的方法。DC疫苗涉及用TAAs处理体外培养的DCs，如肽、蛋白质、DNA/RNA或病毒。DCs将吸收抗原，然后在仔细控制的培养过程中激活。DCs作为强大的抗原呈递细胞，在影响免疫系统方面发挥着至关重要的作用。虽然未成熟的DCs处理外来抗原，触发成熟和迁移到淋巴结，成熟的DCs可以在TME内促进肿瘤耐受，可能导致T辅助型2反应。 通常使用体外成熟并用抗原脉冲的自体单核细胞的DC疫苗，在不同的肿瘤患者中显示出良好的耐受性和最小的毒性。然而，抗原特异性免疫反应的幅度和持续时间通常较弱，限制了客观的临床反应。尽管在儿童肿瘤中的反应有限，正在进行的研究集中在增强疫苗生产的每个步骤。策略包括扩大DC来源，提高免疫原性，优化抗原选择，开发新的免疫佐剂，并探索同时进行的免疫调节或化疗。 Sipuleucel-T是唯一获得FDA批准的自体DC疫苗，为有效治疗成人恶性肿瘤，特别是去势抵抗性前列腺腺癌带来了希望。通过培养患者的PBMCs与一种重组蛋白(PAP-GM-CSF)，该蛋白由TAA[前列腺酸性磷酸酶(PAP)]和GM-CSF组成。这种开创性的疫苗代表了DC疫苗领域的重大进步，展示了在成人和儿童恶性肿瘤中改善结果的潜在途径。在临床试验中，DCs主要用于与CIK细胞、免疫检查点抑制剂(ICI)以及化疗和放疗的组合免疫疗法中，以改善结果。研究表明DCs能够激活自然杀伤T(NKT)细胞，或同时激活CD4+和CD8+ T细胞。 2.4.DC/CIK细胞疗法 当多种低风险免疫细胞疗法一起使用时，可以实现积极的协同效应，特别是在DC和CIK的共同应用中，这种协同作用尤为明显，旨在增强身体对疾病的免疫反应。CIK细胞以其广谱的肿瘤杀伤效应而闻名，但由于缺乏特异性识别能力而受到限制。DC目前被认为是最有效的抗原呈递细胞，最新研究表明，CIK和DC之间的相互作用会在两个群体中引起免疫刺激性表面分子表达的变化。实际上，将DC与CIK细胞共培养发挥了互补作用，相互促进成熟，共同增加抗肿瘤活性，并展示了有希望的协同效应，甚至在以前对CIK有抵抗力且之前没有与DC共培养的肿瘤细胞系上也是如此。DC分泌的细胞因子，如IL-2、IL-12和IFN-γ，增强了CIK细胞的成熟，导致CIK细胞中CD3+、CD8+和CD56+亚群的水平增加。值得注意的是，DC分泌的IL-12显著增加，显著增强了CIKs的细胞溶解功能。此外，这种协作环境还减少了IL-10的分泌和调节性T细胞（CD4+CD25+ Treg细胞）的数量，减弱了它们对肿瘤免疫的抑制作用，增强了CIK细胞的肿瘤杀伤效应。同时，CIK细胞增强了DC的抗原呈递特异性和共刺激分子的表达，有助于整体增加抗肿瘤活性。此外，DC和CIK细胞的共培养抑制了人类端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白的表达，抑制了端粒酶活性，阻碍了肿瘤细胞的增殖。基于上述机制，以相互适应和协同作用为特征的DC-CIK疗法，已成为近年来肿瘤治疗领域的研究焦点。基础和临床研究迅速发展，并证明了在显著增强抗肿瘤免疫方面的有效性。尽管存在轻度移植物抗宿主病(GvHD)的担忧，试验经验表明结果是可控的。案例研究已经证明了安全性和提高的疗效。DC/CIK细胞疗法针对免疫系统的各个方面，实现了更全面的抗病方法。这在复杂情况或难治性恶性肿瘤中尤其有益，其中多种免疫功能障碍起作用。总的来说，低风险免疫细胞疗法可以帮助增强免疫系统识别和消除有害实体的能力，从而改善健康结果。这些疗法的协同效应有潜力显著提高基于免疫的治疗的有效性，并为患者提供更好的结果。然而，评估和定制这些疗法的精确组合和剂量以确保其对个体患者的安全性和有效性至关重要。 3.高风险免疫细胞疗法的技术进展 高风险免疫细胞疗法使用自体干细胞、同种异体或异种细胞，或基因修饰细胞，所有这些都需要进一步的操纵和评估。这些疗法的设计非常适合其预期目的。这些治疗刺激针对肿瘤的新免疫反应，通常有潜力重振现有的反应。在这里，我们描述了CAR-T、T细胞受体-T(TCR-T)、CAR-NK和CAR-巨噬细胞(CAR-M)等高风险免疫细胞疗法的特征设计、转染方法、细胞来源和克服抑制性TME的方法。此外，我们还提供了对即将到来的趋势的见解。 3.1.CAR的设计 CAR是工程化的受体蛋白，为免疫细胞提供了一种新的能力，可以识别癌细胞表面的特定抗原，从而可能触发免疫细胞消除癌细胞的专长。当前研究表明，即使是对CAR结构的微小修改也会显著影响治疗结果。它通常由三个模块化域组成：细胞外域、跨膜域和细胞内域。细胞外域：靶向的艺术。细胞外域包括用于目标结合的ScFv和铰链区域，通常是CAR工程细胞中的免疫球蛋白(Ig)样域铰链，并通过跨膜域锚定到细胞膜上。通过CAR的细胞外域引入了驱动免疫细胞激活的新功能，包括T细胞、NK细胞和巨噬细胞。CAR工程免疫细胞可以识别癌症特异性目标表位，而不受MHC和共受体的限制，使它们在寻找和杀死癌细胞方面更有效。CAR工程免疫细胞已经从针对单一抗原发展到针对两种不同的抗原，以优化治疗阴性抗原癌细胞逃逸或失去抗原的复发，并且与任一抗原的结合都会触发CAR工程免疫细胞的激活。这可以通过几种方式实现（图1A-C），例如将一个双顺反子载体转导到一个细胞中，编码两个独立的CAR分子，或将一个编码双价CAR分子的载体转导到细胞中，或两种不同的CAR工程免疫细胞产品的共同给药，或将两个编码不同CAR的载体共转导到一个免疫细胞中。这些方法对于B细胞淋巴性白血病尤其有前景，特别是对于复发或难治性B细胞急性淋巴性白血病(B-ALL)，因为临床研究表明CD19/CD22共转导CAR-T细胞和CD19/CD22双特异性CAR-T细胞具有显著的疗效。同样，I期临床试验表明，双特异性CD20/CD19 CAR-T也可用于治疗复发和难治性B细胞恶性肿瘤患者，在治疗28天后的总有效率为82%，显示出治疗的安全性和有效性。此外，Wang等人证明CD19/CD22双顺反子CAR-T与单特异性CD19或CD20 CAR-T细胞相比，在体外和体内具有等效或更好的功能。除了ScFv的优化外，细胞外区域也得到了改进。与直接作用于目标细胞的传统CAR不同，研究人员提出了一个新概念：模块化CAR(modCAR)。这种CAR-T（图1D, E）通常与其适配器一起工作，适配器的一端结合到细胞上，另一端用于识别和结合肿瘤表面抗原。适配器分子可以是单克隆抗体、抗体片段（图1D）、小分子或任何结构（图1E），可以针对至少一个所需的抗原，并介导目标细胞和效应细胞之间的交联。它提供了一种高度灵活、可定制和通用的方法，以快速优化效应细胞活性，潜在地实现智能抗原靶向。 图 1. CARs的设计策略。展示针对肿瘤的CARs设计示意图。(A) 通过将编码两个独立CAR分子的双顺反子载体转导到单个细胞中，可以产生双顺反子CAR工程化细胞。(B) 通过将编码串联CAR分子的载体转导到细胞中，产生双价CAR。(C) 通过两种不同的CAR工程免疫细胞产品的联合给药（上图）或将编码不同CAR的两个载体共转导到免疫细胞中（下图），实现双特异性，但产品将复杂且昂贵。可以使用抗体（D）或其他适配器（E）生成modCAR。(F) 设计“装甲”CAR共表达分子，包括细胞因子和/或趋化因子，以提高效果和持久性。(G) 通过添加分泌蛋白和结合剂，并利用特殊设计的配对机制执行AND、NOT和OR布尔逻辑门，实现SynNotch CARs。这也可以通过使用特殊设计的转录因子和转录机制（H）来实现。CAR：嵌合抗原受体；modCAR：模块化CAR。 装甲CAR（图1F）被设计为分泌细胞因子或其他分子，帮助抵消肿瘤微环境（TME）的免疫抑制特性，可能提高CAR工程细胞的持久性和有效性。有时被称为第四代CAR或TRUCKs（T细胞重定向以启动抗原非限制性细胞因子引发的杀伤），它们为CAR靶向组织提供了一种多功能治疗，超越了传统CAR-T细胞的能力。TRUCK概念目前正在通过共表达分子如趋化因子配体或基于第二代或第三代CAR的细胞因子组合来探索。其中，IL-7、IL-12、IL-15、IL-18、IL-23以及这些分子的各种组合正在进行早期阶段的试验。值得注意的是，IL-7和IL-15被发现可以促进CAR-T细胞的增殖，而IL-12和IL-18增强了T细胞的效应能力。此外，表达特定分子的工程CAR-T细胞，如CCL-19（C-C基序趋化因子配体19）或CCL-217，化学吸引其他免疫细胞或CAR-T细胞向附近的癌细胞移动。这增强了免疫细胞的渗透和CAR-T细胞的存活，导致CAR-T细胞的有效性增加。 CAR设计的更近期发展是合成Notch（SynNotch）受体（图1G, H），它提供了一种精确的靶向策略，允许精确控制CAR工程细胞的激活，同时通过整合可诱导的开关来最小化非靶向效应。一个典型案例使用布尔逻辑和逻辑门的原则，共定位依赖的蛋白开关（Co-LOCKR）可以通过满足所有条件时的构象变化来激活AND、NOT和OR布尔逻辑门。体外已证明针对癌细胞的特异性，但在临床应用中仍面临各种挑战。 细胞内域：信号传导和细胞功能。细胞内域由一系列共刺激域组成，CAR的分类基于共刺激域的数量。第一代CAR仅由CD3ζ组成，而第二代CAR除了CD3ζ外还包含一个共刺激域，第三代CAR则涉及一个以上的共刺激域以及CD3ζ。在T细胞中，已构建了第一代CAR，包含编码抗2,4,6-三硝基苯酚（TNP）抗体可变区域的重排基因片段，与α或β T细胞受体（α或β TCR）链的C区之一相连。转导T细胞后，这种结构可以稳定地表达在T细胞表面，并且可以MHC非限制性地识别肿瘤细胞，但在临床试验中显示出较弱的抗肿瘤效果。第二代CAR-T借鉴了T细胞激活的经典信号，并增加了一个共刺激分子，如4-1BB（也称为CD137）或CD28，这显著提高了CAR-T细胞的激活水平和增殖能力。临床数据支持接受第二代CAR-T细胞治疗的患者对其肿瘤负担有延长和有效的控制。新发现的共刺激分子目前包括诱导性共刺激分子（ICOS）、OX40（也称为CD134）和CD40等。第二代CAR结构在临床实践中使用最广泛。第三代CAR-T细胞包含两个共刺激分子，导致增强的细胞毒性。在临床试验中，当共同给药淋巴瘤患者使用针对CD19的第二代CAR-T细胞（具有CD28共刺激域）和第三代CAR-T细胞（具有CD28和4-1BB）时，观察到更长的持久性和更好的扩张。然而，目前仍有有限的临床数据可用于单独评估第三代CAR-Ts。在一项研究者发起的试验中，HD-CAR-1，一种第三代CAR-T疗法，在复发/难治性ALL的成年患者中进行了评估。在90天的研究期结束时，80%的患者实现了完全缓解（CR）。此外，最近的研究表明，配备4-1BB和CD28共刺激域的CAR-T细胞增强了T细胞记忆表型，与只有一个共刺激分子的细胞相比，表现出更好的增殖和细胞因子释放水平。 迄今为止，大多数涉及CAR-NK细胞的研究都使用了最初用于T细胞的CAR构建体。已开发出包含CD28或4-1BB共刺激域的第二代CAR-NK。最近的研究报告了含有4-1BB和CD3ζ细胞内域的CAR-NK，克服了抑制性信号并诱导了NK细胞特异性，导致杀死CD19+ aALL细胞。然而，已经为NK细胞专门创建了新的CAR设计，这些不同的CAR构建体对NK细胞的细胞毒性和细胞因子产生有不同的影响。研究表明，包含NK特异性共刺激域2B4（也称为CD244）的CAR-NK细胞显著增强了对肿瘤细胞的细胞毒性活性，诱导快速增殖，增加细胞因子产生，并减少凋亡。这表明与NK细胞上的常规4-1BB CAR相比，NK细胞特异性激活信号在CAR性能中起着至关重要的作用。此外，利用不同信号域的CAR构建体，如CD3ζ、DAP10和DAP12，在原代NK细胞或NK92细胞系中表现出不同的抗肿瘤活性。具体来说，具有CD3ζ信号域的CAR与包含DAP10域的CAR相比表现出优越的性能，而使用DAP12域的CAR优于包含CD3ζ域的CAR。 CAR-M细胞与CAR-T细胞具有相同的结构和代级分类，但它们的细胞内信号域的功能不同，主要用于增强吞噬作用。CAR-M细胞能够直接利用CD3ζ细胞内域来传递吞噬信号。Fc受体（FcRγ）的γ亚基和具有多个表皮生长因子样域的蛋白10（Megf10）也可以作为细胞内信号域。最近的结果表明，添加串联的PI3K招募域增加了癌细胞的吞噬。CAR-M的首个临床试验是第一代产品，其细胞内域包含CD3ζ，并且I期临床试验结果显示了有希望的初步安全性和有效性结果，并获得FDA的快速通道指定。 4.提高基因转移方法的效率 在免疫疗法中引入核酸，包括基因表达和CRISPR基因编辑，是一个至关重要但具有挑战性的步骤。近年来，由于经济上的好处，非病毒转染技术越来越受欢迎，克服了与病毒载体制造相关的劳动密集和昂贵程序以及cGMP（现行良好生产规范）合规性的监管要求。例如，可以利用转座子或移动遗传元素实现高效且持久的转基因表达，在产生稳定的CAR-T细胞方面引起了极大的兴趣。此外，电穿孔或机械穿孔使免疫细胞（如用于CRISPR-Cas9表达）的基因组编辑核酸的短暂表达成为可能，并已在基于mRNA的人类T细胞修饰中进行了探索。这些非病毒转染技术在程序简便性、容量和吞吐量以及有利的安全性方面提供了优势。与非病毒转染相比，病毒转导方法在临床环境中是普遍的模式，并且被广泛认为是转染具有挑战性的细胞类型（如免疫细胞）的高效方法。常用的病毒载体，如腺相关病毒载体和腺病毒载体，不能整合到宿主基因组。然而，逆转录病毒载体和慢病毒载体可以整合，并且表现出高传递效率，使它们非常适合转导高度复制的细胞，如免疫细胞。Tecartus104和Yescarta3，均由Kite Pharma生产，依赖于γ逆转录病毒（GRV）载体将CAR构建体转导到T细胞中，而Kymriah则使用慢病毒（LV）载体进行转导。通常，γ-逆转录病毒和LV系统经常用于将基因转移到T细胞中，研究表明它们通常产生30%-80%的转导效率。然而，安全性、效率和便利性问题是必须考虑的问题。与T细胞相比，病毒基因传递到原代NK细胞已被证明既具有挑战性又效率较低，可能由于NK细胞的固有特性。研究表明，使用逆转录病毒载体成功转染原代扩增的NK细胞，实现了27%-52%的单轮转染效率，并且在两轮转染后达到47%-75.4%。虽然逆转病毒已广泛用于最近的临床前和临床研究中生产CAR-NK细胞，但缺乏针对原代NK细胞的高效基因转移方法仍然是使用NK细胞进行免疫疗法的主要障碍。此外，与逆转录病毒转染相关的插入突变和对原代NK细胞活性的有害影响是临床应用中的主要限制。与逆转录病毒载体相比，基于慢病毒的转染对基因毒性和插入突变的风险较低。然而，原代NK细胞在LV转导中表现出低效率，需要多轮转染。最近，Bari等人证明，使用狒狒包膜糖蛋白变体（BaEV-LV）伪型的LV载体显示出比使用泡状口炎病毒糖蛋白（VSV-G-LV）伪型的转导效率高出20倍以上，这是用于伪型LV载体的第一种且仍然最广泛使用的糖蛋白。他们通过这种转染方法成功地在来自不同供体的约70%的原代人类NK细胞中表达了CD19-CAR，这些CD19-CAR NK细胞有效地且特异性地根除了CD19阳性肿瘤细胞。BaEV-gp伪型慢病毒带有肿瘤特异性CAR，在NK92细胞中显示出近100%的转导率，在iPSC衍生的NK细胞或激活的原代NK细胞中为50%-80%。因此，它可能是NK细胞CAR基因转移的有希望的载体。此外，使用长臂猿白血病病毒（GaLV）包膜蛋白伪型的慢病毒可以有效转导原代NK细胞。电穿孔和脂质体介导的方法也用于在NK细胞中传递外源基因。与上述病毒转染相比，这些方法提供了更快的转基因表达、降低的凋亡水平、更小的个体间差异和更高的基因转移效率。然而，外源DNA通常不会整合到目标细胞的基因组中，导致转基因的短暂表达在转染后约3-5天内下降。但是，当与DNA整合技术结合时，这些方法可以产生稳定转染并表达转基因的细胞。DNA转座子是可以通过切割和粘贴机制在载体和染色体之间有效转座的移动DNA元素。PiggyBac（PB）和Sleeping Beauty（SB）是迄今为止最常用的两种转座子系统，并且在与其他系统相比时，在哺乳动物细胞中显示出最高的转座活性。通过将含有CAR的质粒转染到iPSC中，以及转座酶DNA，成功稳定地创建了CAR-iPSC-NK细胞，表达CAR分子。与病毒载体相比，转座子系统提供了许多好处，如更低的免疫原性、增加的生物安全性、降低的生产成本以及能够转移具有接近9-10 kb货物容量的基因片段的能力。这些优势使其成为将CAR整合到NK细胞基因组中以实现持久表达的有力选择。然而，完全利用转座子系统对原代NK细胞进行转染需要优化，例如通过电转染提高转导效率和细胞活性。 巨噬细胞由于其识别和响应外来核酸的能力，比造血系统中的其他细胞更难转染和对遗传操作具有抵抗力。Bobadilla及其同事创建了一种基于HIV-1的慢病毒（LV）系统，该系统已被证明在通过Vpx诱导的SAMHD1降解后，能够有效地将转基因传递给骨髓细胞。Klichinsky的团队利用了一种复制缺陷的嵌合腺病毒载体Ad5F35，有效地将CAR传递给巨噬细胞，并同时促进M1表型的表达，最终增强了其抗肿瘤活性。这些结果强调了基因工程巨噬细胞在癌症免疫疗法中的潜力。与生成CAR-NK细胞的方法类似，转座系统也被用来将感兴趣的基因整合到宿主基因组中。 4.1.新型细胞来源方法推动现成的免疫细胞治疗产品 迄今为止，所有商业批准的癌症免疫细胞疗法都依赖于自体使用，即所使用的源材料是患者的自己的细胞。尽管这种方法已被证明有效，但仍存在重要的限制，例如在处理快速癌症进展的患者时，制造所需的等待时间不受欢迎，患者T细胞功能障碍可能导致制造失败，提取健康淋巴细胞时同时提取的恶性白血病细胞可能导致产品污染，高生产成本，标准化的复杂性，以及重新给药的机会受限。因此，当前的研究工作集中在开发同种异体疗法上，以克服自体疗法的限制。值得注意的是，CAR-NK是一种有前途的同种异体细胞疗法，对实体瘤和血液肿瘤都没有主要的毒性副作用。它是一种更简单、可重新注射且更经济的通用治疗。然而，目前的治疗还没有显示出强大的疗效和/或长期持久性，NK细胞更难进行工程改造。CAR-NK细胞的研究主要处于临床前和早期临床试验阶段，很少有临床试验报告。尽管如此，通用的同种异体CAR-NK细胞在癌症治疗中仍然显示出巨大的潜力。目前，CAR-M主要是一种自体疗法，但“现成的”同种异体CAR-M已经出现，并正在进行进一步研究。 为了开发同种异体方法，必须系统地解决最重大的风险：免疫排斥和移植物抗宿主病（GvHD）的发展。免疫排斥可以限制治疗的效力，因为接受者的免疫系统可能会排斥移植物。GvHD可能是致命的，由供体T细胞内源性αβ TCR复合体识别宿主肽-人类白细胞抗原（HLA）复合体，导致组织损伤。为了解决同种异体风险，可以采用两种主要策略。第一种是在供体αβ T细胞上除了引入CAR转基因外，进行额外的遗传改造。另一种是选择替代的细胞来源或亚群，如诱导多能干细胞（iPSCs）、脐带血（UCB）细胞、γδ T细胞、记忆T细胞亚群、病毒特异性T细胞（VST）等（VST）等。 为了消除内源性αβ TCR介导的GvHD，最直接的方法是破坏编码T细胞受体恒定（TRAC）α链的基因。Eyquem等人开发了一个案例，通过腺病毒转染和CRISPR-Cas9敲入技术将CAR构建体整合到TRAC位点，同时诱导CAR表达和TCR失活。与随机整合相比，CAR表达可以由内源性TCR启动子调节，并在暴露于抗原时模仿TCR转录，防止恒定和过度的T细胞激活，这可能导致T细胞分化和耗竭。此外，研究结果表明，这些TRAC-CD19 CAR-T细胞在小鼠ALL模型中显示出比用逆转录病毒编码的CAR的T细胞更大的抗肿瘤效力。此外，除了CRISPR-Cas9，基因编辑技术，如TALENs和锌指核酸酶（ZFNs），也被发现在消除TCR表达以创建“通用”供体T细胞方面有效。然而，尽管TCR缺失的CAR-T细胞降低了GvHD的风险，它们的长期持久性更短，可能是由于免疫排斥。因此，科学家们敲除了β2-微球蛋白（B2M）基因以限制HLA I分子的表达。这种方法防止了同种异体CAR-T细胞通过它们的TCR被识别为外来的，但仍然容易受到宿主NK细胞的裂解。因此，一项研究利用突变B2M融合蛋白来解决这个问题。为了提高在激活的同种异体CAR-T细胞生产过程中HLA-II消除的效率，一些学者提出抑制CIITA或HLA-DRA、HLA-DQA和HLA-DPA基因。 iPSCs具有无限的增殖和分化潜力，使它们成为创建大量同种异体HLA组合库的理想资源。通过从库中选择与HLA匹配的iPSC来源，可以最小化宿主和移植物之间的免疫排斥风险，但必须进行严格的质量控制以确保安全，因为未分化的、增殖的iPSCs可能引发不良结果。Wang等人产生了缺乏HLA-I/II、B2M和CD155的低免疫原性iPSC衍生的CAR-T细胞。研究表明它们通过在体内发挥效应功能来抑制肿瘤进展的有效性。此外，iPSCs也为生产符合临床需求的CAR-NK和CAR-M细胞铺平了道路。与分化的NK细胞或巨噬细胞相比，iPSCs可以更有效地被工程化以稳定表达CARs。Li等人通过向培养基中添加各种细胞因子和促分化蛋白来修改培养基，以将CAR转染的iPSCs分化为CAR-NK细胞。这些iPSC衍生的CAR-NK细胞在体外和体内都表现出强大的抗肿瘤活性。Zhang等人建立了骨髓/巨噬细胞分化方案，诱导CAR-iPSCs分化为骨髓细胞系，成功生成了足够的CAR-iMac细胞（iPSC衍生的CAR-M细胞）。然而，当在小鼠模型中进行测试时，CAR-iMacs的效力受到限制。总体而言，iPSC衍生的工程免疫细胞的发展涉及复杂的生产程序，需要精确的细胞产品制造和质量保证，以支持更广泛的临床应用。 γδ T细胞表达TCRγδ，以HLA非依赖的方式识别恶性细胞。它不需要消除TCR表达或信号，并且GvHD的风险很低或不存在。研究表明，γδ CAR-T细胞表现出与传统的αβ CAR-T细胞相似或更大的细胞毒性效果，在体内没有观察到GvHD。然而，它们在体外的细胞毒性能力持续时间较短。此外，抗CD20的γδ CAR-T细胞在B细胞淋巴瘤的动物模型中取得了有希望的结果，目前正在进行I期临床试验。值得注意的是，已经鉴定出以HLA非依赖方式针对多种肿瘤的TCR，这些TCR来自αβ和γδ TCR库，允许工程化免疫细胞攻击患者之间常见的肿瘤特异性抗原。 脐带血（UCB）提供了一个容易获得的NK细胞和同种异体T细胞的来源。它们富含γδ T细胞和造血干细胞（HSCs），尽管总细胞数量有限。来自脐带血的CAR-T细胞在体内表现出增强的肿瘤抑制作用，减少了IL-10的分泌，并降低了调节性T细胞（Tregs）的比例，表明其治疗潜力有所提高。Van Caeneghem等人从脐带血中分离出CD34+ HSCs，然后生成CAR-T细胞。这些CAR-T细胞具有原始表型（CD45RA+ CD62L+），不表达TCRαβ复合体，显著降低了GvHD的风险，并有效地消除肿瘤细胞。 记忆T细胞的特征是CD45RA−CD45RO+表型，它们不太可能发展成GvHD，也不太可能迁移到表现出GvHD的器官。研究表明，与分化的对应物相比，T记忆干细胞（TSCM）和中央记忆T细胞（Tcm）具有优越的增殖和干性潜力，在T细胞转移后的临床研究中表现出高扩增和持久性。 VSTs具有能够识别病毒抗原的TCR，如巨细胞病毒（CMV）、Epstein-Barr病毒（EBV）等。经过CAR改造的VSTs在实体瘤中表现出有希望的结果，但与CARs相比，工程化针对肿瘤的转基因TCR VSTs更具挑战性。在肿瘤细胞中表达EBV相关抗原的霍奇金淋巴瘤患者中，CAR-VST细胞的输注显示出良好的耐受性和缓解率。针对HER2的CAR-VST细胞产品在CMV血清阳性和进行性胶质母细胞瘤患者的I期临床试验中显示出安全性和临床效果。值得注意的是，可以建立VST库，以覆盖大多数患者，并适当匹配的线，促进CAR-T或TCR-T向肿瘤的重定向用于临床。 PBMCs通常来自外周循环或脐带血等。它是临床目的的主要NK细胞来源。来自PBMC的NK（PB-NK）细胞可以从HLA匹配和不匹配的供体中分离出来，扩大了潜在供体池。通常，它们表现出成熟的表型，增殖能力降低，细胞毒性增加，没有GvHD的风险。Töpfer等人已经证明，表达CAR的NK细胞系YTS以及PB-NK细胞可以成功地重定向对抗前列腺干细胞抗原（PSCA）阳性肿瘤，导致治疗的小鼠中有相当一部分完全消除肿瘤。一种短暂表达间皮素靶向mRNA CAR的CAR-PBMC细胞产品，MCY-M11，已进入临床试验（NCT03608618），它是一种混合产品，包含多样化的CAR工程化T细胞亚群、单核细胞和B细胞群体，展现出理想的功能和免疫表型特征。 NKT细胞，也称为CD1d限制性T细胞，是一群具有T细胞和NK细胞特性的异质性T细胞。这些细胞主要识别非多态性CD1d分子，这是一种结合自身和外来脂质和糖脂的抗原呈递分子。I型NKT或iNKT细胞缺乏HLA限制，可能作为通用供体细胞发挥作用，但其在体内的持久性尚不清楚。研究表明，CAR19-iNKT细胞表现出抗淋巴瘤活性，并增强了消除脑淋巴瘤的能力。另一种同种异体NKT，表达带有CD28和IL-15的抗CD19嵌合受体，目前正在进行针对复发或难治性B细胞恶性肿瘤患者的临床试验（NCT03774654）。 4.2.修改肿瘤环境以治疗免疫细胞 低持续性和输注后不充分的增殖是实体瘤免疫细胞治疗有效性的重大挑战，这在很大程度上归因于免疫抑制性微环境，它作为癌症进展的积极推动者，而不是被动的旁观者。肿瘤细胞居住在这个由浸润和宿主细胞（如T细胞和巨噬细胞）、分泌因子（如IL-10和转化生长因子β（TGFβ））以及细胞外基质（ECM）组成的异质微环境中。这些组分可以相互作用，为恶性细胞的生长、迁移和转移创造一个支持性的环境，从而逃避免疫系统和肿瘤特异性T细胞。 为了根除肿瘤，科学家们已经开发了几种策略，以促进CAR工程化或TCR工程化的治疗免疫细胞迁移和渗透到癌症焦点，包括使用趋化因子受体如CCR2、CXCR2、CCR4、CXCR4等。这些研究表明，CAR-T、TCR-T和NK细胞显示出增加的肿瘤渗透率，导致肿瘤缩小和增强的抗肿瘤效果。 然而，将基因工程免疫细胞渗透到肿瘤中只是抗击癌症的第一步。有时，可能需要直接转化方法来修改免疫抑制性微环境。使用免疫检查点抑制剂，如抗PD-1、抗PD-L1抗体和抗CTLA4抗体，可以改善免疫抑制性TME。然而，它可能导致药物抗性的出现、T细胞耗竭和复发，有时甚至可能导致危及生命的毒性。阻断TME中的TGF-β信号是提高检查点抑制剂效果和增强抗肿瘤反应的替代方法，由于其在肿瘤信号、重塑和代谢中的关键作用。临床证据也表明TGF-β信号与对检查点阻断剂无反应的患者之间存在相关性。为了解决这个问题，已经开发了双功能抗体-配体陷阱，使用针对CTLA-4或PD-L1的抗体与TGFβ受体II外域（TGFβRIIecd）融合。它可以在TME中隔离TGF-β，耗尽Tregs，并促进CTL共刺激。此外，通过转导显性负TGFβ受体-II（dnTGFβRII），开发了TGFβ抗性肿瘤特异性T细胞，并在动物模型和临床研究中显示出治疗益处。 另一种新策略是利用TME中高浓度的免疫抑制信号分子，通过引入一个嵌合开关受体（CSR），如PD-1:CD28、TIGIT:CD28、CTLA-4:CD28、TGF-βRII:4-1BB、Fas:4-1BB。CSR由PD-1、CTLA-4或TGF-βRII的细胞外域和CD28或4-1BB的细胞内域组成。T细胞与CSR一起转导CAR或TCR，以产生工程化的CTL。这些工程化的CTL仍然与肿瘤细胞上的免疫抑制分子相互作用，但通过细胞内域传递共刺激信号而不是抑制信号。 最近，这种策略已经进行了临床测试。发现这些工程化的细胞有效地克服了免疫抑制性TME，例如分泌更多的IFN-γ，积累在肿瘤中，并展现出优越的抗肿瘤功能。 ECM为各种抗癌治疗创造了物理屏障。然而，巨噬细胞在调节ECM和表现出肿瘤归巢行为方面发挥着关键作用。CAR工程化的巨噬细胞被证明能够主动迁移到肿瘤部位，作为药物输送系统时，能够在抗原特异性环境中局部输送细胞因子和/或细胞毒素，显著改变免疫抑制性TME，并通过吞噬作用消除肿瘤细胞。Zhang等人使用CAR修饰的巨噬细胞解决了ECM引起的免疫细胞渗透不足的问题。体外研究表明，CAR-147巨噬细胞能够重塑肿瘤的ECM，诱导CD3+ T细胞渗透，并提高肿瘤微环境中IL-12和IFN-γ的水平，最终展现抗肿瘤效果。 4.3.临床研究进展 从临床进展的角度来看，自2017年FDA批准第一种CAR-T细胞治疗产品以来，全球已有10种CAR-T产品获得批准（补充表1）。自2013年以来，CAR-T、CAR-NK和TCR-T疗法的临床研究迅速增加，到2022年CAR-T细胞治疗的数量达到258例，值得注意的是，2023年的数据来自1月至10月（图2A）。从国家的角度来看，高风险细胞治疗的临床研究主要分布在美国和中国，占全球研究的80%以上（图2B）。CAR-T治疗的主要临床治疗目标是CD19、CD22、CD20和B细胞成熟抗原（BCMA）。在血液肿瘤中，增长最快的适应症是淋巴瘤和骨髓瘤。 图 2. 临床试验中的CAR-T、TCR-T和CAR-NK疗法。临床试验数据统计。(A) 2018年至2023年细胞治疗临床研究的数量，分为CAR-T、TCR-T和CAR-NK三个组。(B) 按国家分组的细胞治疗临床研究数量，分为CAR-T、TCR-T和CAR-NK三个组，Y轴在50到450之间中断。(C) 关于适应症的细胞治疗药物的临床进展，细胞治疗药物的分组与(A)相同，适应症分为液体和实体肿瘤。原始数据下载自 https://classic.clinicaltrials.gov/，更新至2023年10月30日。CAR-T：嵌合抗原受体T细胞；CAR-NK：嵌合抗原受体自然杀伤细胞；CNS：中枢神经系统；HPV：人乳头瘤病毒；TCR-T：T细胞受体T细胞。 目前，TCR-T有一种治疗产品在市场上，用于转移性葡萄膜黑色素瘤。总的来说，TCR-T在实体瘤中的进展速度通常比血液肿瘤快（图2C）。TCR-T的目标抗原主要集中在MART-1、HPV16-E6、NYESO、HPV16-E7等。在条件方面，TCR-T的临床研究主要用于实体瘤的治疗。这些实体瘤大多与病毒感染有关，例如与人类乳头瘤病毒（HPV）感染相关的宫颈癌。此外，TCR-T对头颈、肝脏和结肠的癌症的临床研究进展迅速（图2C）。在CAR-NK条件方面，血液肿瘤仍然是进展最快的，其中淋巴瘤条件进展更快（图2C）。CAR-NK的临床治疗目标主要是血液肿瘤的CD19、CD22和BCMA，以及实体瘤的PSMA、HER2、ROBO1和MUC1。总的来说，TCR-T和CAR-NK仍然处于早期临床开发阶段。到目前为止，CAR-M的临床研究仍然处于起步阶段，只有一个I期临床试验（NCT04660929）。 5.结论与展望 免疫细胞治疗在肿瘤治疗中的重要性日益增加。与传统的免疫治疗方式，如免疫检查点抑制剂和细胞因子相比，免疫细胞治疗表现出了更高的疗效、特异性，并倾向于引起可接受的副作用。当作为某些癌症的独立治疗手段时，特别是采用性T细胞转移疗法，在血液恶性肿瘤，如白血病和淋巴瘤中显示出了显著的成功。然而，由于免疫抑制性TME、肿瘤异质性、目标抗原表达低等因素，一些实体瘤对单独的免疫细胞治疗更具挑战性。在许多情况下，转向另一种免疫细胞治疗或将免疫细胞治疗与其他治疗策略结合使用，如化疗、放疗、其他免疫治疗或靶向治疗，通过不同的机制可能增强整体治疗效果。 目前，全球已有10种CAR-T产品获批，而DC疫苗和TCR-T各有一种获批产品。在低风险免疫细胞治疗方面，TILs和DC疫苗在治疗实体瘤方面显示出前景。此外，CIK治疗与其他免疫策略结合使用时显示出协同抗肿瘤效果。这些方法通常由具有不同功能特性的异质细胞组成，为治疗相对高异质性的恶性肿瘤提供了优势。另一方面，高风险免疫细胞治疗，如CAR-T和TCR-T，通常以目标为导向且高度特异性，使它们特别适合相对快速增殖的恶性肿瘤。在血液肿瘤中，CAR-T和TCR-T已经得到临床验证，它们在治疗实体瘤方面的应用正在稳步进展。而基于其生物学特性，CAR-NK和CAR-M在治疗实体瘤方面具有固有优势。TCR-T专注于特定的肿瘤相关抗原(TAA)和新抗原，使它们在外来抗原，如与病毒相关的恶性肿瘤中受益。研究人员目前正在努力突破包括CAR-T在内的细胞治疗技术的瓶颈。新的细胞来源和方法降低了GvHD和其他风险，为“现成的”或同种异体细胞治疗创造了机会，这些治疗可以事先准备好，并在需要时轻松地给多个患者使用，实现更快的诊断和癌症治疗。此外，针对CAR的新颖设计最小化了对健康组织的损害，并与传统治疗相比减少了副作用。某些设计甚至为治疗实体瘤提供了可能性。此外，修改肿瘤环境和诱导记忆T细胞的策略已使实现长期效果成为可能。 同时，由于这些疗法新颖、复杂和技术性，它们可能对公共卫生和个体患者构成以前未探索的风险。TIL细胞治疗、DC/CIK细胞治疗和DC疫苗被认为是低至中等风险。风险因素包括生产中使用的生物活性物质，如抗体、细胞因子、血清、生长因子和抗生素，以及在保存、冷冻、解冻和冷链运输过程中的产品稳定性和活性风险。此外，产品本身可能存在固有风险，如不完全去除肿瘤细胞或其他不需要的细胞，以及与归巢、植入、迁移和增殖相关的潜在并发症或产品活性降低。然而，高风险免疫疗法需要更多的操作，无论是使用基因修饰细胞、自体干细胞，还是同种异体或异种细胞，都需要额外评估。在临床上，这些疗法有时可能触发细胞因子风暴和细胞因子释放综合征(CRS)，这两种都是危及生命的全身性炎症综合征。因此，这些产品的风控管理考虑相应更具挑战性。必须仔细评估产品与患者之间相互作用产生的即时和延迟影响的潜在风险。这些风险包括不希望的免疫原性及其相关效应，包括CRS、GvHD、移植物排斥、过敏反应、超敏反应和免疫缺陷。此外，评估与患者细胞的预期和非预期基因修饰相关的潜在风险也很重要，包括细胞功能的改变、细胞凋亡、生长或分化的变化、插入突变或基因毒性，以及恶性转化的可能性。 然而，准确评估免疫细胞治疗的风险仍然具有挑战性。一些真正的风险超出了预期或在临床前研究中没有被揭示。了解风险在临床研究中无处不在，并且被定义为在特定时间内发生不良结果的可能性。评估免疫细胞治疗风险的可接受水平涉及权衡各种因素，而不仅仅是绝对风险，还要考虑可能随之而来的潜在治疗益处。与患有较轻肿瘤或癌症的患者相比，存在适当治疗方法的癌症指征，患有危及生命的晚期或严重恶性肿瘤的患者可接受的风险水平要高得多。 总体而言，免疫细胞治疗的技术壁垒相对较高，创新驱动力强，技术发展多样。近年来的进展显示了爆炸性增长。尽管CAR-T、TCR-T和DC疫苗已获批准，但其他免疫细胞治疗仍处于早期临床和临床前研究阶段。低风险疗法，如TIL，由于无法完全消除Tregs，面临有限的效果。CIK细胞治疗在获取和扩增方面遇到困难。DC肿瘤疫苗受到缺乏理想的肿瘤特异性抗原、TAA免疫原性弱、难以有效诱导免疫原性DC以及体外DC致敏方法的静脉再灌注无法有效激活DC分化和成熟的阻碍。高风险细胞治疗在克服肿瘤异质性的障碍方面仍有很长的路要走。CAR-T细胞仍面临效应T细胞耗竭、细胞因子风暴和免疫抑制微环境等挑战。TCR-T细胞治疗的挑战包括如何减少TCR不匹配和针对新抗原的最小选择。CAR-NK疗法正在经历遗传操作和细胞增殖困难。尽管CAR-M可能成为一种有前景的抗癌疗法，但它们尚未完全实现。临床研究需要确认肿瘤相关巨噬细胞在决定TME是否可以将针对肿瘤的CAR-M转化为支持肿瘤表型方面的高适应性。尽管如此，免疫细胞治疗在抗癌疗法的未来发展中仍具有至高无上的潜力。人们普遍认为，快速的技术革新将使这些疗法成为高效的癌症治疗手段，显著改善治疗效果，推进人类医疗保健。 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

摘要：嵌合抗原受体（CAR）T细胞疗法的出现，为儿童和成人患者中复发/难治性血液系统恶性肿瘤的长期清除带来了前所未有的成果。然而，与CAR-T细胞相关的严重毒性，如细胞因子释放综合征和神经毒性，影响了治疗的实用性；并且对实体瘤的治疗效果仍然不够令人印象深刻。因此，出现了修改其他免疫细胞类型的工程策略，特别是自然杀伤（NK）细胞。由于CAR依赖性和CAR非依赖性（先天免疫介导的）抗肿瘤杀伤能力、主要组织相容性复合体非依赖性细胞毒性、降低异体反应风险以及缺乏主要CAR-T细胞毒性，CAR NK细胞构成了有前景的下一代CAR免疫细胞，并且也适用于“现成的”治疗。在这篇综述中，我们比较了CAR-T和CAR NK细胞疗法，特别关注免疫突触、工程策略和挑战。 引言 CAR T细胞疗法基于用重组抗原特异性CAR分子对T细胞进行工程改造，赋予CAR T细胞目标特异性细胞毒性，独立于T细胞抗原受体（TCR）。与传统的细胞毒性T细胞功能不同，后者受TCR复合物在T细胞上与目标细胞上的主要组织相容性复合体（MHC）分子的结合和识别的限制，CAR介导的CAR T细胞的细胞毒性是非MHC限制性的。CAR T细胞在患有复发/难治性血液系统恶性肿瘤的患者中实现了持久的缓解。然而，严重的毒性，如细胞因子释放综合征（CRS）和神经毒性，以及对实体瘤的有限疗效，促使人们改造具有细胞毒性潜力的替代免疫细胞，如NK细胞。尽管美国食品药品监督管理局（FDA）批准的所有CAR T细胞疗法都依赖于患者衍生的和工程改造的CAR T细胞的自体转移以避免移植物抗宿主病（GvHD），但FDA也批准了基因改造的同种异体CAR T细胞的临床试验。目前正在研究低免疫原性同种异体CAR T细胞的开发，以实现健康捐赠者的同种异体CAR T细胞的大规模工程和输血。在这篇综述中，我们比较了T细胞和NK细胞抗肿瘤细胞毒性的机制、CAR设计和工程策略，并讨论了解决CAR T细胞和CAR NK细胞疗法面临的挑战如何影响它们未来的应用，特别是针对实体瘤。 NK细胞是如何与T细胞一起抗击癌症的NK细胞是先天免疫细胞，作为第一线的防御者。与T细胞不同，NK细胞的抗肿瘤功能独立于MHC分子，并且不需要抗原启动。NK细胞表达一系列激活受体（aNKRs）和抑制受体（iNKRs）；取决于aNKR和iNKR信号之间的协调是倾向于NK细胞激活还是抑制，分别导致目标细胞的裂解或免疫自我耐受。当肿瘤细胞下调自身MHC I类分子，创造出“缺失自我”的状态，或者通过aNKRs识别肿瘤相关的压力配体时，NK细胞的脱颗粒和目标细胞裂解就会发生。NK细胞的细胞毒性也可以通过FasL与肿瘤细胞上的相应受体结合发生，通过抗体依赖性细胞毒性（ADCC）发生，涉及NK细胞上的CD16与抗体结合的目标细胞的结合，或者间接通过释放免疫原性细胞因子。免疫系统与实体瘤的战斗涉及一个复杂的先天和适应性免疫细胞网络。这些细胞在肿瘤内的丰度和它们的信号协调影响肿瘤进展或控制的命运。在新转化的实体瘤中，NK细胞可以检测到肿瘤细胞亚群上的压力配体。 CAR NK细胞相对于CAR T细胞的优势  CAR NK细胞相对于CAR T细胞具有几个优势，可以用来治疗实体瘤。例如，CAR NK细胞可以利用NK细胞的先天抗肿瘤能力，同时更倾向于目标特异性的杀伤。这使得CAR NK细胞能够杀死表达目标的癌细胞（CAR介导的杀伤）和缺乏目标的癌细胞。 (CAR独立/先天NK细胞毒性介导的)，这一优势对于治疗实体瘤尤为重要，对于治疗实体瘤来说尤其重要，因为这些肿瘤通常以抗原异质性和逃避免疫细胞毒性为特征。由于大多数NK细胞的细胞毒性能力在癌症患者中在肿瘤进展过程中以及在如手术等治疗性方案后会降低，大多数CAR NK细胞需要同种异体来源。迄今为止，对接受同种异体CAR NK细胞治疗的患者进行的临床研究记录显示，由于缺乏MHC I类限制，没有发生移植物抗宿主病(GvHD)。 尽管可逆，细胞因子释放综合征(CRS)是一种危及生命的状况，通常发生在接受CAR T细胞治疗的患者中，这是由于效应免疫细胞的过度激活和血清细胞因子水平的放大分泌，无论是由CAR T细胞还是CAR T细胞激活的巨噬细胞分泌的，包括干扰素γ(IFNγ)、肿瘤坏死因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、巨噬细胞炎症蛋白-1(MIP-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1，也称为CCL2)和白细胞介素-6 (IL-6)及IL-10。然而，在接受CAR NK细胞治疗的患者中，CRS的发生率非常低。虽然原因尚未完全理解，但在CAR NK细胞治疗后CRS病例的罕见可能部分归因于NK细胞激活后不同的细胞因子谱，包括干扰素γ、肿瘤坏死因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和趋化因子CCL1、MCP-1、MIP-1α（也称为CCL3）、MIP-1β(CCL4)、CCL5和CXCL8，以及与CAR T细胞试验相比完成的CAR NK细胞临床研究的数量有限。 此外，从脐带血、干细胞分化、外周血或NK细胞系大量生产CAR NK细胞的前景对于未来的现成生产是有希望的。例如，在一项研究中，通过在70天内进行五轮刺激，从脐带血中获得的NK细胞扩增了大约1100万倍，从外周血中获得的NK细胞扩增了超过2500亿倍。在另一项研究中，使用辐照的自体外周血单核细胞、IL-2和抗CD3抗体的混合物，可以获得高达15000倍的高活性外周血衍生NK细胞扩增。 CAR与典型T细胞和NK细胞免疫突触的比较  CAR淋巴细胞与目标肿瘤细胞之间形成的免疫突触的类型和特征对CAR淋巴细胞抗肿瘤效果至关重要（图1）。CAR T细胞与肿瘤细胞的第一次接触涉及通过形成免疫突触，在T细胞上的CAR分子与肿瘤细胞上的目标抗原之间进行识别和稳定结合；然而，由CAR分子形成的免疫突触与典型TCR在许多方面都有所不同。一个经典的成熟的免疫突触由三个同心的超分子激活簇(SMACs)区域组成，这些对于TCR细胞毒性功能是必不可少的。在溶解性免疫突触中，中央SMAC由Lck激酶-TCR微簇组成，参与启动激活信号级联和释放溶解颗粒。外围SMAC控制LFA-1整合素与目标细胞表面的ICAM-1粘附分子的结合，被认为是稳定突触的，远端SMAC主要是一个含有如CD43和CD45等糖萼蛋白排斥因子的肌动蛋白环，这些因子保护T细胞，并由CD2的冠与目标细胞上的CD58结构域相互作用，从而实现额外的共刺激信号。然而，在某些情况下，单个受体的参与或膜微簇的形成就足以触发T细胞激活，无需成熟的突触形成。另一方面，CAR T细胞中的免疫突触不涉及成熟的突触形成，而是包括复杂的Lck微簇，对LFA-1的依赖性较小，并且缺乏粘附环。这种较不组织的突触使得CAR介导的参与更快，随后比TCR更快地释放信号级联，并且与更快的细胞毒性颗粒分泌和随后CAR从目标细胞上的脱离有关。 肿瘤激活的NK细胞释放XCL1、XCL2和CCL5趋化因子，吸引传统的1型树突状细胞（cDC1s），导致炎症活跃的微环境，通常被称为“热肿瘤”。新抗原呈递或肿瘤相关抗原（TAA）呈递的cDC1s在肿瘤引流淋巴结中启动CD8+ T细胞，使进一步的T细胞浸润和MHC I类介导的肿瘤细胞裂解成为可能。多克隆的CD4+和CD8+肿瘤浸润性淋巴细胞，包括一个能够通过MHC II类介导的肿瘤杀伤的细胞毒性CD4+ T细胞亚群，具有多样化的TCR库和不同的记忆分化和耗竭表型，响应于这种启动而浸润实体瘤。免疫逃逸可以通过肿瘤细胞分泌前列腺素E2来促进，它不仅阻断了CD8+的细胞毒性，还降低了NK细胞的存活率、活性以及趋化因子CCL5和XCL1的分泌，这削弱了NK细胞介导的cDC1s到肿瘤微环境（TME）的招募。肿瘤细胞内在的对干扰素-γ（IFNγ）的敏感性，由活化的TAA特异性CD8+ T细胞分泌，促进肿瘤细胞上PD-L1和其他免疫检查点配体的表达，通过与T细胞上的相应检查点受体（如PD-1）结合，使肿瘤细胞对T细胞细胞毒性产生抗性。在这种情况下，免疫检查点阻断（ICB）可以是一种有效的免疫疗法；然而，肿瘤也可以通过减少抗原呈递来逃避T细胞细胞毒性并获得对ICB的抗性，从而使肿瘤内的T细胞通过CXCL12-CXCR4介导的趋化作用进入邻近的淋巴结。由于iNKR与自身MHC I类复合物的结合有利于NK细胞的抑制，ICB耐药肿瘤细胞中MHC I类复合物的丢失通过限制iNKR的结合，重新使肿瘤内的NK细胞敏感，从而恢复NK细胞的细胞毒性。然而，并非所有肿瘤内的NK细胞都具有细胞毒性。一项研究发现，在三阴性乳腺癌患者中存在一个促进肿瘤发生的亚群Socs3hiCD11b−CD27−未成熟NK细胞，这与预后不良相关，并可能促进肿瘤进展和阻碍异种移植小鼠模型中ICB的效力。肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）和髓源性抑制细胞被肿瘤细胞招募以创造一个缺氧和免疫抑制的TME。抗炎M2样巨噬细胞通过释放抑制性的转化生长因子-β（TGFβ）并推动NK细胞上CD85j抑制性受体的上调来抑制NK细胞的脱颗粒和功能。根据肿瘤类型、恶性阶段和TME的状态，TAMs可以通过向CD4+ T细胞交叉呈递新抗原来增强抗肿瘤功能，这些T细胞获得细胞毒性能力。TAMs也可以帮助肿瘤逃逸。最近的研究显示，TAMs是TME内主要的葡萄糖消耗者；通过细胞内在的持续糖酵解作用导致TME内乳酸积累，TAMs有利于调节性T（Treg）细胞的招募和CD8+ T细胞的驱逐。髓源性抑制细胞表达NK抑制性配体，分泌活性氧，有助于抑制性的腺苷和TGFβ的积累，并激活Treg细胞释放更多的TGFβ，这些协调作用对NK和T细胞功能有严重影响。TME中丰富的Treg细胞和表达PD-1的滤泡调节性T（TFR）分化细胞，具有强大的免疫抑制能力，可以减少肿瘤浸润性淋巴细胞的细胞毒性，并可能进一步抑制抗PD-1 ICB的效力。因此，持久的免疫抑制TME和克服肿瘤免疫逃逸机制对于成功的CAR T或CAR NK细胞疗法至关重要。 图1 | T细胞和NK细胞中的典型免疫突触与CAR免疫突触。辅助T细胞-APC相互作用代表了TCR和MHC之间典型的免疫突触。这种免疫突触由中心TCR-Lck复合体（中心SMAC）构成，但不包含溶解颗粒，周围是由外周LFA-1/ICAM-1组装（外周SMAC）和伴随CD45和CD2结合的远端肌动蛋白聚合环（远端SMAC）所环绕。CTL-肿瘤细胞溶解突触具有类似的SMAC簇，但也涉及MTOC极化后的中心SMAC内溶解颗粒释放。NK溶解免疫突触包括aNKR配体结合以及CD16介导的ADCC，抑制性NK细胞受体-自身MHC I类结合的丰度低或缺失，并由LFA-1/ICAM-1的外周组装所环绕。NK细胞在静息阶段含有溶解颗粒，并且只有在涉及MTOC极化的时空有序的信号级联发生后，才会经历“定向分泌”。CAR T细胞中的免疫突触包括卷曲的CAR-Lck微簇，对LFA-1的依赖性较小，并且缺乏粘附环。同样，CAR NK细胞的免疫突触涉及溶解颗粒释放和多个CAR-抗原聚集，但在突触裂隙处的肌动蛋白组织较少。PDZ CAR NK细胞-肿瘤细胞溶解突触与CAR NK细胞相比具有更好的突触组织，其特征是Scribble的积累以及浓缩的突触区域和激活的ZAP70与溶解颗粒的增强聚集。使用BioRender.com创建。 NK细胞的功能取决于aNKRs和iNKRs之间的信号平衡。抑制性受体，如人类杀手免疫球蛋白样受体（KIR）和小鼠Ly49，在维持自身MHC I类耐受对内源性健康细胞的同时，在促进NK细胞激活对抗低MHC I类表达细胞的过程中也起着关键作用，这一过程被称为“教育”。在NK细胞激活过程中，NK溶解免疫突触的形成始于含有SH2结构域的磷酸酪氨酸磷酸酶-1（SHP-1）形成小的中心簇，周围环绕着LFA-1，随后是细胞毒性颗粒在中心SMAC中的聚集，而LFA-1重新定位到外围，这一步骤使得NK细胞激活突触对低MHC I类表达目标的教育成为可能。有趣的是，在未受教育的自耐受小鼠Ly49A+ NK细胞（来自MHC I类敲除小鼠）与经过MHC I类分子H2Dd教育的自耐受Ly49A+ NK细胞（来自H2Dd转基因小鼠）中，SHP-1在NK细胞激活突触中的聚集模式不同，包括SHP-1在激活免疫突触中的积累程度以及SHP-1与F-肌动蛋白和SLP-76信号适配器的共定位。研究表明，激活突触中SHP-1的积累导致下游信号蛋白的去磷酸化，以维持“自我耐受”。一旦激活突触通过iNKRs接受“教育”，SHP-1就被排除在激活突触之外，从而解除抑制，激活下游信号，并提高NK细胞的响应性。 一般而言，免疫突触形成的多步骤过程对于许多免疫细胞相互作用都是成立的，包括辅助T细胞-抗原呈递细胞（APC）、细胞毒性T淋巴细胞（CTL）-肿瘤细胞，以及NK细胞-肿瘤细胞或NK细胞-健康细胞。对于溶解突触，它始于抗原识别和受体信号，并随后是效应器激活、微管组织中心（MTOC）极化和脱颗粒，并以从溶解目标细胞的解离结束，使免疫稳态和串行杀伤级联成为可能。然而，研究表明NK和CTL溶解突触之间存在一些动力学和机械转导差异。与T细胞不同，T细胞是在激活后诱导溶解颗粒，NK细胞在静息阶段就含有溶解颗粒，因此在激活和突触形成期间遵循精确的空间时间机制的溶解颗粒分泌，这一过程称为“定向分泌”。NK细胞也可以通过聚集iNKRs，例如与健康细胞上的自身决定因素结合的KIR，形成抑制性突触，形成超分子抑制簇，阻止SMAC形成并保护健康细胞不受溶解。NK细胞膜突出物有助于抑制性突触形成和细胞间蛋白转移。在一项研究中，从肝癌患者体内分离的肿瘤内NK细胞与肿瘤周围NK细胞或健康供者的外周NK细胞相比，膜突出物较少。肿瘤诱导的丝氨酸代谢改变降低了肿瘤内NK细胞膜中的鞘磷脂水平，导致膜突出物调节异常，损害了溶解突触形成和细胞毒性。阻断鞘磷脂代谢增加了解离自膜突出物的突触数量，并在体外以及在肝癌人源化小鼠模型中恢复了肿瘤内NK细胞的溶解活性。 由于CAR溶解突触需要比典型免疫突触更高的抗原识别阈值才能启动杀伤，并且更容易受到磷酸酶诱导的失活，科学家们假设通过靶向细胞极化并引发CAR免疫突触的更有序组装，可能会实现更好的CAR实体瘤细胞毒性。通过将细胞毒性和调节性T细胞分子（CRTAM）的突触后密度-95、discs large和紧密连接蛋白-1结合基序（PDZbms）插入到称为CAR PDZ NK的CD28z CAR的C末端，生成了突触调节的CAR NK细胞。与传统CAR NK细胞相比，这些发现表明体外增强了亲和力、抗原敏感性、细胞毒性、突触强度和CAR PDZ NK细胞极化，以及在实体瘤小鼠模型中延长了CAR PDZ NK细胞的存活和持久性。同样，当在T细胞中测试时，CAR PDZ构建物与传统CAR T细胞相比，在体外和异种移植小鼠模型中都有增强的效应功能。 CAR T细胞与CAR NK细胞工程 CAR设计的相似之处、差异和进展 与传统的T细胞受体（TCR）相比，CAR是一种合成受体，它赋予CAR T细胞以非MHC限制性机制的靶向特异性细胞毒性。第一代CAR由一个细胞外的单链可变片段（scFv）构成，通过一个铰链域和跨膜域连接到C末端的CD3ζ激活域，该激活域将非TCR外部-内部激活信号传递到T细胞。然而，第一代CAR T细胞的临床效果有限，可能是由于有限的植入和细胞毒性。为了提高CAR T细胞的细胞毒性、产生细胞因子和对目标刺激的增殖能力，后来对CAR分子进行了修改，包括插入一个（第二代）或两个（第三代）细胞内共刺激（ICS）域在CD3ζ上游（见图2a）。值得注意的是，CAR模块化域或链接结构的任何遗传改变都可能影响CAR T细胞的亲和力、效力和持久性。目前美国食品药品监督管理局（FDA）批准的六种靶向CD19或BCMA的CAR T细胞疗法已经在许多血液恶性肿瘤患者中实现了持久缓解。然而，为了创造下一代CAR T细胞以治疗实体瘤并增强CAR T细胞的细胞毒性、持久性、渗透性和安全性，已经实施了额外的工程策略。 CAR NK细胞采用了用于CAR T细胞工程的CAR骨架，但在跨膜和ICS域方面有更多的变化[7]（见图2a）。将scFv替换为aNKR的细胞外域，如NKG2D CAR T细胞和CAR NK细胞，可以增加对传统NK细胞靶标的效力。纳米抗体是单域骆驼抗体片段，由于更高的稳定性、改善的TME渗透性和更容易的遗传工程，比传统的单克隆抗体表现更好。对于CAR T细胞和CAR NK细胞，将CAR scFv域替换为纳米抗体在临床前对血液和实体瘤都显示出有效性。CAR NK细胞的一个主要特点是缺乏MHC依赖性细胞毒性，这使得来自健康捐赠者的异体NK细胞可以耐受MHC I类分子在供体和受体之间的差异。然而，从健康捐赠者异体CAR T细胞中遗传删除TCR以及MHC类-I相关和MHC类-II相关基因，以及在诱导的多能干细胞（iPS）细胞衍生的CAR T细胞中过表达HLA-E，允许生成通用CAR T细胞，这些细胞可以承受受体宿主免疫系统而不会诱发GvHD。尽管供体细胞中MHC类I的遗传删除提供了来自受体异体T细胞的保护，但它创造了一个“缺失自我”信号，使供体细胞暴露于受体NK细胞攻击。因此，规避受体NK细胞细胞毒性的策略包括额外过表达HLA-E、HLA-G或CD47，以生成低免疫原性CAR T或CAR NK细胞。 图2 | CAR设计和工程策略以克服实体瘤逃避CAR T和CAR NK细胞。a，典型TCR信号涉及Lck、CD3ζ和ZAP70的顺序激活，以及SLP76和LAT的磷酸化，它们与GADS和PLCγ形成信号复合体，导致T细胞激活。第一代CAR通过一个重组细胞外（Exc）域通过一个铰链和TM域连接到细胞内CD3ζ作为主要激活信号，以促进CAR细胞激活。在第二代和第三代CAR中，信号由一个或两个ICS域支持。LINK CAR T细胞使两个scFv CARs的门控激活成为可能，其信号取决于SLP-76与LAT作为ICS域的复合，仅当肿瘤细胞上呈现两种认知抗原并且与scFv CARs结合时。b，通过工程DN-TGFβ-RII单独或与IL-15受体激动剂（HCW9218）复合；DN-PD-1作为ICB；或者通过遗传删除T细胞或NK细胞中的负调节因子来阻断CAR细胞功能障碍。增强CAR T细胞细胞毒性的方法包括工程化TRUCK CARs，这些CARs使CAR诱导的细胞因子分泌，插入细胞因子受体作为额外的ICS，工程化组成型活性IL-7受体（C7R），或者通过过度表达orthoIL-2/orthoIL-2Rβ。增强CAR NK细胞细胞毒性的方法包括增加细胞因子载荷或使用K562/4-1BBL/膜结合IL-21（mbIL-21）或K562/膜结合IL-15（mb15）/4-1BBL饲养细胞，或补充IL-2、IL-15和/或IL-21的培养基，体外扩增CAR NK细胞。通过与IL-12、IL-15和IL-18的刺激，可以产生具有改善持久性和代谢适应性的类似记忆的CAR NK细胞。多靶向CAR设计的例子以克服抗原异质性和丧失包括IL-13/抗EphA2 Tan-CAR T细胞或一种多靶向CAR NK细胞，该细胞共表达肿瘤可切割的抗CD73 scFv连接到抗GD2 CAR以及NKG2D CAR。抗CD73 scFv与CD73的结合阻止了从腺苷酸（AMP）产生免疫抑制腺苷。通过过度表达趋化因子受体或肝素酶，可以增强CAR T细胞的渗透和持久性，肝素酶降解蛋白聚糖和其他细胞外基质（ECM）蛋白，与CAR一起。αFAP-scFv CAR T细胞靶向癌症相关成纤维细胞上的FAP，以减轻FAP诱导的ECM重塑。将scFv替换为FAP在CAR NK细胞上改善了ECM降解，并增加了NK细胞的渗出和渗透。癌症相关成纤维细胞（CAF）、成纤维细胞激活蛋白（FAP）、髓源性抑制细胞（MDSC）。使用BioRender.com创建。 成功实施CAR T和CAR NK细胞疗法的另一个主要挑战是，由于正常组织共享抗原识别，存在严重的肿瘤外毒性风险。为了缓解这个问题，已经开发了几种逻辑门控和开关受体CAR T细胞[1]。最新的是一种可逆的布尔逻辑AND门控细胞内网络(LINK) CAR，其中CD3ζ被替换为细胞内近端下游信号分子LAT和SLP-76，以产生CD19-28TM-LAT和HER2-8TM-SLP-76 CAR T细胞(图2a)。CD19+ HER2+ 目标细胞诱导的LINK CARs刺激在体外和体内效应功能改善以及限制肿瘤外靶向毒性方面，优于以前开发的逻辑门控平台。同样地，对于CAR NK细胞，SENTI-202是一种新型的“或门和非门逻辑门控”CAR NK细胞候选物，它被设计成通过一个或门激活CAR靶向急性髓系白血病(AML)相关靶标FLT3或CD33，同时通过一个非门EMCN靶向抑制性CAR，避免健康造血干细胞受到肿瘤外毒性的影响。这最终将增强AML白血病干细胞/母细胞肿瘤清除，同时减少对骨髓移植的需求。 针对血液肿瘤的CAR T和CAR NK细胞的临床试验已在其他地方讨论。这里我们关注以实体瘤为靶标的CAR T或CAR NK细胞的临床试验，从Clinicaltrials.gov截至2023年7月1日提取，胶质母细胞瘤、乳腺癌和卵巢癌是目标肿瘤列表中的首选。对于CAR T细胞，针对实体瘤的试验总数为340（23项已完成，23项正在进行/不招募，165项积极招募或邀请注册，67项状态未知，33项暂停/终止/撤回，29项尚未招募）。与此同时，已报告19项针对实体瘤的CAR NK细胞试验（9项积极招募，6项状态未知，4项尚未招募）。表1列出了所有CAR NK细胞试验和已完成的针对实体瘤的CAR T细胞试验。虽然来自CAR T细胞疗法的临床数据未能再现血液肿瘤的持久反应率，但CAR NK细胞的数据仍在等待中。对于CAR T和CAR NK细胞来说，肿瘤内归巢和在实体瘤环境中的持久性是尚待克服的主要障碍。缺乏关于CAR NK细胞在实体瘤中的归巢的临床数据；然而，从第一个CAR NK细胞试验中推断出的投入，该试验利用了携带人类IL-15的CD19 CAR NK细胞，证明了输注的CAR NK细胞在患者外周血中至少持续1年，尽管水平较低。在NK细胞中过表达DNAM-1和/或NKG2D是增强NK细胞肿瘤内渗透的提议策略之一，并已在体外对患者衍生的肉瘤标本显示出有效性。 增强CAR T和CAR NK细胞特别是对实体瘤的抗肿瘤细胞毒性是一个不断增长的研究领域。研究人员使用的策略包括工程化共刺激域，增强CAR修饰细胞的激活细胞内信号。尽管TCR是介导T细胞细胞毒性的唯一主要受体，但许多跨膜共刺激分子，如CD28、4-1BB、ICOS和OX-40，可以放大TCR下游的信号能力，以获得优越的细胞毒性效果。这些分子中的每一个都有利于不同的信号通路，一旦包含在CAR构建物的ICS域中，就会影响CAR T细胞的细胞毒性、增殖和持久性。与此同时，NK细胞有各种激活和抑制受体，它们招募不同的下游信号介导者，其信号线索的微调控制了NK细胞的激活与抑制作用。研究表明，使用NK特异性信号域，如2B4和DAP10或DAP12，作为ICS域，定制NK细胞的CAR工程，可以增加CAR NK细胞抗肿瘤功效和IFNγ分泌，与T细胞定制的CAR构建物相比（图2a）。 克服实体瘤逃逸是CAR基础细胞工程中另一个积极扩展的领域。克服CAR T和CAR NK细胞功能障碍的方法包括过表达TGFβ（DN-TGFβ-RII）或PD-1（DN-PD-1）的优势负性受体(DNRs)，或遗传删除包括PD-1和二酰甘油激酶在内的负面CAR细胞调节器。正交和/或膜结合细胞因子/细胞因子受体工程策略也已被用于增强CAR T或CAR NK细胞的抗肿瘤功能。通过CAR T或CAR NK细胞对TAAs进行多靶向和串联靶向可以提高对实体瘤及其相关抗原异质性或丢失的功效，与单一CAR相比。改善CAR T或CAR NK细胞通过基质屏障的运输和渗透的策略包括过表达趋化因子受体，生成FAP-scFv CAR T或过表达FAP的CAR NK细胞，或过表达肝素酶。图2b总结了已经研究的突出工程方法。 增强抗肿瘤效果的联合免疫疗法 癌症免疫疗法是一系列旨在动员并增强免疫细胞效应功能以消灭肿瘤的治疗方式。图3a描述了CAR T和CAR NK组合免疫疗法的主要模型。 重组单克隆抗体或作为替代品的纳米抗体可以用多种方式增强CAR T和CAR NK细胞的功能[57]。激活性单克隆抗体作为特定激活受体或共刺激分子（如CD28、4-1BB和SLAMF7）的激动剂，对T细胞或NK细胞的扩增和持久性很重要。肿瘤特异性单克隆抗体单独使用或与高亲和力CD16的过表达结合，通过抗体结合的肿瘤细胞的Fc部分的包被作用，将CAR表达细胞重定向至肿瘤细胞和/或增强ADCC功能。阻断性单克隆抗体（如ICB中使用的）通过阻断免疫检查点受体或配体（如TIM3、CTLA4和PD(L)-1）靶向免疫抑制性的TME。尽管FDA批准的ICB作为单一疗法为一些实体瘤患者提供了持久缓解，但在许多其他患者中失败是因为肿瘤特异性的一级和二级抵抗机制。NK抑制性受体阻断单克隆抗体通过模仿通常在抑制配体下调或丢失时发生的“缺失自我”信号，促进NK功能。其他阻断性单克隆抗体靶向炎症性细胞因子受体。例如，tocilizumab是一种FDA批准的阻断性单克隆抗体，靶向IL-6受体（IL-6R），用于管理CAR T细胞诱导的CRS。免疫结合剂，如BiTE和TriTE（对T细胞）以及BiKE、TriKE和TetraKE（对NK细胞），是双特异性或多特异性T细胞或NK细胞结合剂，结合了scFv、纳米抗体和/或其他分子如细胞因子，以促进CAR表达细胞有针对性地消灭肿瘤。 Lenalidomide是E3泛素连接酶途径的免疫调节剂，具有多种免疫效应。除了诱导肿瘤细胞周期停滞外，lenalidomide可以通过阻断血管生成和抑制Treg细胞来调节TME，以及介导恢复与淋巴瘤相关的免疫突触缺陷。与T细胞结合使用时，lenalidomide是一种共刺激剂，增强了抗CD133或抗HER2 CAR T细胞对实体瘤的细胞毒性和细胞因子分泌。在I期临床试验中，lenalidomide促进了NK细胞的扩增，与抗抑制性KIR疗法结合使用，增强了对多发性骨髓瘤的类固醇节约细胞毒性。 溶瘤病毒是一组经过工程改造的病毒，可以增强肿瘤免疫原性和树突状细胞诱导的NK细胞活性，以及实现转基因的肿瘤靶向传递。溶瘤病毒表达截断CD19（OV19t）和抗CD19 CAR T细胞的联合瘤内治疗导致实体肿瘤消退。同样，溶瘤病毒表达人类IL-15/IL-15受体α sushi结构域融合蛋白（IL-15–suIL-15Rα）复合物（OV-IL15C）和抗EGFR CAR NK细胞的组合，在胶质母细胞瘤小鼠模型中引发了协同抗肿瘤细胞毒性和CAR NK细胞的持久性，并改善了生存率。 对于所有这些组合疗法，正在进行血液和实体瘤的临床前和临床评估。虽然ICB与CAR T细胞结合使用的临床评估看起来很有前景，但它在CAR NK细胞毒性中的作用还有待商榷。基于纳米抗体的疗法可能很快会在针对实体瘤的免疫疗法时代占据主导地位，因为它们能够穿透密集的基质；然而，纳米抗体从循环中的快速清除需要额外的工程化。增强两种CAR基础疗法的细胞毒性和持久性的细胞因子装甲已被证明是有效的，还有更多灵活的机会有待探索。最终，由不同癌症免疫疗法介导的多模式机制在增强CAR基础疗法时，考虑到可能的肿瘤外毒性，对未来选择与CAR T和CAR NK细胞一起的最佳组合免疫疗法至关重要。 这些数据来源：https://clinicaltrials.gov。DLL3，类DLL3配体3；CLDN6，紧密连接蛋白6；ROBO1，漫游导向受体1；MUC，粘液蛋白；Meso，间皮素；CIR，嵌合免疫受体；GPC3，糖蛋白聚糖3；CEA，癌胚抗原；CD133，蛋白I；CLDN18.2，紧密连接蛋白18.2；GD2，二唾液酸神经节苷脂；HCC，肝细胞癌；PSMA，前列腺特异性膜抗原；TNBC，三阴性乳腺癌；Cytoxan，环磷酰胺；Fludarabine，抗代谢物；Pembrolizumab，针对PD-1的单克隆抗体；Ezabenlimab，针对PD-1的人源化单克隆抗体；Aldesleukin，重组人类IL-2；AP1903，一种通过交联FKBP结构域发挥作用的化学二聚体剂。NA，不适用。 影响实体瘤中细胞毒性和持久性的挑战 用于体外扩增的T细胞来源包括外周血和iPS细胞衍生群体，很少有文献报告使用脐带血扩增的T细胞，因为这些细胞在扩增后往往富含Treg细胞。尽管CAR T细胞治疗在对抗血液恶性肿瘤方面取得了显著成功，但在对抗实体瘤方面却表现不佳[1]。除了长期体外扩增后诱导的CAR T细胞产品耗竭，影响记忆表型、寿命和增殖能力外，阻止CAR T细胞成功治疗实体瘤的第一障碍是由癌症相关成纤维细胞形成的密集基质，这抑制了CAR T细胞渗透到肿瘤部位。绕过这一障碍的肿瘤内CAR T细胞在持续刺激目标抗原和/或免疫抑制性肿瘤和相关TME后可能会变得耗竭。肿瘤逃逸可能发生，因为肿瘤试图通过突变逃避有效的肿瘤内CAR T细胞毒性，导致抗原丢失或抗原异质性。肿瘤内CAR T细胞也可能因内在和外在因素的复合作用而被驱逐到淋巴结，导致增殖能力降低和持久性丧失。 与可以存活数月的T细胞不同，NK细胞的寿命很短，年轻成人的半衰期不到10天，这一限制因素强调了需要反复输注NK细胞产品以维持体内的有效性和持久性。此外，扩增的NK细胞对冷冻和解冻的敏感性影响了输注后的细胞毒性和存活率。在三维肿瘤模型中，解冻后迁移NK细胞的比例下降了六倍，对细胞毒性效果有严重影响，这可能部分解释了冷冻保存的CAR NK细胞在体内的持久性受损。目前正在研究优化冷冻保存方案，包括使用替代二甲基亚砜的替代品，二甲基亚砜是传统上用于冷冻细胞的保护剂，以保持CAR T和CAR NK细胞在解冻后的完整性、活性、功能和效力，并促进未来的现成生产和冷冻保存。 体外扩增NK细胞需要用细胞因子进行启动，以防止NK细胞耗竭和衰老。NK细胞可以从多种来源扩增用于临床测试，如外周血、脐带血、iPS细胞和不朽的NK细胞系，如NK-92细胞；每种来源都有特定的限制和优势。CAR NK细胞的产生反映了未经编辑的NK细胞的体外扩增方案，尽管后者需要额外的病毒或非病毒工程以表达CAR构建物。这些扩增方案依赖于持续的细胞因子刺激，有或没有饲养细胞的共激活。尽管扩增的CAR NK细胞在体外对目标细胞提供了显著的细胞毒性，但研究表明，它们对细胞因子和激活信号的依赖可能是输注到患者后功能失常和寿命缩短的原因，特别是当这些信号线索在TME内变得稀疏时。 NK细胞暴露于许多肿瘤诱导和TME介导的细胞因子和代谢物中，这可以减少NK细胞的持久性和功能。对患者的血液和实体瘤样本分析表明，肿瘤介导和TME介导的NK细胞功能障碍，以及细胞毒性、持久性和寿命受损，可以总结为五种主要机制：耗竭、抑制、无反应、可塑性和增殖缺陷。导致NK细胞耗竭的肿瘤相关因素包括肿瘤细胞持续激活NK细胞导致效应功能降低。肿瘤相关和TME相关释放的TG-β和其他抑制性代谢物诱导aNKR下调；溶解颗粒释放减少；细胞因子产生缺陷；以及iNKR过度表达。无反应可能是由于过度抑制性信号或在缺乏iNKR许可的情况下持续刺激aNKR所致。由于NK细胞属于第1组先天淋巴细胞（ILC1），肿瘤相关因素诱导的ILC1和ILC3亚类之间的可塑性可能允许将传统的细胞毒性NK细胞转换为细胞毒性较低的或ILC1样表型，具有促肿瘤潜力。NK细胞功能障碍还伴随着增殖能力受损和NK细胞浸润数量减少。 图3 | CAR T和CAR NK组合免疫疗法及CAR细胞工程方法。a，抗CD3和抗CD3/抗CD28激活单克隆抗体偶联珠增强CAR T细胞扩增。CAR NK细胞激活单克隆抗体(mAbs)和纳米抗体(Nbs)的靶标包括共刺激分子和aNKR，单独或与高亲和力CD16(ha-CD16)的过表达结合。阻断单克隆抗体和纳米抗体针对免疫检查点受体或配体(ICB)、iNKR或IL-6受体(IL-6R)。FDA批准的阻断单克隆抗体的例子包括托珠单抗、阿特珠单抗、尼伏单抗和伊匹单抗。来普尼增强了CAR T细胞的细胞毒性和增殖，并且通过在多发性骨髓瘤(MM)细胞上增加aNKR配体的表达，与KIR阻断单克隆抗体(IPH2101)联合使用时增强了CAR NK细胞的细胞毒性。OV19t溶瘤病毒通过实体瘤细胞诱导截短型CD19(CD19t)的表达，使其易于受到抗CD19 CAR T细胞的细胞毒性，而OV-15C诱导肿瘤细胞表达和分泌人类IL-15/IL-15受体α寿司结构域融合蛋白(IL-15–suIL-15Rα)，这提高了抗EGFR CAR NK细胞的抗肿瘤效果。免疫结合剂的例子包括BiHC(抗HER2-Nb/抗CD3-scFv BiTE)或布利纳图单抗(抗CD19-scFv/抗CD3-scFv BiTE)用于CAR T细胞，以及抗EGFR-Nb/抗CD16-Nb BiKE或抗CD16-Nb/重组IL-15/抗CLEC12A-Nb TriKE，后者结合了ADCC和TAA特异性杀伤CAR NK细胞。b，病毒CAR转导导致CAR在T细胞或NK细胞内的整合。c，非病毒CAR工程策略的例子包括通过电穿孔或脂质纳米颗粒传递的mRNA，DNA纳米载体平台和转座子以及CRISPR-Cas9和碱基编辑作为基因编辑工具。正在开发中的先进策略包括使用生物材料进行体内CAR传递和扩增，以及通过顺序磁声激活将抗CD3/抗CD28珠与CAR T细胞结合创建的CAR T细胞基活体微型机器人(M-CAR T细胞)的靶向传递和扩增。使用BioRender.com创建。 当前CAR T和CAR NK细胞高效开发的工程策略包括通过额外的遗传操作或组合疗法来增强这些细胞，以解决T和NK细胞功能障碍和持久性问题。 增强CAR-T和CAR NK细胞的传递技术  传统的CAR T细胞生成涉及病毒载体传递CAR构建体，以实现高转导效率和CAR的稳定表达。最广泛使用的载体是慢病毒、逆转录病毒或腺相关病毒载体。与T细胞相比，NK细胞更难进行工程改造，这是由于其固有的抗病毒能力、对凋亡的高敏感性和有限的扩增潜力。由于慢病毒包膜直接影响原代NK细胞的转导效率，因此可以使用泡状口炎病毒G（VSV-G）、长臂猿白血病病毒包膜（GALV）、猫科内源性逆转录病毒包膜蛋白（RD114-TR）或狒狒包膜（BaEV）对慢病毒进行伪型化，后者显示出与逆转录病毒相当的转导效率。然而，增加的免疫原性、可能的插入突变、有限的插入大小、高昂的GMP级病毒生产成本和相关的监管复杂性是主要缺点，这些缺点激发了探索成本效益的非病毒传递途径。非病毒转座子平台Sleeping Beauty和PiggyBac能够更安全地整合CAR构建体，但效率低于病毒系统。通过电穿孔或脂质纳米颗粒传递的非病毒mRNA基CAR构建体产生高但短暂的CAR表达效率。科学家们还开发了一种简单、多功能、经济实惠、非病毒、非整合的DNA纳米载体平台，能够在体外和体内实现T细胞的非染色体CAR表达，且没有免疫原性或遗传毒性。其他的非病毒基因编辑平台包括CRISPR-Cas9，它能够实现CAR和其他有利基因的位点定向整合或免疫细胞负调节因子、TCR或MHC相关基因的删除。在一项研究中，通过结合T细胞相关基因的基础编辑和CAR-慢病毒转导，产生了抗兄弟细胞毒性的双重CAR T细胞。最后，生物材料传递车辆允许定向转移编辑或未编辑的免疫细胞，有病毒或非病毒编辑的选项，在体内，而无需事先的体外扩增，而基于CAR T细胞的活体微型机器人能够通过磁声激活实现CAR T细胞的靶向传递和激活。 结论  过去十年在CAR基础免疫疗法的工程方面取得了革命性的成功，已有六种FDA批准的CAR T细胞疗法使一些儿童和成人患者的血液恶性肿瘤实现了长达十年的缓解。然而，血液恶性肿瘤患者在接受CAR T细胞输注后的复发率是可变的，而且尚未实现对实体瘤有显著数量的完全缓解。CAR T和CAR NK细胞的耗竭、低反应性和被宿主免疫系统排斥被认为是许多患者肿瘤抵抗和复发的主要因素。因此，要实现CAR基础免疫细胞功能的最优化，需要解决这些细胞疗法面临的多重挑战，同时优化临床给药环境，并利用组合免疫治疗模式。 尽管一些CAR NK和CAR T细胞基础的临床前研究展示了对实体瘤的有效细胞毒性，但CAR NK细胞的临床数据很少，而CAR T细胞在临床上尚未成功。未来的治疗方案应该操纵工程策略和组合疗法，以解决阻碍CAR T和CAR NK细胞对实体瘤效果的挑战。这些挑战包括克服肿瘤诱导的抗原异质性或丧失；促进长期肿瘤内抗原遭遇，以实现有效的肿瘤细胞毒性；在肿瘤内维持更好的CAR表达细胞的持久性和保留；耐受缺氧和免疫抑制的TME；以及维持类似记忆的CAR细胞库，以实现更持久、更具肿瘤特异性的细胞毒性。与溶解性突触形成和稳定性相关的额外挑战，如免疫细胞-目标识别、结合动力学和效力，应该得到解决。应该继续研究消除受体中超活性或有毒CAR细胞的方法，包括逻辑门控和开关式CAR设计以及其他新方法，直到实现最佳平台。最终，成功开发针对实体瘤的高效CAR疗法可能需要一个全面的组合方法，而不是单独针对个别障碍。 未来需要从MHC不匹配的健康捐赠者那里生产“现成的”通用CAR T细胞产品，以促进在疾病关键阶段向患者、弱势社区或缺乏CAR T细胞开发设施的医疗机构提供已经FDA批准的产品。基于MHC非限制性细胞毒性、降低的肿瘤外靶向毒性和“现成的”生产便利性，我们预计未来十年将带来更多的研究结果，帮助优化NK细胞扩增工作流程；减轻NK细胞耗竭，改善解冻后恢复，并增强移植后的细胞毒性和持久性。然而，由于同种异体CAR NK细胞可能促进免疫原性并在后期被宿主免疫细胞排斥，因此需要进行额外的遗传操作，类似于应用于通用CAR T细胞的操作。也应该采用创造最佳无饲养层扩增的新型策略，以实现CAR NK细胞的大规模生产，并绕开监管和一致性问题。 关于CAR T或CAR NK细胞抗肿瘤效果的大多数临床可用数据都是从分析晚期癌症的重度预处理患者中推断出来的，同时缺乏作为早期肿瘤进展阶段的一线疗法的有效性证据。因此，进一步研究CAR基础疗法的最佳时间、剂量、途径和频率，将更好地指导临床决策，并扩大治疗适用患者的范围。CAR基础细胞疗法的另一个主要缺点是治疗成本的显著提高，包括对伴随副作用的症状管理。未来有助于降低成本的步骤包括优化“现成的”生产和冻存“通用”工程CAR产品，减轻肿瘤外靶向毒性，缩短体外扩增工作流程，优化非病毒CAR递送以及微调体内动力学和个别CAR设计的效力。 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 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引言胶质母细胞瘤(GBM)是一种无法治愈的中枢神经系统(CNS)癌症，其特征是骨髓细胞大量浸润。在外周非中枢神经系统肿瘤中发现的髓细胞靶向治疗靶点是否适用于GBM还有待进一步研究。2024年5月23日，中山大学张弩及北京大学白凡共同通讯在Cancer Cell 在线发表题为“Distinct roles of TREM2 in central nervous system cancers and peripheral cancers”的研究论文，该研究发现外周肿瘤中关键的免疫抑制靶点，骨髓细胞上表达的触发受体-2 (TREM2)，在GBM中具有免疫保护作用。遗传或药理学TREM2缺乏促进GBM在体内的进展。单细胞和空间测序显示，在GBM浸润的骨髓细胞中，TREM2表达下调。TREM2与GBM中免疫抑制性骨髓和T细胞衰竭特征负相关。进一步证明，在GBM进展过程中，富含CNS的鞘脂结合髓细胞上的TREM2并引发抗肿瘤反应。在临床上，髓系细胞中TREM2的高表达与GBM患者更好的生存率相关。腺相关病毒介导的TREM2过表达阻碍GBM进展并与抗PD-1治疗协同。该研究结果揭示了TREM2在中枢神经系统癌症中的独特功能，并支持癌症免疫治疗中器官特异性骨髓细胞重塑。髓样细胞-2触发受体(TREM2)是一种髓样细胞表面受体，是多种疾病中重要的免疫信号中枢生理上，TREM2在有限数量的组织特异性髓样细胞中表达，包括中枢神经系统(CNS)的小胶质细胞(MG)，以维持细胞内稳态在病理条件下，TREM2与病变部位释放的许多配体结合，TREM2通路成为感知损伤和限制其扩散的核心。在阿尔茨海默病(AD)中，TREM2缺陷小鼠表现出MG功能和Ab斑块聚集受损TREM2中的R47H突变破坏了TREM2配体的结合能力，是人类AD的一个确定的危险因素。然而，TREM2在癌症中的作用更为复杂。越来越多的证据表明，TREM2的表达仅限于肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)和髓源性抑制细胞(MDSCs)抗TREM2和抗PD-1抗体的结合在几种不同的癌症中显示出有希望的效果，包括肉瘤、结直肠癌和乳腺癌。在肝细胞癌中，TREM2是促进肿瘤还是抑制肿瘤是有争议的。TREM2的这些不同作用可能源于其配体的多样性以及随后由DAP10/12介导的细胞内信号转导机制，这些机制可能根据组织类型和状态发挥相反的下游作用。考虑到TREM2在感知环境信号和引发多种下游信号的作用，TREM2可能在TAMs的功能重编程中起关键作用。然而，TREM2将TAMs重定向到免疫抑制或防御状态的潜在机制尚未阐明。在不同的恶性肿瘤中，如何利用TREM2靶向TAMs或诱导其重编程还有待进一步研究。模式图（Credit: Cancer Cell）尽管TAMs已成为免疫治疗干预的有希望的靶点，但在几项临床试验中，与外周肿瘤相比，GBM对TAMs靶向治疗的反应并不理想，表明GBM具有独特的肿瘤微环境(TME)，与外周癌症的TME几乎没有共同特征。考虑到TAM和其他免疫细胞在GBM的发生、进展和治疗反应中有时具有相反的作用，最近的研究应用单细胞RNA测序(scRNA-seq)来解读GBM的环境和不同的TAM表型。包括肿瘤相关MG中的TGF-β，MDMs中的SDF-1/ CXCR4信号通路，CSF-1信号通路CD39和CD73外切酶和SIRPa-CD47通路，正在成为潜在的TAM靶点。迄今为止，治疗方法尚未转化为临床实践。作为TAMs的信号中枢，TREM2在GBM和其他中枢神经系统癌症中的作用尚不清楚，因为TREM2在GBM中的单细胞表达分析很少有报道。该研究揭示了TREM2在GBM中的保护作用，以及在GBM进展过程中浸润骨髓细胞中TREM2的下调。TREM2水平升高会阻碍GBM的进展，在癌症免疫治疗中强调了分子靶点的器官特异性重塑。该研究揭示了TREM2在中枢神经系统癌症中的独特功能及其潜在的机制线索，并揭示了恢复而不是抑制TREM2的表达可能代表了GBM的疾病特异性治疗方法。原文链接https://www-cell-com.libproxy1.nus.edu.sg/cancer-cell/abstract/S1535-6108(24)00162-4责编|探索君排版|探索君文章来源|“iNature”End往期精选围观一文读透细胞死亡(Cell Death) | 24年Cell重磅综述（长文收藏版）热文Nature | 破除传统：为何我们需要重新思考肿瘤的命名方式热文Nature | 2024年值得关注的七项技术热文Nature | 自身免疫性疾病能被治愈吗？科学家们终于看到了希望热文CRISPR技术进化史 | 24年Cell综述