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不知道大家发现没有，一些研究方向跟着大牛肯定是没有任何问题的，比如之前推广过的张泽民老师的中性粒细胞，组织驻留记忆T细胞。这次终于卷到NK细胞了，敲黑板，5+IF文章，爱要不要。NK细胞在肿瘤的预后，治疗中发挥作用巨大，这一次又是大佬叠加cell推荐，必然会成为文章发表的新热点，大家一定要引起关注。什么？有人担心结果做不出来？大佬都总结好了！秘密就在图片中！图中的排序就是肿瘤相关NK细胞占比！肝癌、结肠癌、甲状腺癌、胰腺癌和头颈部鳞状细胞癌荣获前五！这五个方向科研人冲就对了！大家好，最近张泽民教授又出新成果了，团队成员联合中国科学技术大学彭慧教授课题组，在《Cell》杂志上发表了题目为“A pan-cancer single-cell panorama of human natural killer cells”的论文，该研究收集整理了大量公开的单细胞转录组数据，涉及24种癌症类型，包括来自716名患者的1223个样本的NK细胞单细胞表达谱数据，首次在泛癌水平系统地鉴定到了5类CD56 bright CD16 lo 和9类CD56 dim CD16 hi NK细胞亚群，并详细地刻画了各类群的表型和功能多样性。数据来源1. 大量公开的单细胞转录组数据公开发表的70个数据集的scRNA-seq数据，来自669名患者的1146个样本，包括肿瘤、邻近非肿瘤组织、外周血和其他组织(如淋巴结)。2.新生成的scRNA-seq数据作者从其团队之前的研究中收集和分析了来自47名癌症患者的77个样本，涉及8种癌症类型。分析流程将公开数据库的数据和研究团队新生成的scRNA-seq数据，进行整合，得到来自共计716名患者的1223个样本的NK细胞单细胞表达谱数据，涉及24种癌症类型，本研究最终获得了160,011个高质量NK细胞，其中包括11,963个新生成的NK细胞。分析流程图结果解读1.在单细胞水平上构建人类泛癌NK细胞景观为了更好地定义NK细胞的泛癌群体结构，作者整合了数据集之间批次效应最小的scRNA-seq数据，并进行了两轮无监督聚类。第一轮分析是基于高表达的典型细胞标记NCAM1和FCGR3A，分别对应于先前报道的“NK_1”和“NK_2”群体，区分两种特征明确的主要细胞类型为CD56brightCD16lo和CD56dimCD16hi。在第二轮聚类中，CD56brightCD16lo区可以进一步细分为5个细胞群， CD56dimCD16hi区进一步被确定为9个细胞群，其中包括同时表达高水平的NCAM1和FCGR3A的CD56brightCD16hi NK细胞，其表现出介于CD56brightCD16lo和CD56dimCD16hi NK细胞之间的中间特征，表明不同的细胞亚群具有不同的转录表型。接下来，作者分析了所有亚群的组织分布，观察到不同的组织富集模式，表明本研究的综合分析可以保留不同组织的异质性。为了进一步证实聚类的稳定性，作者还将血液、肿瘤和邻近非肿瘤组织中的NK细胞分别重新聚类，聚类结果高度一致。此外，作者还发现不同发育状态的NK细胞亚群在肿瘤中同时存在，表明NK细胞向肿瘤的迁移可能与NK细胞成熟解耦。        作者进一步检查了基因表达特征，以破译不同细胞亚群之间的功能差异。研究发现，CD56dimCD16hi NK细胞高表达细胞毒性效应基因，包括穿孔素(PRF1)和除GZMK外的大多数颗粒酶(GZMB、GZMA和GZMH)，而GZMK只在CD56brightCD16lo NK细胞中表达，CD56brightCD16lo NK细胞还表达多种细胞因子基因，如IL-8等。此外，作者还描述了NK细胞亚群中激活或抑制受体的表达情况，结果表明不同细胞亚群的转录和功能表型存在显著差异。   总之，作者在单细胞水平上构建了人类泛癌NK细胞的详细转录组谱，深刻剖析了不同NK细胞亚群的分子特异性，并揭示了其未被重视的异质性。图1 NK细胞泛癌单细胞图谱及其特征2. 不同肿瘤类型NK细胞的组织异质性接下来，作者评估了不同癌症类型中肿瘤浸润NK细胞群的偏好，观察到不同癌症类型中，NK细胞亚群的分布存在明显差异。如，未成熟的CD56brightCD16lo NK细胞在鼻咽癌和基底细胞癌中占主导地位，而成熟的CD56dimCD16hi NK细胞在肾癌和肺癌中占主导地位，这与先前的报道一致。其他如结直肠癌和肝癌中没有明显的差异(图2A)。 为了进一步检验上述现象是否可以用器官特异性来解释，作者分析了邻近非肿瘤组织中主要NK细胞类型的内在组成及其在肿瘤中的相应变化。结果发现，在包括肺癌、肾癌在内的多种癌症类型中，CD56dimCD16hi NK细胞在肿瘤组织中的比例明显降低(图2B)，乳腺癌和食管癌等癌症类型中的优势NK细胞群发生了逆转(图2C)。这些观察结果表明，器官特异性和肿瘤因素共同影响NK细胞群的分布。作者进一步从细胞亚群的角度探索NK细胞的癌症类型特异性，根据NK细胞亚群比例对所分析的癌症类型进行分层。结果发现，NK细胞亚群如c2-CX3CR1在胰腺癌、乳腺癌和黑色素瘤中表现出强烈的偏好。在某些癌症类型中观察到高变异性，如c4-NFKBIA和c7-NR4A3从头颈部鳞状细胞癌和甲状腺癌到食管癌和鼻咽癌的中位数频率显著降低(图2D)。 此外，作者还发现，罕见CD56brightCD16hi NK细胞亚群在黑色素瘤和白血病中大量存在，特别是在急性髓性白血病(AML)中(图2D)，与AML患者的总生存率和无复发生存率的降低有关。与其他NK细胞群相比，这些低成熟阶段的CD56brightCD16hi细胞在激活和抑制受体方面表现出独特的表型和功能变化(图2E)。综上所述，作者认为，目前基于NK细胞的治疗侧重于增强NK细胞的活化和延长其寿命，但通常忽略了癌症类型之间的异质性和TME对NK细胞细胞毒性功能的抑制作用，这些都应该在未来的治疗策略中加以考虑。图2 肿瘤浸润NK细胞在癌症类型中的异质性3. RGS1是组织浸润NK细胞的标志如上所述，NK细胞成分从血液到组织显著改变。同样，在组织浸润NK细胞与其血液对应物之间检测到广泛的转录变化(图3A)。先前的研究已经确定了组织驻留NK细胞的几种标记物，如CD69、CD103、CXCR6和CD49a。然而，作者发现ITGA1 (CD49a)、ITGAE (CD103)和CXCR6在单细胞转录组水平的检测很少，CD69在NK细胞(包括血液细胞)中广泛表达(图3E)。作者选择了血液和组织之间的差异表达基因，并进一步评估了它们的敏感性和特异性，以区分NK细胞的组织来源。RGS1 (G蛋白信号1的调节因子)被明确识别，其只在肿瘤和邻近非肿瘤组织的NK细胞中表达，但在血液中几乎检测不到(图3C和3D)。此外，RGS1的表达与KLF2、SELL等迁移信号相反(图3E)。与上述常规组织驻留标志物相比，RGS1具有更高的敏感性和特异性。接下来，作者直接比较了RGS1与ITGAE、CD69等在血液中的表达模式，发现RGS1单独在血液中的检出率最低，而RGS1/CD69组合可以进一步提高组织中的阳性检出率(图3F)， 还可以更好地区分血液和非血液NK细胞。值得注意的是，RGS1在癌症患者中广泛表达(图3G-H)。综上所述，这些特征暗示了RGS1单独或与CD69结合的潜在作用，在转录组水平上是组织浸润NK细胞的优秀标记物。作者推测RGS1的表达可能减弱G蛋白的信号活性，导致NK细胞趋化迁移能力减弱，促进NK细胞驻留。RGS1在NK细胞中的作用机制有待进一步研究。 图3 RGS1作为NK细胞关键组织浸润标志物的鉴定4. 肿瘤相关NK细胞程序及其特征接下来，作者试图阐明NK细胞在肿瘤中的具体特征。利用RNA 速率分析，作者分析了NK细胞的转录动力学，在CD56brightCD16lo和CD56dimCD16hi NK细胞中观察到从血液富集亚群到肿瘤浸润亚群的明确定向流动，作者发现CD56dimCD16hi c6-DNAJB1 NK细胞位于速率分析末端，因此推断为终末状态(图4A)。值得注意的是，来自邻近非肿瘤组织的CD56dimCD16hi NK细胞主要出现在富含c7-NR4A3细胞的均匀歧形近似和投影(UMAP)区域；相比之下，肿瘤来源的CD56dimCD16hi NK细胞在富含c6-DNA JB1细胞的UMAP区域占主导地位(图4B)。与此一致的是，肿瘤富集的c6-DNAJB1 NK细胞的标记物，如DNAJB1和HSPA1A在肿瘤浸润的CD56dimCD16hi NK细胞群中高度表达(图4C)。作者进一步关注肿瘤微环境，发现肿瘤组织中高度富集一群DNAJB1+ CD56dimCD16hi NK细胞。数据分析发现，该群细胞具有功能失调的表型，包括杀伤性下降、抑制受体上升、高表达应激反应相关蛋白等，因此将这一群细胞命名为肿瘤相关NK细胞（Tumor-associated NK cells, TaNK cells）(图4D)。作者还利用流式细胞术验证了TaNK细胞(CD56dimCD16hi HSP40+)在体内肿瘤的富集情况。结果显示，在1例肝内胆管癌和6例HCC样本中发现了TaNK细胞，其在肿瘤浸润性CD56dimCD16hi NK细胞中的比例高于匹配的邻近肝组织，与作者的scRNA-seq数据一致(图4E)。为了检验TaNK细胞的新特征，作者通过拟时序分析来研究CD56dimCD16hi NK细胞的动态，其结果和RNA速率分析结果一致。有趣的是，CD56dimCD16hi NK细胞在过渡过程中表现出细胞毒性降低，抑制受体和应激基因表达升高(图4F)。值得注意的是，在所有肿瘤浸润的CD56dimCD16hi NK细胞亚群中，终端TaNK细胞具有最低的细胞毒性和最高的应激评分。相比之下，相应的c7-NR4A3在邻近非肿瘤组织中富集，具有高细胞毒性(图4G)。通过对几种癌症类型进行多重免疫荧光染色，作者观察到TaNK细胞表现出较低水平的GZMB(图4H)。肝癌患者的流式细胞术分析进一步证实，与CD56dimCD16hi HSP40−NK细胞相比，TaNK细胞在肿瘤部位的细胞毒性颗粒(颗粒酶B和穿孔素)表达较低，抑制受体CD158a (KIR2DL1)和CD158e (KIR3DL1)表达较高(图4I和4J)。肝癌患者的流式细胞术分析进一步证实，与CD56dimCD16hi HSP40−NK细胞相比，TaNK细胞在肿瘤部位的细胞毒性颗粒(颗粒酶B和穿孔素)表达较低，抑制受体CD158a (KIR2DL1)和CD158e (KIR3DL1)表达较高(图4I和4J)。这些结果表明，TaNK细胞可能与功能失调状态有关。此外，作者还观察到了NR4A核受体家族随着拟时序的增加而呈现的差异动态趋势(图4F)。c7-NR4A3 NK细胞高表达NR4A2和NR4A3，而TaNK细胞高表达NR4A1。有趣的是，NR4A1已被确定为T细胞功能障碍的关键介质，并被认为有助于限制实体瘤中CAR - T细胞的功能。总之，该研究数据表明，肿瘤中的TaNK细胞可能发生终末功能障碍，并可能在TME中发挥关键作用。图4肿瘤相关NK细胞的特征5. TaNK细胞与不良预后和免疫治疗耐药的关系由于NK细胞和CD8+ T细胞表现出广泛的表型和功能相似性，作者接下来研究了靶向CD8+ T细胞的免疫检查点阻断(ICB)疗法是否也会影响NK细胞。在肿瘤浸润性NK细胞和CD8+ T细胞中，TaNK细胞和耗竭T细胞(Tex)表现出明显的应激状态(图5A)，提示它们参与肿瘤免疫应答。两者都高度表达一系列抑制性受体分子，然而它们在各种免疫调节基因上具有不同的表达谱。传统的免疫检查点基因，如PDCD1和CTLA4，在TaNK细胞上几乎不表达(图5A)，这意味着它们不是抗PD-1/CTLA-4治疗的直接靶点。在TME和当前的ICB治疗中，TaNK细胞可能与Tex细胞发挥不同的作用。作者观察到不同癌症类型的TaNK细胞丰度存在显著差异(图5B)，肿瘤分期对TaNK细胞比例的影响很小(图5C)。值得注意的是，在TCGA数据集中，肿瘤中的高TaNK细胞信号与大多数癌症类型的低生存率相关(图5D和5E)。作者进一步应用基于深度学习的模型进行反卷积和细胞组成分析，发现高TaNK细胞频率表明癌症患者预后不良。作者还通过分析先前乳腺癌和黑色素瘤的ICB治疗研究中预处理肿瘤的scRNA-seq数据 (图5F)，研究了TaNK细胞是否与ICB治疗应答相关。值得注意的是，在两种癌症类型中，无应答患者中观察到的TaNK细胞比例高于应答患者。进一步利用来自各种癌症(包括黑色素瘤、肺癌、转移性尿路上皮癌)的已发表的大量数据，作者证实了无应答患者比应答患者表现出更强的TaNK细胞信号(图5G)。作者推测，长期浸润可能赋予肿瘤中TaNK细胞的功能状态，导致其对恶性细胞的无效杀伤。TaNK细胞的富集与对肿瘤的免疫反应受损以及对当前ICB治疗的低敏感性有关。该研究发现揭示了TaNK细胞在肿瘤中的潜在作用，并为NK细胞免疫疗法的合理设计提供了参考。图5  TaNK细胞与临床结局的关系6. TME塑造肿瘤浸润NK细胞功能的潜在介质为了深入了解NK细胞在TME中的调控程序，我们利用CellPhoneDB来探测NK细胞和其他CD45+免疫细胞(包括T细胞和髓细胞)之间潜在的细胞-细胞相互作用。与T细胞相比，除肥大细胞外，大多数髓细胞类型与CD56dimCD16hi NK亚群表现出强烈的潜在相互作用(图6A)。特别有趣的是，TaNK细胞被预测通过ANXA1调节多髓细胞类型，ANXA1是一种在炎症反应中与免疫抑制和诱导巨噬细胞重编程相关的蛋白(图6B)，这表明功能失调的NK细胞可能具有抑制TME中促炎巨噬细胞的潜力。为了进一步阐明NK细胞来源的ANXA1在巨噬细胞中的作用，作者对肺癌和肝癌的肿瘤样本进行了多重免疫荧光染色，发现了一个ANXA1+ NK细胞群。与远离ANXA1+ NK细胞的巨噬细胞相比，靠近ANXA1+ NK细胞的巨噬细胞表现出较低的活化标志物CD86(图6C、6D)和较高的抗炎标志物转化生长因子β (TGF-β)的表达水平(图6E、6F)。值得注意的是，在树突状细胞(DC)亚群中，LAMP3+ DC，最近表征的成熟cDCs(也称为mregDC)显示出与CD56dimCD16hi NK细胞最强的相互作用潜力(图6A)。多重免疫荧光分析显示，LAMP3+ DCs与NK细胞共定位(图6J)。此外，预测它们之间的相互作用通过IL-15-IL-15受体和NECTIN2-TIGIT相互作用轴介导(图6B)。      重要的是，LAMP3+ DCs在转录组水平上表达免疫群体中最高水平的IL15、PVRL2 (NECTIN2)和PVR(图6G和S6F)。流式细胞术也证实了IL-15在LAMP3+ dc中的高表达(图6H)。IL-15已被确定为维持NK细胞寿命的稳态相关细胞因子，并用于NK细胞输注和体外繁殖。相反，TIGIT作为一种抑制性受体有助于抑制NK细胞介导的免疫反应。此外，在TCGA数据集中，LAMP3+ DCs的丰度与CD56dimCD16hi NK细胞相关(图6I)。        接下来，作者研究了LAMP3+ DCs在肿瘤中的具体调控过程，发现肿瘤浸润的LAMP3+ DCs与邻近非肿瘤组织相比，IL15的表达较低，表明LAMP3+ DCs可能对TME中CD56dimCD16hi NK细胞的激活作用受损。事实上，物理上接近LAMP3+ DCs的NK细胞表达颗粒酶B的水平较低(图6J、6K)。   总之，以上数据分析表明，在TME中，LAMP3+ DCs对CD56dimCD16hi NK细胞的异常调节。图6  在不同肿瘤类型中，LAMP3+ DCs与CD56dimCD16hi NK细胞的关系 7.外周血NK细胞亚群的不同转录组模式通过分析来自35名健康供者的血液来源NK细胞的9个scRNA数据集，能够探测肿瘤患者外周血中NK细胞的特异性改变。作者首先比较了来自健康供体和肿瘤患者的循环NK细胞的转录组特征。循环NK细胞在来自不同数据集的健康供体中表现出高度的相似性(图S7B)。相比之下，对于来自肿瘤患者的循环CD56brightCD16lo细胞，观察到与健康供者的转录组存在显著差异；在所分析的所有癌症类型中，循环CD56dimCD16hi细胞的差异甚至更为显著(图S7A)。值得注意的是，肿瘤患者在NK细胞亚群中表现出显著的组成变化，这种模式似乎是癌症类型特异性的(图S7C)。例如，在结直肠癌、头颈部鳞状细胞癌、肾癌和HCC中，循环CD56brightCD16lo c3-CCL3 NK细胞的比例增加，但在其他被分析的癌症类型中没有增加。接下来，作者将重点放在CD56dimCD16hi c8-KLRC2适应性NK细胞上，该细胞在某些癌症类型如结直肠癌和胃癌中富集(图S7D)。适应性NK细胞被认为是CAR NK细胞的一个有吸引力的来源，因为它们具有增强细胞因子反应的效应特性和对免疫抑制效应的内在抗性特别有趣的是，与其他循环NK细胞相比，这些细胞特异性表达MHC II类基因(图S7E)。作者还检查了这些NK细胞在肿瘤患者中的功能变化，发现与健康供体相比，肿瘤来源的适应性NK细胞的功能基因和MHC II类基因的表达明显更高(图S7F和S7H)，这意味着它们在肿瘤患者中处于高度激活状态。作者通过流式细胞术进一步证实，与健康供者相比，HCC患者循环NK细胞中MHC II类分子的高表达(图S7G)。因此，在患者源性适应性NK细胞中上调的基因参与了免疫效应过程的正调控等途径(图S7I)。综上所述，研究分析表明，循环NK细胞参与了肿瘤进展过程中外周免疫环境的系统性变化。图S7患者循环NK细胞的改变（与图1相关）     讨论本研究中，作者收集了大量的单细胞转录组数据，首次在泛癌水平系统地鉴定到了5类CD56brightCD16lo和9类CD56dimCD16hi NK细胞亚群，并详细地刻画了各类群的表型和功能多样性。这些NK细胞可能参与了广泛的抗肿瘤反应，如直接杀死癌细胞、分泌促炎细胞因子和募集其他免疫成分(图7A和7B)。促进NK细胞在实体恶性肿瘤中的浸润一直是开发治疗性NK细胞产品的关键焦点。我们在转录组水平上发现RGS1是组织浸润NK细胞的关键标志物(图7C)。促进NK细胞在实体恶性肿瘤中的浸润一直是开发治疗性NK细胞产品的关键焦点。作者在在转录组水平上发现RGS1是组织浸润NK细胞的关键标志物(图7C)。此外，作者发现了一个潜在功能失调状态的肿瘤富集NK细胞亚群，称为TaNK细胞(图7D)。TaNK细胞的高丰度与多种癌症类型的不良预后和免疫治疗耐药性有关，暗示了其在临床环境中的作用。作者推测，TaNK细胞富集可能反映或影响TME中的肿瘤免疫反应，尽管这些细胞可能不是ICB治疗的直接靶点。本研究的分析和实验证据支持骨髓细胞是NK细胞的核心介质。具体来说，LAMP3+ DCs可以作为关键的调节剂，并可能抑制CD56dimCD16hi NK细胞在TME中的功能，但需要进一步的功能验证 (图7E)。总之，作者通过寻找细胞内在和TME相关的因子，为维持NK细胞在体内的抗肿瘤活性提供了线索。图7研究的主要发现总结本研究聚焦TME中与T细胞功能相似、但具有更直接的识别和杀伤癌细胞能力的NK细胞。作者创新性地整合利用大规模单细胞数据，克服数据整合的多项难点，包括高精度分离NK细胞、去除复杂的批次效应等，首次在泛癌水平系统地鉴定到5类CD56brightCD16lo和9类CD56dimCD16hiNK细胞亚群，并详细地刻画了各类群的表型和功能多样性，揭示了NK细胞中的基因表达模式转变，捕捉了肿瘤免疫微环境的NK细胞亚群组分变化，为未来通过更全面的整合分析手段探索新的生物标志物和治疗靶点提供了助力，也为药物研发提供更准确、更全面的数据支持。参考文献：Tang F, Li J, Qi L, Liu D, Bo Y, Qin S, Miao Y, Yu K, Hou W, Li J, Peng J, Tian Z, Zhu L, Peng H, Wang D, Zhang Z. A pan-cancer single-cell panorama of human natural killer cells. Cell. 2023 Aug 15:S0092-8674(23)00849-8. doi: 10.1016/j.cell.2023.07.034. Epub ahead of print. PMID: 37607536.识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

本文中，小编整理了近期了科学家们在单细胞研究领域取得的重磅级研究成果，分享给大家！ 本文中，小编整理了近期了科学家们在单细胞研究领域取得的重磅级研究成果，分享给大家！ 【1】Nat Genet：浙大学者利用小鼠发育的单细胞图谱确定细胞命运调控程序 doi：10.1038/s41588-022-01118-8 多细胞生物的发育过程的稳健性表明有一个专门的调控程序来控制细胞命运决定的轨迹。根据Waddington的表观遗传景观理论，分化的细胞类型来自不稳定的干/祖细胞状态，并最终进入稳定的细胞状态。从单细胞数据中得出的状态流形（state manifold）的新兴概念进一步增强了我们对谱系进展的理解。这些状态流形背后的基因调控程序是什么？它们是如何被调控的？这两个问题在这个领域仍然是个谜。中国浙江大学医学院郭国骥（Guo Guoji）教授和韩晓平（Han Xiaoping）教授领导的一个研究团队长期致力于单细胞测序和细胞命运决定的研究。他们开发了Microwell-seq，即一种使用简单和廉价设备的高通量和低成本的scRNA-seq平台。利用Microwell-seq，他们构建了世界上第一个小鼠细胞图谱和人类细胞景观，分别于2018年和2020年发表在Cell期刊和Nature期刊上。 在此基础上，这个研究团队在一项新的研究中对小鼠进行了从早期胚胎阶段到成熟成体阶段的七个生命阶段的单细胞转录组分析。他们总共分析了52万多个细胞，并确定了参与小鼠核心命运决定回路的谱系共同主调节因子和谱系特异性主调节因子。相关研究结果发表在2022年7月的Nature Genetics期刊上。 在这项新的研究中，这个研究团队分析了小鼠在从早期胚胎阶段到成熟成体阶段的不同阶段---胎龄（E）10.5、E12.5、E14.5、出生当天（P0）、出生后第10天（P10）、出生后第21天（P21）和成年（6～10周）---的基因表达变化。所分析的器官涉及神经系统、呼吸系统、消化系统、循环系统、泌尿系统和生殖系统。 实验显示，在谱系发育过程中，转录的可塑性逐渐降低。这个研究团队构建了一个系统性的转录因子调控网络，确定了900多个调控子（regulon），并确定了15种不同的表达模式，包括谱系共同调控程序和谱系特异性调控程序。他们比较了不同细胞谱系的分化特异性，确定了细胞命运决定的共同调控因子。 单细胞多组学分析或为开发新型CAR-T细胞疗法提供新的思路。 原始出处：Science Advances (2022). DOI:10.1126/sciadv.abj2820 【2】Sci Adv：单细胞多组学分析或为开发新型CAR-T细胞疗法提供新的思路 doi：10.1126/sciadv.abj2820 在过去10年里，一种称之为CAR-T细胞疗法的癌症疗法在治疗血液癌症上展现出了巨大的前景，但通常情况下患者往往会在短时间内出现疾病复发。近日，一篇发表在国际杂志Science Advances上题为“Single-cell antigen-specific landscape of CAR T infusion product identifies determinants of CD19-positive relapse in patients with ALL”的研究报告中，来自耶鲁大学等机构的科学家们揭示了其中一些关键的线索来解释为何患者会出现癌症复发。 CAR-T细胞疗法主要涉及从患者机体的血液中分离出抵御病毒的T细胞，并利用嵌合抗原受体（CAR）对其进行遗传性修饰，CAR能靶向作用癌细胞表面表达的标志物，这些CAR-T细胞随后就会被重新输注到患者体内来抵御癌细胞，实践证明，其能有效抵御多种血液癌症，比如急性淋巴细胞性白血病（ALL）、淋巴瘤和多发性骨髓瘤，然而，很多患者都会在短期内出现疾病的缓解，30%-60%接受治疗的患者都会在1年内出现疾病的复发。 为此，研究人员开始着手分析疾病长期缓解的患者和疾病复发的患者之间的差异，他们寻找了患者机体细胞的模式，并分析了12名儿童ALL患者机体的10万个单一的CAR-T细胞，在12名患者中，有5名患者在长达5年多的时间里疾病得到了完全缓解，另外5名患者则在试验过程中发生了疾病复发，其中位时间点为9.6个月，另外2名受试者并没有显示出对该疗法的客观反应。 文章中，研究人员使用了所谓的多组学方法，即将来自转录组和蛋白质组的数据结合，从而进行了强大的单细胞分析，这样他们就能密切研究每个细胞的基因表达特性，并识别出CAR-T细胞中隐藏的分子机制，其在未来癌症疗法的开发过程中扮演着关键角色。研究人员还识别出了一种共表达的细胞因子组件，其能作为免疫系统的信使而分泌特殊蛋白质，同时其还是协调免疫细胞的关键调节子，在这些细胞因子中，研究者发现了一组能代表T辅助2细胞（Th2）功能的细胞因子在疾病已经缓解了5年或更长时间的患者的细胞谱中非常突出，Th2细胞是介导机体免疫反应激活和维持的一种细胞亚型，这样研究人员就能更好地评估来自不同患者机体的CAR-T细胞的功能差异。 【3】Nature子刊： 单细胞测序揭示受体介导的癌症精准联合治疗 doi：10.1038/s41467-022-29154-2 个性化肿瘤学带来了希望，即每个患者的癌症都可以根据其基因组特征进行治疗。几项试验表明，有可能以足够快的速度收集基因组数据，为治疗决策提供信息。对2011-2013年间完成的I期临床试验的荟萃分析显示，总的来说，使用分子生物标记物信息来影响治疗计划的试验比没有使用分子生物标志物信息的试验结果更好。然而，大多数精确肿瘤学治疗只使用一到两种药物，耐药克隆经常出现，强调需要以多个药物组合的方式提供个性化药物。人们已经认识到，将系统生物学和纳米材料设计相结合的重要机会是以组合的方式提供药物，以克服耐药性并结合生物效应。 近日，马里兰大学研究者们在Nature Communications杂志上发表了题为“The landscape of receptor-mediated precision cancer combination therapy via a single-cell perspective”的文章，该研究提供了对选择性和精确化靶向癌症所需靶点的身份和数量的计算估计。 在本研究中，通过挖掘大量的单细胞转录组数据，研究者使用组合优化技术来绘制癌症最佳组合治疗的图景。研究者假设每一种单独治疗都可以针对编码细胞表面受体的1269个基因中的任何一个，这些基因可能是CAR-T、结合抗体或包被纳米粒治疗的靶点。研究者发现，在大多数癌症类型中，由最多四个靶点组成的个性化组合足以杀死至少80%的肿瘤细胞，同时保留至少90%的肿瘤微环境中的非肿瘤细胞。然而，随着要求更严格和更有选择性的杀戮，所需目标的数量迅速上升。新出现的个人靶点包括治疗脑癌和头颈癌的PTPRZ1，以及多种肿瘤类型的EGFR。 【4】Science：利用单细胞eQTL定位确定自身免疫性疾病的细胞类型特异性基因控制 doi：10.1126/science.abf3041 人类的免疫系统已经进化到通过调节专门的细胞群体来维持组织稳态和靶向外源性病原体。它在不同个体之间显示出巨大的差异，决定了人们对疾病易感性和对病原体或癌症的反应是如何不同。在单细胞分辨率的数据生成过程中，科学家们对遗传差异如何在细胞水平上促进免疫变异的认识受到两个主要挑战的限制。其中的一个挑战是对许多人进行测序，另一个挑战是对每个人的大量细胞进行测序。解决这些挑战对于剖析常见异质性疾病的遗传和分子基础是必要的。 在一项新的研究中，来自澳大利亚加文医学研究所、昆士兰大学、塔斯马尼亚大学、墨尔本大学、新南威尔士大学、莫纳什大学和美国加州大学旧金山分校的研究人员提出了OneK1K队列，包括针对从982名供者体内收集的127万个外周血单核细胞（PMBC）的单细胞RNA测序（scRNA-seq）数据。相关研究结果发表在2022年4月8日的Science期刊上，论文标题为“Single-cell eQTL mapping identifies cell type–specific genetic control of autoimmune disease”。 这些作者开发了一个细胞分类框架，并通过结合scRNA-seq数据和基因型数据，他们绘制了14种免疫细胞类型中每种类型的基因表达的遗传效应，并确定了26597个独立的顺式表达数量性状基因座（eQTL）。他们发现其中的大多数eQTL对基因表达的等位基因效应是细胞类型特异的。他们的结果在两个独立的队列中得到了重现，其中的一个队列由与他们的发现队列不同血统的个体组成。在所有的基因座上，他们的发现队列和重现队列在不同免疫细胞类型中的等位基因方向的一致性在72.2至98.1%之间。 Tabula Sapiens细胞图谱。 图片来源：Science, 2022, doi:10.1126/science.abl4896 【5】Science：构建出迄今为止最为庞大的多种人类器官的单细胞图谱 doi：10.1126/science.abl4896 除了极少数例外，我们每个人身体里的数万亿个细胞都携带着基本相同的人类基因组，每个人类基因组包含2万到2.5万个蛋白编码基因。但是，为了执行使生命成为可能的专门功能，像肾脏、肺部、心脏和大脑这样的器官依赖于由独特的细胞类型构建的组织，当每个细胞类型发育到只表达基因组中的特定基因子集时，就会出现这种情况。在此之前，不同细胞类型的基因表达多样性，即所谓的转录组（transcriptome），一直难以破译。但随着单细胞生物学的迅速发展，科学家们已经开发出一些工具和技术，精确地揭示了构成组织和器官的不同细胞所表达的基因。除了带来对正常生物学的更深理解，这些单细胞方法有望为新的治疗方法开辟途径，因为疾病通常会袭击特定的细胞类型。 在一项新的研究中，来自Tabula Sapiens联盟的研究人员公布了一个巨大的数字图谱，绘制了来自24种人类组织和器官的近50万个细胞的基因表达，包括肺部、皮肤、心脏和血液。相关研究结果发表在2022年5月13日的Science期刊上，论文标题为“The Tabula Sapiens： A multiple-organ， single-cell transcriptomic atlas of humans”。Tabula Sapiens细胞图谱是包括来自同一人类供者的多种组织的最大图谱，也是第一个包括组织的组织学图像的图谱，并纳入了生活在组成肠道不同区室的人类细胞周围的微生物群落的细节。 研究者Stephen Quake博士表示，这些数据的质量和广度是无可比拟的。这个图谱将使科学家们能够提出并回答他们以前从未接触过的有关人类健康和疾病的问题。”这篇新论文是本周发表在Science期刊上的四项主要合作研究之一，作为国际人类细胞图谱（HCA）联盟的一部分，所有这些研究都构建了全面和可公开获得的跨组织细胞图谱。HCA得到了包括陈-扎克伯格倡议（Chan Zuckerberg Initiative， CZI）在内的广泛的全球资助者的支持。CZI的单细胞生物学项目也为Tabula Sapiens联盟提供了资金。 【6】Science：利用单细胞RNA测序揭示系统性红斑狼疮的细胞类型特异性分子关联和遗传关联 doi：10.1126/science.abf1970 系统性红斑狼疮（SLE）是一种异质性的自身免疫性疾病，在女性和亚洲、非洲和西班牙血统的人中发病率较高。bulk转录组分析表明，1型干扰素信号的增加、淋巴细胞激活失调和细胞凋亡清除的失败是这种疾病的标志。许多参与这些过程的基因与系统性红斑狼疮相关的约100个基因位点相接近。尽管取得了这一进展，但对系统性红斑狼疮的循环免疫细胞的全面普查仍然是不完整的，对介导遗传关联的细胞类型和背景的注释仍然具有挑战性。 历史上，流式细胞仪和bulk转录组分析被用来分析SLE中循环免疫细胞的组成和基因表达。然而，流式细胞术因其使用有限的已知标志物而会出现偏差，而bulk转录组分析没有足够的能力来检测细胞类型的表达差异。对外周血单核细胞（PBMC）的单细胞RNA测序（scRNA-seq）作为一种全面和无偏差的方法，具有同时分析循环免疫细胞的组成和转录状态的潜力。然而，scRNA-seq在人群队列中的应用受到了样本量、成本和对技术变化的敏感性的限制。为了克服这些限制，来自加州大学旧金山分校等研究机构的研究人员之前开发出多重scRNA-seq（multiplexed scRNA-seq， mux-seq），以实现对人群队列的系统性和经济性scRNA-seq测序。 在一项新的研究中，这些研究人员利用mux-seq对来自162名系统性红斑狼疮患者和99名亚裔或欧裔健康对照者的120多万PBMC进行分析。相关研究结果发表在2022年4月8日的Science期刊上。系统性红斑狼疮患者在PBMC的组成和状态方面都表现出差异。对淋巴细胞组成的分析显示，初始CD4+T细胞（na？ve CD4+ T cell）减少，而细胞库限制（repertoire-restricted）的GZMH+CD8+T细胞增加。对八种细胞类型的转录组分析显示，经典的单核细胞对泛细胞类型和髓系特异性1型干扰素刺激基因（ISG）的表达水平最高。 【7】Science：我国科学家成功构建肿瘤浸润T细胞的泛癌单细胞图谱 doi：10.1126/science.abe6474 2021年12月23日讯/生物谷BIOON/---靶向肿瘤特异性T细胞的癌症免疫疗法已使许多癌症患者受益，但是针对不同类型的癌症的临床疗效差异很大。肿瘤浸润T细胞经常进入功能失调状态，这一现象被广泛称为T细胞衰竭（T cell exhaustion），而效应T细胞的抗肿瘤功能受多种因素调节，包括调节性T细胞（Treg细胞）的存在。T细胞的状态和丰度在不同癌症类型的肿瘤微环境（TME）中有所不同，这可能从根本上影响不同的临床参数，如对免疫疗法的药物反应。 在一项新的研究中，为了建立一种高分辨率的泛癌T细胞图谱，来自中国北京大学的研究人员对各种癌症类型的患者的肿瘤、癌旁组织和血液样本进行了单细胞RNA测序（scRNA-seq），并收集了其他已发表的scRNA-seq数据集。在校正了混杂因素和批次效应后，对这些不同的数据进行了整合。该图谱由21种癌症类型的316名患者的scRNA-seq数据组成。将T细胞表面上的T细胞受体（TCR）序列与基因表达谱组合起来，以描述T细胞的扩增和动态。应用各种计算方法来研究不同癌症类型的T细胞的特征和丰度。相关研究结果发表在2021年12月17日的Science期刊上。 这些作者在癌症患者中发现了多种潜在的肿瘤反应性T细胞（pTRT）群体。在不同类型的癌症的肿瘤微环境中，pTRT的状态有很大的不同。对于CD8+T细胞而言，主要的pTRT是功能衰竭的T细胞，并表现出高度的异质性。他们通过计算推断出T细胞衰竭的两条主要发展路径，分别是通过效应记忆T细胞和组织驻留记忆T细胞，而且这两条路径在不同的癌症类型中都很普遍。他们还注意到末端衰竭的T细胞与自然杀伤（NK）样T细胞、17型CD8+T细胞（Tc17细胞）细胞和CD8+Treg细胞等细胞之间的状态转换，但这类转换往往发生在特定的癌症类型中。 【8】Cell：科学家绘制人类单细胞染色质可及性图谱 doi： 10.1016/j.cell.2021.10.024 在人类细胞中，总长约2米的基因组DNA通过与组蛋白缠绕形成核小体，并经过螺旋折叠等方式盘绕形成染色体进而团聚于直径10微米的细胞核中。在细胞内的DNA需要进行转录等活动的时候，DNA才会从组蛋白中释放出来，裸露出需要与转录因子结合的位点从而便于转录，染色质的这种特性叫做染色质可及性，暴露的区域被称为“开放染色质”。作为转录调控的核心区域，顺式作用元件附近的染色质通常具有较高的可及性，利用全基因组染色质可及性检测技术可鉴定出潜在的顺式作用元件。 近日，发表在Cell杂志上的一项题为“A single-cell atlas of chromatin accessibility in the human genome”的研究中，来自美国加州大学圣地亚哥分校的研究团队利用单细胞测序技术在30个人类组织中分析了约60万个细胞，并通过与之前数据的集成分析识别了222个细胞亚型并注释了近120万个顺式作用元件，绘制了目前最大规模的人类单细胞染色质可及性图谱，为解析基因转录调控机制以及人类复杂疾病的致病机理提供了宝贵的参考资源。 该研究对人类发育的不同阶段进行了较为全面的组织分析，同时也为寻找具有细胞类型特异性的致病基因提供了数据支持。 【9】Cell：新研究构建出人类基因组中的单细胞染色质图谱 doi：10.1016/j.cell.2021.10.024 在一项新的研究中，来自美国加州大学圣地亚哥分校的研究人员为人类基因组构建出单细胞染色质图谱。染色质是真核细胞中发现的由DNA和蛋白组成的复合物；在某些细胞核内，关键基因调控元件所在的染色质区域以开放的结构出现。在不同人类组织类型的细胞中精确地确定这些可访问的染色质区域将是理解基因调控元件（非编码DNA）在人类健康或疾病中的作用的重要一步。相关研究结果于2021年11月12日在线发表在Cell期刊上。 对于科学家来们说，俗称“生命之书”的人类基因组大部分是未撰写的。或者至少是没有读取过。虽然科学界对构建人类所需的所有蛋白编码基因给出了一个著名的（近似）数字，即大约20000多个，但这一估计并没有真正开始解释这种基因组构建过程究竟是如何运作的，或者在疾病的情况下，它如何可能出现问题。 论文通讯作者、加州大学圣地亚哥分校表观基因组学中心主任Bing Ren博士说，“人类基因组在20年前被测序，但解释这部生命之书的意义仍然具有挑战性。一个主要的原因是，人类DNA序列的大部分，超过98%，都是非蛋白编码的，我们还没有一本遗传密码书来解开嵌入在这些序列中的信息。”换句话说，这有点像知道章节标题，但页面的其余部分仍是空白。填补这些空白的努力广泛地体现在一项正在进行的国际努力中，即DNA元件百科全书（Encyclopedia of DNA Elements， ENCODE）。特别是，Ren及其同事们已研究了染色质的作用和功能。作为由DNA和蛋白组成的复合物，染色质在真核细胞的细胞核内形成染色体。 小鼠前列腺癌发生后50天对其结构进行3D重建。 图片来源：Julian Taranda/Osten lab/CSHL, 2021 【10】Cell Rep：科学家将单细胞分辨率下的全器官成像技术与免疫组化技术相结合来揭示前列腺癌的发生和转移机制 doi：10.1016/j.celrep.2021.110027 尽管癌症的启动和转移的早期步骤对理解疾病的发病机制非常重要，但却难以进行可视化的研究；近日，一篇发表在国际杂志Cell Reports上题为“Combined whole-organ imaging at single-cell resolution and immunohistochemical analysis of prostate cancer and its liver and brain metastases”的研究报告中，来自冷泉港实验室等机构的科学家们通过研究开发了一种新方法来研究小鼠机体中胰腺癌的生命史；文章中，研究人员结合了他们在全器官成像和前列腺癌方面研究的专业知识，追踪了胰腺癌细胞如何生长成为肿瘤病扩散到其它器官中；这种方法或能帮助研究人员首次在一种能准确模仿真实生活的疾病环境中来研究前列腺癌细胞的行为和特性。 天然肿瘤通常源于一个出现问题的单一细胞，然而在实验室小鼠机体中生长的合成性肿瘤往往起源于数百万个细胞而并非单一细胞；这一过程或许并不能准确反映癌症是如何发生的。研究者表示，以皮肤癌为例，其发生是遭受了紫外辐射的细胞成为了诱因，而并非是整个皮肤。 文章中，研究者Osten等人所描述的新方法能利用一种更有针对性的技术来研究非常早期的前列腺癌，其能利用一种病毒来讲一种正常的小鼠前列腺细胞转化为癌变细胞；这一孤独的癌细胞或能利用名为全器官序列双光子断层扫描的显微镜技术进行定位；这种断层扫描机器是完全自动化的，其能对器官上层的所有细胞进行拍照成像，同时还会切下一块并对下一层进行成像，同时还会重复这一过程，直到其拍摄了整个器官。接下来在利用了一种人工智能程序后，该机器就能在单细胞分辨率下对器官进行3D重建。 这一点非常重要，因为在癌症的后期阶段，机体或许就会携带大量癌细胞，这样研究人员就能很容易找到这些细胞；而在早期阶段，机体器官中或许可能只会携带很少量的细胞，因此利用传统方法寻找这些癌细胞或许存在很大难度，因为这些方法必须不断切开组织不断寻找。（生物谷Bioon.com） 生物谷更多精彩盘点！敬请期待！ “2022（第五届）单细胞多组学研究与临床应用峰会”打造四大论坛，将专注于前沿科创、临床应用、肿瘤治疗、单细胞空间转录组算法四大领域，从独立专业展区到垂直行业论坛，促进领域内各个垂直行业的专业交流，共同探索单细胞多组学的技术发展前景，共同推进单细胞多组学研究的全面应用！

Disease control rate of 87.5 percent achieved in patients who were all progressing on anti-PD-1 therapy at trial entryDurable disease stabilization that was ongoing at data cutoff in 62.5 percent of the patients who entered the study with progressive disease and were followed for a minimum of 12 weeksPartial response in 15 percent of the patients Evidence of tumor regression in both injected and uninjected lesionsInduction of local and systemic cytotoxic T cell response after experimental treatment with CAN-2409 Candel to host investor event and webcast at 6:30 am CDT on June 4NEEDHAM, Mass., May 26, 2022 (GLOBE NEWSWIRE) -- Candel Therapeutics, Inc. (Nasdaq: CADL), a late clinical stage biopharmaceutical company developing novel oncolytic viral immunotherapies, today announced the publication of abstract #9037 at the American Society of Clinical Oncology (ASCO) Annual Meeting taking place June 3-7, 2022, in Chicago. The abstract summarizes initial data as of January 10, 2022, from Candel’s open-label phase 2 clinical trial evaluating CAN-2409 in combination with anti-PD-1 or PD-L1 agents in patients with stage III/IV non-small cell lung cancer (NSCLC) who have had an inadequate response to immune checkpoint inhibitor treatment. The data presented in the poster will include additional data not included in the abstract from a total of 20 patients as of April 20, 2022, including 16 patients from cohort 2. “The achievement of an 87.5 percent disease control rate in patients whose cancer was progressing on anti-PD-1 treatment at enrollment bolsters the evidence of CAN-2409’s potential to induce immunization against cancer neoantigens in both injected tumors and uninjected metastases so that resistance to checkpoint blockade can be overcome,” said Paul Peter Tak, MD, PhD, FMedSci, President and CEO of Candel. “The occurrence of abscopal effects and clinically meaningful and durable activity, supported by significant biomarker responses and prior monotherapy activity data, strengthens our belief that this investigational agent has the potential to improve outcomes for patients with NSCLC who are progressing on anti-PD-1 agents.”Experimental treatment with CAN-2409 plus valacyclovir in combination with anti-PD-1 agents appeared to be well tolerated. The most common treatment-related adverse events were transient flu-like symptoms, such as chills, fever and fatigue, with no grade 4 and two grade 3 events reported. Additional data highlights include: Most patients experienced a reduction in tumor burden.There were three objective responses in cohorts 1 and 2 (patients with stable disease or progressive disease upon entry, respectively). A fourth patient with PR initially reported in the abstract became ineligible for RECIST assessment due to an irradiated lesion; the patient still showed an absence of disease progression for more than 6 months.Two of the three patients with a PR had PD-L1 expression below 1 percent, the third being unknown; 19 of 20 patients in the trial had negative or low PD-L1 expression.CAN-2409 treatment induced 1) increased tumor infiltration by cytotoxic T cells, 2) a systemic increase in actively proliferating, granzyme B positive T cells, 3) an increase in interferon gamma producing effector cells in both CD4+ and CD8+ compartments, and 4) increased levels of soluble granzymes A, B and H, all consistent with the hypothesized mechanism of action of CAN-2409. “As a physician who cares for patients with NSCLC, I am frequently confronted with the problem faced by the majority of patients with lung cancer who ultimately progress on immune checkpoint therapy,” said Daniel Sterman, M.D., Professor at NYU Langone Heath, and a principal investigator for the phase 2 clinical trial. “The data from this clinical trial are incredibly exciting, suggesting that the addition of CAN-2409 to pembrolizumab or nivolumab containing treatment regimens in patients experiencing progression may offer a new therapeutic option where few good alternatives exist. Importantly, CAN-2409 was administered only two times in this setting, with intratumoral administration providing a simple and straightforward approach.” Details on the abstract are below: Abstract Title: First report of safety/tolerability and preliminary antitumor activity of CAN-2409 in inadequate responders to immune checkpoint inhibitors for stage III/IV NSCLC Presenter: Charu Aggarwal, MD, MPH, Associate Professor of Lung Cancer Excellence, Perelman School of Medicine, University of PennsylvaniaSession Date and Time: June 6, 2022, from 8:00 - 11:00 am CDTSession Title: Lung Cancer – Non-Small Cell MetastaticLocation: McCormick Convention Center, Hall AAbstract Number: 9037 Candel also announced that an in-person and webcast investor event will be held on Saturday, June 4, 2022, from 6:30 – 7:45 am CDT. Key speakers will be: Dr. Roy Herbst, Professor of Medical Oncology and Chief of Medical Oncology at the Yale Cancer Center, and member of Candel’s Research Advisory BoardDr. Daniel S. Sterman, Professor of Pulmonary and Critical Care Medicine, at the New York University, Director of the Multidisciplinary Pulmonary Oncology Program at NYU Langone Health, and a principal investigator on the phase 2 clinical trialDr. Paul Peter Tak, President and CEO of Candel Therapeutics The webcast and slides will be accessible live under “Events and Presentations" on the Investors page of the company’s website at https://ir.candeltx.com/news-and-events/events-and-presentations or by clicking here. A replay will be available on the website for approximately 90 days after the event. Dr. Charu Aggarwal is serving as the co-principal investigator of this phase 2 clinical trial. For more information on the clinical trial please visit: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT04495153 About CAN-2409CAN-2409, Candel’s most advanced oncolytic viral immunotherapy candidate, is a replication-deficient adenovirus that delivers the herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-tk) gene to cancer cells. HSV-tk is an enzyme that locally converts orally administered valacyclovir into a toxic metabolite that kills nearby cancer cells. The intra-tumoral administration results in the release of tumor-specific neoantigens in the microenvironment. At the same time, the adenoviral serotype 5 capsid protein elicits a strong pro-inflammatory signal in the tumor microenvironment. This creates the optimal conditions to induce a specific CD8+ T cell mediated response against the injected tumor and uninjected distant metastases for broad anti-tumor activity. Because of its versatility, CAN-2409 has the potential to treat a broad range of solid tumors. Monotherapy activity as well as combination activity with standard of care radiotherapy, surgery, chemotherapy, and immune checkpoint inhibitors have previously been shown in several preclinical and clinical settings. Furthermore, CAN-2409 presents a favorable tolerability profile; more than 700 patients have been dosed to date, supporting the potential for combination with other therapeutic strategies without inordinate concern of overlapping adverse events. Currently, Candel is evaluating the effects of treatment with CAN-2409 in non-small cell lung cancer, high-grade glioma, pancreatic cancer, and localized, non-metastatic prostate cancer in ongoing clinical trials. About Candel Therapeutics Candel is a late clinical stage biopharmaceutical company focused on helping patients fight cancer with oncolytic viral immunotherapies. Candel’s engineered viruses are designed to induce immunogenic cell death through direct viral-mediated cytotoxicity in cancer cells, thus releasing tumor neo-antigens while creating a pro-inflammatory microenvironment at the site of injection. Candel has established two oncolytic viral immunotherapy platforms based on novel, genetically modified adenovirus and herpes simplex virus (HSV) constructs, respectively. CAN-2409 is the lead product candidate from the adenovirus platform and CAN-3110 is the lead product candidate from the HSV platform. The enLIGHTEN™ Discovery Platform is based on Candel’s HSV technology. For more information about Candel, visit: www.candeltx.com Forward-Looking Statements This press release includes certain disclosures that contain “forward-looking statements,” within the meaning of the Private Securities Litigation Reform Act of 1995, as amended, including, without limitation, express or implied statements regarding the timing and advancement of development programs such as CAN-2409, including key data readout milestones; expectations regarding the therapeutic benefit of its programs; potential regulatory strategies and plans; and expectations regarding cash runway and expenditures. The words “may,” “will,” “could,” “would,” “should,” “expect,” “plan,” “anticipate,” “intend,” “believe,” “estimate,” “predict,” “project,” “potential,” “continue,” “target” and similar expressions are intended to identify forward-looking statements, although not all forward-looking statements contain these identifying words. Any forward-looking statements in this press release are based on management’s current expectations and beliefs and are subject to a number of risks, uncertainties and important factors that may cause actual events or results to differ materially from those expressed or implied by any forward-looking statements contained in this press release, including, without limitation, those risks and uncertainties related to the timing and advancement of development programs; expectations regarding the therapeutic benefit of the Company’s programs; the Company’s ability to efficiently discover and develop product candidates; the Company’s ability to obtain and maintain regulatory approval of product candidates; the Company’s ability to maintain its intellectual property; the implementation of the Company’s business model, and strategic plans for the Company’s business and product candidates, and other risks identified in the Company’s SEC filings, including the Company’s Registration Statement on Form S-1, the Company’s Quarterly Report on Form 10-Q filed on May 12, 2022, and subsequent filings with the SEC. The Company cautions you not to place undue reliance on any forward-looking statements, which speak only as of the date they are made. The Company disclaims any obligation to publicly update or revise any such statements to reflect any change in expectations or in events, conditions or circumstances on which any such statements may be based, or that may affect the likelihood that actual results will differ from those set forth in the forward-looking statements. Any forward-looking statements contained in this press release represent the Company’s views only as of the date hereof and should not be relied upon as representing its views as of any subsequent date. This press release includes certain disclosures about initial data that is subject to change and may not reflect data from future clinical trials. Media ContactHeidi Chokeir, PhDManaging DirectorCanale Communicationsheidi.chokeir@canalecomm.com619-203-5391 Investor ContactSylvia WheelerPrincipalWheelhouse Life Science Advisorsswheeler@wheelhouselsa.com