100 项与 浙江天杭生物科技股份有限公司 相关的临床结果
0 项与 浙江天杭生物科技股份有限公司 相关的专利(医药)
中文摘要目的 实验室确认静注巨细胞病毒人免疫球蛋白(pH4)(human cytomegalovirus immunoglobulin for intravenous injection,CMV-IVIG)抑制巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染的有效性。方法 分别通过免疫荧光染色和细胞病变实验测定CMV-IVIG抑制CMV的即早基因1表达和致细胞病变能力,确认CMV-IVIG有效性。结果 即早基因1表达量与病变细胞数量随着制品稀释倍数的增加而增加;27倍稀释的CMV-IVIG可抑制90.77%~95.85%的CMV感染力;103倍稀释的CMV-IVIG可抑制>90%的细胞病变。结论 CMV-IVIG中的中和抗体能特异性中和CMV,阻止CMV感染细胞,且具有良好的量效关系。正文巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)是疱疹病毒科β属的DNA病毒[1],在发展中国家成年人中感染率可达100%[2]。虽然通常呈隐性感染,但当机体免疫功能低下时,病毒可被激活而发生显性感染[3]。孕妇初次或复发CMV感染引起新生儿宫内感染或围产期感染侵袭胎儿,是导致先天畸形的重要原因之一[4]。目前尚无治疗CMV感染疾病的特效药物,由于抗CMV抗体可以保护特定人群抵抗CMV感染疾病[5-9],因此,目前使用抗病毒药物或联合抗病毒药物和静注巨细胞病毒人免疫球蛋白(human CMV immunoglobulin for intravenous injection,CMV-IVIG)(pH4)预防和治疗 CMV感染疾病[10]。成都蓉生药业有限责任公司(成都蓉生)研制的CMV-IVIG(pH4)系从健康人血浆中筛选含高效价CMV中和抗体(CMV neutralizing antibody,CMV-NA)的血浆,采用成都蓉生分离工艺和成品配方,经两步病毒灭活(低pH孵放和纳米膜过滤)制备的特异性CMV-IVIG冻干制剂,供静脉输注。输注后可迅速提高患者血浆中CMV-NA水平,理论上可通过CMV-NA与CMV中的抗原结合,阻止病毒侵入健康细胞并清除CMV,起到预防和治疗CMV感染及相关性疾病的作用。由于人CMV种属特异性高,难以建立动物模型,因此本品未能做动物实验以验证其药效,只能选择体外药效实验,而离体人源组织和器官珍贵难觅,且涉及伦理规范,我们选择用正规商业来源的敏感人源细胞进行了药效学实验研究。CMV基因组复制缓慢,基因表达具有严格的时相性。即早基因(immediate early gene,IE)1在感染后3 h开始在细胞核中表达,6 h后即可被检出;而CMV晚期基因的转录和翻译发生在感染后的36~48 h[11]。因此,采用免疫组织化学法可使感染CMV的细胞核特异性着色。1材料与方法1.1材料1.1.1 实验样品 成都蓉生研制的6批CMV-IVIG(pH4):V002、V003、V004、V005、V006、V007为2种规格,浓度相同,装量不同,其中V002、V004、V006 为20 000 U(25 ml)/瓶,V003、V005、V007为40 000 U(50 ml)/瓶,制品的纯度分别为98.3%、98.1%、98.3%、98.4%、98.2%、98.4%;分子大小分布分别为99.2%、99.2%、99.1%、99.2%、99.1%、99.1%。复溶后用维持液(含2%胎牛血清的MEM培养基)根据不同实验特点稀释成不同稀释倍数(IE1表达量抑制实验样品:128、256、512······4 096倍;细胞病变实验样品:1 000、1 050、1 100······1 350倍)溶液待用。1.1.2 细胞和病毒株 MRC-5人胚肺成纤维细胞、CMV均购自美国典型培养物保藏中心。1.1.3 主要试剂 MEM基础培养基购自美国Life Technologies公司,胎牛血清购自浙江天杭生物科技股份有限公司,生物素化抗鼠IgG购自美国Jackson ImmunoResearch公司,亲和素化链霉抗生物素蛋白和TrueBlue显色剂购自美国KPL公司,抗CMV IE1单克隆抗体购自美国Merck Millipore公司。1.1.4 主要设备 BSC-1500Ⅱ A2-X生物安全柜购自济南鑫贝西生物技术有限公司,XDS-1B倒置显微镜购自重庆光电仪器有限公司,GL-99T Ⅰ型体视显微镜购自桂林桂光仪器有限公司。1.2方法1.2.1 IE1表达量抑制实验 CMV-IVIG与中和用CMV等量混和,每个浓度样品2个复孔,37 °C、5%CO2中和1 h。然后加入MRC-5细胞于37 ℃、5%CO2培养16~18 h。同时设阳性对照(维持液代替CMV-IVIG)和阴性对照(维持液代替CMV-IVIG和病毒)。经过细胞固定、封闭及加抗CMV IE1单克隆抗体、生物素化抗鼠IgG、亲和素化链霉抗生物素蛋白,最后显色。显色后在体视显微镜下采集各孔图像,用克隆计数软件计数每孔的特异性着色细胞核。降低感染力程度(%)=100-样品孔平均核着色个数÷病毒孔平均核着色个数×1001.2.2 细胞病变实验 CMV-IVIG与同体积的CMV于37 ℃、5%CO2中和1 h后,加入 MRC-5细胞于37 ℃、5%CO2培养48 h,设阳性对照(维持液代替CMV-IVIG)和阴性对照(维持液代替CMV-IVIG和病毒),在倒置生物显微镜下观察MRC-5细胞的致细胞病变程度,记录观察结果。2结果2.1IE1表达量抑制实验结果同体积的不同稀释倍数CMV-IVIG在加入相同量的CMV后,残留病毒数不同,残留病毒感染细胞后在细胞核内表达的IE1数量也不同,经染色后计数结果也不同。稀释倍数越高,特异性着色的细胞核越多,即IE1表达越多,见图1。随着CMV-IVIG稀释倍数的增加,降低病毒感染力的程度减小,病毒感染力增强(IE1表达越多)。在128倍稀释度时,能降低约93%的病毒感染力,而在4 096倍稀释度时50%样品降低病毒感染力的能力已降到0,见表1。2.2细胞病变实验结果同体积的不同稀释倍数的CMV-IVIG能中和的同体积病毒液中的病毒数不同,残存的病毒导致的MRC-5细胞病变的范围程度也不同。随着CMV-IVIG稀释程度的增加,相同体积样品内含有的CMV-NA量也减少,而致细胞病变的程度增加,说明CMV-NA能特异性有效阻止CMV感染细胞,避免细胞发生病变(图2、3)。3讨论目前全球仅有CytoGam®和Cytotect®品牌的CMV-IVIG应用于欧美市场,且已上市多年,国内至今仍无同类产品上市。为了在实验室确认成都蓉生研制的CMV-IVIG产品对CMV的有效性,我们用CMV敏感的MRC-5细胞开展了本研究。从两方面进行试验设计:(1)CMV感染MRC-5细胞数小时后会在细胞核内大量表达IE1,通过组织化学染色使病毒感染的细胞核出现特异性着色现象,且1个着色细胞核代表1个感染并表达IE1细胞[12]。将系列稀释的CMV-IVIG分别与CMV悬液混和,再感染MRC-5细胞。感染细胞培养后,通过对感染细胞中的染色颗粒的计数测定中和后的残留病毒IE1的表达能力。(2)CMV感染MRC-5细胞,在细胞内的繁殖过程引起细胞肿胀变形,由细长梭形变为球形(巨细胞),即细胞病变。将系列稀释的CMV-IVIG分别与CMV悬液混和,然后感染MRC-5细胞。感染后的细胞经过培养,在倒置显微镜下观察残余病毒引起的致细胞病变程度。IE1表达量抑制实验结果中,随着CMV-IVIG稀释倍数的增加,相同体积样品内含有的CMV-NA量也减少,IE1表达越多,即病毒感染力越强,CMV-IVIG 能降低病毒感染力的程度越小,在128倍稀释时,杀灭了绝大部分病毒(平均93%),而在4 096倍稀释时50%样品已无降低病毒感染力能力(IE1表达与阳性对照一致)。细胞病变实验结果显示,随着制品稀释程度的增加,致细胞病变的程度也在增加,说明CMV-NA能特异性有效阻止CMV感染细胞,避免细胞发生病变。成都蓉生研制的CMV-IVIG标示效价单位为可以直接有效中和活病毒的中和抗体效价单位,而非对应病毒抗原片段的抗体总量。我们的体外药效学研究结果显示:产品所含有的特异性中和抗体能有效中和病毒,阻止CMV感染细胞;中和病毒的能力与CMV-IVIG中的中和抗体含量呈正相关,具有良好的量效关系。基于上述结果,该产品应具有相应的临床药效。作者刘波1 吴强2 张航3 李小姣3 李伟4 杨春4 吴佳君5 秦婷婷51成都蓉生药业有限责任公司质量检定部,成都 610219;2成都蓉生药业有限责任公司生产管理部,成都 610219;3北京天坛生物制品股份有限公司科研管理部,北京 100024;4成都蓉生药业有限责任公司血液制品研发部,成都 610219;5成都蓉生药业有限责任公司科研质量部,成都 610219通信作者:秦婷婷,Email:1590825@qq.com引用本文:刘波, 吴强, 张航, 等. 静注巨细胞病毒人免疫球蛋白(pH4)体外药效学研究 [J]. 国际生物制品学杂志, 2023, 46(2): 61-64. DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20220628-00036
中文摘要目的 建立柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CV-A10)抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于CV-A10生产过程样品和四价手足口病疫苗的质量控制。方法 以纯化的CV-A10抗原分别免疫绵羊和小鼠获得羊免疫血清和杂交瘤单克隆抗体(单抗)细胞株,以杂交瘤细胞株免疫小鼠制备腹水,羊血清和小鼠腹水分别经亲和层析后获得纯化羊抗CV-A10多克隆抗(多抗)和小鼠抗CV-A10单抗。采用微量细胞病变法测定纯化多抗和单抗中和抗体效价。分别以纯化羊多抗作为包被抗体、小鼠单抗作为检测抗体,进行配对筛选研究,建立CV-A10抗原定量双抗体夹心ELISA;对方法的线性、专属性、准确度、精密度、范围进行验证,并对CV-A10抗原生产过程中的样品和成品进行检测。结果 纯化抗CV-A10单抗和多抗均具有中和抗体活性。以多抗作为包被抗体、7株单抗作为检测抗体进行配对,其中5株单抗配对成功,选择CY166-14R作为检测抗体用于CV-A10抗原定量检测ELISA的建立;对检测方法进行优化,确定以羊多抗作为包被抗体的使用稀释比例为1∶5 000~1∶10 000、小鼠单抗检测抗体稀释比例1∶2 000~1∶4 000。建立的CV-A10抗原定量检测方法范围为0.42~10.00 U/ml,线性决定系数≥0.99;该方法仅能特异性检测CV-A10抗原,与其他抗原或物质(肠道病毒71型、CV-A6、CV-A16、M199、DMEM、Vero细胞蛋白、牛血清)无交叉反应;对高、中、低浓度样品进行测定,测定值/理论值在95%~110%之间,相对标准偏差在15%以内。结论 建立了CV-A10抗原定量双抗体夹心ELISA,该方法在一定范围内的线性、专属性、准确度、精密度均较好,可用于CV-A10抗原生产过程样品和成品的质量控制,为CV-A10抗原的体外效力评价提供方法学基础。正文手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)由20多种肠道病毒引起,其中肠道病毒71型(enterovirus A71,EV-A71 )、柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16),CV-A6 和 CV-A10为引起HFMD暴发流行的主要病原体[1-5]。随着EV-A71灭活疫苗的上市,由EV-A71引起的HFMD明显减少[6]。近年来,CV-A10在全球广泛流行,尤其是在中国已引起多次HFMD暴发,在个别地区已取代EV-A71和CV-A16成为HFMD的主要病原体[7-8]。CV-A10属于A组肠道病毒,作为引发HFMD的相关病原,对全球婴幼儿的健康具有严重威胁。除在患儿手、足、口处引起红色疱疹外,CV-A10的感染还可能导致发热、疱疹性咽峡炎,严重者甚至引发病毒性脑膜炎等。但由于目前尚无可预防多种HFMD病原感染的多价疫苗上市,对CV-A16、CV-A6和CV-A10等引起的HFMD尚无有效的预防手段,因此多价HFMD疫苗的研制具有重要意义,建立CV-A10抗原检测方法对于四价HFMD疫苗研制中工艺和质量的评价至关重要。本研究旨在建立CV-A10抗原测定方法,为CV-A10生产工艺和质量评价提供方法学支持。1材料与方法1.1材料人横纹肌肉瘤(human rhabdomyosarcoma,RD)细胞由美国典型培养物保藏中心提供,CV-A10由国药中生生物技术研究院有限公司第二研究室(第二研究室)分离。CV-A10(含量 12 536 U/ml)、CV-A6、CV-A16、EV-A71(纯度均在95%以上)抗原和CV-A10抗原参考品(批号 20210823,2 000 U/ml)由第二研究室制备,绵羊抗CV-A10多克隆抗体(多抗)和小鼠抗CV-A10单克隆抗体(单抗)10-1、10-2、10-4、10-6、10-7、CY166-13、CY166-14R纯化由第二研究室完成(纯度均在95%以上),Vero细胞蛋白由第二研究室提供,CV-A10收获液、浓缩液、纯化样品(GF、IEC)、单价原液、成品均由第二研究室制备。小鼠抗CV-A10单抗委托北京博奥森生物技术有限公司制备,羊抗CV-A10血清委托北京佑科生物科技有限公司制备。辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记羊抗小鼠IgG购自美国Southern Biotech公司,M199、DMEM培养基购自天信和(苏州)生物科技有限公司,牛血清由浙江天杭生物科技股份有限公司提供。MULTISKAN ASCENT酶标仪由美国Thermo公司提供。无特定病原体级雌性BALB/c小鼠60只,18~22 g,6~8周龄,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,动物使用许可证号SCXK(京)20160006。1.2方法1.2.1 抗体制备、活性检测以及亚型鉴定 以纯化的CV-A10抗原多次免疫小鼠和绵羊,待抗体ELISA效价达到106以上获得羊免疫血清,并制备小鼠单抗,以亲和层析法纯化羊多抗和小鼠单抗。采用间接ELISA对多抗和单抗进行ELISA效价检测和单抗亚型鉴定:包被CV-A10抗原1 μg/ml,100 μl/孔,2~8 °C包被16~18 h,洗板并封闭后加入系列稀释的待测抗体,37 ℃水浴1.5 h后洗板,加入酶标抗体,37 ℃水浴1 h后洗板,四甲基联苯胺显色液显色10 min终止反应,读取450和620 nm吸光度(A)值,以2.1倍空白A值为cut-off值计算ELISA效价。采用微量细胞病变法检测中和抗体效价:将待测抗体进行4倍稀释,然后于96孔板内进行2倍系列稀释,共8个稀释度,每孔50 μl,共2个复孔,每孔加入50 μl含100 CCID50的CV-A10病毒液,37 ℃ CO2培养箱中和3 h,加入浓度为1×105 ml-1的RD细胞悬液,100 μl/孔,35 ℃、5% CO2培养7 d,观察细胞病变,将能抑制50%细胞病变的抗体稀释倍数判定为中和效价。1.2.2 双抗体夹心ELISA抗体配对筛选 按照一定稀释倍数用0.05 mmol/L碳酸盐缓冲液稀释纯化的羊多抗,100 μl/孔,2~8 ℃孵育16~18 h,用含Tween的PBS(PBST)洗板后以1%牛血清白蛋白封闭液37 ℃水浴中封闭至少1 h;将梯度稀释的CV-A10抗原加入板中,100 μl/孔,37 ℃水浴1.5 h;PBST洗板3次,加入一定比例稀释的小鼠单抗,100 μl/孔,37 ℃水浴1.5 h;PBST洗板3次,加入羊抗小鼠IgG-HRP,37 ℃水浴1.0 h;PBST洗板3次,室温显色10 min后终止反应。读板:检测波长450 nm,参比波长620 nm。根据抗原-抗体反应的A值以及线性情况确定包被抗体和检测抗体。1.2.3 双抗体夹心ELISA实验条件优化 分别以1∶5 000、1∶10 000、1∶20 000 稀释包被羊多抗,以1∶2 000、1∶4 000、1∶8 000稀释检测单抗CY166-14R,设计方阵实验,对系列梯度稀释的CV-A10抗原进行检测;加入1∶4 000稀释羊抗小鼠IgG-HRP;四甲基联苯胺显色液显色后终止反应。读板:检测波长450 nm,参比波长620 nm。根据抗原抗体反应的A值以及线性情况确定最佳包被抗体和检测抗体稀释倍数。1.2.4 CV-A10抗原检测方法的验证 按照中国药典2020年版三部(药典三部)等标准对CV-A10抗原检测方法进行验证,主要包括方法的线性、专属性、准确度、精密度(重复性、中间精密度)、范围[9-11]。1.2.4.1 线性 将CV-A10抗原参考品稀释至不同浓度(20.00、13.33、10.00、6.67、5.00、3.33、2.50、1.67、1.25、0.83、0.63、0.42、0.31、0.21 U/ml),对抗原浓度和两个波长的读数比值(A450/620值)分别取对数后进行直线回归,根据回归值/理论值和线性决定系数(R2)确定方法最佳检测范围,并对范围内的线性和平行性进行评价。1.2.4.2 专属性 考虑到该方法用于多价HFMD疫苗的抗原检测,专属性主要包括对该多价疫苗其他病毒型别抗原(CV-A6、CV-A16和EV-A71)的交叉反应能力以及生产过程中存在的M199、DMEM、Vero细胞蛋白、牛血清对方法的干扰能力进行验证。1.2.4.3 准确度 选取高浓度(>75%检测范围上限,8.0 U/ml)、中浓度(检测范围中间段,4.0 U/ml)、低浓度(<3倍检测范围下限,0.5 U/ml)CV-A10抗原样品进行检测,计算测定值与理论值的比值。1.2.4.4 精密度 同1.2.4.3选取高、中、低浓度CV-A10抗原样品进行检测,计算多次测定值的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)。1.2.4.5 范围 根据线性、准确度和精密度验证结果确定范围,即能满足一定线性R2、准确度和精密度要求的测定浓度范围。1.2.5 CV-A10抗原检测方法的初步应用 对多价HFMD疫苗生产过程中CV-A10收获液、浓缩液、纯化样品(GF、IEC)、单价原液以及成品进行检测,对该方法进行初步应用研究。2结果2.1抗体活性检测和亚型鉴定共获得7个具有中和抗体活性的小鼠单抗,ELISA效价为 1.00×105 ~1.00×106,羊多抗ELISA效价为105;7个单抗中和抗体滴度在1∶256~1∶1 024,均具有一定的中和抗体活性,羊多抗中和抗体活性较高,滴度大于1∶16 384;7个单抗中除CY166-13为IgG3亚型外,其他均为IgG2a亚型,见表1。2.2抗体配对筛选和实验浓度优化2.2.1 抗体配对筛选 以羊多抗作为包被抗体,小鼠单抗作为检测抗体进行配对实验,结果表明,10-1、10-2、10-4、10-6 和 CY166-14R单抗A450/620值较高,均可与羊多抗进行配对;单抗10-7和CY166-13的 A450/620值较低,配对失败。10-1、10-2、10-4、10-6和CY166-14R均可用于方法的建立,选择线性范围较广的CY166-14R作为检测抗体进行实验条件的优化,见图1。2.2.2 抗体使用浓度的优化 包被抗体稀释比例为1∶5 000、1∶10 000、1∶20 000,随包被抗体稀释比例的增大,A450/620值降低,包被抗体稀释比例1∶20 000时,A450/620值较低,稀释比例1∶5 000~1∶10 000时,A450/620值较为理想;不同稀释比例的检测抗体对A450/620值影响较小,见图2。由结果可知,包被抗体稀释比例1∶5 000~1∶10 000、检测抗体稀释比例1∶2 000~1∶4 000时较合适。2.3方法验证2.3.1 线性 以双对数法进行标准曲线拟合,CV-A10抗原浓度在0.31~13.33 U/ml时,线性回归值与理论值比值在85%~115%之间,线性R2大于0.85;在抗原浓度为0.42~10.00 U/ml时,该范围内线性较好,线性R2可达0.99以上。2.3.2 专属性 用该方法对CV-A6、CV-A16和EV-A71抗原样品进行检测,均未检测到3种抗原,即该方法对CV-A6、CV-A16和EV-A71抗原均无交叉反应;在CV-A10抗原中加入DMEM培养基、M199培养基、Vero细胞蛋白和牛血清进行检测,CV-A10测定值与理论值一致,即DMEM培养基、M199培养基、Vero细胞蛋白和牛血清对该方法测定无干扰;该方法特异性良好。2.3.3 准确度 4次实验结果见表2,高、中、低3个浓度测定值与理论值比值分别为99%、106%和97%,均在95%~110%之间。2.3.4 精密度2.3.4.1 重复性 4次实验结果见表3,高、中、低3个浓度测定RSD分别为4%、2%和5%,均在15%以内,该方法重复性较好。2.3.4.2 中间精密度 高、中、低3个浓度同一日期4次实验测定RSD分别为7%、9%和10%;3个浓度不同日期4次实验测定RSD分别为2%、2%和3%;3个浓度不同检测人员3次实验测定RSD分别为3%、4%和2%。该方法日内精密度、日间精密度、人员测定精密度RSD均在15%以内,见表4—6。2.3.5 范围 综合线性、准确度和精密度验证结果,在范围0.42~10.00 U/ml时,线性R2≥0.99,抗原测定准确度测定值/理论值在95%~110%之间,抗原测定精密度RSD均低于15%。因此确定该CV-A10抗原检测方法范围为0.42~10.00 U/ml。2.4初步应用采用所建立的CV-A10抗原检测方法对CV-A10抗原生产过程中的收获液、浓缩液、纯化样品(GF、IEC)进行检测,比活值(抗原/蛋白)依次增加,灭活后单价原液抗原比活有一定程度的下降,可有效反映工艺过程中抗原纯度和回收率变化趋势;在成品测定中,2个剂量、各3批次四价HFMD疫苗解离后测定CV-A10抗原回收率在90%~115%之间,提示该方法可适用于四价HFMD疫苗CV-A10抗原工艺过程和成品的质量控制。结果见表7、8。3讨论CV-A10体外效力的检测直接关乎疫苗的免疫原性,抗原测定是四价HFMD疫苗生产工艺和成品质量控制中最重要的质控指标。本研究通过对抗CV-A10羊多抗和小鼠单抗的配对研究,筛选出具有中和活性的抗CV-A10单抗7株,其中5株可与羊多抗配对并呈现良好的线性关系。在对单抗特性的研究中,我们发现CY166-14R株单抗具有良好的中和抗体活性,同时为了防止该细胞株由于传代不稳定等导致抗体丢失,我们完成了对该细胞株单抗的可变区测序,且完成该株单抗的克隆表达。研究结果表明,CY166-14R在中国仓鼠卵巢细胞中可稳定高效表达,表达单抗与腹水制备单抗在亲和力、中和抗体效价等方面无明显差别。因此我们选择CY166-14R单抗作为检测抗体建立双抗体夹心ELISA并对该方法进行验证[9],结果显示所建立的方法在一定范围内的线性、准确度、精密度以及特异性良好,对CV-A6、CV-A16、EV-A71抗原均无交叉反应,工艺过程中的各种添加成分对该方法无检测干扰。对建立的方法进行应用研究,显示该方法对工艺过程中间样品的测定具有较好的适用性,对不同剂量成品解吸附后抗原测定回收率可达90%以上,提示该方法可用于CV-A10抗原的工艺评价和质控检测。现有的研究关于CV-A10抗原表位的报道较少,对于所筛选出的单抗识别的抗原表位尚不清楚,接下来将对其进一步研究。同时该方法也有一定的局限性,由于单抗作为检测抗体识别位点的单一性,在疫苗生产过程中样品的纯化、灭活等处理方式以及在成品的放置过程中,抗原结构可能会发生一定的变化,该方法能否准确评价疫苗的抗原稳定性以及体外相对效力还有待进一步深入研究。因此,对于体外-体内效力的相关性评价还需要积累更多的研究数据,进一步验证体内效力与抗原测定之间的相关性。作者鲁卫卫1 郭会杰1 刘善茹1 郝春生1 杨永娟1 张中洋1 李秀玲21国药中生生物技术研究院有限公司第二研究室,北京 101111; 2上海生物制品研究所有限责任公司,上海 200051通信作者:李秀玲,Email:lixiuling@sinopharm.com;张中洋,Email:yy_saturn@163. com引用本文:鲁卫卫, 郭会杰, 刘善茹, 等. 柯萨奇病毒A组10型抗原双抗体夹心ELISA定量方法的建立及应用[J]. 国际生物制品学杂志, 2022, 45(6): 310-315. DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20220321-00018
注:本文不构成任何投资意见和建议,以上市公司或公司公告为准;本文仅作医疗健康相关药物介绍,非治疗方案推荐(若涉及)。近日,喀斯玛线上商城的交易数据显示,我国部分科研机构中的中高端生物试剂严重依赖进口——进口品牌交易额累计占比高达79%。而生物产业领域,药用原材料和试剂国产化率较低,培养基、各类酶、一次性耗材等基本依赖进口,例如:国外工业培养基三巨头Gibco、Hyclone、Merck,2020年预估占70%左右市场份额。生物原料试剂严重依赖进口,一旦断供,将给中国生命科学发展带来极大风险。试剂原料是生命科学工具的最关键一环,试剂原料的质量决定了下游应用的效果。刚刚结束的两会中,生物科学产业界代表积极献言献策,鼓励生物制药链条上的国产替代,加大科研试剂研发投入,推动国产生物原料试剂产业发展。生物原料试剂国产化已成为行业热点话题,备受瞩目,国产化建设迫在眉睫。01生物原料试剂分类生命科学面广、发展快,因此生物原料试剂品种繁多、性质复杂。主要有电泳试剂、色谱试剂、离心分离试剂、免疫试剂、标记试剂、组织化学试剂、培养基、缓冲剂、蛋白质和核酸沉淀剂、生化标准品试剂、生化质控品试剂等等。02生命科学上游领域企业现状国外巨头Thermo、Merck、Sartorius、Danaher通过不断的整合和收购,产品几乎涉及生物原料试剂的各个领域,能够给用户提供整体解决方案。另一方面,国内生命科学上游领域在最近十年得到快速发展,有些领域或者某些产品方面已经接近世界先进水平,越来越受到行业资本的关注,成为投资热点领域。近年来,随着国家政策的扶持,以抗体药、免疫细胞治疗、干细胞治疗、基因治疗、疫苗等为代表的生物医药产业得到快速发展,细胞培养试剂做为生物医药产业关键原材料,在方兴未艾的中国生物医药产业中不可或缺,得到长足发展。目前国内也有很多和细胞培养试剂相关的企业如雨后春笋般陆续崛起,但是随着各个公司的发展规划不同,更多的都已经转向了CDMO领域,细胞培养试剂仅是其业务的一小部分,而真正专注在细胞培养试剂领域的寥寥无几。目前做的比较好的比如依科赛生物(胎牛血清、无血清培养基)、杭州天杭(国产新生牛血清)、兰州民海(国产新生牛血清)等等。其中,依科赛生物的发展最为耀眼,其胎牛血清在国内占有比较大的市场份额,近年来更多精力投入到了无血清培养基方面,市场占有率也在逐年提升,曾在2020年获得近亿元B轮融资,据披露更多用在无血清培养基的生产建设上,期待其后续的发展。当前,国际贸易关系摩擦不断,新冠疫情带来的生物安全问题层出不穷,高度依赖欧美进口试剂的现状面临着技术受限、成本高、供应不稳定、供货周期长、技术服务延迟等多重隐患,直接制约中国生物医药产业发展。在不久的将来,谁将扛起国产化的大旗,值得我们拭目以待。但可以肯定的是,国产化替代帷幕已经拉开,国产品牌终会崛起。 但与国外巨头相比,我国生命科学上游领域还停留在产品创新度不强,以模仿国外为主,业务范围狭窄,没有重组整合的状况下,暂没有一家企业可以给用户提供上下游整体解决方案的全方位服务。03生物原料试剂未来发展趋势《中国制造2025》明确了10大重点领域:生物医药及高性能医疗器械等、新材料、农机装备等,要着力提升国货制造水平,打破国外技术垄断格局,从国家战略层面上推行各领域核心技术的攻关。当前国际形势复杂多变,个别国家对华为、中兴“卡脖子”事件历历在目,生命科学产业作为关系国计民生的重要领域,其上游原料试剂国产替代进口势在必行。我们有理由相信,在国家政策的主推下,在国内企业的共同努力下,未来几年国内一定能产生若干个可以比肩国外巨头的民族企业,中国的生命科学上游领域巨头企业呼之欲出。
【关于药融圈】药融圈围绕我国生物医药产业链,针对生物医药大数据、技术和资本投资、药融园(产业园)等开展系列系统性工作,促进我国生物医药产业健康发展,完善产业链,共同面对全球合作和竞争。
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