DAAM2

12月16日的《热心肠日报》，我们解读了 10 篇文献，关注：肠干细胞，组织再生，潘氏细胞，防御素，类器官，宿主-微生物互作，生物材料，组织工程。 国内团队：果蝇羽化肌分泌皮质激素，引发肠干细胞不对称分裂 Developmental Cell——[11.8] ① 利用果蝇蛹期肠道为研究模型，探索启动肠道干细胞由对称分裂转向不对称分裂的信号；② 在蛹期肠道干细胞中进行全基因组RNAi筛选，发现蜕皮激素存在情况下EcR和Usp会促进E93表达而抑制Br表达，导致不对称分裂；③ 蛹蜕皮激素主要来源不是胸腺，是背侧内斜肌（DIOM），遗传和体外培养实验也证明DIOM在蛹期会产生蜕皮激素脉冲；④ 基因分析表明，抑制mTOR后DIOM无法重塑导致蜕皮激素脉冲消失，激活mTOR后DIOM重塑时间提前，脉冲产生时间提前。 【主编评语】 干细胞通过对称分裂扩增干细胞数目，通过不对称分裂产生终末分化的子代细胞。近日，华中科技大学同济医学院郭峥及团队在Developmental Cell发表最新研究，通过系列遗传和体外培养试验结合全基因组方法，发现果蝇负责执行出蛹的腹部背侧内斜肌会通过释放蜕皮激素来精确控制蛹期肠道干细胞由对称分裂到不对称分裂的发生及其时间，解决了百年来完全变态昆虫在蛹期的蜕皮激素信号来源问题，值得关注。（@九卿臣） 【原文信息】 Eclosion muscles secrete ecdysteroids to initiate asymmetric intestinal stem cell division in Drosophila 2023-12-13, doi: 10.1016/j.devcel.2023.11.016 Cell子刊：果蝇肠干细胞如何丧失杂合性 Cell Reports——[8.8] ① 利用果蝇肠道模型研究成体干细胞中自发产生杂合性丧失（LOH）的潜在分子机制和驱动因素；② 老化的肠干细胞 (ISC) 会发生自发LOH，且随着年龄增长而增加；③ 致病性肠道细菌软腐欧文氏菌Ecc15而非嗜虫假单胞菌感染会促进DNA损伤并增加LOH；④ 全基因组测序揭示LOH主要是通过有丝分裂重组产生的；⑤ 分子特征和遗传证据表明LOH并非断裂诱导复制机制，而是通过基于双霍利迪连接体的修复进行交叉。 【主编评语】 杂合性丧失（LOH）发生在正常人体组织中且在病理遗传状况和癌症中普遍存在，其中单细胞酵母细胞中促进LOH的DNA修复机制已知晓，而多细胞生物体组织中的主要途径和环境触发因素尚不清楚。近日，发表在Cell Reports上的这篇文章，揭示了果蝇肠干细胞中LOH的分子基础和环境驱动因素。（@圆圈儿） 【原文信息】 Molecular underpinnings and environmental drivers of loss of heterozygosity in Drosophila intestinal stem cells 2023-11-29, doi: 10.1016/j.celrep.2023.113485 Science子刊：部分重编程诱导肠道再生的分子机制 Science Advances——[13.6] ① 通过体内表达OSKM（Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc）强制部分重编程，从而诱导肠上皮细胞去分化；② OSKM诱导的强制去分化具有类似肠道再生分子特征，如从稳态细胞向损伤反应性细胞类型的转变；③ 损伤反应样细胞具有再生干细胞和萎缩诱导的绒毛上皮细胞基因特征，并积极协助损伤后的组织再生；④ 与前列腺素内过氧化物合酶2（Ptgs2）诱导的正常肠道再生不同，OSKM通过上皮Ptgs1表达促进前列腺素E2的自主产生。 【主编评语】 损伤后的组织再生涉及体细胞的去分化，是一种自然的适应性重编程，导致具有胎儿样特征的损伤反应细胞出现，然而目前缺乏各种组织中部分重编程的再生效应分子机制。近日，发表在Science Advances上的这篇文章，发现Ptgs1介导的上皮前列腺素产生是体内部分重编程的关键，直接使肠上皮细胞采用胎儿特征而不涉及任何间充质辅助。（@圆圈儿） 【原文信息】 Partial in vivo reprogramming enables injury-free intestinal regeneration via autonomous Ptgs1 induction 2023-11-24, doi: 10.1126/sciadv.adi8454 Science子刊：经典与非经典Wnt信号如何协调控制肠潘氏细胞分化？ Science Advances——[13.6] ① 鉴定发现Dishevelled相关形态发生激活剂1（Daam1）及其旁系同源物Daam2通过其N端结构域与Wnt抑制剂RNF43相互作用；② Daam1/2双敲除通过抑制RNF43依赖性的Wnt受体Frizzled内吞降解，从而激活经典Wnt信号传导；③ Daam1/2双敲除破坏非经典Wnt（Wnt/PCP）信号传导并增强经典Wnt信号传导，并进一步损害潘氏细胞分化；④ Daam1/2不对称地调节经典和非经典Wnt信号传导。 【主编评语】 潘氏细胞是构成肠道微环境的主要元素，可以提供各种生长因子如Wnt3来协调肠道干细胞稳态，不同的Wnt配体可以选择性地激活β-连环蛋白依赖（经典）或非依赖（非经典）信号传导，然而目前尚不清楚非经典Wnt信号传导如何影响肠上皮稳态和分化以及经典与非经典Wnt信号传导如何协调。近日，发表在Science Advances上的这篇文章，发现Daam1/2是协调经典和非经典Wnt信号传导的中心分子，对于潘氏细胞分化至关重要。（@圆圈儿） 【原文信息】 Intestinal Paneth cell differentiation relies on asymmetric regulation of Wnt signaling by Daam1/2 2023-11-24, doi: 10.1126/sciadv.adh9673 Nature子刊：潘氏细胞化生的诱导机制 Nature Communications——[16.6] ① 研究由诱导型bcr-abl癌基因驱动的慢性粒细胞白血病（CML）小鼠模型中潘氏细胞化生（PCM）的进展；② 机制上，CML在胃肠道内诱导促炎状态，从而导致肠上皮细胞诱导IL-33产生；③ IL-33与受体ST2结合导致2型先天淋巴细胞（ILC2）激活产生IL-9，并驱动结肠PCM和小肠组织重塑（其特征是杯状和簇细胞增生以及粘膜肥大细胞扩张）；④ 肠炎触发ILC2/IL-9回路，诱导PCM并调节胃肠道中特化上皮细胞发育。 【主编评语】 潘氏细胞化生（PCM）通常出现在已有的胃肠道疾病中，然而诱导化生的机制途径以及PCM是否仅由胃肠道固有疾病引发尚不清楚。近日，发表在Nature Communications上的这篇文章，证明肠外疾病可触发ILC2/IL-9免疫回路，从而诱导PCM并调节胃肠道上皮细胞的命运决定。（@圆圈儿） 【原文信息】 Interleukin-9 production by type 2 innate lymphoid cells induces Paneth cell metaplasia and small intestinal remodeling 2023-12-02, doi: 10.1038/s41467-023-43248-5 FOXO抑制剂或可增强潘氏细胞功能 PNAS——[11.1] ① 潘氏细胞可产生大量的α-防御素和其他抗菌素介导了人小肠中关键的宿主-微生物相互作用；② 这些抗菌素在人小肠类器官（enteroids）中的表达谱与在其来源的配对组织中的表达谱相比显著倾斜，α-防御素减少到几乎无法检测到的水平；③ 然而，在鼠类小肠类器官中，可以重现潘氏细胞α-防御素在组织中的表达谱；④ FOXO抑制剂AS1842856诱导人小肠类器官中α-防御素mRNA的表达增加超10万倍，将DEFA5和DEFA6恢复到与原始人体组织相当的水平。 【主编评语】 潘氏细胞分泌的α-防御素的一个关键功能是塑造肠道微生物群的组成。虽然微生物群可以显著促进健康宿主的生理，但微生物组成的扰动（即微生态失调）可能导致多种慢性疾病的发病机制，包括自闭症谱系障碍（ASD）、炎症性肠病(IBD)、肥胖、糖尿病和癌症。在克罗恩病中，潘氏细胞α-防御素的表达减少，并被认为是导致该病的微生态失调的原因之一。近期发表于PNAS的一项研究发现，FOXO抑制剂AS1842856在患者源性肠道类器官中重建了人α-防御素的天然组织水平，这一新发现表明FOXO信号轴可能是增强潘氏细胞功能的有价值的治疗靶点。（@注册营养师陈彬林） 【原文信息】 FOXO inhibition rescues α-defensin expression in human intestinal organoids 2023-11-13, doi: 10.1073/pnas.2312453120 肠道类器官助力揭示罕见病发病机制 Journal of Clinical Investigation——[15.9] ① 通过胃肠道内窥镜可视化技术，观测到隐窝增大可能是Cronkhite-Canada综合征（CCS）患者独有的特征；② 从CCS患者体内分离肠道干细胞并制成人类肠道类器官（HIO），其表现出独特的出芽形态；③ CCS-HIO具有高度增殖性，并且能产生5-羟色胺的肠内分泌细胞数量增加，这些特征也在患者组织活检中观测到；④ HIO的修饰导致肠内分泌细胞增加，表现出CCS-HIO表型；⑤ 局部上皮5-羟色胺的产生与HIO增殖增加相关。 【主编评语】 Cronkhite-Canada综合征（CCS）又称息肉-色素沉着-脱发-爪甲营养不良综合征，是一种极为罕见的非遗传性疾病，病因尚不清楚，以胃肠道多发息肉伴皮肤色素沉着、脱发、指趾甲萎缩等为主要临床特征，缺乏特异性治疗方法。该疾病发现迄今已有50余年，但其发病机制和最佳治疗方法仍然未知。Journal of Clinical Investigation最新研究性文章从CCS患者体内分离出肠道干细胞，构建人类肠道类器官，并揭示了5-羟色胺在肠上皮增殖中发挥关键作用。（@RZN） 【原文信息】 Human intestinal organoids from Cronkhite-Canada syndrome patients reveal link between serotonin and proliferation 2023-11-01, doi: 10.1172/JCI166884 用原代肠道类器官检测宿主如何响应微生物刺激 Gut Microbes——[12.2] ① 从27个健康受试者的活检组织中构建小肠类器官，分解类器官并在层粘连蛋白511上培养，可产生绒毛基底膜（绒毛是上皮-微生物相互作用的主要部位），即产生体内与微生物互作的肠上皮细胞层；② 将上述肠上皮细胞层与菌进行共培养，会影响上皮细胞的转录状态，这个共培养体系可用于研究宿主对微生物的响应；③ 多个个体（n=9）的健康上皮对一系列益生菌菌株（BB-12R、LGGR、DSM33361和Bif195），表现出强烈的急性共通反应和菌株特异性反应。 【主编评语】 与微生物相互作用的研究大多来源于癌细胞系（如Caco-2），但这些癌症细胞系中的反应如何反映正常上皮的反应，以及是否存在微生物菌株特异性效应，需要进一步研究。Gut Microbes近期发表的文章，研究如何利用原代上皮类器官来检测宿主对微生物刺激的反应。（@章台柳） 【原文信息】 Detecting host responses to microbial stimulation using primary epithelial organoids 2023-11-22, doi: 10.1080/19490976.2023.2281012 用于人肠类器官培养和治疗递送的工程合成基质（综述） Advanced Materials——[29.4] ① 多能干细胞或成体干细胞来源的人肠类器官（HIOs）可在体外研究人类发育、药物测试和疾病模型，并作为体内组织再生和治疗进展的细胞来源；② 合成水凝胶具有调节基质的机械和生化特性，比Matrigel-TM等生物衍生水凝胶具有优势，可设计为细胞外基质的类似物以支持HIOs生长和分化；③ HIOs被用于重建肠道移植物及体内递送至受伤的肠道部位；④ 使用合成水凝胶进行体外培养和体内递送将显著提高HIOs在药物筛选、疾病建模和治疗应用中的相关性。 【主编评语】 近日，发表在Advanced Materials上的这篇综述，讨论了合成水凝胶在人肠类器官（HIOs) 的体内外应用，包括概述多能干细胞或成体干细胞来源的人肠道类器官的生物学特性、设计合成基质时的不同设计注意事项、使用不同合成水凝胶用于体外HIOs培养和分化并总结了当前肠道再生的组织工程方法。（@圆圈儿） 【原文信息】 Engineered Synthetic Matrices for Human Intestinal Organoid Culture And Therapeutic Delivery 2023-11-21, doi: 10.1002/adma.202307678 Nature Reviews：从零开始——肠道组织工程的进展与更新（综述） Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology——[65.1] ① 肠道组织工程ITE具有治疗短肠症候群SBS的潜力；② 生成功能性全层肠移植物需要吸收性粘膜、平滑肌、肠神经和脉管系统等组件；③ 基于此，ITE的进展包括内皮细胞再编程和血管工程、使用患者来源的材料及使用小肠类器官改造结肠粘膜；④ ITE移植物需要根据患者及其病理进行个体化；⑤ 进行临床转化时，需考虑细胞来源的选择、是否追求同种异体或自体疗法以及良好生产规范要求；⑥ 引入脉管系统对于未来升级多层组织工程小肠以满足临床需求非常重要。 【主编评语】 Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology发表的综述，集中讨论了工程肠道移植的最新进展，特别探讨了临床转化时的关键因素和难题，并提供了其在治疗及其他领域中应用的未来场景。（@好雨） 【原文信息】 Building gut from scratch — progress and update of intestinal tissue engineering 2022-03-03, doi: 10.1038/s41575-022-00586-x 感谢本期日报的创作者：九卿臣，圆圈儿，注册营养师陈彬林，RZN，章台柳，张小艳 点击阅读过去10天的日报： 12-15 | 今日Science：菌群如何“排挤”病原体？生态学原理探究竟 12-14 | 今日Nature和Cell齐发，肠道菌群研究再掀小高潮 12-13 | 国内团队Cell子刊突破：调肠菌，改善肝癌患者手术预后！ 12-12 | 蜱虫叮咬使人对红肉过敏？JAMA解析α-gal综合征 12-11 | 《自然·综述》年度回顾：于君等详解癌症菌群研究新突破 12-10 | 限制性饮食如何影响健康？多文阐述背后的科学原理 12-09 | 黄秀娟等Lancet子刊突破：微生态干预可改善长新冠 12-08 | Cell连发3文，大肠癌基础和转化研究成焦点 12-07 | Nature重磅：用反向代谢组学方法，挖掘IBD中的微生物新分子 12-06 | 刘瑞欣、陈鹏等各取新突破，30分Cell子刊2文聚焦肠菌代谢与宿主健康

在一项新的研究中，来自来自德国弗莱堡大学和基尔大学等研究机构的研究人员发现肌动蛋白作用于细胞核，部分负责男性性特征的呈现。相关研究结果于2023年3月27日在线发表在Nature期刊上。 在一项新的研究中，来自来自德国弗莱堡大学和基尔大学等研究机构的研究人员发现肌动蛋白作用于细胞核，部分负责男性性特征的呈现。相关研究结果于2023年3月27日在线发表在Nature期刊上，论文标题为“Formin-mediated nuclear actin at androgen receptors promotes transcription”。论文通讯作者为弗莱堡大学医学院的Robert Grosse教授和基尔大学医学院的Nadine Hornig博士。 类固醇激素属于性激素，如雌激素或睾酮，是重要的信号分子，负责控制女性和男性的表型性别分化。它们通过与受体分子结合而发挥作用，这些受体分子开启和关闭激素依赖性的基因的活性。这些作者指出，作为细胞骨架的组成部分，肌动蛋白在这一过程中起着关键作用。这一发现对于诊断医学疾病和研究类固醇激素在其中发挥重要作用的疾病和癌症具有重要意义。 这些新的研究结果显示作为细胞骨架的一种组成部分，纤维状肌动蛋白（filamentous actin, F-actin）与细胞核中的雄激素受体直接相互作用，并加强它的效果。雄激素受体调节性激素的信号，以促进男性性发育，但是也能促进前列腺癌进展。 作为关键指标的基因变化 这些作者在研究所谓的雄激素不敏感综合征（androgen insensitivity syndrome, AIS）患者的细胞时，意识到了肌动蛋白和类固醇激素之间以前未知的联系。患有AIS的人携带男性XY染色体，但没有明显的男性性特征，甚至长得完全是女性。这通常是由于雄激素受体的变化，这意味着雄激素不能再起作用。然而，在AIS患者中，雄激素受体通常没有变化。 Hornig解释说，“我们想找出是什么基因变化导致这些患者患上AIS。因此，我们想进一步确定在性特征发育中起作用的分子。”为此，这些作者使用了一种筛选方法来研究AIS患者的细胞。在这个过程中，他们在两名患者身上发现了DAAM2基因的突变：该基因编码的DAAM2蛋白属于成蛋白（formins），控制肌动蛋白纤维的动态聚合和伸长。作为细胞骨架的一部分，肌动蛋白对细胞的稳定性和运动很重要，但也有调节功能。 高分辨率显微镜揭示了细胞核内的过程 这些作者使用高分辨率的三维SIM显微镜来研究DAAM2是否确实对性激素的作用很重要。这是一种精心设计的技术，可用于观察细胞内的分子运动。显微图片显示DAAM2和肌动蛋白与雄激素受体直接在细胞核内共定位。进一步的实验证明，这种共定位对控制基因活性很重要。 暴露在性激素二氢睾酮下的细胞的超高分辨率显微图像。图片来自Nature, 2023, doi:10.1038/s41586-023-05981-1。 在强调了这些新发现的意义之后，Grosse说，“这是一种完全未知的作用模式，我们在这里成功地描述了一种非常重要的受体。” 这些作者假设，这种机制可能是广泛存在的，也会影响其他类固醇激素的效果。 Grosse解释说，“这可能在许多生理过程和疾病中起作用。看看它是否能促进开发新的治疗方法，将是令人兴奋的。” 对更多的AIS患者进行诊断成为可能 这一发现还为进一步研究性特征的发育提供了基础，并使更多的AIS患者能够得到明确的诊断。 Hornig说，“以前，尽管有明确的症状，但对雄激素不敏感但没有雄激素受体改变的患者并没有得到明确的诊断。如今，我们可以对那些DAAM2发生改变的患者做出明确的诊断。” （生物谷 Bioon.com） 参考资料： Julian Knerr et al. Formin-mediated nuclear actin at androgen receptors promotes transcription. Nature, 2023, doi:10.1038/s41586-023-05981-1.

Researchers discover that actin acts in the cell nucleus and is partly responsible for the expression of male sexual characteristics. Steroid hormones, to which belong sex hormones like estrogen or testosterone, are important signaling molecules and are responsible among other things for controlling female and male phenotypic sex differentiation. They act by binding to receptor molecules that switch on and off the activity of hormone-dependent genes. Researchers at the University of Freiburg and Kiel University Hospital have discovered that components of the cytoskeleton are critically involved in this process. The findings are relevant for the diagnosis of medical conditions and the study of diseases and cancers in which steroid hormones play important roles. The study was published in the journal Nature. The new research findings show that filamentous actin, a component of the cytoskeleton, interacts with the androgen receptor directly in the cell nucleus and strengthens its effect. The androgen receptor mediates the signals of sex hormones for male sex development but also promotes the progression of prostate cancer. A genetic modification as the key indicator Scientists with different research foci from Freiburg, Kiel, and Lübeck collaborated on the study across disciplines. The project was led jointly by Prof. Dr. Robert Grosse and PD Dr. Nadine Hornig: Grosse conducts his research at the Cluster of Excellence CIBSS -- Centre for Integrative Biological Signalling Studies and the University of Freiburg's Faculty of Medicine, Hornig at University of Kiel´s Faculty of Medicine and the University Hospital Schleswig-Holstein, campus Kiel. The researchers became aware of the previously unknown connection between actin and steroid hormones while studying the cells of patients with a so-called androgen insensitivity syndrome (AIS). People who live with AIS have a set of male XY chromosomes but have less pronounced male sexual characteristics, extending even to a completely female appearance. This is often due to a change in the androgen receptor, which means that male sex hormones can no longer take effect. However, the androgen receptor is frequently unchanged in patients with AIS. "We want to find out what genetic modifications cause AIS in these patients," explains Hornig. "Thus, we wanted to identify further molecules that play a role in the development of sexual characteristics." For this purpose, the researchers used a screening method to examine the cells of patients with AIS. In the process, they discovered mutations in the DAAM2 gene in two patients: The molecule belongs to the group of formins and controls the dynamic polymerization and elongation of actin filaments. As a part of the cytoskeleton, actin is important for the stability and locomotion of cells but also serves regulatory functions. High-resolution microscopy reveals the processes in the cell nucleus The researchers used high-resolution 3D SIM microscopy to examine whether DAAM2 is indeed important for the effect of sex hormones. This is an elaborate technique that can be used to observe molecular movements within cells. The images show that DAAM2 and actin colocalize with the androgen receptor directly in the cell nucleus. Further experiments demonstrated that this colocalization is important for the control of gene activity. "This is a completely unknown mode of action, which we succeeded in describing here for a very important receptor," says Grosse, highlighting the significance of the new findings. The research team assumes that the mechanism could be widespread and also influences the effect of other steroid hormones. "This could play a role in many physiological processes and diseases. It will be exciting to see whether it will enable new therapeutic approaches," explains Grosse. Diagnosis possible for more patients with AIS The discovery also provides a basis for further research on the development of sexual characteristics and enables a clear diagnosis for more patients with AIS: "Previously, patients with androgen insensitivity but without a modification in the androgen receptor did not receive a clear diagnosis despite having clear symptoms," says Hornig. "Now we can make a clear diagnosis for those in whom DAAM2 is altered."